Name: a caenorhabditis elegans nutritional-status based copper aversion assay
Uploaded: 2017-07-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af Det Naturvidenskabelige og Tekniske Forskningsråd i Canada Discovery Grant RGPIN36481-08 til William G. Bendena.

1. Fremstilling af eksperimentelle organismer <ol><li> Vælg 10 L4 iscenesatte nematoder pr. Stamme 24 timer inden påbegyndelse af analysen for at sikre, at organismer er unge voksne, når de testes. For hver mutant eller kontrol nematode testet, vælg 10 L4s (10 for kontrollen og 10 for assayet). <ol><li> Vedligeholdelse af L4-organismer ved anvendelse af standardmetoder 26 , 27 i 24 timer på standard agarplader podet med OP50 Escherich...

<ol>
	<li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314 (1165), 1-340 (1986).</li><li>Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemosensation+in+C.+elegans+(October+25,+2006).">Chemosensation in C. elegans (October 25, 2006).</a> The C. elegans Research Community, WormBook. , (2006).</li><li>Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction+in+C.+elegans.">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans.</a> Cell. 74 (3), 515-527 (1993).</li><li>Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotaxis+by+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+identification+of+attractants+and+analysis+of+the+response+by+use+of+mutants.">Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans: identification of attractants and analysis of the response by use of mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 70 (3), 817-821 (1973).</li><li>Ramot, D., MacInnis, B. L., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+temperature-sensing+by+a+single+thermosensory+neuron+in+C.+elegans.">Bidirectional temperature-sensing by a single thermosensory neuron in C. elegans.</a> Nat. Neurosci. 11 (8), 908-915 (2008).</li><li>Russell, J., Vidal-Gadea, A. G., Makay, A., Lanam, C., Pierce-Shimomura, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humidity+sensation+requires+both+mechanosensory+and+thermosensory+pathways+in+Caenorhabditis+elegans.">Humidity sensation requires both mechanosensory and thermosensory pathways in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 111 (22), 8269-8274 (2014).</li><li>van Campen, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+modulation+disorders+in+childhood+epilepsy.">Sensory modulation disorders in childhood epilepsy.</a> J. Neurodev. Disord. 7 (34), (2015).</li><li>Festa, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neocortical+disconnectivity+disrupts+sensory+integration+in+Alzheimer's+disease.">Neocortical disconnectivity disrupts sensory integration in Alzheimer's disease.</a> Neuropsych. 19 (6), 728-738 (2005).</li><li>Boecker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+processing+in+Parkinson's+and+Huntington's+disease:+investigations+with+3D+H(2)(15)O-PET.">Sensory processing in Parkinson's and Huntington's disease: investigations with 3D H(2)(15)O-PET.</a> Brain. 122 (9), 1651-1665 (1999).</li><li>Markaki, M., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+disease+in+Caenorhabditis+elegans.">Modeling human disease in Caenorhabditis elegans.</a> Biotechnol. J. 5 (12), 1261-1276 (2010).</li><li>O'Reilly, L. P., Luke, C. J., Perlmutter, D. H., Silverman, G. A., Pak, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+in+high-throughput+drug+discovery.">C. elegans in high-throughput drug discovery.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. , 247-253 (2014).</li><li>Thompson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+million+mutation+project:+a+new+approach+to+genetics+in+Caenorhabditis+elegans.">The million mutation project: a new approach to genetics in Caenorhabditis elegans.</a> Genome Res. 23 (10), 1749-1762 (2013).</li><li>Chao, M. Y., Komatsu, H., Fukuto, H. S., Dionne, H. M., Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+status+and+serotonin+rapidly+and+reversibly+modulate+a+Caenorhabditis+elegans+chemosensory+circuit.">Feeding status and serotonin rapidly and reversibly modulate a Caenorhabditis elegans chemosensory circuit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 101 (43), 15512-15517 (2004).</li><li>Maricq, A. V., Peckol, E., Driscoll, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanosensory+signaling+in+C.+elegans+mediated+by+the+GLR-1+glutamate+receptor.">Mechanosensory signaling in C. elegans mediated by the GLR-1 glutamate receptor.</a> Nat. 378 (6552), 78-81 (1995).</li><li>Chalasani, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+a+circuit+for+olfactory+behaviour+in+Caenorhabditis+elegans.">Dissecting a circuit for olfactory behaviour in Caenorhabditis elegans.</a> Nat. 450 (7166), 63-70 (2007).</li><li>Hilliard, M. A., Bargmann, C. I., Bazzicalupo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+responds+to+chemical+repellents+by+integrating+sensory+inputs+from+the+head+and+the+tail.">C. elegans responds to chemical repellents by integrating sensory inputs from the head and the tail.</a> Curr. Biol. 12 (9), 730-734 (2002).</li><li>Hart, A. C., Kass, J., Shapiro, J. E., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+signaling+pathways+mediate+touch+and+osmosensory+responses+in+a+polymodal+sensory+neuron.">Distinct signaling pathways mediate touch and osmosensory responses in a polymodal sensory neuron.