Name: recording synaptic plasticity in acute hippocampal slices maintained in a small-volume recycling-, perfusion-, and submersion-type chamber system
Uploaded: 2018-01-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System at JoVE.com

W.W. realizó, analizados y había diseñado los experimentos y escribió el manuscrito. D.X. y C.P. ayudó en la preparación de la figura y llevado a cabo los experimentos. Este trabajo fue apoyado por NSFC (31320103906) y 111 (B16013) en T.B.

Los animales fueron mantenidos según las normas de cuidado de los animales y los procedimientos de los institutos de ciencia del cerebro y el estado clave de laboratorio médico Neurobiología de la Universidad de Fudan, Shanghai, China.
1. preparación de la solución
Nota: Consulte la tabla de materiales.
<ol>
	<li>Preparar el buffer de corte (solución de Gey modificado): 92 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1.25 mM NaH2PO4, 30 mM NaHCO3, 25 mM de glucosa, 20 mM HE...

<ol>
	<li>McIlwain, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+response+in+vitro+to+electrical+stimulation+of+sections+of+mammalian+brain.">Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain.</a> Biochem J. 48 (4), (1951).</li><li>McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+in+vitro+from+the+piriform+cortex+of+the+rat,+and+their+susceptibility+to+centrally-acting+drugs.">Responses in vitro from the piriform cortex of the rat, and their susceptibility to centrally-acting drugs.</a> J Neurochem. 14 (9), 937-938 (1967).</li><li>Yamamoto, C., McIlwain, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+activities+in+thin+sections+from+the+mammalian+brain+maintained+in+chemically-defined+media+in+vitro.">Electrical activities in thin sections from the mammalian brain maintained in chemically-defined media in vitro.</a> J Neurochem. 13 (12), 1333-1343 (1966).</li><li>Andersen, P., Bliss, T. V., Lomo, T., Olsen, L. I., Skrede, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamellar+organization+of+hippocampal+excitatory+pathways.">Lamellar organization of hippocampal excitatory pathways.</a> Acta Physiol Scand. 76 (1), 4-5 (1969).</li><li>Skrede, K. K., Westgaard, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transverse+hippocampal+slice:+a+well-defined+cortical+structure+maintained+in+vitro.">The transverse hippocampal slice: a well-defined cortical structure maintained in vitro.</a> Brain Res. 35 (2), 589-593 (1971).</li><li>Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slices+have+more+synapses+than+perfusion-fixed+hippocampus+from+both+young+and+mature+rats.">Slices have more synapses than perfusion-fixed hippocampus from both young and mature rats.</a> J Neurosci. 19 (8), 2876-2886 (1999).</li><li>Schwartzkroin, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+CA1+neurons+recorded+intracellularly+in+the+hippocampal+in+vitro+slice+preparation.">Characteristics of CA1 neurons recorded intracellularly in the hippocampal in vitro slice preparation.</a> Brain Res. 85 (3), 423-436 (1975).</li><li>Schwartzkroin, P. A., Wester, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-lasting+facilitation+of+a+synaptic+potential+following+tetanization+in+the+in+vitro+hippocampal+slice.">Long-lasting facilitation of a synaptic potential following tetanization in the in vitro hippocampal slice.</a> Brain Res. 89 (1), 107-119 (1975).</li><li>Reymann, K. G., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+late+maintenance+of+hippocampal+LTP:+requirements,+phases,+'synaptic+tagging',+'late-associativity'+and+implications.">The late maintenance of hippocampal LTP: requirements, phases, 'synaptic tagging', 'late-associativity' and implications.