Name: chondrogenic pellet formation from cord blood-derived induced pluripotent stem cells
Uploaded: 2017-06-19T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par une subvention du projet de R &amp; D en matière de technologie de la santé de Corée, Ministère de la santé, du bien-être et de la famille, République de Corée (HI16C2177).

Ce protocole a été approuvé par le comité d&#39;examen institutionnel de l&#39;Université catholique de Corée (KC12TISI0861). Les CBMC utilisés pour la reprogrammation ont été obtenus directement de la banque de sang de cordon de l&#39;hôpital St. Mary&#39;s de Seoul. 1. Différenciation chondrogénique des iPSC <ol><li> Production CBMC-iPSC <ol><li> Générer des CBMC-hiPSC en utilisant le protocole montré dans nos travaux antérieurs 23...

Ce protocole a généré avec succès des hiPSC à partir de CBMC. Nous avons reprogrammé les CBMC aux hiPSC en utilisant un vecteur viral Sendai contenant des facteurs Yamanaka 24 . Trois cas ont été utilisés en différenciation, et toutes les expériences ont généré avec succès des granulés chondrogéniques avec ce protocole. De nombreuses études ont rapporté des protocoles pour la différenciation des hiPSC en chondrocytes 25 , 26...

L&#39;utilisation de hiPSCs représente une nouvelle stratégie pour le dépistage de drogue et les études mécanistes de diverses maladies. Du point de vue de la régénération, les hiPSC sont également une source potentielle de remplacement des tissus endommagés qui ont une capacité de guérison limitée, comme le cartilage articulaire 1 , 2 . La régénération du cartilage articulaire natif a été un défi depuis plusieurs décennies. Le cartilage articulaire est un tissu doux et blanc qui recouvre la fin des os, les protégeant des frottements. Cependant, il a une capacité de régénération limitée lorsqu&#39;il est endommagé, ce qui rend l&#39;auto-réparation presque impossible. Par conséquent, la recherche axée sur la régénération du cartilage est en cours depuis plusieurs décennies. Auparavant, la différenciation in vitro dans la lignée chondrogénique était habituellement réalisée avec des BMSC ou des chondrocytes indigènes isolés de l&#39;articulation du genou 3 . Due tO leur potentiel de chondrogenic, BMSC et chondrocytes indigènes ont de nombreux mérites soutenant leur utilisation dans la chondrogénèse. Cependant, en raison de leur expansion limitée et de leur phénotype instable, ces cellules sont confrontées à plusieurs limitations dans la reconstruction des défauts du cartilage articulaire. Dans des conditions de culture in vitro , ces cellules ont tendance à perdre leurs propres caractéristiques après 3 à 4 passages, ce qui finit par affecter leurs capacités de différenciation 4 . En outre, dans le cas des chondrocytes indigènes, des dommages supplémentaires à l&#39;articulation du genou sont inévitables lors de l&#39;obtention de ces cellules. Contrairement aux BMSC ou aux chondrocytes indigènes, les hiPSC peuvent se développer indéfiniment in vitro . Avec les conditions de culture appropriées, les hiPSC ont un grand potentiel en tant que source de remplacement pour la différenciation chondrogénique. Cependant, il est difficile de modifier les caractéristiques intrinsèques des hiPSC 5 . En outre, il faut plusieurs essais in vitro compliqués.Ps pour diriger le sort des hiPSC vers un type de cellule spécifique. Malgré ces complications, l&#39;utilisation de hiPSC est toujours recommandée en raison de leur capacité d&#39;auto-renouvellement élevé et de leur capacité à se différencier en cellules ciblées, y compris les chondrocytes 6 . La différenciation chondrogénique est généralement effectuée avec des systèmes de culture tridimensionnels, tels que la culture de pastilles ou la culture de micromasses, en utilisant des cellules progénitrices de type MSC. Si vous utilisez le système HiPSC, le protocole pour générer des cellules progénitrices MSC diffère des protocoles existants. Certains groupes utilisent une culture monocouche de hiPSC pour convertir directement le phénotype en cellules MSC 7 . Cependant, la plupart des études utilisent les EB pour générer des cellules secondaires qui ressemblent aux MSC 8 , 9 , 10 , 11 . Différents types de facteurs de croissance sont utilisés pour induire ChondrogeNesis. Habituellement, les protéines de famille BMP et TGFβ sont utilisées, seules ou en combinaison. La différenciation a également été induite avec d&#39;autres facteurs, tels que GDF5, FGF2 et IGF1 12 , 13 , 14 , 15 . On a montré que le TGFß1 stimule la chondrogénèse de manière dose-dépendante dans les MSC 16 . Par rapport à l&#39;autre isotype, le TGFβ3, le TGFß1 induit une chondrogénèse en augmentant la condensation de la cellule mésenchymateuse pré-cartilagineuse. Le TGFβ3 induit la chondrogénèse en augmentant significativement la prolifération des cellules mésenchymateuses 17 . Cependant, le TGFβ3 est utilisé plus fréquemment par les chercheurs que TGFβ1 7 , 10 , 18 , 19 . BMP2 améliore l&#39;expression de gènes liés aux composants de la matrice chondrogénique chez l&#39;hommeChondrocytes articulaires dans des conditions in vitro 20 . BMP2 augmente l&#39;expression de gènes critiques pour la formation de cartilage dans les MSC en combinaison avec des protéines TGFβ 21 . Il a également été démontré que BMP2 améliore de manière synergique l&#39;effet du TGFβ3 par les voies Smad et MAPK 22 . Dans cette étude, les CBMC-hiPSC ont été agrégés en EB en utilisant du milieu EB dans une boîte de Petri à faible fixation. Les cellules de dépassement ont été induites en fixant les EB à un plat revêtu de gélatine. La différenciation chondrogénique à l&#39;aide de cellules secondaires a été réalisée par culture de pastilles. Le traitement à la fois avec le BMP2 et le TGFß3 a condensé avec succès les cellules et a induit une accumulation de protéines de la matrice extracellulaire (ECM) pour la formation de granules chondrogéniques. Cette étude suggère un protocole de différenciation chondrogénique simple mais efficace utilisant CBMC-hiPSCs.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="653">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td colspan="4" height="21" style="height:21px;width:653px;">Plasticware</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">100mm Dish</td>
