Name: recording synaptic plasticity in acute hippocampal slices maintained in a small-volume recycling-, perfusion-, and submersion-type chamber system
Uploaded: 2018-01-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System at JoVE.com

וו. וו שנערך, ניתח, עיצב את הניסויים, כתב היד. D.X. סי בסיוע בהכנה איור, ערכו הניסויים. עבודה זו נתמכה על ידי NSFC (31320103906) ופרוייקט 111 (B16013) מתה משחפת

החיות היו נשמרים על פי הוקמה בסטנדרטים של טיפול בבעלי חיים ונהלים של המכון למדעי המוח, מפתח מעבדה של הרפואה נוירוביולוגיה של פודאן סטייט, שנגחאי, סין.
1. פתרון הכנה
הערה: ראה טבלה של חומרים.
<ol>
	<li>הכנת המאגר עם פרוסות (פתרון של Gey ששונה): 92 מ מ NaCl, 2.5 מ מ אשלגן כלורי, 1.25 מ"מ NaH2</s...

<ol>
	<li>McIlwain, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+response+in+vitro+to+electrical+stimulation+of+sections+of+mammalian+brain.">Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain.</a> Biochem J. 48 (4), (1951).</li><li>McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+in+vitro+from+the+piriform+cortex+of+the+rat,+and+their+susceptibility+to+centrally-acting+drugs.">Responses in vitro from the piriform cortex of the rat, and their susceptibility to centrally-acting drugs.</a> J Neurochem. 14 (9), 937-938 (1967).</li><li>Yamamoto, C., McIlwain, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+activities+in+thin+sections+from+the+mammalian+brain+maintained+in+chemically-defined+media+in+vitro.">Electrical activities in thin sections from the mammalian brain maintained in chemically-defined media in vitro.</a> J Neurochem. 13 (12), 1333-1343 (1966).</li><li>Andersen, P., Bliss, T. V., Lomo, T., Olsen, L. I., Skrede, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamellar+organization+of+hippocampal+excitatory+pathways.">Lamellar organization of hippocampal excitatory pathways.</a> Acta Physiol Scand. 76 (1), 4-5 (1969).</li><li>Skrede, K. K., Westgaard, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transverse+hippocampal+slice:+a+well-defined+cortical+structure+maintained+in+vitro.">The transverse hippocampal slice: a well-defined cortical structure maintained in vitro.</a> Brain Res. 35 (2), 589-593 (1971).</li><li>Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slices+have+more+synapses+than+perfusion-fixed+hippocampus+from+both+young+and+mature+rats.">Slices have more synapses than perfusion-fixed hippocampus from both young and mature rats.</a> J Neurosci. 19 (8), 2876-2886 (1999).</li><li>Schwartzkroin, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+CA1+neurons+recorded+intracellularly+in+the+hippocampal+in+vitro+slice+preparation.">Characteristics of CA1 neurons recorded intracellularly in the hippocampal in vitro slice preparation.</a> Brain Res. 85 (3), 423-436 (1975).</li><li>Schwartzkroin, P. A., Wester, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-lasting+facilitation+of+a+synaptic+potential+following+tetanization+in+the+in+vitro+hippocampal+slice.">Long-lasting facilitation of a synaptic potential following tetanization in the in vitro hippocampal slice.</a> Brain Res. 89 (1), 107-119 (1975).</li><li>Reymann, K. G., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+late+maintenance+of+hippocampal+LTP:+requirements,+phases,+'synaptic+tagging',+'late-associativity'+and+implications.">The late maintenance of hippocampal LTP: requirements, phases, 'synaptic tagging', 'late-associativity' and implications.</a> Neuropharm. 52 (1), 24-40 (2007).</li><li>Bliss, T. V., Collingridge, G. L., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+in+health+and+disease:+introduction+and+overview.">Synaptic plasticity in health and disease: introduction and overview.