Name: automated analysis of a nematode population-based chemosensory preference assay
Uploaded: 2017-07-13T14:00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Automated Analysis of a Nematode Population-based Chemosensory Preference Assay at JoVE.com

تم توفير بعض السلالات من قبل مركز علم الوراثة كاينورهابديتيس (سغك)، الذي يتم تمويله من قبل المعاهد الوطنية للصحة مكتب برامج البنية التحتية للبحوث (P40 OD010440). ويدعم هذا العمل معهد هوارد هيوز الطبي، الذي بوس هو المحقق.

<ol>
	<li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 314, 1-340 (1986).</li><li>Bargmann, C. I., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemosensory+neurons+with+overlapping+functions+direct+chemotaxis+to+multiple+chemicals+in+C.+elegans.">Chemosensory neurons with overlapping functions direct chemotaxis to multiple chemicals in C. elegans.</a> Neuron. 7 (5), 729-742 (1991).</li><li>Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-selective+genes+and+neurons+mediate+olfaction+in+C.+elegans.">Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans.</a> Cell. 74 (3), 515-527 (1993).</li><li>Hilliard, M. A., Bargmann, C. I., Bazzicalupo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+responds+to+chemical+repellents+by+integrating+sensory+inputs+from+the+head+and+the+tail.">C. elegans responds to chemical repellents by integrating sensory inputs from the head and the tail.</a> Curr Biol. 12 (9), 730-734 (2002).</li><li>Hilliard, M. A., Bergamasco, C., Arbucci, S., Plasterk, R. H., Bazzicalupo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Worms+taste+bitter:+ASH+neurons,+QUI-1,+GPA-3+and+ODR-3+mediate+quinine+avoidance+in+Caenorhabditis+elegans.">Worms taste bitter: ASH neurons, QUI-1, GPA-3 and ODR-3 mediate quinine avoidance in Caenorhabditis elegans.</a> EMBO J. 23 (5), 1101-1111 (2004).</li><li>Zariwala, H. A., Miller, A. C., Faumont, S., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Step+response+analysis+of+thermotaxis+in+Caenorhabditis+elegans.">Step response analysis of thermotaxis in Caenorhabditis elegans.</a> J Neurosci. 23 (10), 4369-4377 (2003).</li><li>Ward, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotaxis+by+the+nematode+Caenorhabditis+elegans:+identification+of+attractants+and+analysis+of+the+response+by+use+of+mutants.">Chemotaxis by the nematode Caenorhabditis elegans: identification of attractants and analysis of the response by use of mutants.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 70 (3), 817-821 (1973).</li><li>Wicks, S. R., de Vries, C. J., van Luenen, H. G., Plasterk, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CHE-3,+a+cytosolic+dynein+heavy+chain,+is+required+for+sensory+cilia+structure+and+function+in+Caenorhabditis+elegans.">CHE-3, a cytosolic dynein heavy chain, is required for sensory cilia structure and function in Caenorhabditis elegans.</a> Dev Biol. 221 (2), 295-307 (2000).</li><li>Jansen, G., Weinkove, D., Plasterk, R. H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+G-protein+subunit+gpc-1+of+the+nematode+C.+elegans+is+involved+in+taste+adaptation.">The G-protein subunit gpc-1 of the nematode C. elegans is involved in taste adaptation.</a> EMBO J. 21 (5), 986-994 (2002).</li><li>Srinivasan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+blend+of+small+molecules+regulates+both+mating+and+development+in+Caenorhabditis+elegans.">A blend of small molecules regulates both mating and development in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 454 (7208), 1115-1118 (2008).</li><li>Choe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ascaroside+signaling+is+widely+conserved+among+nematodes.">Ascaroside signaling is widely conserved among nematodes.</a> Curr Biol. 22 (9), 772-780 (2012).</li><li>Ezcurra, M., Tanizawa, Y., Swoboda, P., Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Food+sensitizes+C.+elegans+avoidance+behaviours+through+acute+dopamine+signalling.">Food sensitizes C. elegans avoidance behaviours through acute dopamine signalling.</a> EMBO J. 30 (6), 1110-1122 (2011).</li><li>Ward, A., Liu, J., Feng, Z., Xu, X. Z. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-sensitive+neurons+and+channels+mediate+phototaxis+in+C.+elegans.">Light-sensitive neurons and channels mediate phototaxis in C. elegans.</a> Nat Neurosci. 11 (8), 916-922 (2008).</li><li>Kunitomo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentration+memory-dependent+synaptic+plasticity+of+a+taste+circuit+regulates+salt+concentration+chemotaxis+in+Caenorhabditis+elegans.">Concentration memory-dependent synaptic plasticity of a taste circuit regulates salt concentration chemotaxis in Caenorhabditis elegans.</a> Nat Commun. 4, 2210 (2013).</li><li>Snow, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+anterograde+intraflagellar+transport+motors+cooperate+to+build+sensory+cilia+on+C.+elegans+neurons.">Two anterograde intraflagellar transport motors cooperate to build sensory cilia on C. elegans neurons.</a> Nat Cell Biol. 6 (11), 1109-1113 (2004).</li><li>Tobin, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+expression+of+TRPV+channel+proteins+defines+their+sensory+functions+and+subcellular+localization+in+C.+elegans+neurons.">Combinatorial expression of TRPV channel proteins defines their sensory functions and subcellular localization in C. elegans neurons.</a> Neuron. 35 (2), 307-318 (2002).</li><li>Waggoner, L. E., Zhou, G. T., Schafer, R. W., Schafer, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+alternative+behavioral+states+by+serotonin+in+Caenorhabditis+elegans.">Control of alternative behavioral states by serotonin in Caenorhabditis elegans.</a> Neuron. 21 (1), 203-214 (1998).</li><li>Sawin, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Genetic and cellular analysis of modulated behaviors in Caenorhabditis elegans. , (1996).</li><li>Ramot, D., Johnson, B. E., Berry, T. L., Carnell, L., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+parallel+worm+tracker:+A+platform+for+measuring+average+speed+and+drug-induced+paralysis+in+nematodes.">The parallel worm tracker: A platform for measuring average speed and drug-induced paralysis in nematodes.</a> PLoS One. 3 (5), e2208 (2008).</li><li>Swierczek, N. A., Giles, A. C., Rankin, C. H., Kerr, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+behavioral+analysis+in+C.+elegans.">High-throughput behavioral analysis in C. elegans.</a> Nat Methods. 8 (7), 592-598 (2011).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

