Name: purification of the membrane compartment for endoplasmic reticulum-associated degradation of exogenous antigens in cross-presentation
Uploaded: 2017-08-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of the Membrane Compartment for Endoplasmic Reticulum-associated Degradation of Exogenous Antigens in Cross-presentation at JoVE.com

इस काम को Takasaki यूनिवर्सिटी ऑफ हेल्थ एंड वेलफेयर ने सपोर्ट किया है ।

1. बढ़ती कोशिकाओं और Exogenous एंटीजन के अलावा <ol> <li> एक बायोटिन-प्रोटीन लेबलिंग किट का प्रयोग कर bOVA तैयार करें निर्माता & #39; s प्रोटोकॉल का पालन कर रहा है. 
	नोट: साधारणतः, bOVA में 2 m बायोटिन प्रति 1 m ओवा औसतन होता है....

<ol>
	<li>van Endert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Providing+ligands+for+MHC+class+I+molecules.">Providing ligands for MHC class I molecules.</a> Cell Mol Life Sci. 68 (9), 1467-1469 (2011).</li><li>Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , (2001).</li><li>McDevitt, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovering+the+role+of+the+major+histocompatibility+complex+in+the+immune+response.">Discovering the role of the major histocompatibility complex in the immune response.</a> Annu Rev Immunol. 18 (1), 1-17 (2000).</li><li>Bedoui, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-presentation+of+viral+and+self+antigens+by+skin-derived+CD103++dendritic+cells.">Cross-presentation of viral and self antigens by skin-derived CD103+ dendritic cells.</a> Nat Immunol. 10 (5), 488-495 (2009).</li><li>Segura, E., Villadangos, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen+presentation+by+dendritic+cells+in+vivo.">Antigen presentation by dendritic cells in vivo.</a> Curr Opin Immunol. 21 (1), 105-110 (2009).</li><li>Cheong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+stimulation+fully+differentiates+monocytes+to+DC-SIGN/CD209(+)+dendritic+cells+for+immune+T+cell+areas.">Microbial stimulation fully differentiates monocytes to DC-SIGN/CD209(+) dendritic cells for immune T cell areas.</a> Cell. 143 (3), 416-429 (2010).</li><li>Henri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD207++CD103++dermal+dendritic+cells+cross-present+keratinocyte-derived+antigens+irrespective+of+the+presence+of+Langerhans+cells.">CD207+ CD103+ dermal dendritic cells cross-present keratinocyte-derived antigens irrespective of the presence of Langerhans cells.</a> J Exp Med. 207 (2), 189-206 (2010).</li><li>Shortman, K., Heath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CD8++dendritic+cell+subset.">The CD8+ dendritic cell subset.</a> Immunol. Rev. 234 (1), 18-31 (2010).</li><li>Carbone, F. R., Kurts, C., Bennett, S. R., Miller, J. F., Heath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-presentation:+a+general+mechanism+for+CTL+immunity+and+tolerance.">Cross-presentation: a general mechanism for CTL immunity and tolerance.</a> Immunol Today. 19 (8), 368-373 (1998).</li><li>Nair-Gupta, P., Blander, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+updated+view+of+the+intracellular+mechanisms+regulating+cross-presentation.">An updated view of the intracellular mechanisms regulating cross-presentation.</a> Front Immunol. , (2013).</li><li>Joffre, O. P., Segura, E., Savina, A., Amigorena, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-presentation+by+dendritic+cells.">Cross-presentation by dendritic cells.</a> Nat Rev Immunol. 12 (8), 557-569 (2012).</li><li>Kurts, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constitutive+class+I-restricted+exogenous+presentation+of+self+antigens+in+vivo.">Constitutive class I-restricted exogenous presentation of self antigens in vivo.</a> J Exp Med. 184 (3), 923-930 (1996).</li><li>Kurts, C., Kosaka, H., Carbone, F. R., Miller, J. F., Heath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Class+I-restricted+cross-presentation+of+exogenous+self-antigens+leads+to+deletion+of+autoreactive+CD8(+)+T+cells.">Class I-restricted cross-presentation of exogenous self-antigens leads to deletion of autoreactive CD8(+) T cells.</a> J Exp Med. 186 (2), 239-245 (1997).</li><li>Bonifaz, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+targeting+of+protein+antigen+to+the+dendritic+cell+receptor+DEC-205+in+the+steady+state+leads+to+antigen+presentation+on+major+histocompatibility+complex+class+I+products+and+peripheral+CD8++T+cell+tolerance.">Efficient targeting of protein antigen to the dendritic cell receptor DEC-205 in the steady state leads to antigen presentation on major histocompatibility complex class I products and peripheral CD8+ T cell tolerance.</a> J Exp Med. 196 (12), 1627-1638 (2002).</li><li>Heath, W. R., Carbone, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-presentation+in+viral+immunity+and+self-tolerance.">Cross-presentation in viral immunity and self-tolerance.</a> Nat Rev Immunol. 1 (2), 126-134 (2001).</li><li>Imai, J., Hasegawa, H., Maruya, M., Koyasu, S., Yahara, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exogenous+antigens+are+processed+through+the+endoplasmic+reticulum-associated+degradation+(ERAD)+in+cross-presentation+by+dendritic+cells.">Exogenous antigens are processed through the endoplasmic reticulum-associated degradation (ERAD) in cross-presentation by dendritic cells.</a> Int Immunol. 17 (1), 45-53 (2005).</li><li>Houde, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagosomes+are+competent+organelles+for+antigen+cross-presentation.">Phagosomes are competent organelles for antigen cross-presentation.</a> Nature. 425 (6956), 402-406 (2003).