Name: in vivo imaging of cx3cr1gfp/gfp reporter mice with spectral-domain optical coherence tomography and scanning laser ophthalmoscopy
Uploaded: 2017-11-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy at JoVE.com

यह काम स्विस नेशनल साइंस फाउंडेशन (SNSF; #320030_156019) के अनुदान से समर्थित था । लेखकों हीडलबर्ग इंजीनियरिंग GmBH, जर्मनी से वित्तीय सहायता प्राप्त की ।

सभी प्रक्रियाओं में, बालब/c वयस्क पुरुष और मादा चूहे जो Cx3cr1 के प्रवर्तक के अधीन gfp व्यक्त करते थे < सुप वर्ग = "xref" > 24 . चूहों नेत्र और दृष्टि अनुसंधान में पशुओं के उपयोग के लिए ARVO बयान के अनुसार इलाज किया ...

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	<li>Madeira, M. H., Boia, R., Santos, P. F., Ambrosio, A. F., Santiago, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+microglia-mediated+neuroinflammation+to+retinal+degenerative+diseases.">Contribution of microglia-mediated neuroinflammation to retinal degenerative diseases.</a> Mediators Inflamm. , 673090 (2015).</li><li>Ng, T. F., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+migration+of+retinal+microglia+into+the+subretinal+space.">Light-induced migration of retinal microglia into the subretinal space.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 42 (13), 3301-3310 (2001).</li><li>Langmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+activation+in+retinal+degeneration.">Microglia activation in retinal degeneration.</a> J Leukoc Biol. 81 (6), 1345-1351 (2007).</li><li>Joly, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperative+phagocytes:+resident+microglia+and+bone+marrow+immigrants+remove+dead+photoreceptors+in+retinal+lesions.">Cooperative phagocytes: resident microglia and bone marrow immigrants remove dead photoreceptors in retinal lesions.</a> Am J Pathol. 174 (6), 2310-2323 (2009).</li><li>Arroba, A. I., Alvarez-Lindo, N., van Rooijen, N., de la Rosa, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia-mediated+IGF-I+neuroprotection+in+the+rd10+mouse+model+of+retinitis+pigmentosa.">Microglia-mediated IGF-I neuroprotection in the rd10 mouse model of retinitis pigmentosa.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (12), 9124-9130 (2011).</li><li>Zhang, C., Lam, T. T., Tso, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+populations+of+microglia/macrophages+in+the+retina+and+their+activation+after+retinal+ischemia+and+reperfusion+injury.">Heterogeneous populations of microglia/macrophages in the retina and their activation after retinal ischemia and reperfusion injury.</a> Exp Eye Res. 81 (6), 700-709 (2005).</li><li>Geng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+properties+of+the+mouse+eye.">Optical properties of the mouse eye.</a> Biomed Opt Express. 2 (4), 717-738 (2011).</li><li>Lozano, D. C., Twa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+rat+schematic+eye+from+in+vivo+biometry+and+the+correction+of+lateral+magnification+in+SD-OCT+imaging.">Development of a rat schematic eye from in vivo biometry and the correction of lateral magnification in SD-OCT imaging.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (9), 6446-6455 (2013).</li><li>Vaz-Pereira, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+Coherence+Tomography+Features+Of+Active+And+Inactive+Retinal+Neovascularization+In+Proliferative+Diabetic+Retinopathy.">Optical Coherence Tomography Features Of Active And Inactive Retinal Neovascularization In Proliferative Diabetic Retinopathy.</a> Retina. 36 (6), 1132-1142 (2016).</li><li>Kokona, D., Haner, N. U., Ebneter, A., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+of+macrophage+dynamics+with+optical+coherence+tomography+in+anterior+ischemic+optic+neuropathy.">Imaging of macrophage dynamics with optical coherence tomography in anterior ischemic optic neuropathy.</a> Exp Eye Res. , (2016).</li><li>Makiyama, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macular+cone+abnormalities+in+retinitis+pigmentosa+with+preserved+central+vision+using+adaptive+optics+scanning+laser+ophthalmoscopy.">Macular cone abnormalities in retinitis pigmentosa with preserved central vision using adaptive optics scanning laser ophthalmoscopy.</a> PLoS One. 8 (11), e79447 (2013).</li><li>Paques, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+fundus+imaging+by+confocal+scanning+laser+ophthalmoscopy+in+the+mouse.">High resolution fundus imaging by confocal scanning laser ophthalmoscopy in the mouse.</a> Vision Res. 46 (8-9), 1336-1345 (2006).