خطوة حاسمة في البروتوكول هو ضمان أن لوحات الفحص لديها مستوى ثابت من جفاف في مختلف أيام التجريبية. سوف مستويات جفاف مختلفة يؤدي إلى معدلات انتشار مختلفة من الحل في أجار وبالتالي، والتغيرات في النتائج السلوكية. وبالتالي، لوحات الفحص يجب دائما أن تكون جديدة في فترة ما بعد الظهر قبل التجارب. وينبغي أيضا أن ينظم عدد الديدان اختبار لكل فحص لسهولة المقارنة بين العلاجات. للاشارة، دودة من النوع البري يضع 4-10 بيضة / ساعة في المتوسط ​​ينتج&gt; 360 الديدان لكل مقايسة إذا تم اتباع بروتوكول تزامن دودة أعلاه 17 . إذا سلالات متحولة معينة هي وضع البيض معيبة، واختيار الديدان الكبار أكثر حمولة لوضع البيض للوصول إلى العدد المستهدف من النسل. خطوة هامة أخرى في البروتوكول هو التعامل مع الديدان بلطف خلال عملية الغسيل ودودة التنسيب. الديدان حساسة للمؤثرات الميكانيكية، والتي تثير ردود الإجهاد مثل هذا<html> s و تثبيط وضع البيض 18 . وعلاوة على ذلك، ينبغي توخي الحذر لتحديد العائد على الاستثمار بدقة وتحديد القيمة الثابتة العتبة المثلى لظروف الإضاءة المحددة قبل الشروع في تحليل الفيديو. ويوصى أيضا بأن تتكرر عمليات المعايرة والعطف إذا انقضت فترة طويلة من الزمن منذ تشغيل التجربة الأخيرة. الحد من هذه الطريقة هو أنها ليست مناسبة لفحص السكان دودة صغيرة. ومع ذلك، إذا تم تنفيذ الضوابط المناسبة لتحديد تأثير وجود الطعام على السلوك الحسي، ثم استخدام الغذاء لتقييد موقع الاستكشاف المكاني الديدان كما هو الحال في فحص الاحتفاظ هو ممكن أيضا مع هذا الإعداد. وبالإضافة إلى ذلك، لا يقصد هذا الأسلوب لدراسة التحفيز الملاحة التدرج نظرا لقربها وكميات صغيرة من السيطرة والحلول التجريبية قطرات المستخدمة. e_content &quot;&gt; في المستقبل، يمكن دمج برامج البرمجة التي تمكن تتبع متعددة الدودة واستخلاص ميزة دودة واحدة في هذا النظام 19 ، 20. تسجيل المعلمات سلوك خفية من سلوك دودة واحدة مثل سرعات عكسية واتساع منحنى الجسم ستوفر صورة أكثر تفصيلا للسلوك الحسي الكيميائي للديدان الفردية في سياق مقايسة تعتمد على السكان.يمكن أيضا أن يتم تعديل الفحص لدراسة التعود الثقوب مملة من خلال عائد الاستثمار باستخدام الإبر حقنة مع حجم قياس مناسب وملء الثقوب مع أجار غارقة مع المختبر التجريبي أو المخزن المؤقت السيطرة.هذا سيضمن تركيز سطح أكثر اتساقا للمركب على مدى فترة أطول من وقت التسجيل كما هو ضروري خلال دراسات التكرار.ومن التطبيقات المحتملة الأخرى لهذه الطريقة لإجراء دراسات السلوك المقارنة عبر أنواع مختلفة من الديدان الخيطية. بالإضافة إلى ذلك، غرفة السلوكيمكن تعديلها بطرق متعددة لدراسة الاستجابات السلوكية للمؤثرات متعددة الوسائط. لتطبيقات أوبتوجينيتيك، عالية الكثافة الصمام صفائف يمكن تركيبها بجانب جبل الكاميرا لتنشيط الخلايا العصبية ذات الاهتمام الانتقائي خلال الفحص. ويمكن أيضا إضافة عناصر التدفئة، وأنظمة التبريد، وأجهزة استشعار درجة الحرارة إلى الإعداد لدراسة آثار درجة الحرارة على السلوكيات الحسية. وعلاوة على ذلك، يمكن تركيب أنظمة تسليم الرائحة داخل الغرفة للتحقيق في التفاعلات بين الطرائق الحسية والروحية الحسية.