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 369 (1633), 20130129 (2014).</li><li>Bliss, T. V., Gardner-Medwin, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-lasting+potentiation+of+synaptic+transmission+in+the+dentate+area+of+the+unanaestetized+rabbit+following+stimulation+of+the+perforant+path.">Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the unanaestetized rabbit following stimulation of the perforant path.</a> J Physiol. 232 (2), 357-374 (1973).</li><li>Reid, K. H., Edmonds, H. L., Schurr, A., Tseng, M. T., West, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pitfalls+in+the+Use+of+Brain-Slices.">Pitfalls in the Use of Brain-Slices.</a> Prog Neurobiol. 31 (1), 1-18 (1988).</li><li>Rambani, K., Vukasinovic, J., Glezer, A., Potter, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+thick+brain+slices:+an+interstitial+3D+microperfusion+system+for+enhanced+viability.">Culturing thick brain slices: an interstitial 3D microperfusion system for enhanced viability.</a> J Neurosci Methods. 180 (2), 243-254 (2009).</li><li>Hajos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintaining+network+activity+in+submerged+hippocampal+slices:+importance+of+oxygen+supply.">Maintaining network activity in submerged hippocampal slices: importance of oxygen supply.</a> Eur J Neurosci. 29 (2), 319-327 (2009).</li><li>Redondo, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+tagging+and+capture:+differential+role+of+distinct+calcium/calmodulin+kinases+in+protein+synthesis-dependent+long-term+potentiation.">Synaptic tagging and capture: differential role of distinct calcium/calmodulin kinases in protein synthesis-dependent long-term potentiation.</a> J Neurosci. 30 (14), 4981-4989 (2010).</li><li>Stopps, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+application+of+a+novel+brain+slice+system+that+permits+independent+electrophysiological+recordings+from+multiple+slices.">Design and application of a novel brain slice system that permits independent electrophysiological recordings from multiple slices.</a> J Neurosci Methods. 132 (2), 137-148 (2004).</li><li>Behnisch, T., Matsushita, S., Knopfel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+gene+expression+during+long-term+potentiation.">Imaging of gene expression during long-term potentiation.</a> Neuroreport. 15 (13), 2039-2043 (2004).</li><li>Karpova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encoding+and+transducing+the+synaptic+or+extrasynaptic+origin+of+NMDA+receptor+signals+to+the+nucleus.">Encoding and transducing the synaptic or extrasynaptic origin of NMDA receptor signals to the nucleus.</a> Cell. 152 (5), 1119-1133 (2013).</li><li>Karpova, A., Mikhaylova, M., Thomas, U., Knopfel, T., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+protein+synthesis+and+degradation+in+long-term+potentiation+of+Schaffer+collateral+CA1+synapses.">Involvement of protein synthesis and degradation in long-term potentiation of Schaffer collateral CA1 synapses.</a> J Neurosci. 26 (18), 4949-4955 (2006).</li><li>Weng, W., Chen, Y., Wang, M., Zhuang, Y., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potentiation+of+Schaffer-Collateral+CA1+Synaptic+Transmission+by+eEF2K+and+p38+MAPK+Mediated+Mechanisms.">Potentiation of Schaffer-Collateral CA1 Synaptic Transmission by eEF2K and p38 MAPK Mediated Mechanisms.</a> Front Cell Neurosci. 10 (247), (2016).</li><li>Meduna, L. J., Jackman, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+dioxide+inhalation+therapy.">Carbon dioxide inhalation therapy.