</li><li>Joshi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneously+occurring+fundus+findings+observed+using+confocal+scanning+laser+ophthalmoscopy+in+wild+type+Sprague+Dawley+rats.">Spontaneously occurring fundus findings observed using confocal scanning laser ophthalmoscopy in wild type Sprague Dawley rats.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 77, 160-166 (2016).</li><li>Muraoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+rabbit+retina+with+retinal+degeneration+by+using+spectral-domain+optical+coherence+tomography.">Real-time imaging of rabbit retina with retinal degeneration by using spectral-domain optical coherence tomography.</a> PLoS One. 7 (4), e36135 (2012).</li><li>Fischer, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive,+in+vivo+assessment+of+mouse+retinal+structure+using+optical+coherence+tomography.">Noninvasive, in vivo assessment of mouse retinal structure using optical coherence tomography.</a> PLoS One. 4 (10), e7507 (2009).</li><li>Bell, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+vasculature+of+adult+zebrafish:+in+vivo+imaging+using+confocal+scanning+laser+ophthalmoscopy.">Retinal vasculature of adult zebrafish: in vivo imaging using confocal scanning laser ophthalmoscopy.</a> Exp Eye Res. 129, 107-118 (2014).</li><li>Bailey, T. J., Davis, D. H., Vance, J. E., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral-domain+optical+coherence+tomography+as+a+noninvasive+method+to+assess+damaged+and+regenerating+adult+zebrafish+retinas.">Spectral-domain optical coherence tomography as a noninvasive method to assess damaged and regenerating adult zebrafish retinas.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (6), 3126-3138 (2012).</li><li>Huber, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+mouse+models+of+retinal+degeneration.">Spectral domain optical coherence tomography in mouse models of retinal degeneration.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (12), 5888-5895 (2009).</li><li>Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Analysis+of+Mouse+Retinal+Layers+Using+Automated+Segmentation+of+Spectral+Domain+Optical+Coherence+Tomography+Images.">Quantitative Analysis of Mouse Retinal Layers Using Automated Segmentation of Spectral Domain Optical Coherence Tomography Images.</a> Transl Vis Sci Technol. 4 (4), 9 (2015).</li><li>Sim, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+in+vivo+labelling+of+infiltrating+leukocytes+in+the+mouse+retina+using+indocyanine+green+dye.">A simple method for in vivo labelling of infiltrating leukocytes in the mouse retina using indocyanine green dye.</a> Dis Model Mech. 8 (11), 1479-1487 (2015).</li><li>Bosco, A., Romero, C. O., Ambati, B. K., Vetter, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+dynamics+of+retinal+microglial+activation+during+neurodegeneration:+confocal+ophthalmoscopic+imaging+and+cell+morphometry+in+mouse+glaucoma.">In vivo dynamics of retinal microglial activation during neurodegeneration: confocal ophthalmoscopic imaging and cell morphometry in mouse glaucoma.</a> J Vis Exp. (99), e52731 (2015).</li><li>Acton, J. H., Cubbidge, R. P., King, H., Galsworthy, P., Gibson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drusen+detection+in+retro-mode+imaging+by+a+scanning+laser+ophthalmoscope.">Drusen detection in retro-mode imaging by a scanning laser ophthalmoscope.</a> Acta Ophthalmol. 89 (5), e404-e411 (2011).</li><li>Greenstein, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+changes+associated+with+normal+and+abnormal+fundus+autofluorescence+in+patients+with+retinitis+pigmentosa.">Structural and functional changes associated with normal and abnormal fundus autofluorescence in patients with retinitis pigmentosa.</a> Retina. 32 (2), 349-357 (2012).</li><li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+fractalkine+receptor+CX(3)CR1+function+by+targeted+deletion+and+green+fluorescent+protein+reporter+gene+insertion.">Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion.</a> Mol Cell Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+Microglia+for+the+Maintenance+of+Synaptic+Function+and+Integrity+in+the+Mature+Retina.">Requirement for Microglia for the Maintenance of Synaptic Function and Integrity in the Mature Retina.</a> J Neurosci. 36 (9), 2827-2842 (2016).