يجب على الحيوانات العلفية دمج المدخلات من طرائق الحسية متعددة وتحديد الاستراتيجيات السلوكية المناسبة من أجل التنقل بنجاح بيئتهم. فهم كيفية تلقي المدخلات الحسية الخارجية وترانزدوسد إلى المعلومات العصبية لتوجيه اختيار العمل هو هدف مركزي في مجال علم الأعصاب. إن الديدان الخيطية القابلة للجراثيا، C. إليغانز ، هي كائن نموذج جذاب يجسد فيه الآليات العصبية الكامنة وراء البيولوجيا الحسية والتكامل المتعدد الوسائط. على الرغم من أن C. ايليجانس لديها فقط 302 الخلايا العصبية، فإنه يمكن الكشف والتمييز بين مجموعة واسعة من المحفزات البيئية بما في ذلك المركبات القابلة للذوبان، الرائحة الطيارة، ودرجة الحرارة المحيطة 1 ، 2 ، 3 ، 4 ، 5 ، 6 ، 7 . الالنيماتودا C. تعتمد ايليجانس بشكل كبير على جهازها الكيميائي الحسي لتوطين مصادر الغذاء وتنبيه نفسها إلى التهديدات المحتملة. وبالتالي، المقايسات السلوكية المصممة لفحص ردود من النوع البري وC. ايليجانس متحولة للمؤثرات الكيميائية تلعب دورا حاسما في تشريح الآليات الوراثية الخلوية، والعصبية الكامنة وراء القدرات الحسية ملحوظة C. ايليجانس. لفحص الاستجابة للمركبات القابلة للذوبان، وقد وصفت ثلاثة أنواع من المقايسات - اختبار السقوط، فحص الكيميائي، وفحص الفحص. في اختبار السقوط، يتم وضع قطرة صغيرة من المركب في ذيل دودة متحركة وقرار دودة لعكس أو المضي قدما بمجرد وصول السائل يصل إلى الجهاز الحسي الأمامي 4 . اختبار السقوط يتطلب القليل من الإعداد التجريبي ومفيد عندما يكون حجم العينة من الديدان الصغيرة، كما هو الحال في الديدان التي تعمل بالليزر. ومع ذلك، كما دودة واحدة فقطيمكن أن يعاير في وقت واحد ويجب أن يكون المجرب حاضرا طوال مدة الفحص، واختبار قطرة يمكن أن تستغرق وقتا طويلا. اختبار السقوط هو أيضا عرضة للتغيرات في تسليم قطرة بين كل دودة داخل العينة، والتي قد تؤثر على النتائج الإجمالية للفحص. وهناك قيد آخر لاختبار السقوط هو أنه لا يمكن استخدامه إلا لفحص استجابة دودة للمركبات النادرة حيث أنه من غير الممكن التمييز بين تأثير جذاب أو محايد للمركب من حركة دودة إلى الأمام. فحص الكيميائي للمركبات القابلة للذوبان ينطوي عادة تقسيم لوحة أجار إلى أربعة أرباع، مع الحل التجريبي مختلطة في أجار اثنين من الأرباع المتعارضة وحل التحكم مختلطة في اثنين من الأرباع الأخرى 8 ، 9 . في بداية الفحص، يتم وضع قطرة من العازلة التي تحتوي على الديدان في وسط لوحة وعدد من الديدان في<html> وسجل كل رباعي في نقاط زمنية مختلفة. الفحص الكيميائي يوفر قوة إحصائية أكبر مقارنة مع اختبار قطرة كما يتم اختبار عدد كبير من الديدان في كل فحص. ومع ذلك، واحد الحد من هذه الطريقة هو أن إعداد لوحات الفحص الكيميائي يتطلب كميات كبيرة من المجمع التجريبي. وهذا سيجعل من الصعب إجراء شاشات السلوك على نطاق واسع إذا كان هناك حاجة لعملية تنقية معقدة مع غلة محدودة للحصول على المركب من الفائدة، كما هو الحال في جزيئات الإشارة أسكاروسيد 10 . بالإضافة إلى ذلك، العد اليدوي من الديدان في جميع أنحاء الفحص هو عرضة للأخطاء و اضطراب لوحات خلال عملية العد قد تؤثر على النتائج. على عكس اثنين من الأساليب المذكورة أعلاه، واستبقاء الفحص يستخدم رؤية الجهاز، مما يقلل من الخطأ أثناء عملية التهديف ويقلل من تدخل المجرب خلال الفحص<html> &gt; 11. التحليل المحوسب لتسجيلات الفيديو من سلوك دودة يمكن أيضا أن تكشف عن ديناميات سلوكية أكثر صعوبة التي سيتم تفويتها عندما يتم تنفيذ التهديف فقط في بضع نقاط زمنية منفصلة. في الفحص الاحتفاظ، يتم إضافة اثنين من البقع الحلول على طرفي نقيض من صغيرة التعميم البقعة الغذائية البكتيرية تليها وضع عدد قليل من الديدان في منتصف التصحيح الغذائي. ثم يتم تسجيل سلوك الديدان، وتحليلها، ويتم احتساب قيمة مؤشر تفضيل استنادا إلى العدد الإجمالي للبكسل بكسل في كل منطقة الحل. على الرغم من أن وجود التصحيح الغذائي جذابة تمكن السكان الأصغر من الديدان لاستخدامها في كل فحص، وقد سبق أن أظهرت الغذاء لتوعية السلوكيات تجنب لذوبان الطارد 12 . وعلاوة على ذلك، تظهر الديدان استجابة فوتوفوبيك لضوء الموجة القصيرة واستخدام مصادر الضوء المجهر التي تنبعث الضوء الأبيض في الإعداد تسجيل السلوك قد تؤثر على السلوكs = &quot;كريف&quot;&gt; 13. الغرض من الطريقة التي نوقشت في هذه المقالة هو لتسجيل وتحليل C. ايليجانس &quot; تفضيل المركبات القابلة للذوبان باستخدام مقايسة سكانية. وتحقيقا لهذه الغاية، فإن الأسلوب الحالي يدمج ويحسن الجوانب من كل ثلاث طرق سبق مناقشتها. فإنه يتيح مجموعات كبيرة من الديدان لفحصها ويتطلب كميات صغيرة فقط من الحل التجريبي