Name: a caenorhabditis elegans nutritional-status based copper aversion assay
Uploaded: 2017-07-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av Naturvitenskaps- og ingeniørforskningsrådet i Canada Discovery Grant RGPIN36481-08 til William G. Bendena.

1. Fremstilling av eksperimentelle organismer <ol><li> Velg 10 L4 iscenesatte nematoder pr. Belastning 24 timer før analysen starter for å sikre at organismer er unge voksne når de testes. For hver mutant eller kontroll nematode testet, velg 10 L4s (10 for kontrollen og 10 for analysen). <ol><li> Opprettholde L4 organismer ved bruk av standardmetoder 26 , 27 i 24 timer på standard agarplater frøet med OP50 Escherichia coli . Hvis...

<ol>
	<li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 314 (1165), 1-340 (1986).</li><li>Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemosensation+in+C.+elegans+(October+25,+2006).">Chemosensation in C. elegans (October 25, 2006).</a> The C. elegans Research Community, WormBook. , (2006).</li><li>Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction+in+C.+elegans.">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans.</a> Cell. 74 (3), 515-527 (1993).</li><li>Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotaxis+by+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+identification+of+attractants+and+analysis+of+the+response+by+use+of+mutants.">Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans: identification of attractants and analysis of the response by use of mutants.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 70 (3), 817-821 (1973).</li><li>Ramot, D., MacInnis, B. L., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+temperature-sensing+by+a+single+thermosensory+neuron+in+C.+elegans.">Bidirectional temperature-sensing by a single thermosensory neuron in C. elegans.</a> Nat. Neurosci. 11 (8), 908-915 (2008).</li><li>Russell, J., Vidal-Gadea, A. G., Makay, A., Lanam, C., Pierce-Shimomura, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humidity+sensation+requires+both+mechanosensory+and+thermosensory+pathways+in+Caenorhabditis+elegans.">Humidity sensation requires both mechanosensory and thermosensory pathways in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 111 (22), 8269-8274 (2014).</li><li>van Campen, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+modulation+disorders+in+childhood+epilepsy.">Sensory modulation disorders in childhood epilepsy.</a> J. Neurodev. Disord. 7 (34), (2015).</li><li>Festa, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neocortical+disconnectivity+disrupts+sensory+integration+in+Alzheimer's+disease.">Neocortical disconnectivity disrupts sensory integration in Alzheimer's disease.</a> Neuropsych. 19 (6), 728-738 (2005).</li><li>Boecker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+processing+in+Parkinson's+and+Huntington's+disease:+investigations+with+3D+H(2)(15)O-PET.">Sensory processing in Parkinson's and Huntington's disease: investigations with 3D H(2)(15)O-PET.</a> Brain. 122 (9), 1651-1665 (1999).</li><li>Markaki, M., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+disease+in+Caenorhabditis+elegans.">Modeling human disease in Caenorhabditis elegans.</a> Biotechnol. J. 5 (12), 1261-1276 (2010).</li><li>O'Reilly, L. P., Luke, C. J., Perlmutter, D. H., Silverman, G. A., Pak, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+in+high-throughput+drug+discovery.">C. elegans in high-throughput drug discovery.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. , 247-253 (2014).</li><li>Thompson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+million+mutation+project:+a+new+approach+to+genetics+in+Caenorhabditis+elegans.">The million mutation project: a new approach to genetics in Caenorhabditis elegans.</a> Genome Res. 23 (10), 1749-1762 (2013).</li><li>Chao, M. Y., Komatsu, H., Fukuto, H. S., Dionne, H. M., Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+status+and+serotonin+rapidly+and+reversibly+modulate+a+Caenorhabditis+elegans+chemosensory+circuit.">Feeding status and serotonin rapidly and reversibly modulate a Caenorhabditis elegans chemosensory circuit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 101 (43), 15512-15517 (2004).</li><li>Maricq, A. V., Peckol, E., Driscoll, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanosensory+signaling+in+C.+elegans+mediated+by+the+GLR-1+glutamate+receptor.">Mechanosensory signaling in C. elegans mediated by the GLR-1 glutamate receptor.</a> Nat. 378 (6552), 78-81 (1995).</li><li>Chalasani, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+a+circuit+for+olfactory+behaviour+in+Caenorhabditis+elegans.">Dissecting a circuit for olfactory behaviour in Caenorhabditis elegans.</a> Nat. 450 (7166), 63-70 (2007).</li><li>Hilliard, M. A., Bargmann, C. I., Bazzicalupo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+responds+to+chemical+repellents+by+integrating+sensory+inputs+from+the+head+and+the+tail.">C. elegans responds to chemical repellents by integrating sensory inputs from the head and the tail.</a> Curr. Biol. 12 (9), 730-734 (2002).</li><li>Hart, A. C., Kass, J., Shapiro, J. E., Kaplan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+signaling+pathways+mediate+touch+and+osmosensory+responses+in+a+polymodal+sensory+neuron.">Distinct signaling pathways mediate touch and osmosensory responses in a polymodal sensory neuron.