</a> Res Publ Assoc Res Nerv Ment Dis. 31, 280-286 (1953).</li><li>Edwards, F. A., Konnerth, A., Sakmann, B., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+thin+slice+preparation+for+patch+clamp+recordings+from+neurones+of+the+mammalian+central+nervous+system.">A thin slice preparation for patch clamp recordings from neurones of the mammalian central nervous system.</a> Pflugers Arch. 414 (5), 600-612 (1989).</li><li>Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+acute+hippocampal+slices+from+rats+and+transgenic+mice+for+the+study+of+synaptic+alterations+during+aging+and+amyloid+pathology.">Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li><li>Yuanxiang, P., Bera, S., Karpova, A., Kreutz, M. R., Mikhaylova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+CA1+nuclear+enriched+fractions+from+hippocampal+slices+to+study+activity-dependent+nuclear+import+of+synapto-nuclear+messenger+proteins.">Isolation of CA1 nuclear enriched fractions from hippocampal slices to study activity-dependent nuclear import of synapto-nuclear messenger proteins.</a> J Vis Exp. (90), e51310 (2014).</li><li>Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LTP+in+cultured+hippocampal-entorhinal+cortex+slices+from+young+adult+(P25-30)+rats.">LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats.</a> J Neurosci Meth. 130 (1), 19-32 (2003).</li><li>Kloosterman, F., Peloquin, P., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apical+and+basal+orthodromic+population+spikes+in+hippocampal+CA1+in+vivo+show+different+origins+and+patterns+of+propagation.">Apical and basal orthodromic population spikes in hippocampal CA1 in vivo show different origins and patterns of propagation.</a> J Neurophysiol. 86 (5), 2435-2444 (2001).</li><li>Thiemann, W., Malisch, R., Reymann, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+microcirculation+chamber+for+inexpensive+long-term+investigations+of+nervous+tissue+in+vitro.">A new microcirculation chamber for inexpensive long-term investigations of nervous tissue in vitro.</a> Brain Res Bull. 17 (1), 1-4 (1986).</li><li>Shetty, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+Synaptic+Tagging/Capture+and+Cross-capture+using+Acute+Hippocampal+Slices+from+Rodents.">Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents.</a> J Vis Exp. (103), (2015).</li><li>Du, H., Lin, J., Zuercher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Higher+efficiency+of+CO2+injection+into+seawater+by+a+venturi+than+a+conventional+diffuser+system.">Higher efficiency of CO2 injection into seawater by a venturi than a conventional diffuser system.</a> Bioresour Technol. 107, 131-134 (2012).</li><li>Weinman, J., Mahler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Analysis+of+Electrical+Properties+of+Metal+Electrodes.">An Analysis of Electrical Properties of Metal Electrodes.</a> Med Electron Biol Eng. 2, 299-310 (1964).</li><li>Fanselow, M. S., Dong, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+the+dorsal+and+ventral+hippocampus+functionally+distinct+structures.">Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures.</a> Neuron. 65 (1), 7-19 (2010).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translation+of+BDNF-gene+transcripts+with+short+3'+UTR+in+hippocampal+CA1+neurons+improves+memory+formation+and+enhances+synaptic+plasticity-relevant+signaling+pathways.">Translation of BDNF-gene transcripts with short 3' UTR in hippocampal CA1 neurons improves memory formation and enhances synaptic plasticity-relevant signaling pathways.</a> Neurobiol Learn Mem. , (2016).</li></ol>