لاستخدامها في كل فحص. وبالإضافة إلى ذلك، يتم إجراء مقايسة داخل غرفة السلوك المغلقة بنيت خصيصا مع الأشعة تحت الحمراء ليد الخلفية للحد من آثار ضوء الموجة القصيرة على السلوك. ويمكن أيضا أن تجهز كل غرفة مع الكاميرات المجهر متعددة، مما يزيد من الإنتاجية التجريبية دون المساس مساحة مقاعد البدلاء. وأخيرا، يخرج برنامج تحليل الفيديو قيمة مؤشر التفضيل لكل مقطع فيديو بالإضافة إلى مؤامرة إشغال دودة مصاحبة لتصور ديناميات سلوك السكان بمرور الوقت. إعداد غرفة وبروتوكول ساي يمكن تعديلها أكثر لدراسة ردود السلوك المتعدد الوسائط مثل تأثير الروائح أو درجة الحرارة على السلوكيات الحسية الحسية. توضح هذه المقالة بناء غرفة السلوك وبروتوكول الفحص. كما أنه يدل على فائدة هذه الطريقة في فحص استجابة من نوع البرية الديدان والمسخنات المعيبة كيميائية الحسية إلى طارد للذوبان المعروفة، أيونات النحاس 4 . وأخيرا، يتم تفصيل عملية تحليل الفيديو باستخدام البرنامج المقدم.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="840">
	<tbody>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Aluminum T-slotted framing extrusions</td>
			<td style="width:147px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">47065T101</td>
			<td style="width:359px;">Single profile, 1&#34; size, solid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Brackets</td>
			<td style="width:147px;">McMaster-Carr</td>
			<td>47065T236</td>
			<td>1&#34; long for 1&#34; high single profile extrusions</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Compact end-feed fasteners</td>
			<td style="width:147px;">McMaster-Carr</td>
			<td>47065T139</td>
			<td>1&#34; (single), pack of 4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Twist-in solid panel holders</td>
			<td style="width:147px;">McMaster-Carr</td>
			<td>47065T251</td>
			<td>For 1&#34; high extrusion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Plastic end caps</td>
			<td style="width:147px;">McMaster-Carr</td>
			<td>47065T91</td>
			<td>For 1&#34; high extrusion</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Optically clear cast acrylic sheet</td>
			<td style="width:147px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">8560K211</td>
			<td>3/16&#34; thick, 12&#34; x 12&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vinyl-coated polyester fabric</td>
			<td style="width:147px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:119px;">88505K57</td>
			<td>0.027&#34; thick, 61&#34; width, black</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Brass grommets</td>
			<td style="width:147px;">McMaster-Carr</td>
			<td>9604K22</td>
			<td>Trade size 0, 0.545&#34; outer diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Steel washers</td>
			<td style="width:147px;">McMaster-Carr</td>
			<td>90107A029</td>
			<td>1/4&#34; screw size</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Rounded head screws</td>
			<td style="width:147px;">McMaster-Carr</td>
			<td>90272A546</td>
			<td>1/4&#34;-20 thread size, 1-1/2&#34; long</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Standard operating backlight</td>
			<td style="width:147px;">Smart Vision Lights</td>
			<td style="width:119px;">See local vendor</td>
			<td>8&#34;x8&#34;, infrared 850nm</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">IVP-C1 Variable Control Pot</td>
			<td style="width:147px;">Smart Vision Lights</td>
			<td style="width:119px;">See local vendor</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">T1 Power Supply</td>
			<td style="width:147px;">Smart Vision Lights</td>
			<td style="width:119px;">See local vendor</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Dino lite Pro AM4113T</td>
			<td style="width:147px;">Dino-Lite Digital Microscope</td>
			<td style="width:119px;">See local vendor</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">MS09B microscope stand</td>
			<td style="width:147px;">Dino-Lite Digital Microscope</td>
			<td>See local vendor</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