</a> J. Neurosci. 19 (6), 1952-1958 (1999).</li><li>Ishihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HEN-1,+a+secretory+protein+with+an+LDL+receptor+motif,+regulates+sensory+integration+and+learning+in+Caenorhabditis+elegans.">HEN-1, a secretory protein with an LDL receptor motif, regulates sensory integration and learning in Caenorhabditis elegans.</a> Cell. 109 (5), 639-649 (2002).</li><li>Saeki, S., Yamamoto, M., Iino, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+chemotaxis+revealed+by+paired+presentation+of+a+chemoattractant+and+starvation+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Plasticity of chemotaxis revealed by paired presentation of a chemoattractant and starvation in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> J. Exp. Biol. 204 (10), 1757-1764 (2001).</li><li>Chao, M. Y., Komatsu, H., Fukuto, H. S., Dionne, H. M., Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+status+and+serotonin+rapidly+and+reversibly+modulate+a+Caenorhabditis+elegans+chemosensory+circuit.">Feeding status and serotonin rapidly and reversibly modulate a Caenorhabditis elegans chemosensory circuit.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101 (43), 15512-15517 (2004).</li><li>Campbell, J. C., Polan-Couillard, L. F., Chin-Sang, I. D., Bendena, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NPR-9,+a+Galanin-Like+G-Protein+Coupled+Receptor,+and+GLR-1+Regulate+Interneuronal+Circuitry+Underlying+Multisensory+Integration+of+Environmental+Cues+in+Caenorhabdities+elegans.">NPR-9, a Galanin-Like G-Protein Coupled Receptor, and GLR-1 Regulate Interneuronal Circuitry Underlying Multisensory Integration of Environmental Cues in Caenorhabdities elegans.</a> PLoS Genet. 12 (5), (2016).</li><li>Harris, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+distinct+amine+receptors+operating+at+different+levels+within+the+locomotory+circuit+are+each+essential+for+the+serotonergic+modulation+of+chemosensation+in+Caenorhabditis+elegans.">Three distinct amine receptors operating at different levels within the locomotory circuit are each essential for the serotonergic modulation of chemosensation in Caenorhabditis elegans.</a> J. Neurosci. 29 (5), 1446-1456 (2009).</li><li>Harris, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+the+serotonergic+food+signal+stimulating+sensory-mediated+aversive+behavior+in+C.+elegans.">Dissecting the serotonergic food signal stimulating sensory-mediated aversive behavior in C. elegans.</a> PLoS One. 6 (7), (2011).</li><li>Mitchell, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+differential+role+for+neuropeptides+in+acute+and+chronic+adaptive+responses+to+alcohol:+behavioural+and+genetic+analysis+in+Caenorhabditis+elegans.">A differential role for neuropeptides in acute and chronic adaptive responses to alcohol: behavioural and genetic analysis in Caenorhabditis elegans.</a> PLoS One. 5 (5), (2010).</li><li>Colbert, H. A., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+signals+modulate+olfactory+acuity,+discrimination,+and+memory+in+Caenorhabditis+elegans.">Environmental signals modulate olfactory acuity, discrimination, and memory in Caenorhabditis elegans.</a> Learn Mem. 4 (2), 179-191 (1997).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genet. 77 (1), 71-71 (1974).</li><li>Hart, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+(July+3,+2006).">Behavior (July 3, 2006).</a> The C. elegans Research Community, WormBook. , (2006).</li><li>Sambongi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensing+of+cadmium+and+copper+ions+by+externally+exposed+ADL,+ASE,+ASH+neurons+elicits+avoidance+response+in+Caenorhabditis+elegans.">Sensing of cadmium and copper ions by externally exposed ADL, ASE, ASH neurons elicits avoidance response in Caenorhabditis elegans.</a> NeuroReport. 10 (4), 753-757 (1999).</li><li>Gray, J. M., Hill, J. J., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+circuit+for+navigation+in+Caenorhabditis+elegans.">A circuit for navigation in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 102 (9), 3184-3191 (2004).</li><li>Rechavi, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Starvation-Induced+Transgenerational+Inheritance+of+Small+RNAs+in+C.+elegans.">Starvation-Induced Transgenerational Inheritance of Small RNAs in C. elegans.</a> Cell. 158 (2), 277-287 (2014).</li><li>Gloria-Soria, A., Azevedo, R. B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=npr-1+Regulates+Foraging+and+Dispersal+Strategies+in+Caenorhabditis+elegans.">npr-1 Regulates Foraging and Dispersal Strategies in Caenorhabditis elegans.</a> Cell. 18 (21), 1694-1699 (2008).</li><li>Beron, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+burrowing+behavior+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+A+new+assay+for+the+study+of+neuromuscular+disorders.">The burrowing behavior of the nematode Caenorhabditis elegans: A new assay for the study of neuromuscular disorders.</a> Genes Brain Behav. 14 (4), 357-368 (2015).</li><li>Wang, S. J., Wang, Z. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Track-A-Worm,+An+Open-Source+System+for+Quantitative+Assessment+of+C.+elegans+Locomotory+and+Bending+Behavior.">Track-A-Worm, An Open-Source System for Quantitative Assessment of C. elegans Locomotory and Bending Behavior.</a> PLoS One. 8 (7), (2013).</li></ol>