</a> Neuropharm. 52 (1), 24-40 (2007).</li><li>Bliss, T. V., Collingridge, G. L., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+plasticity+in+health+and+disease:+introduction+and+overview.">Synaptic plasticity in health and disease: introduction and overview.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 369 (1633), 20130129 (2014).</li><li>Bliss, T. V., Gardner-Medwin, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-lasting+potentiation+of+synaptic+transmission+in+the+dentate+area+of+the+unanaestetized+rabbit+following+stimulation+of+the+perforant+path.">Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the unanaestetized rabbit following stimulation of the perforant path.</a> J Physiol. 232 (2), 357-374 (1973).</li><li>Reid, K. H., Edmonds, H. L., Schurr, A., Tseng, M. T., West, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pitfalls+in+the+Use+of+Brain-Slices.">Pitfalls in the Use of Brain-Slices.</a> Prog Neurobiol. 31 (1), 1-18 (1988).</li><li>Rambani, K., Vukasinovic, J., Glezer, A., Potter, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+thick+brain+slices:+an+interstitial+3D+microperfusion+system+for+enhanced+viability.">Culturing thick brain slices: an interstitial 3D microperfusion system for enhanced viability.</a> J Neurosci Methods. 180 (2), 243-254 (2009).</li><li>Hajos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintaining+network+activity+in+submerged+hippocampal+slices:+importance+of+oxygen+supply.">Maintaining network activity in submerged hippocampal slices: importance of oxygen supply.</a> Eur J Neurosci. 29 (2), 319-327 (2009).</li><li>Redondo, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+tagging+and+capture:+differential+role+of+distinct+calcium/calmodulin+kinases+in+protein+synthesis-dependent+long-term+potentiation.">Synaptic tagging and capture: differential role of distinct calcium/calmodulin kinases in protein synthesis-dependent long-term potentiation.</a> J Neurosci. 30 (14), 4981-4989 (2010).</li><li>Stopps, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+application+of+a+novel+brain+slice+system+that+permits+independent+electrophysiological+recordings+from+multiple+slices.">Design and application of a novel brain slice system that permits independent electrophysiological recordings from multiple slices.</a> J Neurosci Methods. 132 (2), 137-148 (2004).</li><li>Behnisch, T., Matsushita, S., Knopfel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+gene+expression+during+long-term+potentiation.">Imaging of gene expression during long-term potentiation.</a> Neuroreport. 15 (13), 2039-2043 (2004).</li><li>Karpova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encoding+and+transducing+the+synaptic+or+extrasynaptic+origin+of+NMDA+receptor+signals+to+the+nucleus.">Encoding and transducing the synaptic or extrasynaptic origin of NMDA receptor signals to the nucleus.</a> Cell. 152 (5), 1119-1133 (2013).</li><li>Karpova, A., Mikhaylova, M., Thomas, U., Knopfel, T., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+protein+synthesis+and+degradation+in+long-term+potentiation+of+Schaffer+collateral+CA1+synapses.">Involvement of protein synthesis and degradation in long-term potentiation of Schaffer collateral CA1 synapses.</a> J Neurosci. 26 (18), 4949-4955 (2006).</li><li>Weng, W., Chen, Y., Wang, M., Zhuang, Y., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potentiation+of+Schaffer-Collateral+CA1+Synaptic+Transmission+by+eEF2K+and+p38+MAPK+Mediated+Mechanisms.">Potentiation of Schaffer-Collateral CA1 Synaptic Transmission by eEF2K and p38 MAPK Mediated Mechanisms.</a> Front Cell Neurosci. 10 (247), (2016).