automated analysis of a nematode population-based chemosensory preference assay

النيماتودا، كاينورهابديتيس ايليجانس &#39;الجهاز العصبي المضغوط من 302 الخلايا العصبية فقط يكمن ذخيرة متنوعة من السلوكيات. لتسهيل تشريح الدوائر العصبية الكامنة وراء هذه السلوكيات، وتطوير المقايسات السلوكية قوية وقابلة للتكرار ضروري. السابق C. وقد استخدمت الدراسات السلوكية ايليجانس الاختلافات من &quot;اختبار السقوط&quot;، &quot;فحص الكيميائي&quot;، و &quot;فحص الاحتفاظ&quot; للتحقيق في استجابة C. ايليجانس إلى المركبات القابلة للذوبان. الطريقة الموصوفة في هذه المقالة تسعى إلى الجمع بين نقاط القوة التكميلية من المقايسات الثلاثة المذكورة أعلاه. لفترة وجيزة، وتنقسم دائرة صغيرة في منتصف كل لوحة فحص إلى أربعة أرباع مع السيطرة والحلول التجريبية وضعت بالتناوب. بعد إضافة الديدان، يتم تحميل لوحات الفحص في غرفة السلوك حيث كاميرات المجهر تسجيل لقاءات الديدان مع المناطق المعالجة. ثم يتم إجراء تحليل الفيديو الآليويتم إنشاء قيمة مؤشر التفضيل (بي) لكل مقطع فيديو. اقتناء الفيديو وميزات التحليل الآلي لهذه الطريقة يقلل من مشاركة المجرب وأي أخطاء المرتبطة بها. وعلاوة على ذلك، يتم استخدام كميات دقيقة من المجمع التجريبي لكل مقايسة ويزيد الإعداد كاميرا متعددة غرفة السلوك الإنتاجية التجريبية. هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص لإجراء الشاشات السلوكية من المسوخ الوراثية والمركبات الكيميائية الجديدة. ومع ذلك، فإن هذه الطريقة ليست مناسبة لدراسة التحفيز التدرج الملاحة نظرا لقربها من مناطق السيطرة والتحكم التجريبية. وينبغي أيضا أن لا تستخدم إلا عندما يكون عدد قليل من السكان من الديدان المتاحة. في حين أن مناسبة لفحص الردود فقط على المركبات القابلة للذوبان في شكله الحالي، ويمكن تعديل هذه الطريقة بسهولة لاستيعاب التفاعل الحسي المتعدد الوسائط والدراسات أوبتوجينيتيك. ويمكن أيضا أن تتكيف هذه الطريقة لفحص الردود الكيميائية الحسية من الأنواع الأخرى من الديدان الخيطية. </P&gt;

