Name: a method for characterizing embryogenesis in arabidopsis
Uploaded: 2017-08-04T10:00:00
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हम dr. जेसिका उत्तर समीक्षकों की पांडुलिपि पढ़ने के लिए धन्यवाद। हम इमेजिंग सेंटर, जीवन विज्ञान, राजधानी नॉर्मल यूनिवर्सिटी (बीजिंग, चीन), कॉलेज के डॉ Xianyong शेंग DR5-GFP परख का स्थानीयकरण करने के लिए धन्यवाद। यह काम नगर निगम सरकार बीजिंग विज्ञान फाउंडेशन से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था (सीआईटी &#38; TCD20150102) और राष् ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन के चीन से (31600248)।

नोट: इस प्रोटोकॉल को तीन भागों है: 1) पैटर्न गठन डीआइसी माइक्रोस्कोपी; का उपयोग जंगली-प्रकार Arabidopsis भ्रूण में देख 2) भ्रूण पैटर्न गठन के जरिए confocal माइक्रोस्कोपी स्कैनिंग लेजर का उपयोग मार्कर प्रोटीन अ?...

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	<li>Jenik, P. D., Gillmor, C. S., Lukowitz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+patterning+in+Arabidopsis+thaliana.">Embryonic patterning in Arabidopsis thaliana.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 23, 207-236 (2007).</li><li>Lau, S., Slane, D., Herud, O., Kong, J., Jurgens, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+embryogenesis+in+flowering+plants:+setting+up+the+basic+body+pattern.">Early embryogenesis in flowering plants: setting up the basic body pattern.</a> Annu Rev Plant Biol. 63, 483-506 (2012).</li><li>Wendrich, J. R., Weijers, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Arabidopsis+embryo+as+a+miniature+morphogenesis+model.">The Arabidopsis embryo as a miniature morphogenesis model.</a> New Phytol. 199 (1), 14-25 (2013).</li><li>ten Hove, C. A., Lu, K. J., Weijers, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+a+plant:+cell+fate+specification+in+the+early+Arabidopsis+embryo.">Building a plant: cell fate specification in the early Arabidopsis embryo.</a> Development. 142 (3), 420-430 (2015).</li><li>Feng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+N-terminal+acetylation+is+required+for+embryogenesis+in+Arabidopsis.">Protein N-terminal acetylation is required for embryogenesis in Arabidopsis.</a> J Exp Bot. 67 (15), 4779-4789 (2016).</li><li>Berleth, T., Jurgens, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+monopteros+gene+in+organising+the+basal+body+region+of+the+Arabidopsis+embryo.">The role of the monopteros gene in organising the basal body region of the Arabidopsis embryo.</a> Development. 118, 575-587 (1993).</li><li>Luo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=D-myo-inositol-3-phosphate+affects+phosphatidylinositol-mediated+endomembrane+function+in+Arabidopsis+and+is+essential+for+auxin-regulated+embryogenesis.">D-myo-inositol-3-phosphate affects phosphatidylinositol-mediated endomembrane function in Arabidopsis and is essential for auxin-regulated embryogenesis.</a> Plant Cell. 23 (4), 1352-1372 (2011).</li><li>Nodine, M. D., Yadegari, R., Tax, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RPK1+and+TOAD2+are+two+receptor-like+kinases+redundantly+required+for+Arabidopsis+embryonic+pattern+formation.">RPK1 and TOAD2 are two receptor-like kinases redundantly required for Arabidopsis embryonic pattern formation.</a> Dev Cell. 12 (6), 943-956 (2007).</li><li>Ulmasov, T., Murfett, J., Hagen, G., Guilfoyle, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aux/IAA+proteins+repress+expression+of+reporter+genes+containing+natural+and+highly+active+synthetic+auxin+response+elements.">Aux/IAA proteins repress expression of reporter genes containing natural and highly active synthetic auxin response elements.</a> Plant Cell. 9 (11), 1963-1971 (1997).</li><li>Friml, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efflux-dependent+auxin+gradients+establish+the+apical-basal+axis+of+Arabidopsis.">Efflux-dependent auxin gradients establish the apical-basal axis of Arabidopsis.</a> Nature. 426 (6963), 147-153 (2003).</li><li>Clough, S. J., Bent, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+dip:+a+simplified+method+for+Agrobacterium-mediated+transformation+of+Arabidopsis+thaliana.">Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana.</a> Plant J. 16 (16), 735-743 (1998).</li><li>Fiume, E., Fletcher, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Arabidopsis+embryo+and+endosperm+development+by+the+polypeptide+signaling+molecule+CLE8.">Regulation of Arabidopsis embryo and endosperm development by the polypeptide signaling molecule CLE8.</a> Plant Cell. 24 (3), 1000-1012 (2012).</li><li>Jurkuta, R. J., Kaplinsky, N. J., Spindel, J. E., Barton, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partitioning+the+apical+domain+of+the+Arabidopsis+embryo+requires+the+BOBBER1+NudC+domain+protein.">Partitioning the apical domain of the Arabidopsis embryo requires the BOBBER1 NudC domain protein.</a> Plant Cell. 21 (21), 1957-1971 (2009).</li></ol>

