Name: force spectroscopy of single protein molecules using an atomic force microscope
Uploaded: 2019-02-28T12:30:00
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1. 蛋白質の準備
<ol><li>DNA のクローニング。<ol>
<li>興味、例えば NI10C10、DNA シーケンスの DNA シーケンスの合成または経由でPCR 標準分子生物学技術11を使用してホストの有機体から分離します。合成中にまたは (Addgene #74888)12プラスミド pEMI91 のモジュールに対応する PCR プライマーの 5' 末端にサイトを配置することによって...

<ol>
	<li>Rief, M., Gautel, M., Oesterhelt, F., Fernandez, J. M., Gaub, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+Unfolding+of+Individual+Titin+Immunoglobulin+Domains+by+AFM.">Reversible Unfolding of Individual Titin Immunoglobulin Domains by AFM.</a> Science. 276 (5315), 1109-1112 (1997).</li><li>Fisher, T. E., Oberhauser, A. F., Carrion-Vazquez, M., Marszalek, P. E., Fernandez, J. 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F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+force+microscopy+as+a+multifunctional+molecular+toolbox+in+nanobiotechnology.">Atomic force microscopy as a multifunctional molecular toolbox in nanobiotechnology.</a> Nature Nanotechnology. 3 (5), 261-269 (2008).</li><li>Lv, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designed+biomaterials+to+mimic+the+mechanical+properties+of+muscles.">Designed biomaterials to mimic the mechanical properties of muscles.</a> Nature. 465 (7294), 69-73 (2010).</li><li>Kim, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomechanics+of+Streptavidin+Hubs+for+Molecular+Materials.">Nanomechanics of Streptavidin Hubs for Molecular Materials.</a> Advanced Materials. 23 (47), 5684-5688 (2011).</li><li>Gonzalez, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-Adhesive+Hydrogels+from+Intrinsically+Unstructured+Proteins.">Self-Adhesive Hydrogels from Intrinsically Unstructured Proteins.</a> Advanced Materials. , (2017).</li><li>Oberhauser, A. F., Hansma, P. K., Carrion-Vazquez, M., Fernandez, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stepwise+unfolding+of+titin+under+force-clamp+atomic+force+microscopy.">Stepwise unfolding of titin under force-clamp atomic force microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 98 (2), 468-472 (2001).</li><li>Li, Q., Scholl, Z. N., Marszalek, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capturing+the+Mechanical+Unfolding+Pathway+of+a+Large+Protein+with+Coiled-Coil+Probes.">Capturing the Mechanical Unfolding Pathway of a Large Protein with Coiled-Coil Probes.</a> Angewandte Chemie International Edition. 53 (49), 13429-13433 (2014).</li><li>Davis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Basic methods in molecular biology. , (2012).</li><li>Scholl, Z. N., Josephs, E. A., Marszalek, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modular,+Non-Degenerate+Polyprotein+Scaffold+for+Atomic+Force+Spectroscopy.">A Modular, Non-Degenerate Polyprotein Scaffold for Atomic Force Spectroscopy.</a> Biomacromolecules. , (2016).</li><li>Scholl, Z. 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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+single+molecule+force+spectroscopy+through+automated+real-time+data+collection+and+quantification+of+experimental+conditions.">Improving single molecule force spectroscopy through automated real-time data collection and quantification of experimental conditions.</a> Ultramicroscopy. 136, 7-14 (2014).</li><li>Bouchiat, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimating+the+persistence+length+of+a+worm-like+chain+molecule+from+force-extension+measurements.">Estimating the persistence length of a worm-like chain molecule from force-extension measurements.</a> Biophysical journal. 76 (1), 409-413 (1999).</li><li>Su, T., Purohit, P. 