ويبين الشكل 3A قيم مؤشر التفضيل التي تم الحصول عليها لمختلف التراكيب الوراثية والعلاج. تشير قيمة مؤشر التفضيل 1 إلى جذب قوي إلى الحل الموضوعة في عائد الاستثمار التجريبي بينما تشير قيمة مؤشر التفضيل -1 إلى تنافر قوي. تم الحصول على مؤشر التفضيل 0.02 عندما تم وضع محلول العازلة M13 في كل من عوائد الاستثمار الضابطة والتجريبية، مما يدل على عدم وجود تحيز مكاني نحو عائد الاستثمار. وتجنبت الديدان N2 بقوة أيونات النحاس مما أدى إلى مؤشر تفضيلية -0.67، مما يؤكد النتائج السابقة أن أيونات النحاس هي طارد قوي ( الفيلم التكميلي 1 ) 4 . أوسم-3 المسوخ، الذي يفتقر إلى التكوين السليم للقطاعات البعيدة من أهداب الحسية، وأظهرت انخفاض كبير في تجنب أيونات النحاس (بي = -0.19) 15 . أوكر-2 المسوخ، والتي هي دي<html> فاكتيف في العديد من الاستجابات المسببة للألم بوساطة آش بما في ذلك تجنب النحاس، كما تظهر انخفاض كبير في تجنب وحتى بعض جاذبية خفيفة إلى أيونات النحاس (بي = 0.19) ( فيلم التكميلي 2 ) 16 . ويبين الشكل 3B مؤامرات الإشغال دودة التمثيلية، والتي تشير إلى كثافة الديدان في السيطرة مقابل روي عوائد التجريبية مع مرور الوقت في كل فيديو. كلما كان لون منطقة التآمر أكثر قتامة، كلما زاد عدد وحدات بكسل الديدان في عائد الاستثمار. مؤامرة شغل للديدان N2 تعامل مع السيطرة M13 العازلة يدل على أن عدد الديدان في كلا عائد الاستثمار لا تزال مماثلة طوال الفحص. ومع ذلك، فإن مؤامرة شغل للديدان N2 تعامل مع أيونات النحاس يشير إلى أن الديدان بقوة وباستمرار تجنب العائد على الاستثمار التجريبي طوال الفحص. جيمغ &quot;سرك =&quot; / فيليز / ftp_upload / 55963 / 55963fig1.jpg &quot;/&gt; الشكل 1: تمثيل الصور والتصوير التخطيطي لتصميم غرفة السلوك. ( A ) عرض الجبهة من السلوك غرفة الإعداد (يسار) والتمثيل التخطيطي المقابلة من إطار الغرفة (يمين). أوراق البوليستر غير شفافة ترفق الغرفة على جميع الوجوه باستثناء الوجه السفلي، والذي يسمح الضوء من خلال لوحة الأشعة تحت الحمراء الخلفية. الأرقام 1 و 2 و 3 تتوافق مع طبقات البثق في (B). ( B ) تخطيطي من أعلى وجهة نظر طبقات البثق تضم إطار غرفة السلوك. وهذا يشمل الطبقة العليا (1)، والطبقة الوسطى جبل جبل التجمع (2)، وطبقة المرحلة السفلى (3). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55963/55963fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55963/55963fig2.jpg"/&gt; الشكل 2: قوالب الحل والموضع محاذاة اللوحة. ( أ ) يحتوي قالب الحل-التنسيب على أربعة أرباع وعلامات محاذاة الأرقام. يتم وضع حل التحكم في الجزء العلوي الأيسر والأيسر أسفل الأرباع في حين يتم وضع الحل التجريبي في العلوي الأيمن والأيسر السفلي الأرباع. ( B ) قالب لوحة محاذاة لديها علامات محاذاة عدد فقط للحد من انسداد الديدان في مجال الرؤية أثناء تسجيل الفيديو والتحليل. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55963/55963fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55963/55963fig3.jpg" /> الشكل 3: مثال للبيانات التي تم جمعها باستخدام هذا الفحص. ( أ ) قيم مؤشر التفضيل (بي) للنوع البري N2 والمتحولة C. ايليجانس </e<html> م&gt; ردا على M13 العازلة و 10 ملي كوكل 2 . أظهرت الديدان N2 عدم وجود تفضيل بين التحكم وعائد الاستثمار التجريبي عند وضع حل التحكم M13 في كلا عائد الاستثمار ولكن تجنب بقوة عائد الاستثمار التجريبي عند وضع أيونات النحاس فيه (بي = 0.02 و -0.67 على التوالي). أوسم-3 (p802) المسوخ و أوكر -2 (ak47) المسوخ أظهرت انخفاض كبير في تجنب أيونات النحاس مقارنة N2 (بي = -0.1 و 0.2 على التوالي). N = 6 مقايسات لكل الاقتران العلاج الجيني،&gt; 360 الديدان لكل مقايسة، تشير أشرطة الخطأ ± 1 سيم، *** p &lt;0.001، في اتجاه واحد أنوفا تليها بعد توكي اختبار صريح الفرق هسد (هسد). ( B ) ممثلات الإمساك دودة الممثل ل N2 الديدان مع العازلة M13 في كل من روي (أعلى) و N2 الديدان مع M13 العازلة في العائد على الاستثمار روي وأيونات النحاس في روي التجريبي (أسفل). ويمثل مقياس الألوان أسفل كل قطعة أرض عدد وحدات البكسل.بلود / 55963 / 55963fig3large.jpg &quot;تارجيت =&quot; _ بلانك &quot;&gt; الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. الفيلم التكميلي 1: استجابة السلوكية من الديدان N2 إلى 10 ملم كلوريد النحاس. وتنجذب الديدان إلى الأرباع السيطرة مع العازلة M13 (العلوي الأيسر وأسفل اليمين) ولكن تجنب بشدة الأرباع التي تحتوي على أيونات النحاس الذائبة في العازلة M13 (العلوي الأيمن واليسار إلى اليسار). تم تسجيل الفيديو في إطار واحد في الثانية الواحدة، وسجل 15x. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55963/Supplementary_Video_1.mp4">الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الملف.</a> الفيلم التكميلي 2: استجابة السلوكية من أوكر-2 (ak47) الديدان إلى 10 ملي كلوريد النحاس. الديدان تتجول إلى حد متساو تقريبا في كل من الأرباع السيطرة مع M13 عازلة (أعلى اليسار واليمين السفلي) ورباعيةثانية تحتوي على أيونات النحاس المذابة في العازلة M13 (أعلى اليمين واليسار إلى اليسار) طوال مدة التسجيل. تظهر المسوخ تفضيل طفيف للأرباع التي تحتوي على أيونات النحاس في بداية التسجيل. تم تسجيل الفيديو في إطار واحد في الثانية الواحدة، وسجل 15x. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55963/Supplementary_video_2.mp4">الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الملف.</a> ملف تكميلي: قوالب الحل والموضع محاذاة اللوحة. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55963/JoVE_template.pptx">الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الملف.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Automated Analysis of a Nematode Population-based Chemosensory Preference Assay at JoVE.com