</a> J. Neurosci. 19 (6), 1952-1958 (1999).</li><li>Ishihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HEN-1,+a+secretory+protein+with+an+LDL+receptor+motif,+regulates+sensory+integration+and+learning+in+Caenorhabditis+elegans.">HEN-1, a secretory protein with an LDL receptor motif, regulates sensory integration and learning in Caenorhabditis elegans.</a> Cell. 109 (5), 639-649 (2002).</li><li>Saeki, S., Yamamoto, M., Iino, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+chemotaxis+revealed+by+paired+presentation+of+a+chemoattractant+and+starvation+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Plasticity of chemotaxis revealed by paired presentation of a chemoattractant and starvation in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> J. Exp. Biol. 204 (10), 1757-1764 (2001).</li><li>Chao, M. Y., Komatsu, H., Fukuto, H. S., Dionne, H. M., Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+status+and+serotonin+rapidly+and+reversibly+modulate+a+Caenorhabditis+elegans+chemosensory+circuit.">Feeding status and serotonin rapidly and reversibly modulate a Caenorhabditis elegans chemosensory circuit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (43), 15512-15517 (2004).</li><li>Campbell, J. C., Polan-Couillard, L. F., Chin-Sang, I. D., Bendena, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NPR-9,+a+Galanin-Like+G-Protein+Coupled+Receptor,+and+GLR-1+Regulate+Interneuronal+Circuitry+Underlying+Multisensory+Integration+of+Environmental+Cues+in+Caenorhabdities+elegans.">NPR-9, a Galanin-Like G-Protein Coupled Receptor, and GLR-1 Regulate Interneuronal Circuitry Underlying Multisensory Integration of Environmental Cues in Caenorhabdities elegans.</a> PLoS Genet. 12 (5), (2016).</li><li>Harris, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+distinct+amine+receptors+operating+at+different+levels+within+the+locomotory+circuit+are+each+essential+for+the+serotonergic+modulation+of+chemosensation+in+Caenorhabditis+elegans.">Three distinct amine receptors operating at different levels within the locomotory circuit are each essential for the serotonergic modulation of chemosensation in Caenorhabditis elegans.</a> J. Neurosci. 29 (5), 1446-1456 (2009).</li><li>Harris, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+the+serotonergic+food+signal+stimulating+sensory-mediated+aversive+behavior+in+C.+elegans.">Dissecting the serotonergic food signal stimulating sensory-mediated aversive behavior in C. elegans.</a> PLoS One. 6 (7), (2011).</li><li>Mitchell, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+differential+role+for+neuropeptides+in+acute+and+chronic+adaptive+responses+to+alcohol:+behavioural+and+genetic+analysis+in+Caenorhabditis+elegans.">A differential role for neuropeptides in acute and chronic adaptive responses to alcohol: behavioural and genetic analysis in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 5 (5), (2010).</li><li>Colbert, H. A., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+signals+modulate+olfactory+acuity,+discrimination,+and+memory+in+Caenorhabditis+elegans.">Environmental signals modulate olfactory acuity, discrimination, and memory in Caenorhabditis elegans.</a> Learn Mem. 4 (2), 179-191 (1997).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genet. 77 (1), 71-71 (1974).</li><li>Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+(July+3,+2006).">Behavior (July 3, 2006).</a> The C. elegans Research Community, WormBook. , (2006).</li><li>Sambongi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensing+of+cadmium+and+copper+ions+by+externally+exposed+ADL,+ASE,+ASH+neurons+elicits+avoidance+response+in+Caenorhabditis+elegans.">Sensing of cadmium and copper ions by externally exposed ADL, ASE, ASH neurons elicits avoidance response in Caenorhabditis elegans.</a> NeuroReport. 10 (4), 753-757 (1999).</li><li>Gray, J. M., Hill, J. J., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+circuit+for+navigation+in+Caenorhabditis+elegans.">A circuit for navigation in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 102 (9), 3184-3191 (2004).</li><li>Rechavi, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Starvation-Induced+Transgenerational+Inheritance+of+Small+RNAs+in+C.+elegans.">Starvation-Induced Transgenerational Inheritance of Small RNAs in C. elegans.</a> Cell. 158 (2), 277-287 (2014).</li><li>Gloria-Soria, A., Azevedo, R. B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=npr-1+Regulates+Foraging+and+Dispersal+Strategies+in+Caenorhabditis+elegans.">npr-1 Regulates Foraging and Dispersal Strategies in Caenorhabditis elegans.</a> Cell. 18 (21), 1694-1699 (2008).</li><li>Beron, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burrowing+behavior+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+A+new+assay+for+the+study+of+neuromuscular+disorders.">The burrowing behavior of the nematode Caenorhabditis elegans: A new assay for the study of neuromuscular disorders.</a> Genes Brain Behav. 14 (4), 357-368 (2015).</li><li>Wang, S. J., Wang, Z. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Track-A-Worm,+An+Open-Source+System+for+Quantitative+Assessment+of+C.+elegans+Locomotory+and+Bending+Behavior.">Track-A-Worm, An Open-Source System for Quantitative Assessment of C. elegans Locomotory and Bending Behavior.</a> PLoS One. 8 (7), (2013).</li></ol>