			<td style="width:113px;">TPP</td>
			<td style="width:87px;">93100</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">6-well Plate</td>
			<td style="width:113px;">TPP</td>
			<td style="width:87px;">92006</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">50 mL Cornical Tube</td>
			<td style="width:113px;">SPL</td>
			<td style="width:87px;">50050</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">15 mL Cornical Tube</td>
			<td style="width:113px;">SPL</td>
			<td style="width:87px;">50015</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">10 mL Disposable Pipette</td>
			<td style="width:113px;">Falcon</td>
			<td style="width:87px;">7551</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">5 mL Disposable Pipette</td>
			<td style="width:113px;">Falcon</td>
			<td style="width:87px;">7543</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">12-well Plate</td>
			<td style="width:113px;">TPP</td>
			<td style="width:87px;">92012</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:207px;">Name</td>
			<td style="width:113px;">Company</td>
			<td style="width:87px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:247px;">Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="4" height="21" style="height:21px;width:653px;">E8 Medium Materials</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">DMEM/F12, HEPES</td>
			<td style="width:113px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:87px;">11330-057</td>
			<td style="width:247px;">E8 Medium (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td style="width:113px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:87px;">25080-094</td>
			<td style="width:247px;">E8 Medium (Conc.: 543 &#956;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Sodium Selenite</td>
			<td style="width:113px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:87px;">S5261</td>
			<td style="width:247px;">E8 Medium&#160; (Conc.: 14 ng/mL)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Human Transfferin</td>
			<td style="width:113px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:87px;">T3705</td>
			<td style="width:247px;">E8 Medium (Conc.: 10.7 &#956;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Basic FGF2</td>
			<td style="width:113px;">Peprotech</td>
			<td style="width:87px;">100-18B</td>
			<td style="width:247px;">E8 Medium&#160; (Conc.: 100 ng/mL)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Human Insulin</td>
			<td style="width:113px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:87px;">12585-014</td>
			<td style="width:247px;">E8 Medium (Conc.: 20 &#956;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Human TGF&#946;1</td>
			<td style="width:113px;">Peprotech</td>
			<td style="width:87px;">100-21</td>
			<td style="width:247px;">E8 Medium (Conc.: 2 ng/mL)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Ascorbic Acid</td>
			<td style="width:113px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:87px;">A8960</td>
			<td style="width:247px;">E8 Medium&#160; (Conc.: 64 &#956;g/mL)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">DPBS</td>
			<td style="width:113px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:87px;">14190-144</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Vitronectin</td>
			<td style="width:113px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:87px;">A14700</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">ROCK Inhibitor</td>
			<td style="width:113px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:87px;">Y0503</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:207px;">Name</td>
			<td style="width:113px;">Company</td>
			<td style="width:87px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:247px;">Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="4" height="21" style="height:21px;width:653px;">Quality Control Materials</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">18 mm Cover Glass</td>
			<td style="width:113px;">Superior</td>
			<td style="width:87px;">HSU-0111580</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">4% Paraformaldyhyde</td>
			<td style="width:113px;">Tech &#38; Innovation</td>
			<td style="width:87px;">BPP-9004</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:113px;">BIOSESANG</td>
			<td style="width:87px;">9002-93-1</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td style="width:113px;">Vector Lab</td>
			<td style="width:87px;">SP-5050</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Anti-SSEA4 Antibody</td>
			<td style="width:113px;">Millipore</td>
			<td style="width:87px;">MAB4304</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Anti-Oct4 Antibody</td>
			<td style="width:113px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:87px;">SC9081</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Anti-TRA-1-60 Antibody</td>
			<td style="width:113px;">Millipore</td>
			<td style="width:87px;">MAB4360</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Anti-Sox2 Antibody</td>
			<td style="width:113px;">Biolegend</td>
			<td style="width:87px;">630801</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Anti-TRA-1-81 Antibody</td>
			<td style="width:113px;">Millipore</td>
			<td style="width:87px;">MAB4381</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Anti-Klf4 Antibody</td>
			<td style="width:113px;">Abcam</td>
			<td style="width:87px;">ab151733</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:207px;">Alexa Fluor 488 goat anti-mouse IgG (H+L) antibody</td>
			<td style="width:113px;">Molecular Probe</td>
			<td style="width:87px;">A11029</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:207px;">Alexa Fluor 594 goat anti-rabbit IgG (H+L) antibody</td>
			<td style="width:113px;">Molecular Probe</td>
			<td style="width:87px;">A11037</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">DAPI</td>
			<td style="width:113px;">Molecular Probe</td>
			<td style="width:87px;">D1306</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Prolong gold antifade reagent</td>