למרות ממשק פרוסה צ'יימברס התערוכה עמידים יותר תגובות סינפטית25,26,27,28, ועלייתו צ'יימברס לספק נוחות נוסף עבור תיקון-קלאמפ הקלטה של קרינה פלואורסצנטית הדמיה. לפיכך, שתיארנו מספר היבטים של הקלטות שדה פוטנציאל בפרוסות בהיפוק...

בשנת 1951, דיווח ראשון המוח חריפה פרוסה שהניסוי היה מתנהל1. ב-1971, לאחר מוצלחת במבחנה הקלטות מתוכנות piriform קליפת2,3 , הגילוי. נוירונים בהיפוקמפוס מחוברים באופן רוחבי לאורך ציר septotemporal של ההיפוקמפוס4, לאחד במבחנה הקלטות הראשונה של פעילות עצביים בהיפוקמפוס היתה מושגת5. הדמיון של הפרמטרים neurophysiological או neurostructural של נוירונים בתנאים בתוך vivo ו- in vitro לקשרי הם עדיין הנושא של הדיון מספר6, אבל בשנת 1975, Schwartzkroin7 עולה כי הבסיס מאפיינים של נוירונים נשמרים במבחנה ומשרה את גירוי בתדירות גבוהה (קרי: tetanization) של afferents במערך בהיפוקמפוס הקלה לטווח ארוך של סינאפטיים8. אלקטרופיזיולוגיות הקלטה של פעילות. עצבית במבחנה הרחיב את חקר המנגנונים הסלולר של פלסטיות סינפטית תלויי-פעילות9,10, אשר התגלה בשנת 1973 על ידי בליס et al. 11 in vivo ניסויים עם ארנבונים.
בחקר פעילות. עצבית או איתות המסלולים פרוסות המוח, ועל במיוחד-פרוסות בהיפוקמפוס חריפה, הוא עכשיו כלי סטנדרטי. עם זאת, באופן מפתיע, ניסויים במבחנה טרם להיות סטנדרטית, כפי שמעידים הגישות מרובים עדיין קיימים הכנה ותחזוקה של פרוסות בהיפוקמפוס חריפה. ריד. et al. (1988) 12 סקרו את אתגרים מתודולוגיים לשם קיום פרוסות המוח חריפה סוגים שונים של צ'יימברס פרוסה, הבחירות של רחצה ברמה בינונית, pH, טמפרטורה וחמצן. פרמטרים אלה הם עדיין קשה לשלוט בבית הבליעה הקלטה בשל היסודות במבחנה פרוסה-הקלטה setups בהזמנה אישית. הפרסומים ניתן למצוא כי עשוי לעזור להתגבר כמה אתגרים מתודולוגיים וכי לתאר סוגים חדשים של צ'יימברס פרוסה ועלייתו, כגון מערכת של interstitial 3D microperfusion13, תא עם זרימה שכבתית משופרת וחמצן אספקה14, מערכת עם בקרת טמפרטורה ממוחשבת15, מערכת הקלטה רב קאמרית16. מאז התאים האלו לא קל לבנות, רוב המדענים להסתמך על פרוסה זמינים מסחרית צ'יימברס. התאים האלה יכול להיות מותקן על מערכת מיקרוסקופ, ובכך מאפשר עבור שילוב אלקטרופיזיולוגיה עם פלורסצנטיות הדמיה17,18,19. מאז התאים האלה לשמור את פרוסות המוח שקוע בתוך נוזל מוחי שדרתי מלאכותי (כלנית חדד), קצב זרימה גבוהה של הפתרון המאגר צריך להיות מתוחזק, הגדלת ההוצאות של יישום סמים. לשם כך, אנו שילבו מערכת זלוף מיחזור עם תזרים-carbogenation המספק יציבות מספקת עבור הקלטה לטווח ארוך של שדה פוטנציאל בחדר ועלייתו פרוסה באמצעות אמצעי אחסון יצחק גרגיר קטן יחסית. בנוסף, נוכל לסכם כיצד השימוש של מערכת carbogenation ניסויית/זלוף זו משפיעה על התוצאה של פלסטיות סינפטית תלויי-פעילות10 , איך עיכוב של התארכות האיקריוטים פקטור-2 קינאז (eEF2K) ממיקרו סינפטית שידור20.