Dette assaydesign modificerer fødevareløbsassayet 24 for at indbefatte en kobberopløsning for at skabe en aversiv midterbarriere og omkring kanten af ​​pladen for at forhindre tab af nematoder. Organer testes for deres evne til at krydse den aversive barriere og nå en mad patch over en 4 h periode. I sammenhæng med npr-9 (GF) har vi brugt denne analyse for at vurdere, hvordan sultningsbetingelser kan påvirke aversive responser og påvisning af mad. Forudsat at vi tidligere havd...

Caenorhabditis elegans er blevet anvendt som model for undersøgelsen af ​​neurobiologi i årtier på grund af den relative lethed ved at analysere kredsløbene i et nervesystem bestående af kun 302 neuroner 1 . Forudsat at organismen er afhængig af at reagere på miljøet, er meget af nervesystemet dedikeret til at regulere integrationen af ​​miljøsignaler 2 . På trods af enkelhed i nervesystemet kan C. elegans detektere og reagere på forskellige miljøsignaler, herunder repellenter 3 , attractants 4 , temperatur 5 og endda fugtighed 6 . En manglende korrekt integrere miljømæssige signaler er blevet forbundet med en række adfærdsmæssige lidelser og neurodegenerative tilstande i mammale modelsystemer 7- 9. Med en række tilgængelige neurale sygdomsmodeller<html> 10 i C. elegans og udviklingen af ​​nematode farmaceutiske skærme 11 har denne organisme vist sig at være et nyttigt system til undersøgelse af neurobiologi. I betragtning af tilgængeligheden af ​​en kortlagt nematode-forbindelse 1 og mutationer til næsten ethvert gen i nematodegenomet 12 , er vores forståelse for nematoden-nervesystemet og i forlængelse af vores egen del begrænset af designet af kreativt passende analyser. En række kemotaxisanalyser er blevet udviklet i løbet af de sidste 40 år for at evaluere nematode responsivitet til forskellige aversive stimuli 3 , 4 , 13 , 14 , 15 . Indledende eksperimenter involverede indførelsen af ​​en akut miljøstimulering, mens en enkelt orm gik på en agarplade= &quot;Xref&quot;&gt; 3 , 14 , 16 . Umiddelbare ændringer i lokomotiv reaktioner blev registreret. F.eks. Kan den flygtige duftende oktanol påføres et hår og væftes foran en nematods næse for at stimulere indledningen af ​​baglæns bevægelse i vildtype orme 17 . Mere komplekse analyser er også udviklet til at inkorporere flere variabler som et middel til at vurdere adfærdsmæssige valg 18 . En variation af dette assay indebærer anvendelsen af ​​en kobberopløsning for at skabe en aversiv midterbarriere 4 . Et attraktivt stof, nemlig diacetyl, blev anbragt på den ene side af den kemiske barriere med orme overført væk fra diacetylkilden. Ormer, der er defekte for kobber-aversive responser, krydsede straks barrieren for at nå diacetylen, mens vildtype orme oprindeligt blev afstødt af barrieren. Svar blev scoret, da ormer først nærmede sig kobberbarrierenUden langsigtede observationer. Når orme vurderes efter at have været udsat for sultningsbetingelser, nedsættes deres følsomhed over for miljømæssige stimuli 19 . Når den aversive kemiske oktanol blæser frem for nematode næse, stimulerer vildtype organismer baglæns bevægelse inden for 3 - 5 s, når de er på mad. Efter at disse organismer er blevet fjernet fra mad i 10 minutter, udviser de et forsinket respons på 8 - 10 s 20 . Således med øget svimmelhed viser