Automated Analysis of a Nematode Population-based Chemosensory Preference Assay

نقدم إعداد تسجيل السلوك والبروتوكول الذي يتيح التحليل الآلي من الديدان الخيطية، تفضيل كاينورهابديتيس ايليجانس &quot;للمركبات القابلة للذوبان في مقايسة سكانية. توضح هذه المقالة بناء غرفة السلوك، بروتوكول الفحص السلوكي، واستخدام برامج تحليل الفيديو.

التحليل الآلي من النيماتودا القائم على السكان الحسية الكيميائية تفضيل التفضيل

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection ...

Research

JoVE Journal

Behavior

Measurement of Fronto-limbic Activity Using an Emotional Oddball Task in Children with Familial High Risk for Schizophrenia

قياس النشاط الجبهي الحوفي باستخدام العاطفي غريب الاطوار العمل في الأطفال الذين يعانون من مخاطر عالية العائلي لمرض الفصام

Adolescence is a critical developmental period where the early symptoms of schizophrenia frequently emerge. First-degree relatives of people with ...

Fat Preference: A Novel Model of Eating Behavior in Rats

ميول الدهون: نموذج الرواية من سلوك الأكل في الجرذان

Obesity is a growing problem in the United States of America, with more than a third of the population classified as obese. One factor contributing to ...

Experimental Assessment of Mouse Sociability Using an Automated Image Processing Approach

تقييم التجريبية من الفأر المؤانسة باستخدام الآلي صورة نهج المعالجة

Mouse is the preferred model organism for testing drugs designed to increase sociability. We present a method to quantify mouse sociability in which the ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

تقييم التوعية السلوكية التي يسببها الكوكايين ومشروطة مكان الأفضلية في الفئران

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Protocol for Data Collection and Analysis Applied to Automated Facial Expression Analysis Technology and Temporal Analysis for Sensory Evaluation

بروتوكول لجمع البيانات وتحليل التطبيقية لالآلي الوجه تقنية تحليل التعبير والتحليل الزمني للتقييم الحسي

We demonstrate a method for capturing emotional response to beverages and liquefied foods in a sensory evaluation laboratory using automated facial ...

An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration

An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration

فحص الآلي سريع جيوتاكسيس سلبية متكررة لتحليل سلوك التسلق الكبار في نموذج المورفولوجية نيوروديجينيريشن

Neurodegenerative diseases are frequently associated with a progressive loss of movement ability, reduced life span, and age-dependent neurodegeneration. ...

Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

إعادة البحث عن المخدرات في الفئران باستخدام نموذج تفضيل المكان مكيفة

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

Automated, Long-term Behavioral Assay for Cognitive Functions in Multiple Genetic Models of Alzheimer's Disease, Using IntelliCage

الآلي، التحليل السلوكي طويلة الأجل للوظائف المعرفية في عدة نماذج الوراثية لمرض الزهايمر، باستخدام إينتيليكاجي

Multiple factors&#8212;such as aging and genes&#8212;are frequently associated with cognitive decline. Genetically modified mouse models of cognitive ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

بروتوكول تفضيل مكان مكيفة لقياس الحضانة للرغبة في الفئران

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Paw-Print Analysis of Contrast-Enhanced Recordings (PrAnCER): A Low-Cost, Open-Access Automated Gait Analysis System for Assessing Motor Deficits

Paw-Print Analysis of Contrast-Enhanced Recordings PrAnCER: A Low-Cost, Open-Access Automated Gait Analysis System for Assessing Motor Deficits

تحليل بطبعة مخلب من التسجيلات المحسنة على النقيض من التباين (PrAnCER): نظام تحليل مشية آلي منخفض التكلفة ومفتوح الوصول لتقييم حالات العجز في المحرك

Gait analysis is used to quantify changes in motor function in many rodent models of disease. Despite the importance of assessing gait and motor function ...