<table width="982">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Reagents required</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:251px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">NaCl</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10019318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">KCl</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10016318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10017618</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">MgCl2&#183;6H2O</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10012818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">CaCl2</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10005861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10018960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">Glucose</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10010518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">20040718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">HEPES</td>
			<td style="width:244px;">Sigma</td>
			<td style="width:179px;">H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">Sodium pyruvate</td>
			<td style="width:244px;">Sigma</td>
			<td style="width:179px;">A4043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">MgSO4</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">20025118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">NaOH</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10019718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Tools and materials for dissection</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Decapitators</td>
			<td style="width:244px;">Harvard apparatus</td>
			<td style="width:179px;">55-0012</td>
			<td>for rat decapitation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Bandage Scissors</td>
			<td style="width:244px;">SCHREIBER</td>
			<td style="width:179px;">12-4227</td>
			<td>for mouse decapitation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">double-edge blade</td>
			<td style="width:244px;">Flying Eagle, China</td>
			<td style="width:179px;">74-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">IRIS Scissors</td>
			<td style="width:244px;">RWD, China</td>
			<td style="width:179px;">S12003-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Bone Rongeurs</td>
			<td style="width:244px;">RWD, China</td>
			<td style="width:179px;">S22002-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Spoon</td>
			<td style="width:244px;">Hammacher&#160;</td>
			<td style="width:179px;">HSN 152-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">dental cement spatula</td>
			<td style="width:244px;">Hammacher&#160;</td>
			<td style="width:179px;">HSN 016-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">dental double end excavator</td>
			<td style="width:244px;">Blacksmith Surgical, USA</td>
			<td style="width:179px;">BS-415-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Vibrating Microtome</td>
			<td style="width:244px;">Leica, Germany</td>
			<td style="width:179px;">VT1200S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">surgical blade&#160;</td>
			<td style="width:244px;">RWD, China</td>
			<td style="width:179px;">S31023-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">surgical holder</td>
			<td style="width:244px;">RWD, China</td>
			<td style="width:179px;">S32007-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:311px;height:42px;">Electrophysiology equipment and materials</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Vertical Pipette Puller</td>
			<td style="width:244px;">Narishige, Japan</td>
			<td style="width:179px;">PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Vibration isolation table</td>
			<td style="width:244px;">Meirits, Japan</td>
			<td style="width:179px;">ADZ-A0806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">submerged type recording chamber</td>
			<td style="width:244px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:179px;">RC-26GLP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">thermostatic water bath</td>
			<td style="width:244px;">Zhongcheng Yiqi&#65292;China</td>
			<td style="width:179px;">HH-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">4 Axis Micromanipulator</td>
			<td style="width:244px;">Sutter, USA</td>
			<td style="width:179px;">MP-285, MP-225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Platinum Wire</td>
			<td style="width:244px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:179px;">PTP406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Amplifier</td>
			<td style="width:244px;">Molecular Devices, USA</td>
			<td style="width:179px;">Multiclamp 700B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Data Acquisition System</td>
			<td style="width:244px;">Molecular Devices, USA</td>
			<td style="width:179px;">Digidata 1440A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Anaysis software</td>
			<td style="width:244px;">Molecular Devices, USA</td>
			<td style="width:179px;">Clampex 10.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Fluorescence Microscope</td>
			<td style="width:244px;">Nikon, Japan</td>
			<td style="width:179px;">FN1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">LED light source</td>
			<td style="width:244px;">Lumen Dynamics Group, Canada</td>
			<td style="width:179px;">X-cite 120LED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">micropipettes</td>
			<td style="width:244px;">Harvard apparatus</td>
			<td style="width:179px;">GC150TF</td>
			<td>extracelluar recording</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">borosilicate micropipettes</td>
			<td style="width:244px;">Sutter, USA</td>
			<td style="width:179px;">BF150-86</td>
			<td>patch clamp</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">tungsten electrode</td>
			<td style="width:244px;">A-M Systems, USA</td>
			<td style="width:179px;">575500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">peristaltic pump</td>
			<td style="width:244px;">Longer, China</td>
			<td style="width:179px;">BT00-300T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">tubes for peristaltic pump</td>
			<td style="width:244px;">ISMATEC, Wertheim, Germany</td>
			<td style="width:179px;">SC0309</td>
			<td>1x inflow, ID: 1.02mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">tubes for peristaltic pump</td>
			<td style="width:244px;">ISMATEC, Wertheim, Germany</td>
			<td style="width:179px;">SC0319</td>
			<td>2x tubes for outflow, ID: 2.79 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">CCD camera</td>
			<td style="width:244px;">PCO, Germany</td>
			<td style="width:179px;">pco.edge sCMOS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">lens cleaning paper</td>
			<td style="width:244px;">Kodak</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">50 ml conical centrifuge tube</td>
			<td style="width:244px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:179px;">339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Prechamber</td>
			<td style="width:244px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:179px;">BSC-PC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Inline heater</td>
			<td style="width:244px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:179px;">SF-28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Temperature Controller</td>
			<td style="width:244px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:179px;">TC-324B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

recording synaptic plasticity in acute hippocampal slices maintained in a small-volume recycling-, perfusion-, and submersion-type chamber system