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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular,+Nondegenerate+Polyprotein+Scaffolds+for+Atomic+Force+Spectroscopy.">Modular, Nondegenerate Polyprotein Scaffolds for Atomic Force Spectroscopy.</a> Biomacromolecules. 17 (7), 2502-2505 (2016).</li><li>Hoffmann, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+Robust+Polyprotein+Production+Facilitates+Single-Molecule+Mechanical+Characterization+of+&#946;-Barrel+Assembly+Machinery+Polypeptide+Transport+Associated+Domains.">Rapid and Robust Polyprotein Production Facilitates Single-Molecule Mechanical Characterization of &#946;-Barrel Assembly Machinery Polypeptide Transport Associated Domains.</a> ACS. 9 (9), 8811-8821 (2015).</li><li>Dudko, O. K., Hummer, G., Szabo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theory,+analysis,+and+interpretation+of+single-molecule+force+spectroscopy+experiments.">Theory, analysis, and interpretation of single-molecule force spectroscopy experiments.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (41), 15755-15760 (2008).</li><li>Popa, I., Berkovich, R., Alegre-Cebollada, J., Rivas-Pardo, J. A., Fernandez, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Halotag+Tethers+to+Study+Titin+Folding+at+the+Single+Molecule+Level.">Halotag Tethers to Study Titin Folding at the Single Molecule Level.</a> Biophysical journal. 106 (2), 391a (2014).</li><li>Yu, H., Siewny, M. G., Edwards, D. T., Sanders, A. W., Perkins, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hidden+dynamics+in+the+unfolding+of+individual+bacteriorhodopsin+proteins.">Hidden dynamics in the unfolding of individual bacteriorhodopsin proteins.</a> Science. 355 (6328), 945-950 (2017).</li><li>Rico, F., Gonzalez, L., Casuso, I., Puig-Vidal, M., Scheuring, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-speed+force+spectroscopy+unfolds+titin+at+the+velocity+of+molecular+dynamics+simulations.">High-speed force spectroscopy unfolds titin at the velocity of molecular dynamics simulations.</a> Science. 342 (6159), 741-743 (2013).</li><li>He, Y., Lu, M., Cao, J., Lu, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulating+protein+conformations+by+single-molecule+AFM-FRET+nanoscopy.">Manipulating protein conformations by single-molecule AFM-FRET nanoscopy.</a> ACS nano. 6 (2), 1221-1229 (2012).</li><li>Fotiadis, D., Scheuring, S., M&#252;ller, S. A., Engel, A., M&#252;ller, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+manipulation+of+biological+structures+with+the+AFM.">Imaging and manipulation of biological structures with the AFM.</a> Micron. 33 (4), 385-397 (2002).</li><li>Edwards, D. T., Faulk, J. K., LeBlanc, M. A., Perkins, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force+Spectroscopy+with+9-&#956;s+Resolution+and+Sub-pN+Stability+by+Tailoring+AFM+Cantilever+Geometry.">Force Spectroscopy with 9-&#956;s Resolution and Sub-pN Stability by Tailoring AFM Cantilever Geometry.</a> Biophysical journal. 113 (12), 2595-2600 (2017).</li><li>Dudko, O. K., Mathe, J., Szabo, A., Meller, A., Hummer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracting+kinetics+from+single-molecule+force+spectroscopy:+Nanopore+unzipping+of+DNA+hairpins.">Extracting kinetics from single-molecule force spectroscopy: Nanopore unzipping of DNA hairpins.</a> Biophysical. 92 (12), 4188-4195 (2007).</li><li>Scholl, Z. N., Li, Q., Yang, W., Marszalek, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+Force+Spectroscopy+Reveals+the+Calcium+Dependence+of+the+Alternative+Conformations+in+the+Native+State+of+a+&#946;&#947;-Crystallin+Protein.">Single-molecule Force Spectroscopy Reveals the Calcium Dependence of the Alternative Conformations in the Native State of a &#946;&#947;-Crystallin Protein.</a> Journal of Biological Chemistry. 291 (35), 18263-18275 (2016).</li></ol>