</li><li>Guermonprez, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ER-phagosome+fusion+defines+an+MHC+class+I+cross-presentation+compartment+in+dendritic+cells.">ER-phagosome fusion defines an MHC class I cross-presentation compartment in dendritic cells.</a> Nature. 425 (6956), 397-402 (2003).</li><li>Burgdorf, S., Scholz, C., Kautz, A., Tampe, R., Kurts, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+mechanistic+separation+of+cross-presentation+and+endogenous+antigen+presentation.">Spatial and mechanistic separation of cross-presentation and endogenous antigen presentation.</a> Nat Immunol. 9 (5), 558-566 (2008).</li><li>Liz&#233;e, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+dendritic+cell+cross-presentation+by+the+major+histocompatibility+complex+class+I+cytoplasmic+domain.">Control of dendritic cell cross-presentation by the major histocompatibility complex class I cytoplasmic domain.</a> Nat Immunol. 4 (11), 1065-1073 (2003).</li><li>Basha, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CD74-dependent+MHC+class+I+endolysosomal+cross-presentation+pathway.">A CD74-dependent MHC class I endolysosomal cross-presentation pathway.</a> Nat Immunol. 13 (3), 237-245 (2012).</li><li>Saveanu, L., Carroll, O., Hassainya, Y., van Endert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complexity,+contradictions,+and+conundrums:+studying+post-proteasomal+proteolysis+in+HLA+class+I+antigen+presentation.">Complexity, contradictions, and conundrums: studying post-proteasomal proteolysis in HLA class I antigen presentation.</a> Immunol Rev. 207 (1), 42-59 (2005).</li><li>Wiertz, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sec61-mediated+transfer+of+a+membrane+protein+from+the+endoplasmic+reticulum+to+the+proteasome+for+destruction.">Sec61-mediated transfer of a membrane protein from the endoplasmic reticulum to the proteasome for destruction.</a> Nature. 384 (6608), 432-438 (1996).</li><li>Hampton, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ER-associated+degradation+in+protein+quality+control+and+cellular+regulation.">ER-associated degradation in protein quality control and cellular regulation.</a> Curr Opin Cell Biol. 14 (4), 476-482 (2002).</li><li>Tsai, B., Ye, Y., Rapoport, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-translocation+of+proteins+from+the+endoplasmic+reticulum+into+the+cytosol.">Retro-translocation of proteins from the endoplasmic reticulum into the cytosol.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 3 (4), 246-255 (2002).</li><li>Nyathi, Y., Wilkinson, B. M., Pool, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-translational+targeting+and+translocation+of+proteins+to+the+endoplasmic+reticulum.">Co-translational targeting and translocation of proteins to the endoplasmic reticulum.</a> Biochim Biophys Acta. 1833 (11), 2392-2402 (2013).</li><li>Varabyova, A., Stojanovski, D., Chacinska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+protein+homeostasis.">Mitochondrial protein homeostasis.</a> IUBMB Life. 65 (3), 191-201 (2013).</li><li>Shen, Z., Reznikoff, G., Dranoff, G., Rock, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloned+dendritic+cells+can+present+exogenous+antigens+on+both+MHC+class+I+and+class+II+molecules.">Cloned dendritic cells can present exogenous antigens on both MHC class I and class II molecules.</a> J Immunol. 158 (6), 2723-2730 (1997).</li><li>Imai, J., Otani, M., Sakai, T., Hatta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+the+subcellular+compartment+in+which+exogenous+antigens+undergo+endoplasmic+reticulum-associated+degradation+from+dendritic+cells.">Purification of the subcellular compartment in which exogenous antigens undergo endoplasmic reticulum-associated degradation from dendritic cells.</a> Heliyon. , (2016).</li><li>Kovacsovics-Bankowski, M., Rock, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phagosome-to-cytosol+pathway+for+exogenous+antigens+presented+on+MHC+class+I+molecules.">A phagosome-to-cytosol pathway for exogenous antigens presented on MHC class I molecules.</a> Science. 267 (5195), 243-246 (1995).</li><li>Ackerman, A. L., Giodini, A., Cresswell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+the+endoplasmic+reticulum+protein+retro+translocation+machinery+during+cross+presentation+by+dendritic+cells.">A role for the endoplasmic reticulum protein retro translocation machinery during cross presentation by dendritic cells.</a> Immunity. 25 (4), 607-617 (2006).</li><li>Ackerman, A. L., Kyritsis, C., Tamp&#233;, R., Cresswell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+phagosomes+in+dendritic+cells+form+a+cellular+compartment+sufficient+for+cross+presentation+of+exogenous+antigens.">Early phagosomes in dendritic cells form a cellular compartment sufficient for cross presentation of exogenous antigens.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (22), 12889-12894 (2003).</li><li>Saveanu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IRAP+identifies+an+endosomal+compartment+required+for+MHC+class+I+cross-presentation.">IRAP identifies an endosomal compartment required for MHC class I cross-presentation.</a> Science. 325 (5937), 213-217 (2009).</li><li>Zehner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+translocon+protein+Sec61+mediates+antigen+transport+from+endosomes+in+the+cytosol+for+cross-presentation+to+CD8(+)+T+cells.">The translocon protein Sec61 mediates antigen transport from endosomes in the cytosol for cross-presentation to CD8(+) T cells.</a> Immunity. 42 (5), 850-863 (2015).</li></ol>