बीजांड निकासी कोशिका विभाजन का पता लगाने और Arabidopsisमें embryogenesis के दौरान आकारिकी का आकलन करने के लिए एक उपयोगी तरीका है; इस तकनीक का उपयोग कर, भ्रूण सीधे डीआइसी माइक्रोस्कोपी5,12के तहत ...

Embryogenesis उच्च संयंत्र विकास में जल्द से जल्द घटना है। एक परिपक्व भ्रूण रूपों एक युग्मनज कोशिका विभाजन और भेदभाव सख्त आनुवंशिक नियंत्रण1,2के माध्यम से। Arabidopsis भ्रूण morphogenesis के नियंत्रण क्योंकि एक उम्मीद पैटर्न3,4embryogenesis के दौरान सेल प्रभागों के अनुक्रम इस प्रकार अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी मॉडल हैं। हालांकि, कई कक्षों के लिए एक युक्त एक Arabidopsis भ्रूण मनाया और विश्लेषण के लिए बहुत छोटी है। इसके अलावा, कुछ जीनों के उत्परिवर्तन भ्रूण मारक5embryogenesis में उन जीनों की महत्वपूर्ण भूमिका का संकेत, हो सकता है। भ्रूण-घातक म्यूटेंट में पैटर्न गठन के लक्षण वर्णन जिसके तहत भ्रूण विकास आवश्यक जीनों को विनियमित आणविक तंत्र को समझने के लिए एक आधार प्रदान करता है।
एक विस्तृत विधि यहाँ मॉडल संयंत्र Arabidopsis में भ्रूण पैटर्न गठन के लक्षण वर्णन के लिए प्रत्यक्ष सूक्ष्म अवलोकन द्वारा वर्णित है। विधि एक भ्रूण का सूक्ष्म अवलोकन द्वारा पीछा किया बीजांड मंजूरी शामिल है। एक भ्रूण घातक उत्परिवर्ती के लक्षण वर्णन भी वर्णन किया गया है।
विभिन्न विकासात्मक चरणों पर भ्रूण के morphology सीधे माइक्रोस्कोपी Hoyer के समाधान6,7के साथ मंजूरी दे दी गई है बीजाणु के प्रयोग द्वारा निर्धारित किया जा सकता। ऐसे बीजाणु के एक उच्च अपवर्तक सूचकांक प्रदर्शन; इस प्रकार, इस विधि समाशोधन बीजांड नमूनों कि अंतर हस्तक्षेप (डीआइसी) के विपरीत माइक्रोस्कोपी द्वारा मनाया जाना चाहिए के लिए विशेष रूप से लाभप्रद है।
इसके अलावा, जीन है कि embryogenesis के दौरान व्यक्त किया जाता है एक विशेष कक्ष या कक्षों की एक सीमित संख्या में मार्कर के रूप में एक भ्रूण में कोशिकाओं की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता। इसलिए, कक्ष पहचान विनिर्देश embryogenesis दौरान confocal माइक्रोस्कोपी स्कैनिंग लेजर का उपयोग मार्कर GFP-टैग किए गए प्रोटीन की अभिव्यक्ति निगरानी द्वारा एनोटेट कर सकते हैं। इसके विपरीत, अभिव्यक्ति के पैटर्न के एक अज्ञात कार्यात्मक जीन -GFP फ्यूजन embryogenesis के दौरान देख सकते हैं भ्रूण patterning और उस जीन की अभिव्यक्ति के बीच एक लिंक उपलब्ध कराने, और Arabidopsisमें embryogenesis के लिए आवश्यक हैं नए जीनों की पहचान की सुविधा।
यहाँ वर्णित विधि भी एक भ्रूण घातक उत्परिवर्ती के phenotype विशेषताएँ करने के लिए, और सेलुलर स्तर पर embryogenesis पर प्रभावित जीन के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता। इसके अलावा, मार्कर जीन की अभिव्यक्ति पद्धति के साथ संयोजन में एक तुलना जंगली-प्रकार और उत्परिवर्ती पौधों के बीच embryogenesis के दौरान, आणविक तंत्र और संकेतन पथ embryogenesis8,9में शामिल बारे में सुराग विधि उपज कर सकते हैं। दरअसल, विधि naa10 पौधों के लिए लागू किया गया था, और यह पाया गया कि hypophysis में उत्परिवर्ती का असामान्य विभाजन embryogenesis5के दौरान ऒक्झिन्स के वितरण में परिवर्तन के द्वारा कारण हो सकता है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="847">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Chloral Hydrate</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">15307</td>