プロトコルの重要なステップは、単一分子イベント「指紋」をポジティブ コントロールとして機能する 1.1.2、の手順に従って、エンベロープタンパク質の使用です。一般に、ある必要があります開くポリタンパク質蛋白質のイベント (I91、つまり約 28 約 200 pN と輪郭線長さ増分の展開力 nm) 興味の蛋白質が折り畳まれたされていることを明確に締結します。たとえば、興味の蛋白質は、どち?...

原子間力顕微鏡による単一分子力分光 (SMF) の進歩は、機械操作と単一タンパク質分子の正確な評価に有効にしています。この特性は、タンパク質力学1,2,3タンパク質-リガンド相互作用4、蛋白質蛋白質の相互作用5、フォールディングについて知見を生産している、タンパク質ベース設計材料6,7,8。SMF は特にタンパク質を調べる場合に役立ちます AFM によるストレッチとして展開、継続的に増加輪郭線長を生じ、その剛性によると徐々 に拡張するタンパク質分子内における化学的および物理的債をできます。このタンパク質分子の overstretching 破裂イベントの結果力拡張曲線の急激な遷移を生成 (したり強制的にピーク)。力ピーク値は、力学の展開プロセス中にタンパク質の展開力と構造変化に関する直接的な情報を提供します。AFM を用いた最初の研究の一つは、タイチン1を測定し、タンパク質のアンフォールディングとリフォールディング集中化学薬品、極端な温度のような不自然な変性剤を使用せず生理条件下での新しい側面を発見します。
ここで原子間力顕微鏡だけを考えても SMF 実験をさまざまな楽器に行った.AFM は、4 つの主要な要素で構成されます: プローブ、検出器、試料ホルダー、圧電スキャナー。プローブは、片持ちの揺れる端に鋭い先端です。キャリブレーション後フックの法則を使用して力を正確に判断するカンチレバーの背面から反射されるレーザー光を用いた測定接続されている分子のストレッチ中に、片持ち梁の曲げ。ダイオード センターからのレーザービームの変位に比例した電圧を作り出す象限フォト ダイオード検出器に反射レーザー ビーム プロジェクト。流体の蛋白質のサンプルの基板は、サブナノ精度で制御することができます 3 D 圧電ステージ上にマウントされます。フォト ダイオード検出器からの電圧を読み取り、コンピューター制御の電圧供給を通じて 3 D ステージを制御コンピューター。これらの圧電アクチュエータの段階通常容量が装備されているまたは歪みゲージ センサー位置正確に測定圧電変位してフィードバック制御システムを通じて正しい履歴。圧電コント ローラーからセンサー信号出力は、工場出荷時校正は、ピエゾの電圧定数を使用して距離に変換されます。引っ張る実験例力拡張曲線は図 2に示します。
AFM SMF 実験の 2 つのタイプがある: 一定速度、一定力測定を引っ張るします。Oberhauserらのコンスタントフォース SMF 測定値の説明します。9、ここで我々 は一定速度の測定に焦点を当てる一方。典型的な原子間力顕微鏡等速引張実験は、カンチレバー先端に対して基板をゆっくり移動するピエゾに電圧を提供することによって行われます。典型的な実験は最初表面に対して押すとヒントです。引きの測定は、接触の引き出すため先端から基板を移動によって開始されます。場合蛋白質の最初の接触は先端、それが取得され、変位に対する力の展開のトレースで測定されます。先端と接触し、基板を戻され、タンパク質の折り畳みを決定力変位からことができます、リラックスしたトレースを測定します。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>AFM Specimen Discs, 15mm diameter</td>
			<td>Ted Pella, Inc.</td>
			<td>16218</td>
			<td>Serve as base for glass substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round Glass Coverslips, 15mm diamiter No.1 Thick</td>
			<td>Ted Pella, Inc.</td>
			<td>26024</td>
			<td>serve as glass substrate and base for gold coating</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive Tabs</td>
			<td>Ted Pella, Inc.</td>
			<td>16079</td>
			<td>Paste on AFM Specimen Discs to provide a sticky face for attaching glass coverslips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STD Multimode head assembly</td>
			<td>Bruker Nano Inc.</td>
			<td>1B75C</td>
			<td>AFM head</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass probe holder</td>
			<td>Bruker Nano Inc.</td>
			<td>MTFML-V2</td>
			<td>Glass probe holder for scanning in fluid with the MultiMode AFM.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microlever AFM probes</td>
			<td>Bruker Nano Inc.</td>
			<td>MLCT</td>
			<td>Silicon Nitride cantilevers with Silicon Nitride tips, ideal for contact imaging modes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM probes with Au coated tips</td>
			<td>Bruker Nano Inc.</td>
			<td>OBL-10</td>
			<td>Cantilevers for pulling on proteins with low unfolding force</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multifunction Data Acquisition (DAQ) Card,16-Bit, 1 MS/s (Multichannel), 1.25 MS/s (1-Channel), 32 Analog Inputs</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>PCI-6259</td>
			<td>Data Acquisition for signals from AFM head and Piezo Actuators</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LISA Linear Piezo Stage Actuators</td>
			<td>Physik Instrumente LP</td>
			<td>P-753.11C</td>
			<td>Piezo Actuator to control the position of substrate and perform pulling measurements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XY Piezo Stage</td>
			<td>Physik Instrumente LP</td>
			<td>P-541.2CD</td>
			<td>Piezo Actuator to control the position of substrate and scan on substrate surface</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

force spectroscopy of single protein molecules using an atomic force microscope

ネイティブ 3 D 構造にそのアミノ酸配列からのタンパク質の折り畳み過程の定量生物学の重要な問題では。原子間力顕微鏡 (AFM) ストレッチと特定のアンフォールディングとリフォールディング特性の直接証拠を与える単一タンパク質分子の弛緩を有効にしてこの問題に対処することができます。原子間力顕微鏡による単一分子力分光 (原子間力顕微鏡 SMF) は、高エネルギーは従来のばら積み (生化学) 測定不可能なタンパク質立体を一貫して測定するための手段を提供します。AFM SMF の原則を示すため、公開された多数の論文じゃない簡単に網羅的なプロトコルの不足のための SMF 実験を実施できます。本研究では、AFM の原理を簡単に説明して SMF の実験からのよい結果を達成するためにガイドラインとしてプロトコル、手順、およびデータ分析の詳細を広く。単一蛋白質機械的展開測定の代表的な SMF 結果を示すし、一般的、いくつかの戦略をトラブルシューティング問題が発生いたします。

この議定書から代表的な結果は、図 2のとおりです。両方のパネルは、タンパク質から代表的な力-伸長曲線を示します。上部下部 I91 蛋白質、蛋白質の金利、NI10C 分子の側面を示しています I91 エンベロープタンパク質の結果を示しています。これらの録音は I91 の特徴的な力を表示 (200 pN) と長さの増減値を輪郭 (28 nm) の配置および AFM ?...