सीपी के पिछले अध्ययनों में शामिल exogenous एंटीजन देर से endosome या ईआर के प्रतिबंधित क्षेत्र में संचित immunofluorescent माइक्रोस्कोपी16,30,31,३२. यह अनुमान है कि ERAD परिवहन और exogeno...

MHC I अणुओं सभी nucleated कोशिकाओं की सतह पर व्यक्त कर रहे हैं, अंतर्जात एंटीजन से व्युत्पंन लघु प्रतिजनी पेप्टाइड्स के साथ, जो proteasome में ubiquitin-cytosol प्रणाली द्वारा संसाधित कर रहे हैं1. प्रसंस्करण के बाद, प्रतिजनी पेप्टाइड्स पेप्टाइड ट्रांसपोर्टर नल द्वारा endoplasmic जालिका (एर) लुमेन में ले जाया जाता है । एर लुमेन में, विशिष्ट chaperones की एक श्रृंखला पेप्टाइड लोडिंग और MHC मैं परिसर की सही तह सहायता करते हैं । अणुओं की यह श्रृंखला पेप्टाइड-लोडिंग परिसर (पीएलसी) कहा जाता है, यह दर्शाता है कि एर MHC मैं2पर पेप्टाइड लदान के लिए एक केंद्रीय डिब्बा है । पेप्टाइड लदान के बाद, MHC मैं अणु सेल सतह तक ले जाया जाता है और आत्म मार्करों के रूप में अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, और सीडी+ साइटोटोक्सिक टी लिम्फोसाइटों (CTLs) को सक्षम बनाता है प्रतिजनी द्वारा कैंसर कोशिकाओं या संक्रामक एजेंटों का पता लगाने के लिए गैर से पेप्टाइड्स-स्व प्रोटीन3।
में antigen प्रस्तुत कक्ष (APC), exogenous एंटीजन से प्रतिजनी पेप्टाइड भी MHC मैं4,5,6,7,8 के माध्यम से सीपी, जो मुख्य रूप से किया जाता है पर प्रस्तुत कर रहे हैं आउट ऑफ dc9,10,11। वाणिज्यिक पत्र दोनों भोली सीडी+ टी कोशिकाओं और स्मृति सीडी+ टी कोशिकाओं विरोधी संक्रामक और विरोधी ट्यूमर CTLs12,13में सक्रियण के लिए आवश्यक है, और के निष्क्रिय द्वारा प्रतिरक्षा सहिष्णुता के रखरखाव में आत्म अभिनय भोली टी कोशिकाओं14,15। सीपी अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली में कई महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, लेकिन वाणिज्यिक पत्र के आणविक तंत्र अभी तक विस्तार से वर्णित किया है । सीपी के पिछले अध्ययनों से पता चला कि exogenous एंटीजन ईआर और endosome दोनों में स्थानीयकृत थे और ERAD द्वारा संसाधित किए गए थे, सुझाव दे रहे हैं कि exogenous एंटीजन endosome से ईआर तक ERAD के लिए ले जाया जाता है-जैसे प्रोसेसिंग और पेप्टाइड लोडिंग16 . हालांकि, सबूत जमा इंगित करता है कि सीपी के पेप्टाइड लदान नहीं एर में किया जाता है बल्कि गैर शास्त्रीय endocytic डिब्बों में, जो भी एर की विशिष्ट सुविधाओं है (चित्रा 1)17,18 ,19,20,21. cytosol में aminopeptidase22 के उच्च गतिविधि द्वारा प्रतिजनी पेप्टाइड पुरोगामी की गिरावट से बचने के लिए, प्रसंस्करण और सीपीई में पेप्टाइड लोडिंग इन गैर-शास्त्रीय endocytic डिब्बों (चित्रा 1) के समीपस्थ क्षेत्र में होता है. हालांकि इन endocytic डिब्बों की characterizations विवादास्पद हैं, लेकिन इस डिब्बे में exogenous एंटीजन के अलावा कोई मौजूदा विशिष्ट अणु नहीं हैं.
ERAD एक सेलुलर मार्ग है, जो विशेष रूप से एर से निकला हुआ प्रोटीन निकालता है । ERAD मार्ग में, प्रगट प्रोटीन प्रतिगामी कोशिका को एर झिल्ली के माध्यम से ले जाया जाता है और ubiquitin-proteasome प्रणाली23,24,25द्वारा संसाधित । जब बड़े अणुओं, जैसे प्रोटीन, लिपिड bilayer के माध्यम से ले जाया जाता है, इन अणुओं एक आणविक उपकरण के माध्यम से पारित एक translocon, जैसे Sec61 परिसर और Derlin परिसर में एर26, और में टॉम कॉम्प्लेक्स और टिम परिसर mitochondria27. जब exogenously-जोड़ा एंटीजन एर झिल्ली के माध्यम से ले जाया जाता है, वे Sec61 परिसर जैसे translocons के साथ जटिल में लिपिड bilayer घुसना चाहिए । विधि यहां वर्णित इन झिल्ली का उपयोग करके लक्षित पुटिका शुद्ध-endocytic डिब्बों के लिए मार्कर के रूप में अणुओं मर्मज्ञ ।
विधि यहां वर्णित एक नई पुटिका शुद्धि प्रोटोकॉल का उपयोग कर डीसी की तरह सेल लाइन डीसी 2.428 और biotinylated ovalbumin (bOVA) एक exogenous प्रतिजन के रूप में । endocytic डिब्बों streptavidin (एसए) द्वारा शुद्ध थे-एक निर्माता के रूप में झिल्ली मर्मज्ञ bOVA का उपयोग चुंबकीय मोती । इस शुद्ध microsome में, कुछ exogenously जोड़ा bOVA अभी भी झिल्ली भागों में संरक्षित किया गया था, लेकिन microsome के बाहर तक ले जाया गया, और फिर ubiquitinated और इन विट्रो में29संसाधित । यह शुद्ध microsome न केवल endocytic डिब्बे-विशिष्ट प्रोटीन, लेकिन यह भी एर ERAD के लिए निवासी प्रोटीन और पेप्टाइड लोडिंग परिसर निहित; सुझाव है कि सेलुलर डिब्बा29सीपी के लिए भावी endocytic डिब्बे है । इस प्रोटोकॉल exogenous प्रतिजनों की तरह पर निर्भर नहीं है, और अन्य डीसी सबसेट और अन्य सेल प्रकार, जैसे मैक्रोफेज, बी कोशिकाओं, और endothelial कोशिकाओं के लिए भी लागू है, कुशल वाणिज्यिक पत्र के लिए dc की सटीक आणविक तंत्र को स्पष्ट करने के लिए.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="871">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:239px;">gibco by life technologies</td>
			<td style="width:119px;">11875-093</td>