			<td style="width:293px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Murashige and Skoog Basal Medium</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td>M5519</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Phytagel</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td>P8169</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Hygromycin&#160;</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10843555001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Growth chamber&#160;</td>
			<td>Percival</td>
			<td style="width:119px;">CU36L5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss Oberkochen</td>
			<td>Zeiss Image M2</td>
			<td>camera: AxioCam 506 color</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Confocal Laser Scanning Microscopy</td>
			<td>Zeiss Oberkochen</td>
			<td>Zeiss LSM 5</td>
			<td>filters: BP 495-555 nm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereoscope</td>
			<td>Zeiss Oberkochen</td>
			<td>Axio Zoom V16</td>
			<td>camera: AxioCam MRc5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">nutrient-rich&#160;soil</td>
			<td colspan="2">KLASMANN, Germany</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50-ml tube</td>
			<td>Corning Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.5-ml tube</td>
			<td>Corning Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">10% sodium hypochlorite solution</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>&#160;Domestic analytical reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sucrose</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>&#160;Domestic analytical reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KOH</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>&#160;Domestic analytical reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glycerol</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>&#160;Domestic analytical reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">culture dish</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>&#160;Domestic supplies</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">vermiculite</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>&#160;Domestic supplies</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">glass slide</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>&#160;Domestic supplies</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">syringe needle</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>&#160;Domestic supplies</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">fine-tipped tweezers</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>&#160;Domestic supplies</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">super clean bench</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>&#160;Domestic equipment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a method for characterizing embryogenesis in arabidopsis