</li><li>Ebneter, A., Casson, R. J., Wood, J. P., Chidlow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+activation+in+the+visual+pathway+in+experimental+glaucoma:+spatiotemporal+characterization+and+correlation+with+axonal+injury.">Microglial activation in the visual pathway in experimental glaucoma: spatiotemporal characterization and correlation with axonal injury.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (12), 6448-6460 (2010).</li><li>Ebneter, A., Kokona, D., Schneider, N., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+Activation+and+Recruitment+of+Circulating+Macrophages+During+Ischemic+Experimental+Branch+Retinal+Vein+Occlusion.">Microglia Activation and Recruitment of Circulating Macrophages During Ischemic Experimental Branch Retinal Vein Occlusion.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (2), 944-953 (2017).</li><li>Lin, Y. L., Potter-Baker, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+theoretical+models+from+adult+stroke+recovery+to+improve+use+of+non-invasive+brain+stimulation+for+children+with+congenital+hemiparesis.">Using theoretical models from adult stroke recovery to improve use of non-invasive brain stimulation for children with congenital hemiparesis.</a> J Neurophysiol. , (2017).</li><li>Combadiere, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CX3CR1-dependent+subretinal+microglia+cell+accumulation+is+associated+with+cardinal+features+of+age-related+macular+degeneration.">CX3CR1-dependent subretinal microglia cell accumulation is associated with cardinal features of age-related macular degeneration.</a> J Clin Invest. 117 (10), 2920-2928 (2007).</li><li>Bermudez, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+cold+cataract+development+in+anesthetized+mice.">Time course of cold cataract development in anesthetized mice.</a> Curr Eye Res. 36 (3), 278-284 (2011).</li><li>Toth, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+retinal+morphology+viewed+by+optical+coherence+tomography+and+by+light+microscopy.">A comparison of retinal morphology viewed by optical coherence tomography and by light microscopy.</a> Arch Ophthalmol. 115 (11), 1425-1428 (1997).</li><li>Ebneter, A., Kokona, D., Jovanovic, J., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dramatic+Effect+of+Oral+CSF-1R+Kinase+Inhibitor+on+Retinal+Microglia+Revealed+by+In+Vivo+Scanning+Laser+Ophthalmoscopy.">Dramatic Effect of Oral CSF-1R Kinase Inhibitor on Retinal Microglia Revealed by In Vivo Scanning Laser Ophthalmoscopy.</a> Transl Vis Sci Technol. 6 (2), 10 (2017).</li><li>Gabriele, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+spectral-domain+optical+coherence+tomography+total+retinal+thickness+measurements+in+mice.">Reproducibility of spectral-domain optical coherence tomography total retinal thickness measurements in mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (12), 6519-6523 (2010).</li><li>Nakao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wide-field+laser+ophthalmoscopy+for+mice:+a+novel+evaluation+system+for+retinal/choroidal+angiogenesis+in+mice.">Wide-field laser ophthalmoscopy for mice: a novel evaluation system for retinal/choroidal angiogenesis in mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (8), 5288-5293 (2013).</li><li>Wang, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+fundus+hyperautofluorescent+spots+and+their+role+in+retinal+degeneration+in+a+mouse+model+of+Goldmann-Favre+syndrome.">Origin of fundus hyperautofluorescent spots and their role in retinal degeneration in a mouse model of Goldmann-Favre syndrome.</a> Dis Model Mech. 6 (5), 1113-1122 (2013).</li><li>Wang, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+origin+of+fundus+autofluorescence+in+patients+and+mice+with+a+defective+NR2E3+gene.">Cellular origin of fundus autofluorescence in patients and mice with a defective NR2E3 gene.</a> Br J Ophthalmol. 93 (9), 1234-1240 (2009).</li><li>Thanos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sick+photoreceptors+attract+activated+microglia+from+the+ganglion+cell+layer:+a+model+to+study+the+inflammatory+cascades+in+rats+with+inherited+retinal+dystrophy.">Sick photoreceptors attract activated microglia from the ganglion cell layer: a model to study the inflammatory cascades in rats with inherited retinal dystrophy.</a> Brain Res. 588 (1), 21-28 (1992).</li><li>Hughes, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+activated+sialoadhesin-positive+microglia+during+retinal+degeneration.">Generation of activated sialoadhesin-positive microglia during retinal degeneration.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 44 (5), 2229-2234 (2003).</li></ol>