nematoder et svagt aversivt respons på skadelige miljøsignaler, da søgen efter mad bliver mere afgørende for overlevelse. Omvendt reagerer nematoder, der overtrykker neuropeptidreceptor 9 ( npr-9) , ikke på oktanol på eller uden mad og udviser en manglende evne til at reagere på en række aversive stimuli 21 . Disse npr-9 (GF) organismer modulerer heller ikke deres reverseringsfrekvens i nærværelse af mad, men kanOmvendt som reaktion på hårde berøringsstimuleringer, der indikerer at de er i stand til baglæns bevægelse 21 . Vi har også evalueret npr-9 (LF) -mutanter, da de udviser en abnormt nedsat tilbagekoblingsfrekvens af mad, men alligevel kan modulere deres adfærd i nærværelse af mad 21 . Kobling af ormens ernæringsstatus med indførelsen af ​​akutte eksterne stimuli har hjulpet til at belyse de mekanismer, hvormed en fødevarerelateret vej i vid udstrækning kan modulere sensoriske signalveje 22 , 23 . Tilstedeværelsen af ​​mad i nematodmiljøet er også blevet brugt til at evaluere tilbageholdelsesresponser fra etanol 24 . I dette eksperiment blev ormer inkuberet i varierende koncentrationer af ethanol og derefter anbragt på en agarplade med et plaster af fødevarer kendt som et &quot;mad-race-assay&quot;. Madplasterne blev anbragt på den ene kant af pladen, mens nematoderne wEre placeret væk fra fødekilden. Ethanoludtagning blev evalueret ved at måle varigheden af ​​det tidsrum, der kræves for orme for at nå fødevaren. Denne ernæringsbaserede kobberaversionsanalyse bygger på fødevarelabsassayet for at integrere yderligere miljøvariabler, nemlig mad og kobber, mens man vurderer adfærdsændringer over tid. Dette er en tilpasning af en almindelig brugsprotokol i hele C. elegans- fællesskabet 4 . Denne protokol er blevet anvendt til at evaluere aversive responser og påvisning af mad over en fire-timers periode 21 . Da ormen udviser sultedrag efter 30 minutter med fødevaresvigt 25 , kan vi også vurdere, hvordan ændringer i ernæringsstatus kan påvirke miljømæssige reaktioner. Betingelserne for denne analyse måler, hvordan eksperimentelle organismer ændrer responsen til aversive stimuli over tid, og det vurderer derfor adfærdsændringer somOrganismer fremskridt hen imod en sultet tilstand (og fortsatte målinger af langvarig sult). Da npr-9 (GF) dyrene ikke ændrer deres adfærd som følge af mad eller mange aversive tegn, forsøgte vi at identificere, om disse adfærdsmæssige underskud ville fortsætte i tilfælde af sult. I sidste ende er dette analysesignat formuleret til specifikt at evaluere npr-9 (GF) mutanterne, men kan yderligere tilpasses til også at karakterisere nye stammer.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="689">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:332px;">M9 Solution [3 g KH2PO4, 6 g Na2HPO4, 5 g NaCl, 1 ml 1 M MgSO4, H2O to 1 litre. Autoclave to sterilize before use.]</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Produced in lab</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:332px;">Cupric Sulfate</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C-1297</td>
			<td style="width:167px;">Use water to appropriately suspend to a concentration of 0.5M</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a caenorhabditis elegans nutritional-status based copper aversion assay