			<td style="width:113px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:87px;">P36934</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">4% Paraformaldyhyde</td>
			<td style="width:113px;">Tech &#38; Innovation</td>
			<td style="width:87px;">BPP-9004</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Tween 20</td>
			<td style="width:113px;">BIOSESANG</td>
			<td style="width:87px;">T1027</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td style="width:113px;">Vector Lab</td>
			<td style="width:87px;">SP-5050</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Anti-Collagen II antibody</td>
			<td>abcam&#160;</td>
			<td style="width:87px;">ab34712</td>
			<td style="width:247px;">1:100</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Alcian blue</td>
			<td style="width:113px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>A3157-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fast Green FCF</td>
			<td style="width:113px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>F7252-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Safranin O</td>
			<td style="width:113px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:87px;">090m0039v</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:207px;">Nuclear fast red</td>
			<td style="width:113px;">Americanmastertech</td>
			<td>STNFR100&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">xylene</td>
			<td style="width:113px;">Duksan</td>
			<td style="width:87px;">115&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Ethanol</td>
			<td style="width:113px;">Duksan</td>
			<td style="width:87px;">64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:207px;">Mayer&#39;s hematoxylin solution</td>
			<td style="width:113px;">wako pure chemical industries</td>
			<td>LAK7534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:207px;">DAP</td>
			<td style="width:113px;">VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Slide Glass, Coated</td>
			<td style="width:113px;">Hyun Il Lab-Mate</td>
			<td style="width:87px;">HMA-S9914</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Trizol</td>
			<td style="width:113px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:87px;">15596-018</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Chloroform</td>
			<td style="width:113px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:87px;">366919</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Isoprypylalcohol</td>
			<td style="width:113px;">Millipore</td>
			<td style="width:87px;">109634</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">Ethanol</td>
			<td style="width:113px;">Duksan</td>
			<td style="width:87px;">64-17-5</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:207px;">RevertAid First Strand cDNA Synthesis kit</td>
			<td style="width:113px;">Thermo Scientfic</td>
			<td style="width:87px;">K1622</td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:207px;">Name</td>
			<td style="width:113px;">Company</td>
			<td style="width:87px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:247px;">Description</td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:207px;">Chondrogenic Differentiation Materials</td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:247px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:207px;">DMEM</td>
			<td style="width:113px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:87px;">11885</td>
			<td style="width:247px;">Chondrogenic media component (500 mL)</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:207px;">Penicilin Streptomycin</td>
			<td style="width:113px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:87px;">P4333</td>
			<td style="width:247px;">Chondrogenic media component (Conc.: 1 %)</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:207px;">Ascorbic Acid</td>
			<td style="width:113px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:87px;">A8960</td>
			<td style="width:247px;">Chondrogenic media component (Conc.: 64 &#956;g/mL)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:207px;">MEM Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td style="width:113px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:87px;">11140-050</td>
			<td style="width:247px;">Chondrogenic media component (Conc.: 100 mM)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">rhBMP-2</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>355-BM-050</td>
			<td>Chondrogenic media component (Conc.:100ng/ml)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Recombinant Hman TGF-beta3</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>243-B3-002</td>
			<td>Chondrogenic media component (Conc.:10ng/ml)</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">KnockOut Serum Replacement</td>
			<td style="width:113px;">Life Technologies</td>
			<td>10828-028</td>
			<td style="width:247px;">Chondrogenic media component (Conc.: 1 %)</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">ITS+ Premix</td>
			<td>BD</td>
			<td>354352</td>
			<td style="width:247px;">Chondrogenic media component (Conc.: 1 %)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dexamethasone-Water Soluble&#160;</td>
			<td style="width:113px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>D2915-100MG</td>
			<td>Chondrogenic media component (Conc.:10-7 M)</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">GlutaMAX Supplement</td>
			<td style="width:113px;">Life Technologies</td>
			<td>35050-061</td>
			<td style="width:247px;">Chondrogenic media component (Conc.: 1 %)</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">Sodium pyruvate solution</td>
			<td style="width:113px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>S8636</td>
			<td style="width:247px;">Chondrogenic media component (Conc.: 1 %)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-Proline</td>
			<td style="width:113px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>P5607-25G</td>
			<td style="width:247px;">Chondrogenic media component (40&#956;g/ml)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