वर्तमान लेख रेटिना B-स्कैन और माउस रेटिना में gfp सकारात्मक microglia वितरण की इमेजिंग के अधिग्रहण के लिए एक प्रोटोकॉल एक ही इमेजिंग सत्र में प्रदर्शित करता है । एसडी-OCT और SLO तेजी से रेटिना रोग के पशु मॉडलों में प...

प्रयोगात्मक नेत्र विज्ञान में, रेटिना विकृति की परीक्षा आम तौर पर ऊतकीय तकनीकों का उपयोग कर मूल्यांकन किया जाता है. हालांकि, प्रोटोकॉल पशु euthanization की आवश्यकता होती है और ऊतक के वास्तविक गुणों को परिवर्तन के कारण हो सकता है । एसडी-अक्टूबर और SLO नियमित नैदानिक प्रयोजनों के लिए नैदानिक नेत्र विज्ञान में इस्तेमाल कर रहे हैं और इस तरह के मधुमेह धब्बेदार शोफ के रूप में कई रेटिना रोगों की निगरानी के लिए9, पूर्वकाल कोरोनरी ऑप्टिक न्यूरोपैथी10, या रेटनाइटिस पिगमेंटोसा11 . एसडी अक्टूबर और SLO गैर इनवेसिव तकनीक है कि रेटिना, जो आगे के हस्तक्षेप के बिना फैली हुई पुतली के माध्यम से कल्पना कर रहे है की उच्च संकल्प छवियों को उत्पंन कर रहे हैं । एसडी अक्टूबर रेटिना के पार अनुभागीय छवियों को बनाने के लिए backscattering डेटा इकट्ठा करके रेटिना संरचना और रेटिना की मोटाई की जानकारी प्रदान करता है, जबकि SLO रेटिना के त्रिविम उच्च कंट्रास्ट छवियों का उत्पादन करने के लिए प्रतिदीप्ति डेटा एकत्र. आजकल, दोनों तकनीकों तेजी से प्रयोगात्मक छोटे कुतर12,13,14,15 (या भी zebrafish16,17) का उपयोग कर नेत्र विज्ञान में इस्तेमाल कर रहे है और कर सकते है गुणात्मक और मात्रात्मक जानकारी12,17,18,19,20,21प्रदान करें ।
lipofuscins या रेटिना में drusen के गठन की तरह अंतर्जात fluorophores के संचय ऑटो फ्लोरोसेंट संकेत के रूप में SLO द्वारा visualized किया जा सकता है । इस सुविधा का निदान और उम्र के रूप में रेटिना रोगों की निगरानी के लिए एक मूल्यवान तकनीक SLO बनाता है संबंधित धब्बेदार अध-पतन या रेटनाइटिस पिगमेंटोसा22,23. प्रयोगात्मक नेत्र विज्ञान में, ऑटो प्रतिदीप्ति इमेजिंग (वायुसेना) रिपोर्टर माउस लाइनों में विशिष्ट कोशिका प्रकार का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । उदाहरण के लिए, चूहों heterozygous के प्रवर्तक के तहत gfp की अभिव्यक्ति के लिए Cx3cr124 सामान्य रेटिना में microglial कोशिकाओं के vivo विज़ुअलाइज़ेशन में और microglia/macrophage की जांच के लिए लाभप्रद हैं रेटिना रोग में गतिशीलता21. Microglia रेटिना के निवासी मैक्रोफेज हैं, जो चोट लगने पर ऊतक homeostasis और ऊतक मरम्मत पर एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं1,25,26. रेटिना में Microglia सक्रियण रेटिना में चोट, ischemia, और अध..., रेटिना रोग2,3,4,5में इन कोशिकाओं की भूमिका का सुझाव दिया गया है, 6.
वर्तमान प्रोटोकॉल का उद्देश्य है रेटिना इमेजिंग के लिए एक अपेक्षाकृत सरल विधि का वर्णन और रेटिना मोटाई की माप एसडी-OCT का उपयोग कर, और gfp के दृश्य के लिए सकारात्मक microglia कोशिकाओं में Cx3cr1gfp/gfp माउस रेटिना का उपयोग SLO (हीडलबर्ग Spectralis एचआरए + झालेले system). इस प्रोटोकॉल इमेजिंग और विभिंन माउस लाइनों में स्वस्थ या रोगग्रस्त रेटिना की मोटाई माप के लिए उपयोग किया जा सकता है । इसके अतिरिक्त, morphometric विश्लेषणों के लिए किया जा सकता है की पहचान और ठहराव के लिए microglia संख्या और microglia सक्रियकरण रेटिना में SLO21का उपयोग कर । Microglia कोशिकाएं केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) में अपक्षयी रोगों से जुड़ी हैं, जिनमें रेटिना२७,२८,२९है. इस प्रकार, दो वर्तमान प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया तरीकों के संयोजन के द्वारा, microglia वितरण और रेटिना अध कि पतन के सहसंबंध बनाया जा सकता है, जो रोग गंभीरता या vivo मेंचिकित्सीय दृष्टिकोण की प्रभावशीलता की निगरानी की सुविधा कर सकते हैं ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Spectralis Imaging system (HRA+OCT)</td>