			<td style="width:241px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:239px;">Equitech bio</td>
			<td style="width:119px;">SFB30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Sodium pyruvate</td>
			<td style="width:239px;">gibco by life technologies</td>
			<td style="width:119px;">11360-070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:272px;">MEM non-essential amino acids</td>
			<td style="width:239px;">gibco by life technologies</td>
			<td style="width:119px;">11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">HEPES</td>
			<td style="width:239px;">gibco by life technologies</td>
			<td style="width:119px;">15630-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">2-mercaptoethanol</td>
			<td style="width:239px;">gibco by life technologies</td>
			<td style="width:119px;">21985-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:239px;">gibco by life technologies</td>
			<td style="width:119px;">25030-164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Penisicillin-Sreptomycin</td>
			<td style="width:239px;">gibco by life technologies</td>
			<td style="width:119px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:239px;">gibco by life technologies</td>
			<td style="width:119px;">12100-46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">OVA</td>
			<td style="width:239px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">A5503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Biotin-protein labelling kit</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">F6347</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">MG-132&#160;</td>
			<td style="width:239px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:119px;">201270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">lactacystin&#160;</td>
			<td style="width:239px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">L6785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Dounce homogenizer</td>
			<td style="width:239px;">IUCHI</td>
			<td style="width:119px;">131703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">protease inhibitor cocktails&#160;</td>
			<td style="width:239px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">P8340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">iodixanol&#160;</td>
			<td style="width:239px;">Cosmo bio</td>
			<td style="width:119px;">1114542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">SA-magnetic beads&#160;</td>
			<td style="width:239px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:119px;">201270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">control magnetic beads</td>
			<td style="width:239px;">Chemagen</td>
			<td style="width:119px;">M-PVA012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">magnetic stand</td>
			<td style="width:239px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">552311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">BCA protein assay kit</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">silver staining kits</td>
			<td style="width:239px;">Cosmo bio</td>
			<td style="width:119px;">423413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Reticulocyte Lysate</td>
			<td style="width:239px;">Promega</td>
			<td style="width:119px;">1730714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">Flag-tagged ubiquitin&#160;</td>
			<td style="width:239px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">U5382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">anti-ovalbumin (OVA,mouse)</td>
			<td style="width:239px;">Antibody Shop</td>
			<td style="width:119px;">HYB 094-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">ant-multi-ubiquitin (mouse)</td>
			<td style="width:239px;">MBL</td>
			<td style="width:119px;">D058&#8722;3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">anti-Flag (mouse)</td>
			<td style="width:239px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">F3165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:272px;">trypsin</td>
			<td style="width:239px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">85450C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification of the membrane compartment for endoplasmic reticulum-associated degradation of exogenous antigens in cross-presentation