Denne analysesignal modifiserer matkjøringsanalysen 24 for å inkludere en kobberløsning for å skape en aversiv midterbarriere og rundt kanten av platen for å forhindre tap av nematoder. Organer testes for deres evne til å krysse aversive barriere og nå en matrett i løpet av en 4 h periode. I sammenheng med npr-9 (GF) har vi benyttet denne analysen for å vurdere hvordan sultningsforholdene kan påvirke aversive responser og påvisning av mat. Forutsatt at vi tidligere hadde karak...

Caenorhabditis elegans har blitt brukt som en modell for studiet av nevrobiologi i flere tiår på grunn av den relative lettheten ved å analysere kretsen av et nervesystem som består av bare 302 nevroner 1 . Forutsatt at organismen er avhengig av å reagere på miljømessige tegn, er mye av nervesystemet dedikert til å regulere integrasjonen av miljøsignaler 2 . Til tross for enkelheten i nervesystemet, kan C. elegans oppdage og reagere på ulike miljøsignaler, inkludert repellenter 3 , attractants 4 , temperatur 5 og til og med fuktighet 6 . En unnlatelse av å integrere miljøsignaler har blitt knyttet til en rekke av adferdsforstyrrelser og nevrodegenerative tilstander i pattedyrmodellsystemer 7- 9. Med en rekke tilgjengelige neurale sykdomsmodeller<html> 10 i C. elegans og utviklingen av nematode farmasøytiske skjermer 11 , har denne organismen vist seg å være et nyttig system for studiet av neurobiologi. Gitt tilgjengeligheten av en kartlagt nematode-forbindelse 1 og mutasjoner til nesten hvert gen i nematodegenomet 12 , er vår forståelse for nematode-nervesystemet, og i forlengelse vår egen, delvis begrenset av utformingen av kreativt hensiktsmessige analyser. En rekke kjemotaksanalyser har blitt utviklet de siste 40 årene for å evaluere nematoderesponsivitet til forskjellige aversive stimuli 3 , 4 , 13 , 14 , 15 . Førstegangsforsøk involverte innføringen av en akutt miljøstimulus mens en enkelt orm gikk på en agarplate= &quot;Xref&quot;&gt; 3 , 14 , 16 . Umiddelbare endringer i lokomotivsvar ble registrert. For eksempel kan den flyktige luktende oktanol påføres et hår og vevet foran en nematods nese for å stimulere initieringen av bakover-bevegelse i vildtype ormer 17 . Flere komplekse analyser er også utviklet for å inkorporere flere variabler som et middel til å vurdere atferdsvalg 18 . En variant av denne analysen innebærer bruk av en kobberløsning for å skape en aversiv midterbarriere 4 . Et attraktivt middel, nemlig diacetyl, ble plassert på den ene siden av den kjemiske barrieren med ormer overført fra diacetylkilden. Ormer som er defekte for kobber aversive responser krysset straks barrieren for å nå diacetylen, mens villtype ormer ble opprinnelig avstøt av barrieren. Respons ble scoret da ormer først nærmet seg kobberbarrierenUten langsiktige observasjoner. Når ormer vurderes etter å ha gjennomgått sultevilkår, blir deres følsomhet for miljøstimuli redusert 19 . Når den aversive kjemiske oktanolen er ventet foran nematodnosen, stimulerer villtype organismer bakoverbevegelse innen 3 - 5 s når de er på mat. Etter at disse organismene er fjernet fra mat i 10 minutter, utviser de en forsinket respons på 8 - 10 s 20 . Således med økt