			<td>Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td>N/A</td>
			<td>ophthalmic imaging platform system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Eye Explorer</td>
			<td>Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Version 1.9.13.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>78D standard ophthalmic non-contact slit lamp lens</td>
			<td>Volk Optical Inc., Ohio, USA</td>
			<td>V78C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectralis wide angle 55&#176; lens</td>
			<td>Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td>50897-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultra widefield 102&#176; lens</td>
			<td>Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td>50117-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medetomidine hydrochloride 1 mg/mL (Domitor)</td>
			<td>Provet AG, Lyssach, Switzerland</td>
			<td>Swissmedic Nr. 50&#39;590 - ATCvet: QN05CM91</td>
			<td>anesthetic/analgesic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine 50mg/ml (Ketalar)</td>
			<td>Parke-Davis, Zurich, Switzerland</td>
			<td>72276388</td>
			<td>anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tropicamide 0.5% + phenylephrine HCl 2.5% (Augentropfen mix)</td>
			<td>ISPI, Bern, Switzerland</td>
			<td>N/A</td>
			<td>pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnican Insulin-50 0.5 ml G30 0.3 x 12mm</td>
			<td>B. Braun Mesungen AG, Carl-Braun-Stra&#223;e, Germany</td>
			<td>9151125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hydroxypropylmethylcellulose (Methocel 2%)</td>
			<td>OmniVision, Neuhausen, Switzerland</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>+4 dpt rigid gas permeable contact lens</td>
			<td>Quantum I, Bausch + Lomb Inc., Rochester, NY</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Base Curve: 7.20 to 8.40 mm 
			Diameter: 9.00 / 9.60 / 10.20 mm 
			Power: -25.00 to +25.00 Diopters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>balanced salt solution (BSS)</td>
			<td>Inselspital, Bern, Switzerland</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silicon forceps</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>atipamezole 5 mg/mL (Antisedan)</td>
			<td>Provet AG, Lyssach, Switzerland</td>
			<td>N/A</td>
			<td>&#945;2 adrenergic receptor antagonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 7</td>
			<td>GraphPad Software, Inc, San Diego, CA, USA</td>
			<td>N/A</td>
			<td>statistical analysis software</td>
		</tr>
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in vivo imaging of cx3cr1gfp/gfp reporter mice with spectral-domain optical coherence tomography and scanning laser ophthalmoscopy