chondrogenic pellet formation from cord blood-derived induced pluripotent stem cells

Le cartilage articulaire humain n&#39;a pas la capacité de se réparer. La dégénérescence du cartilage est donc traitée non par traitement curatif mais par des traitements conservateurs. Actuellement, des efforts sont déployés pour régénérer le cartilage endommagé avec des chondrocytes expansés ex vivo ou des cellules souches mésenchymateuses dérivées de la moelle osseuse (BMSC). Cependant, la viabilité et l&#39;instabilité restreintes de ces cellules limitent leur application dans la reconstruction du cartilage. Les cellules souches pluripotentes induites par l&#39;homme (hiPSC) ont reçu l&#39;attention scientifique comme nouvelle alternative pour les applications regénératives. Avec une capacité d&#39;auto-renouvellement illimitée et multipotence, les hiPSC ont été mis en évidence comme une nouvelle source de cellules de remplacement pour la réparation du cartilage. Cependant, l&#39;obtention d&#39;une quantité élevée de granulés chondrogéniques de haute qualité est un défi majeur pour leur application clinique. Dans cette étude, nous avons utilisé des cellules de descendance dérivées du corps embryoïde (EB) pour la différenciation chondrogénique. Une chondrogénèse réussie a été confirmée par PCR etD coloration avec bleu alcian, bleu de toluidine et anticorps contre les collagènes types I et II (COL1A1 et COL2A1, respectivement). Nous fournissons une méthode détaillée pour la différenciation des iPSC à base de cellules mononucléaires du sang du cordon de cordon (CBMC-hiPSC) en pastilles chondrogéniques.