sult, viser nematoder en redusert aversiv respons på skadelige miljøsignaler, ettersom søket etter mat blir mer avgjørende for overlevelse. Omvendt reagerer ikke nematoder som overtrykkende nevropeptidreseptor 9 ( npr-9) på oktanol på eller av mat og viser manglende evne til å reagere på en rekke aversive stimuli 21 . Disse npr-9 (GF) organismer modulerer heller ikke deres reverseringsfrekvens i nærvær av mat, men kanOmvendt som svar på sterke berøringsstimulasjoner som indikerer at de er i stand til bakover-bevegelse 21 . Vi har også vurdert npr-9 (LF) mutanter gitt at de utviser en unormalt redusert reverseringsfrekvens av mat, men kan modulere deres oppførsel i nærvær av mat 21 . Kobling av ormens næringsstatus med innføring av akutte ytre stimuli har hjulpet til å belyse mekanismene ved hvilke en matrelatert vei i stor grad kan modulere sensoriske signalveier 22 , 23 . Tilstedeværelsen av mat i nematode-miljøet har også blitt brukt til å evaluere etanol-tilbaketaksreaksjoner 24 . I dette forsøket ble ormer inkubert i varierende konsentrasjoner av etanol og deretter plassert på en agarplate med en lapp av mat kjent som et &quot;mat-race-assay&quot;. Maten lapp ble plassert på en kant av platen mens nematoder wEre plassert vekk fra matkilden. Etanoluttak ble evaluert ved å måle varigheten av tiden som er nødvendig for ormer for å nå maten. Denne næringsbaserte kobberaversjonstesten bygger på mat-raseanalysen for å integrere ytterligere miljøvariabler, nemlig mat og kobber, mens man vurderer atferdsendringer over tid. Dette er en tilpasning av en vanlig bruk protokoll i hele C. elegans samfunnet 4 . Denne protokollen har blitt brukt til å evaluere aversive responser og påvisning av mat over en fire-timers periode 21 . Siden ormen utviser sultedrag etter 30 minutter med matmangel 25 , kan vi også vurdere hvordan endringer i ernæringsstatus kan påvirke miljøresponsene. Forholdene i denne analysen måler hvordan eksperimentelle organismer forandrer responsiviteten til aversive stimuli over tid, og derfor vurderer det atferdsendringer somOrganismers fremgang mot en sultet tilstand (og fortsatte målinger av langvarig sult). Siden npr-9 (GF) dyrene ikke endrer sin oppførsel som svar på mat eller mange aversive signaler, søkte vi å identifisere om disse beteendeunderskuddene vil fortsette i sammenheng med sult. Til slutt er denne analysesignalet formulert for å spesifikt vurdere npr-9 (GF) mutanter, men kan videre tilpasses til å også karakterisere nye stammer.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="689">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:332px;">M9 Solution [3 g KH2PO4, 6 g Na2HPO4, 5 g NaCl, 1 ml 1 M MgSO4, H2O to 1 litre. Autoclave to sterilize before use.]</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Produced in lab</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:332px;">Cupric Sulfate</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">C-1297</td>
			<td style="width:167px;">Use water to appropriately suspend to a concentration of 0.5M</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a caenorhabditis elegans nutritional-status based copper aversion assay