वर्णक्रमीय डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (एसडी-OCT) और स्कैनिंग लेजर ophthalmoscopy (SLO) बड़े पैमाने पर प्रयोगात्मक नेत्र विज्ञान में प्रयोग किया जाता है । वर्तमान प्रोटोकॉल में चूहों ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (gfp) के प्रवर्तक के तहत व्यक्त Cx3cr1 (बालब/c-Cx3cr1gfp/gfp) रेटिना में vivo में छवि microglia कोशिकाओं का इस्तेमाल किया गया । Microglia रेटिना के मैक्रोफेज निवासी है और कई रेटिना रोगों1,2,3,4,5,6में फंसाया गया है । इस प्रोटोकॉल की पीढ़ी के लिए एक विस्तृत दृष्टिकोण प्रदान करता है रेटिना बी-स्कैन, एसडी के साथ-OCT, और microglia सेल वितरण की इमेजिंग में Cx3cr1gfp/ SLO के साथ gfp चूहों में vivo, एक नेत्र इमेजिंग प्लेटफॉर्म प्रणाली का उपयोग कर. प्रोटोकॉल कई रिपोर्टर माउस लाइनों में उपयोग किया जा सकता है । हालांकि, यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल के लिए कुछ सीमाएं हैं । सबसे पहले, दोनों SLO और एसडी अक्टूबर, उच्च संकल्प मोड में इस्तेमाल किया, उच्च अक्षीय संकल्प के साथ डेटा इकट्ठा लेकिन पार्श्व संकल्प कम है (३.५ µm और 6 µm, क्रमशः). इसके अलावा, ध्यान और SLO में संतृप्ति स्तर पैरामीटर चयन और आंख के सही संरेखण पर अत्यधिक निर्भर है । इसके अतिरिक्त, चूहों में मानव रोगियों के लिए डिजाइन उपकरणों का उपयोग मानवीय आँख की तुलना में माउस आँख की उच्च कुल ऑप्टिकल शक्ति के कारण चुनौतीपूर्ण है; यह भी दूसरों के बीच में माउस लेंस द्वारा आवर्धन पर निर्भर कर रहे हैं, जो7वृद्धि अशुद्धियां पार्श्व करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । हालांकि, के बावजूद कि अक्षीय स्कैन की स्थिति पार्श्व आवर्धन पर निर्भर है, अक्षीय एसडी-OCT माप सही कर रहे हैं8.

यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए, SD-OCT स्कैन और SLO छवियाँ एक ही इमेजिंग सत्र में Cx3cr1gfp/gfp चूहों से प्राप्त किए गए थे । चित्रा 3 प्रतिनिधि एसडी-अक्टूबर एकल स्कैन एक 30 डिग?...

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In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

इस प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे उच्च संकल्प इमेजिंग तकनीक जैसे वर्णक्रमीय डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी और स्कैनिंग लेजर ophthalmoscopy छोटे कुतर में उपयोग किया जा सकता है, एक नेत्र इमेजिंग मंच प्रणाली का उपयोग कर, पर जानकारी प्राप्त करने के लिए रेटिना की मोटाई और microglial सेल वितरण, क्रमशः ।

Vivo में Cx3cr1gfp/gfp रिपोर्टर चूहों के साथ इमेजिंग-डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी और स्कैनिंग लेजर Ophthalmoscopy

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

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