אף-על-פי ניסויים על פרוסות המוח כבר בשימוש מאז 1951, בעיות להישאר זה לצמצם את ההסתברות להשגת ניתוח יציב וטוב של אפנון הסינאפסית בעת ביצוע הקלטות שדה פוטנציאלי או תאיים. כתב יד זה מתאר היבטים מתודולוגיים שיכול להועיל בשיפור תנאי ניסיוני עבור שמירה על פרוסות המוח חריפה, הקלטה שדה פוטנציאל postsynaptic סינאפסות בתוך תא צלילה זמינים מסחרית עם יחידת תזרים-carbogenation. יצוא-carbogenation מסייע לייצב את רמת החמצן בניסויים המסתמכים על מיחזור של מאגר מאגר קטן כדי לשפר את העלות-יעילות התרופה ניסויים. בנוסף, כתב היד מציג ניסויים נציג זה לבחון את ההשפעה של מצבים שונים carbogenation, גירויים פרדיגמות על הפלסטיות הסינפטית פעילות תלוית של ההעברה הסינאפסית.

במקטע פרוטוקול, אנחנו תיאר את הכנת חריפה פרוסות בהיפוקמפוס מהחלק הבטני, ביניים של היווצרות בהיפוקמפוס (איור 1) זכר C57BL/6 עכברים וחולדות זכר Wistar (5-8 שבועות). המיקום של ההמיספרות על פלטפורמת מבצעה עוזר לשמור עליהם יציב, מסיר את הצורך של ייצוב עם אגר או agarose. זלוף...

Watch this Scientific Journal Video about Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System at JoVE.com

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

הקלטה הפלסטיות הסינפטית בפרוסות בהיפוקמפוס חריפה, בהשתתפות של מיחזור - בנפח מצומצם, זלוף- ומערכת ועלייתו-סוג תא

פרוטוקול זה מתאר את הייצוב של רמת החמצן נפח קטן של מאגר ממוחזר, היבטים מתודולוגיים של הקלטה פלסטיות סינפטית תלויי-פעילות המשוקע פרוסות בהיפוקמפוס חריפה.

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

הכנת Oligomeric β עמילואיד 1-42 ו אינדוקציה של ירידת ערך הפלסטיות הסינפטית על Slices בהיפוקמפוס

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

הכנת פרוסות בהיפוקמפוס של חולדות חריפה העכברים הטרנסגניים לחקר שינויים Synaptic במהלך ההזדקנות עמילואיד פתולוגיה

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Lateral Diffusion and Exocytosis of Membrane Proteins in Cultured Neurons Assessed using Fluorescence Recovery and Fluorescence-loss Photobleaching

דיפוזיה Exocytosis לרוחב של חלבונים בממברנה של נוירונים בתרבית הוערכה באמצעות שחזור פלואורסצנציה Fluorescence מסופקים Photobleaching

Membrane proteins such as receptors and ion channels undergo active trafficking in neurons, which are highly polarised and morphologically complex. This ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

קלטות אלקטרו כפולות של תגובות Astroglial ועצביות עוררו-synaptically בפרוסות ביפוקמפוס חריפות

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Paired Whole Cell Recordings in Organotypic Hippocampal Slices

הקלטות תא כל לזווג בפרוסות בהיפוקמפוס Organotypic

Pair recordings involve simultaneous whole cell patch clamp recordings from two synaptically connected neurons, enabling not only direct ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

חקירה של Synaptic תיוג / לכידה וצלב-לכידה באמצעות חריפות בהיפוקמפוס פרוסות ממכרסמים

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

מדידת אנדוציטוזה שלפוחית סינפטית של נוירונים בהיפוקמפוס בתרבית

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic ...

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

דגם העכבר מתמצקים הנוצרות על-ידי Pentylenetetrazole

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

Preparation of Acute Spinal Cord Slices for Whole-cell Patch-clamp Recording in Substantia Gelatinosa Neurons

הכנה של חוט השדרה חריפה פרוסות תאים כל תיקון-קלאמפ הקלטה בנוירונים הסובסטנציה Gelatinosa

Recent whole-cell patch-clamp studies from substantia gelatinosa (SG) neurons have provided a large body of information about the spinal mechanisms ...