</li><li>Meduna, L. J., Jackman, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+dioxide+inhalation+therapy.">Carbon dioxide inhalation therapy.</a> Res Publ Assoc Res Nerv Ment Dis. 31, 280-286 (1953).</li><li>Edwards, F. A., Konnerth, A., Sakmann, B., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+thin+slice+preparation+for+patch+clamp+recordings+from+neurones+of+the+mammalian+central+nervous+system.">A thin slice preparation for patch clamp recordings from neurones of the mammalian central nervous system.</a> Pflugers Arch. 414 (5), 600-612 (1989).</li><li>Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+acute+hippocampal+slices+from+rats+and+transgenic+mice+for+the+study+of+synaptic+alterations+during+aging+and+amyloid+pathology.">Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li><li>Yuanxiang, P., Bera, S., Karpova, A., Kreutz, M. R., Mikhaylova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+CA1+nuclear+enriched+fractions+from+hippocampal+slices+to+study+activity-dependent+nuclear+import+of+synapto-nuclear+messenger+proteins.">Isolation of CA1 nuclear enriched fractions from hippocampal slices to study activity-dependent nuclear import of synapto-nuclear messenger proteins.</a> J Vis Exp. (90), e51310 (2014).</li><li>Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LTP+in+cultured+hippocampal-entorhinal+cortex+slices+from+young+adult+(P25-30)+rats.">LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats.</a> J Neurosci Meth. 130 (1), 19-32 (2003).</li><li>Kloosterman, F., Peloquin, P., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apical+and+basal+orthodromic+population+spikes+in+hippocampal+CA1+in+vivo+show+different+origins+and+patterns+of+propagation.">Apical and basal orthodromic population spikes in hippocampal CA1 in vivo show different origins and patterns of propagation.</a> J Neurophysiol. 86 (5), 2435-2444 (2001).</li><li>Thiemann, W., Malisch, R., Reymann, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+microcirculation+chamber+for+inexpensive+long-term+investigations+of+nervous+tissue+in+vitro.">A new microcirculation chamber for inexpensive long-term investigations of nervous tissue in vitro.</a> Brain Res Bull. 17 (1), 1-4 (1986).</li><li>Shetty, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+Synaptic+Tagging/Capture+and+Cross-capture+using+Acute+Hippocampal+Slices+from+Rodents.">Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents.</a> J Vis Exp. (103), (2015).</li><li>Du, H., Lin, J., Zuercher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Higher+efficiency+of+CO2+injection+into+seawater+by+a+venturi+than+a+conventional+diffuser+system.">Higher efficiency of CO2 injection into seawater by a venturi than a conventional diffuser system.</a> Bioresour Technol. 107, 131-134 (2012).</li><li>Weinman, J., Mahler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Analysis+of+Electrical+Properties+of+Metal+Electrodes.">An Analysis of Electrical Properties of Metal Electrodes.</a> Med Electron Biol Eng. 2, 299-310 (1964).</li><li>Fanselow, M. S., Dong, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+the+dorsal+and+ventral+hippocampus+functionally+distinct+structures.">Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures.</a> Neuron. 65 (1), 7-19 (2010).</li><li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translation+of+BDNF-gene+transcripts+with+short+3'+UTR+in+hippocampal+CA1+neurons+improves+memory+formation+and+enhances+synaptic+plasticity-relevant+signaling+pathways.">Translation of BDNF-gene transcripts with short 3' UTR in hippocampal CA1 neurons improves memory formation and enhances synaptic plasticity-relevant signaling pathways.</a> Neurobiol Learn Mem. , (2016).</li></ol>