उनके विकास की अत्यधिक उम्मीद के मुताबिक प्रकृति को देखते हुए Arabidopsis भ्रूण एक मॉडल के रूप में पौधों में morphogenesis के अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया गया है। हालांकि, प्रारंभिक चरण संयंत्र भ्रूण छोटे हैं और कुछ कक्षों, उन्हें निरीक्षण और विश्लेषण करने के लिए मुश्किल बना रही हैं। एक विधि यहाँ पैटर्न गठन मॉडल जीव Arabidopsisका उपयोग कर एक खुर्दबीन के नीचे संयंत्र भ्रूण में निस्र्पक के लिए वर्णन किया गया है। निकासी ताजा बीजाणु के Hoyer के समाधान का उपयोग कर के, बाद में सेल नंबर और भ्रूण की आकारिकी मनाया जा सकता है, और उनके विकास के चरण एक 100 X तेल विसर्जन लेंस का उपयोग कर अंतर हस्तक्षेप विपरीत माइक्रोस्कोपी द्वारा निर्धारित किया जा सका। इसके अलावा, विशिष्ट मार्कर प्रोटीन ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP साथ) टैग की अभिव्यक्ति सेल पहचान विनिर्देश भ्रूण patterning के दौरान एनोटेट करने के लिए confocal माइक्रोस्कोपी स्कैनिंग लेजर द्वारा निगरानी की थी। इस प्रकार, इस विधि में जंगली-प्रकार संयंत्र भ्रूण सेलुलर और आणविक स्तरों पर पैटर्न गठन का निरीक्षण करने के लिए, और पैटर्न गठन जंगली प्रकार के पौधों और भ्रूण घातक म्यूटेंट से भ्रूण में तुलना करके भ्रूण patterning में विशिष्ट जीन की भूमिका विशेषताएँ करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता। इसलिए, विधि Arabidopsisमें embryogenesis विशेषताएँ करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता।

इस पत्र में वर्णित विधि एक खुर्दबीन के नीचे सीधे embryogenesis पर गौर करें, कक्ष पहचान विनिर्देश embryogenesis के दौरान विशिष्ट मार्कर के साथ एनोटेट और embryogenesis के दौरान एक विशेष जीन की भूमिका विशेषताएँ करने के...

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A Method for Characterizing Embryogenesis in Arabidopsis

इस प्रोटोकॉल में Arabidopsis embryogenesis बीजांड निकासी एक खुर्दबीन के नीचे भ्रूण पैटर्न गठन के निरीक्षण के बाद के माध्यम से देख के लिए एक विधि की रूपरेखा।

Embryogenesis Arabidopsis में निस्र्पक के लिए एक विधि

Given the highly predictable nature of their development, Arabidopsis embryos have been used as a model for studies of morphogenesis in plants. However, ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

A Method for Characterizing Embryogenesis in Arabidopsis

Method of Studying Palatal Fusion using Static Organ Culture

स्टेटिक अंग संस्कृति का उपयोग कर तालु फ्यूजन का अध्ययन की विधि

Cleft lip and palate are among the most common of all birth defects. The secondary palate forms from mesenchymal shelves covered with epithelium that ...

In Vitro Colony Assays for Characterizing Tri-potent Progenitor Cells Isolated from the Adult Murine Pancreas

In Vitro Colony Assays for Characterizing Tri-potent Progenitor Cells Isolated from the Adult Murine Pancreas

इन विट्रो कॉलोनी assays में त्रिकोणीय शक्तिशाली पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं निस्र्पक के लिए एडल्ट Murine अग्न्याशय से पृथक

Stem and progenitor cells from the adult pancreas could be a potential source of therapeutic beta-like cells for treating patients with type 1 diabetes. ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

लाइव Arabidopsis फूल विकास की confocal इमेजिंग

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

A Versatile Mounting Method for Long Term Imaging of Zebrafish Development

Zebrafish विकास की लॉन्ग टर्म इमेजिंग के लिए एक बहुमुखी बढ़ते विधि

Zebrafish embryos offer an ideal experimental system to study complex morphogenetic processes due to their ease of accessibility and optical transparency. ...

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संवहनी एंडोथिलियल स्टेम सेल के पोत जनरेशन को विज़ुअलाइज़ करने के लिए एक उपन्यास स्तनधारी फैट पैड ट्रांसप्लांटेशन तकनीक

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

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इन विट्रो Arabidopsis थालियाना में युग्मनज ध्रुवीकरण और भ्रूण के नमूनों की लाइव-सेल इमेजिंग के लिए बीजांड खेती

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

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