For å sikre overlevelse må organismer være i stand til å unngå ugunstige habitater samtidig som det sikres en konsekvent matkilde. Caenorhabditis elegans endrer deres lokomotivsmønstre ved påvisning av ulike miljøstimuli og kan modulere deres pakke med atferdsrespons som svar på sultforhold. Nematoder utviser vanligvis en redusert aversiv respons når de fjernes fra en matkilde i over 30 minutter. Observasjon av atferdsendringer som svar på en forandret ernæringsstatus kan gi innsikt i mekanismene som regulerer overgangen fra en velmattet til sultet tilstand. Vi har utviklet en analyse som måler en nematode evne til å krysse en aversive barriere ( dvs. kobber) og nå en matkilde over en lengre periode. Denne protokollen bygger på tidligere arbeid ved å integrere flere variabler på en måte som muliggjør fortsatt datainnsamling når organismer skifter mot aN stadig sultet tilstand. Videre tillater denne analysen en økt prøvestørrelse slik at større populasjoner av nematoder kan evalueres samtidig. Organer som er defekte for evnen til å oppdage eller reagere på kobber, krysser straks kjemisk barriere, mens wild type nematoder i utgangspunktet avstøtes. Som vill type ormer blir stadig sultet, begynner de å krysse barrieren og nå matkilden. Vi utformet denne analysen for å evaluere en mutant som ikke er i stand til å reagere på ulike miljømessige tegn, inkludert matopplevelse eller påvisning av aversive kjemikalier. Når de ble evaluert via denne protokollen, krysset de defekte organismene straks barrieren, men var heller ikke i stand til å oppdage en matkilde. Derfor krysser disse mutantene gjentatte ganger kjemisk barriere til tross for at de nå en matkilde. Denne analysen kan rett og slett teste populasjoner av ormer for å evaluere potensielle banefeil relatert til aversjon og sult.

Vi benyttet villtype (N2), npr-9 (tm1652) og en npr-9 overekspresjonstamme, dvs. npr-9 (GF) (IC836 - npr-9 :: npr-9; sur-5 :: gfp; odr -1 :: rfp), for å evaluere respons på sult og kobberaversjon. Vildtyporganismer er i stand til å detektere og reagere på den aversive kobberbarrieren, mens npr-9 (GF) -mutanter ikke initierer en aversiv respons på kobberet over 4 h-analysen 21 . Etter 30 minutter av sult kr...

Watch this Scientific Journal Video about A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay at JoVE.com

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

EN<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Næringsstatusbasert kobber-aversjonsanalyse

Her presenterer vi en Caenorhabditis elegans- spesifikke analyse designet for å evaluere endringer i kobberavviksadferd og muligheten til å lokalisere en felles matkilde, ettersom organismen utvikler seg fra en velfødt til sulten ernæringsmessig tilstand.

To ensure survival, organisms must be capable of avoiding unfavorable habitats while ensuring a consistent food source. Caenorhabditis elegans alter their ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Automatisert Kvantifisering av Synaptic fluorescens i<em&gt; C. elegans</em

Synapse strength refers to the amplitude of postsynaptic responses to presynaptic neurotransmitter release events, and has a major impact on overall ...

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

En<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Modell System for Amylopathy Study

Amylopathy is a term that describes abnormal synthesis and accumulation of amyloid beta (A&beta;) in tissues with time. A&beta; is a hallmark of ...

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Methods for Studying the Mechanisms of Action of Antipsychotic Drugs in Caenorhabditis elegans

Metoder for å studere virkningsmekanismer av antipsykotiske legemidler i<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is a simple genetic organism amenable to  large-scale forward and reverse genetic screens and chemical genetic screens. The C.  ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

En undersøkelse for å måle effekten av etanol på Locomotion Speed ​​av<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Agaroseplater Microchambers for Long-term Kalsium Imaging av<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Behavior is controlled by the nervous system. Calcium imaging is a straightforward method in the transparent nematode Caenorhabditis elegans to measure ...

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

A Behavioral Assay for Mechanosensation of MARCM-based Clones in Drosophila melanogaster

En Behavioral analyse for Mechanosensation av MARCM baserte Clones i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Because of the structural and functional homology to the hair cells of the mammalian inner ear, the neurons that innervate the Drosophila external sense ...

Novel Metrics to Characterize Embryonic Elongation of the Nematode Caenorhabditis elegans

Novel Metrics to Characterize Embryonic Elongation of the Nematode Caenorhabditis elegans

Nye beregninger for å karakter Embryonic Forlengelse av nematode<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Dissecting the signaling pathways that control the alteration of morphogenic processes during embryonic development requires robust and sensitive metrics. ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

Analysen utvikling for høy innhold kvantifisering av Sod1 Mutant Protein samlet formasjon i levende celler

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

Ratiometric Calcium Imaging of Individual Neurons in Behaving Caenorhabditis Elegans

Ratiometric kalsium avbilding av individuelle Neurons i oppfører seg Caenorhabditis Elegans

It has become increasingly clear that neural circuit activity in behaving animals differs substantially from that seen in anesthetized or immobilized ...

Imaging Dendritic Spines in Caenorhabditis elegans

Imaging Dendritic Spines in Caenorhabditis elegans

Imaging Dendritic Spines i Caenorhabditis elegans

Dendritic spines are specialized sites of synaptic innervation modulated by activity and serve as substrates for learning and memory. Recently, dendritic ...