Aunque cámaras de rebanada de interfaz exhiben más sólidas respuestas sinápticas25,26,27,28, cámaras de inmersión proporcionan comodidad adicional para la grabación de la abrazadera del remiendo y de la fluorescencia proyección de imagen. Así, hemos descrito algunos aspectos de posibles grabaciones de campo en rebanadas hippocampal agudas usando una cámara de corte de inmersión comer...

En 1951, los experimentos de rebanada cerebral aguda registrados primero fueron realizados1. En 1971, después de éxito en vitro las grabaciones de la corteza piriforme2,3 y el descubrimiento que las neuronas hippocampal están interconectadas transversalmente en el eje septotemporal del hipocampo4, uno de los primeras grabaciones en vitro de la actividad neuronal hippocampal fue alcanzado5. La similitud de los parámetros neurofisiológicos o neurostructural de las neuronas bajo condiciones en vivo y en vitro son todavía objeto de un debate6, pero en 1975, Schwartzkroin7 indica que la basal propiedades de las neuronas se mantienen en vitro y esa estimulación de alta frecuencia (es decir, tetanization) de aferentes en la formación hipocampal induce una facilitación de larga duración de los potenciales sinápticos8. Electrofisiológica de la actividad neuronal en vitro ampliado en gran medida el estudio de los mecanismos celulares de la plasticidad sináptica dependiente de actividad9,10, que había sido descubierto en 1973 por Bliss et al. 11 en vivo experimentos con conejos.
El estudio de la actividad neuronal o la señalización de vías en rebanadas de cerebro y especialmente en rebanadas hippocampal agudas, es ahora una herramienta estándar. Sin embargo, sorprendentemente, en vitro experimentos han estar estandarizados, como lo demuestran los múltiples enfoques que existen para la preparación y mantenimiento de rebanadas hippocampal agudas. Reid et al. (1988) 12 repasa los desafíos metodológicos para el mantenimiento de rebanadas cerebrales agudas en diferentes tipos de cámaras de la rebanada y las opciones de baño nivel medio, pH, temperatura y oxígeno. Estos parámetros son todavía difíciles de controlar en la cámara de grabación debido a los elementos por encargo en vitro rebanada-grabación configuraciones. Pueden encontrar publicaciones que podría ayudar a superar algunos de los retos metodológicos y describen nuevos tipos de cámaras de rebanada de inmersión, como un sistema intersticial microperfusion 3D del13, una cámara con mejor flujo laminar y oxígeno de la fuente14, un sistema con control de temperatura computarizado15y un sistema de grabación multi cámara16. Ya que estas cámaras no son fáciles de construir, mayoría de los científicos se basan en cámaras de corte disponibles en el mercado. Estas cámaras pueden montarse en un sistema de microscopio, permitiendo la combinación de electrofisiología y de fluorescencia de imagen17,18,19. Puesto que estas cámaras guardar las rebanadas de cerebro sumergidas en líquido cefalorraquídeo artificial (aCSF), un alto flujo de la solución tampón debe mantenerse, aumentar el gasto de uso de la droga. Para ello, hemos incorporado un sistema de perfusión reciclaje con carbogenation de salida que proporciona la estabilidad suficiente para la grabación a largo plazo de los potenciales de campo en una cámara de corte de inmersión usando un volumen relativamente pequeño de la aCSF. Además, resumimos cómo el uso de este sistema experimental carbogenation/perfusión afecta el resultado de la plasticidad sináptica dependiente de actividad10 y cómo la inhibición de la cinasa del factor 2 de elongación eucariotas (eEF2K) modula sináptica transmisión20.