Dans cette étude, nous avons généré des granulés chondrogéniques provenant de CBMC-hiPSC en induisant des cellules secondaires des EB. La différenciation chondrogénique a été induite par CBMC-hiPSC avec une forte pluripotence confirmée 11 . Un schéma simple de notre protocole est illustré à la figure 1A . Avant la différenciation, les colonies iPSC ont été développées ( figure 1B ). Les...

Watch this Scientific Journal Video about Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Chondrogenic Pellet Formation from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Formation de granulés chondrogéniques à partir de cellules souches pluripotentes induites par sang de cordon

Ici, nous proposons un protocole pour la différenciation chondrogénique des cellules souches pluripotentes induites par les cellules mononucléaires du sang du cordon de l&#39;omble.

Human articular cartilage lacks the ability to repair itself. Cartilage degeneration is thus treated not by curative but by conservative treatments. ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Three-dimensional Quantification of Dendritic Spines from Pyramidal Neurons Derived from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Quantification tridimensionnelle d&#39;épines dendritiques de Pyramidal neurones humains induits Dérivé de cellules souches pluripotentes

Dendritic spines are small protrusions that correspond to the post-synaptic compartments of excitatory synapses in the central nervous system. They are ...

Recherche

Biologie du développement

Cultivate Primary Nasal Epithelial Cells from Children and Reprogram into Induced Pluripotent Stem Cells

Cultiver des cellules primaires épithéliales nasales des enfants et des Reprogrammer dans les cellules souches pluripotentes induites

Nasal epithelial cells (NECs) are the part of the airways that respond to air pollutants and are the first cells infected with respiratory viruses. They ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Melanoma Tumor-infiltrating Lymphocytes

Génération de Induced cellules souches pluripotentes à partir de mélanome humain Lymphocytes tumorales infiltrant

Adoptive transfer of ex vivo expanded autologous tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) can mediate durable and complete responses in significant subsets ...

Induced Pluripotent Stem Cell Generation from Blood Cells Using Sendai Virus and Centrifugation

Induite cellules souches pluripotentes génération de cellules sanguines utilisant Sendai Virus et Centrifugation

The recent development of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) proved that mature somatic cells can return to an undifferentiated, pluripotent ...

Differentiating Chondrocytes from Peripheral Blood-derived Human Induced Pluripotent Stem Cells

Différenciation des chondrocytes provenant des cellules souches pluripotentes induites par le sang périphérique dérivé du sang

In this study, we used peripheral blood cells (PBCs) as seed cells to produce chondrocytes via induced pluripotent stem cells (iPSCs) in an ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Rapide, réalisée la différenciation des cellules épithéliales pigmentaire rétinien de cellules souches pluripotentes humaines embryonnaires ou induit

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Generation of 3D Skin Organoid from Cord Blood-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Génération de peau 3D Organoïde de dérivés du sang de cordon induite par les cellules souches pluripotentes

The skin is the body&#8217;s largest organ and has many functions. The skin acts as a physical barrier and protector of the body and regulates bodily ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Dans Vitro génération du Somite dérivés de Human induit Pluripotent Stem cellules

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Différenciation pan-myéloïde du sang de cordon humain Dérivé CD34- Cellules hématopoïétiques de tige et progénitrice

Ex vivo differentiation of human hematopoietic stem cells is a widely used model for studying hematopoiesis. The protocol described here is for cytokine ...

In vitro Neuromuscular Junction Induced from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Jonction neuromusculaire in vitro induite par les cellules souches pluripotentes induites par l’homme

The neuromuscular junction (NMJ) is a specialized synapse that transmits action potentials from the motor neuron to skeletal muscle for mechanical ...