वृक्ष कोशिकाओं (dc) प्रसंस्करण और प्रमुख histocompatibility वर्ग (MHC) मैं भी पार-प्रस्तुति (सीपी) के रूप में जाना जाता अणुओं पर आंतरिक exogenous एंटीजन पेश करने में सक्षम हैं । सीपी न केवल की उत्तेजना में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है भोली सीडी+ टी कोशिकाओं और स्मृति सीडी+ टी कोशिकाओं संक्रामक और ट्यूमर उन्मुक्ति के लिए लेकिन यह भी टी सेल anergy द्वारा आत्म अभिनय भोली टी कोशिकाओं की निष्क्रियता में या टी सेल विलोपन. यद्यपि सीपी के महत्वपूर्ण आणविक तंत्र का आविर्भाव होना शेष रहता है, ऐसे साक्ष्यों को संचित करने से संकेत मिलता है कि exogenous एंटीजन गैर-शास्त्रीय endocytic से निर्यात के बाद endoplasmic जालिका-संबद्ध क्षरण (ERAD) के माध्यम से संसाधित किए जाते हैं डिब्बों. अभी हाल तक इन endocytic डिब्बों की characterizations सीमित थीं क्योंकि exogenous एंटीजन के अलावा कोई विशिष्ट आणविक मार्कर नहीं थे. यहां वर्णित विधि एक नया पुटिका आइसोलेशन प्रोटोकॉल है, जो इन endocytic डिब्बों की शुद्धि के लिए अनुमति देता है । इस शुद्ध microsome का उपयोग कर, हम ERAD की तरह परिवहन, ubiquitination, और प्रसंस्करण मेंexogenous प्रतिजन की प्रक्रिया का पुनर्गठन, सुझाव है कि ubiquitin-proteasome प्रणाली इस से निर्यात के बाद exogenous प्रतिजन संसाधित सेलुलर कम्पार्टमेंट । इस प्रोटोकॉल को आगे अंय प्रकार के सेल के लिए लागू किया जा सकता है वाणिज्यिक पत्र के आणविक तंत्र स्पष्ट है ।