<table width="982">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Reagents required</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:251px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">NaCl</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10019318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">KCl</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10016318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10017618</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">MgCl2&#183;6H2O</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10012818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">CaCl2</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10005861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10018960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">Glucose</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10010518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">NaH2PO4</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">20040718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">HEPES</td>
			<td style="width:244px;">Sigma</td>
			<td style="width:179px;">H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">Sodium pyruvate</td>
			<td style="width:244px;">Sigma</td>
			<td style="width:179px;">A4043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">MgSO4</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">20025118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="width:311px;height:27px;">NaOH</td>
			<td style="width:244px;">Sinopharm Chemical Reagent, China</td>
			<td style="width:179px;">10019718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Tools and materials for dissection</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Decapitators</td>
			<td style="width:244px;">Harvard apparatus</td>
			<td style="width:179px;">55-0012</td>
			<td>for rat decapitation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Bandage Scissors</td>
			<td style="width:244px;">SCHREIBER</td>
			<td style="width:179px;">12-4227</td>
			<td>for mouse decapitation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">double-edge blade</td>
			<td style="width:244px;">Flying Eagle, China</td>
			<td style="width:179px;">74-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">IRIS Scissors</td>
			<td style="width:244px;">RWD, China</td>
			<td style="width:179px;">S12003-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Bone Rongeurs</td>
			<td style="width:244px;">RWD, China</td>
			<td style="width:179px;">S22002-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Spoon</td>
			<td style="width:244px;">Hammacher&#160;</td>
			<td style="width:179px;">HSN 152-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">dental cement spatula</td>
			<td style="width:244px;">Hammacher&#160;</td>
			<td style="width:179px;">HSN 016-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">dental double end excavator</td>
			<td style="width:244px;">Blacksmith Surgical, USA</td>
			<td style="width:179px;">BS-415-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Vibrating Microtome</td>
			<td style="width:244px;">Leica, Germany</td>
			<td style="width:179px;">VT1200S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">surgical blade&#160;</td>
			<td style="width:244px;">RWD, China</td>
			<td style="width:179px;">S31023-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">surgical holder</td>
			<td style="width:244px;">RWD, China</td>
			<td style="width:179px;">S32007-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:311px;height:42px;">Electrophysiology equipment and materials</td>
			<td style="width:244px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Vertical Pipette Puller</td>
			<td style="width:244px;">Narishige, Japan</td>
			<td style="width:179px;">PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Vibration isolation table</td>
			<td style="width:244px;">Meirits, Japan</td>
			<td style="width:179px;">ADZ-A0806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">submerged type recording chamber</td>
			<td style="width:244px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:179px;">RC-26GLP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">thermostatic water bath</td>
			<td style="width:244px;">Zhongcheng Yiqi&#65292;China</td>
			<td style="width:179px;">HH-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">4 Axis Micromanipulator</td>
			<td style="width:244px;">Sutter, USA</td>
			<td style="width:179px;">MP-285, MP-225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Platinum Wire</td>
			<td style="width:244px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:179px;">PTP406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Amplifier</td>
			<td style="width:244px;">Molecular Devices, USA</td>
			<td style="width:179px;">Multiclamp 700B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Data Acquisition System</td>
			<td style="width:244px;">Molecular Devices, USA</td>
			<td style="width:179px;">Digidata 1440A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Anaysis software</td>
			<td style="width:244px;">Molecular Devices, USA</td>
			<td style="width:179px;">Clampex 10.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Fluorescence Microscope</td>
			<td style="width:244px;">Nikon, Japan</td>
			<td style="width:179px;">FN1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">LED light source</td>
			<td style="width:244px;">Lumen Dynamics Group, Canada</td>
			<td style="width:179px;">X-cite 120LED</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">micropipettes</td>
			<td style="width:244px;">Harvard apparatus</td>
			<td style="width:179px;">GC150TF</td>
			<td>extracelluar recording</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">borosilicate micropipettes</td>
			<td style="width:244px;">Sutter, USA</td>
			<td style="width:179px;">BF150-86</td>
			<td>patch clamp</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">tungsten electrode</td>
			<td style="width:244px;">A-M Systems, USA</td>
			<td style="width:179px;">575500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">peristaltic pump</td>
			<td style="width:244px;">Longer, China</td>
			<td style="width:179px;">BT00-300T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">tubes for peristaltic pump</td>
			<td style="width:244px;">ISMATEC, Wertheim, Germany</td>
			<td style="width:179px;">SC0309</td>
			<td>1x inflow, ID: 1.02mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">tubes for peristaltic pump</td>
			<td style="width:244px;">ISMATEC, Wertheim, Germany</td>
			<td style="width:179px;">SC0319</td>
			<td>2x tubes for outflow, ID: 2.79 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">CCD camera</td>
			<td style="width:244px;">PCO, Germany</td>
			<td style="width:179px;">pco.edge sCMOS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">lens cleaning paper</td>
			<td style="width:244px;">Kodak</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">50 ml conical centrifuge tube</td>
			<td style="width:244px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:179px;">339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Prechamber</td>
			<td style="width:244px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:179px;">BSC-PC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Inline heater</td>
			<td style="width:244px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:179px;">SF-28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:311px;height:21px;">Temperature Controller</td>
			<td style="width:244px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:179px;">TC-324B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

recording synaptic plasticity in acute hippocampal slices maintained in a small-volume recycling-, perfusion-, and submersion-type chamber system