For at sikre overlevelse skal organismer være i stand til at undgå ugunstige levesteder samtidig med at der sikres en konsekvent fødekilde. Caenorhabditis elegans ændrer deres bevægelsesmønstre ved påvisning af forskellige miljømæssige stimuli og kan modulere deres pakke af adfærdsmæssige reaktioner som reaktion på sultbetingelser. Nematoder udviser typisk et nedsat aversivt respons, når de fjernes fra en fødekilde i over 30 minutter. Observation af adfærdsændringer som reaktion på en ændret ernæringsstatus kan give indsigt i de mekanismer, der regulerer overgangen fra en velfødt til sultet tilstand. Vi har udviklet et assay, der måler en nematode evne til at krydse en aversive barriere ( dvs. kobber) og nå en fødekilde over en længere periode. Denne protokol bygger på tidligere arbejde ved at integrere flere variabler på en måde, der muliggør fortsat dataindsamling, når organismerne skifter mod aN mere sultet tilstand. Desuden tillader dette assay en forøget prøvestørrelse, således at større populationer af nematoder kan evalueres samtidigt. Organer, der er defekte for evnen til at detektere eller reagere på kobber, krydser straks den kemiske barriere, mens vildtype nematoder i starten afstødes. Efterhånden som vildtype orme bliver mere og mere sultede, begynder de at krydse barrieren og nå fødekilden. Vi har udformet dette assay for at evaluere en mutant, der ikke er i stand til at reagere på forskellige miljømæssige tegn, herunder madfølelse eller påvisning af aversive kemikalier. Ved evaluering via denne protokol krydsede de defekte organismer straks barrieren, men var heller ikke ude af stand til at detektere en fødekilde. Derfor krydser disse mutanter gentagne gange den kemiske barriere, selv om de midlertidigt når en fødevarekilde. Dette assay kan let teste populationer af orme for at evaluere potentielle vejfejl i forbindelse med aversion og sult.

Vi benyttede vildtype (N2), npr-9 (tm1652) og en npr-9 overekspressionstamme, dvs. npr-9 (GF) (IC836 - npr-9 :: npr-9; sur-5 :: gfp; odr -1 :: rfp), for at evaluere responser på sult og kobberaversion. Vildtyporganismer er i stand til at detektere og reagere på den aversive kobberbarriere, mens npr-9 (GF) -mutanter ikke initierer et aversivt respons på kobberet over 4 h assayet 21 . Efter 30 minutter af sult...

Watch this Scientific Journal Video about A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay at JoVE.com

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

EN<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Næringsstatusbaseret kobber Aversion Assay

Her præsenterer vi en Caenorhabditis elegans -specifik analyse designet til at evaluere ændringer i kobberaversionsadfærd og evnen til at lokalisere en fælles fødevarekilde, da organismen udvikler sig fra en velfødt til sultet næringsstatus.

To ensure survival, organisms must be capable of avoiding unfavorable habitats while ensuring a consistent food source. Caenorhabditis elegans alter their ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Automatiseret Kvantificering af Synaptic Fluorescens in<em&gt; C. elegans</em

Synapse strength refers to the amplitude of postsynaptic responses to presynaptic neurotransmitter release events, and has a major impact on overall ...

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

A<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Model System for Amylopathy Study

Amylopathy is a term that describes abnormal synthesis and accumulation of amyloid beta (A&beta;) in tissues with time. A&beta; is a hallmark of ...

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Metoder til undersøgelse af virkningsmekanismer for antipsykotika i<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to  large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C.  ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

En analyse til måling virkningerne af ethanol på Locomotion hastighed<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Agarose Microchambers for Langsigtet Calcium Imaging af<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Behavior is controlled by the nervous system. Calcium imaging is a straightforward method in the transparent nematode Caenorhabditis elegans to measure ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

En Behavioral Assay for Mechanosensation af MARCM-baserede kloner i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Novel Metrics to Characterize Embryonic Elongation of the Nematode Caenorhabditis elegans

Novel Metrics to Characterize Embryonic Elongation of the Nematode Caenorhabditis elegans

Nye Metrics at karakterisere Embryonale Forlængelse af nematoden<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Dissecting the signaling pathways that control the alteration of morphogenic processes during embryonic development requires robust and sensitive metrics. ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

Assay udvikling for høje indhold kvantificering af Sod1 Mutant Protein samlede dannelse i levende celler

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

Ratiometric Calcium billeddannelse af enkelte neuroner i opfører sig Caenorhabditis Elegans

It has become increasingly clear that neural circuit activity in behaving animals differs substantially from that seen in anesthetized or immobilized ...

Imaging Dendritic Spines in Caenorhabditis elegans

Imaging Dendritic Spines in Caenorhabditis elegans

Billeddannelse Dendritiske rygsøjler i Caenorhabditis elegans

Dendritic spines are specialized sites of synaptic innervation modulated by activity and serve as substrates for learning and memory. Recently, dendritic ...