सीपी के आणविक तंत्र को स्पष्ट करने के लिए यह जरूरी है कि सेलुलर डिब्बों की पहचान हो, जहां exogenous एंटीजन ERAD-जैसे परिवहन और प्रोसेसिंग से गुजरते हैं । जबकि प्रेक्षण immunofluorescent माइक्रोस्कोपी द्वारा य?...

Watch this Scientific Journal Video about Purification of the Membrane Compartment for Endoplasmic Reticulum-associated Degradation of Exogenous Antigens in Cross-presentation at JoVE.com

Purification of the Membrane Compartment for Endoplasmic Reticulum-associated Degradation of Exogenous Antigens in Cross-presentation

यहां वर्णित विधि एक नया पुटिका आइसोलेशन प्रोटोकॉल है, जो सेलुलर डिब्बों के शुद्धिकरण के लिए अनुमति देता है जहां exogenous एंटीजन पार-प्रस्तुति में endoplasmic जालिका से जुड़े क्षरण की कार्रवाई की जाती है ।

Endoplasmic जालिका के लिए झिल्ली के डिब्बे की शुद्धि-परस्पर प्रस्तुति में Exogenous एंटीजन के जुड़े क्षरण

Dendritic cells (DCs) are highly capable of processing and presenting internalized exogenous antigens upon major histocompatibility class (MHC) I ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Mass Spectrometric Analysis of Glycosphingolipid Antigens

Glycosphingolipid प्रतिजनों के बड़े पैमाने पर spectrometric विश्लेषण

Glycosphingolipids (GSL's) belong to the glycoconjugate class of biomacromolecules, which bear structural information for significant biological processes ...