Aunque los experimentos en rebanadas de cerebro han estado en uso desde 1951, siguen existiendo problemas que reducen la probabilidad de lograr un análisis acertado y estable de la modulación de la transmisión sináptica al realizar grabaciones intracelulares o potenciales del campo. Este manuscrito describe aspectos metodológicos que pueden ser útiles en la mejora de las condiciones experimentales para el mantenimiento de rebanadas cerebrales agudas y para la grabación de potenciales postsinápticos excitatorios de campo en una cámara de inmersión disponibles en el mercado con una unidad de salida carbogenation. La carbogenation de la salida ayuda a estabilizar el nivel de oxígeno en los experimentos que se basan en el reciclaje de un depósito tampón pequeño para mejorar la rentabilidad de experimentos con drogas. Además, el manuscrito presenta experimentos representativos que examinan los efectos de la carbogenation diferentes modos y paradigmas de estimulación de la plasticidad sináptica dependiente de actividad de la transmisión sináptica.

En la sección de protocolo, nos describe la preparación de aguda rebanadas hippocampal de la parte intermedia y ventral de la formación hipocámpica (figura 1) de ratones C57BL/6 machos y ratas Wistar macho (5-8 semanas). La posición de los hemisferios en la plataforma de la máquina de cortar ayuda a mantener estable y elimina la necesidad de estabilización con agar o agarosa. El sistema de perfusión se basa en una bomba peristáltica en alta rotación...

Watch this Scientific Journal Video about Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System at JoVE.com

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Grabación de la plasticidad sináptica en rebanadas Hippocampal agudas mantenidas en un pequeño volumen reciclado - perfusión- y sistema de cámara de tipo inmersión

Este protocolo describe la estabilización del nivel de oxígeno en un pequeño volumen de tampón reciclado y aspectos metodológicos de la plasticidad sináptica dependiente de actividad de la grabación en rebanadas hippocampal agudas sumergidas.

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparación de oligómeros β-amiloide 1-42 Y la inducción del deterioro de plasticidad sináptica en rodajas de hipocampo

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Investigación

Neurociencias

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

Preparación de la aguda rodajas de hipocampo de ratas y ratones transgénicos para el estudio de las alteraciones sinápticas durante el envejecimiento y la patología amiloide

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

Lateral Diffusion and Exocytosis of Membrane Proteins in Cultured Neurons Assessed using Fluorescence Recovery and Fluorescence-loss Photobleaching

Difusión lateral y exocitosis de proteínas de membrana en neuronas cultivadas evaluó a través de la recuperación de fluorescencia y la pérdida de fluorescencia photobleaching

Membrane proteins such as receptors and ion channels undergo active trafficking in neurons, which are highly polarised and morphologically complex. This ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Dos registros electrofisiológicos de sinápticamente respuestas evocadas neuronal y astroglial en agudas rodajas de hipocampo

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Paired Whole Cell Recordings in Organotypic Hippocampal Slices

Pareadas Grabaciones de células enteras en organotípicos de hipocampo rebanadas

Pair recordings involve simultaneous whole cell patch clamp recordings from two synaptically connected neurons, enabling not only direct ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

Investigación de sináptica Tagging / Captura y Cruz de captura utilizando aguda hipocampo rebanadas de Roedores

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

Medición de endocitosis vesícula sináptica en neuronas Hippocampal cultivadas

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic ...

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Modelo murino de inflamación inducida por Pentylenetetrazole

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

Preparation of Acute Spinal Cord Slices for Whole-cell Patch-clamp Recording in Substantia Gelatinosa Neurons

Preparación de láminas agudas de la médula espinal para celulares Patch-clamp de grabación en las neuronas de la sustancia Gelatinosa

Recent whole-cell patch-clamp studies from substantia gelatinosa (SG) neurons have provided a large body of information about the spinal mechanisms ...