Antigens Protected Functional Red Blood Cells By The Membrane Grafting Of Compact Hyperbranched Polyglycerols

एंटीजन कॉम्पैक्ट hyperbranched Polyglycerols की ग्राफ्टिंग झिल्ली कार्यात्मक लाल रक्त कोशिकाओं की रक्षा

Red blood cell (RBC) transfusion is vital for the treatment of a number of acute and chronic medical problems such as thalassemia major and sickle cell ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

झिल्ली Polarity, झिल्ली अखंडता, और intracellular आयन सांद्रता में निगरानी परिवर्तन<em&gt; स्ट्रैपटोकोकस निमोनिया</em&gt; फ्लोरोसेंट रंगों का उपयोग

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

RNA Purification from Intracellularly Grown Listeria monocytogenes in Macrophage Cells

RNA Purification from Intracellularly Grown Listeria monocytogenes in Macrophage Cells

Intracellularly से शाही सेना शोधन बढ़ी<em&gt; लिस्टेरिया monocytogenes</em&gt; बृहतभक्षककोशिका कोशिकाओं में

Analysis of the transcriptome of bacterial pathogens during mammalian infection is a valuable tool for studying genes and factors that mediate infection. ...

Using X-ray Crystallography, Biophysics, and Functional Assays to Determine the Mechanisms Governing T-cell Receptor Recognition of Cancer Antigens

का उपयोग करते हुए एक्स-रे क्रिस्टलोग्राफी, बायोफिजिक्स, और कार्यात्मक assays तंत्र शासी टी-सेल कैंसर प्रतिजनों की रिसेप्टर मान्यता निर्धारित करने के लिए

Human CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTLs) are known to play an important role in tumor control. In order to carry out this function, the cell ...

Purification of Viral DNA for the Identification of Associated Viral and Cellular Proteins

एसोसिएटेड वायरल और सेलुलर प्रोटीन की पहचान के लिए वायरल डीएनए का शुद्धिकरण

The goal of this protocol is to isolate herpes simplex virus type 1 (HSV-1) DNA from infected cells for the identification of associated viral and ...

Expression of Exogenous Antigens in the Mycobacterium bovis BCG Vaccine via Non-genetic Surface Decoration with the Avidin-biotin System

Expression of Exogenous Antigens in the Mycobacterium bovis BCG Vaccine via Non-genetic Surface Decoration with the Avidin-biotin System

Avidin-बायोटिन प्रणाली के साथ गैर आनुवंशिक सतह सजावट के माध्यम से माइकोबैक्टीरियम bovis बीसीजी वैक्सीन में Exogenous एंटीजन की अभिव्यक्ति

Tuberculosis (TB) is a serious infectious disease and the only available vaccine M. bovis bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is safe and effective for ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

ओवेरेक्स्पेशन एंड हेरिंग ऑफ ह्यूमन<em&gt; सीआईएस</em&gt; -प्रेनिलट्रांसफ़्रेज़ इन<em&gt; एस्चेरिचिया कोली</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification (BiCAP)

Dissecting Multi-protein Signaling Complexes by Bimolecular Complementation Affinity Purification BiCAP

Bimolecular पूरित अपनत्व शुद्धि (BiCAP) द्वारा विदारक मल्टी प्रोटीन सिगनल कॉम्प्लेक्स

The assembly of protein complexes is a central mechanism underlying the regulation of many cell signaling pathways. A major focus of biomedical research ...

Assembly and Purification of Prototype Foamy Virus Intasomes

विधानसभा और प्रोटोटाइप फोम वायरस Intasomes का शुद्धिकरण

A defining feature and necessary step of the retrovirus life cycle is the integration of the viral genome into the host genome. All retroviruses encode an ...