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Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

原子間力顕微鏡を用いた単一タンパク質分子の力分光法

詳細な手順と機械的性質および原子間力顕微鏡を用いた単一タンパク質分子のアンフォールディング経路を機械的に測定するための戦略について述べる。また選択と良い単一蛋白質分子の録音の正当化のための参照として代表的な結果を述べる.

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

単一分子力分光法は、単一分子を力で操作できるようにすることで、原子スケールで分子生物学に関する膨大な洞察を提供することができます。ここでは、原子間力顕微鏡を用いた一定速度測定を行う。最終的にデータを使用して、タンパク質の安定性、展開速度、展開経路を決定することができます。手順を開始するには、非導電性接着剤タブをクリーンな15ミリメートル幅の鉄ディスクに取り付けます。カバーシートを取り外し、露出した接着剤に清潔でコーティングされていない、または金でコーティングされたガラススライドをしっかりと押し込みます。スライドを清潔で覆われたペトリ皿に保管します。次に、精製したポリタンパク質を遠心フィルターに濃縮し、次にカラムを逆にして、実験に使用するバッファーにタンパク質を溶出させる。280ナノメートルの吸光度に基づいて適切なタンパク質濃度を決定し、次いでタンパク質の1ミリリットル溶液あたり100マイクログラムの100マイクロリットルを調製する。60マイクロリットルのタンパク質溶液をスライドの中央に塗布します。これは、実験中に制御されていないサンプルの動きにつながるので、スライドと鉄ディスクの間に液体が滑らせないように注意してください。サンプルを室温で少なくとも10分間座らせます。まず、末端でカンチレバーを慎重にピックアップし、プローブ保持セルに入れる。片持ちレバーがしっかりと取り付けられていることを確認します。次に、AFMヘッドに保持セルを置きます。逆顕微鏡ステージにヘッドをセットし、電池パックをAFMヘッドに接続してレーザーに電力を供給します。顕微鏡検出器用のカメラを設置し、モニタやテレビ画面でレーザー光を可視化します。顕微鏡で導き、レーザーをカンチレバー先端に向けられるように位置する。サンプルの準備ができたら、10マイクロリットルの実験バッファーをプローブ保持セルの各ポートにフラッシュします。サンプルスライドから約40マイクロリットルの流体をデスキャンし、40マイクロリットルのバッファーを追加します。その間、測定のための原子間力顕微鏡の準備を始める。まず、マグネット上のピエゾモーターの上にスライドを置きます。AFMステージが高い位置にあることを確認し、サンプル液滴の上に片持ち持ちでステージ上にAFMヘッドを置きます。次に、AFMフォトダイオードの前に小さな紙を置きます。用紙のスポットが明るくなり、焦点が合うまでレーザーを調整し、用紙を取り外します。AFMソフトウェアを起動して、フォトダイオードからの信号を表示します。4 つのフォトダイオード象限でレーザー信号が最大になり、上部と下部の象限ペアの間の異なる信号がゼロになるように、AFM ヘッド ミラーを調整します。AFM のキャリブレーションを開始するには、AFM ヘッド信号のフィルタ設定を全帯域幅に切り、ピエゾがオフになっていることを確認します。AFM ソフトウェアでは、1 つの計算で 1,024 データポイントを使用して、パワースペクトルの 512 の計算の平均を測定します。カンチレバーの振動のメインモードに対応する第1のピークを横切って電力スペクトル密度を統合します。次に、圧電コントローラをオンにして、フィルタを500ヘルツに設定します。AFMヘッドを数百マイクロメートル下に素早く移動させながら、異なる信号を監視します。異なる信号で一貫したジャンプを見ながら、一度に数百マイクロメートル下に頭を動かし続けます。信号のジャンプが高さが増加し始めると、先端はサンプル表面に非常に近くなります。表面との先端接触時に偏向信号が飽和したら、ヘッドをわずかに上げてから、ピエゾ電圧を調整してAFMヘッドを100~5,000ナノメートル動かしてサンプル表面を見つけます。その後、約500ナノメートルのスキャンサイズで、先端が表面に接触するように、または約100ナノメートルのピエゾモーター移動で、引っ張り実験を行います。結果を使用して、ばね定数と感度を計算します。ソフトウェアでは、スキャンサイズを展開するポリタンパク質の理論上の合計サイズよりも40%大きく設定します。表面からスキャンサイズの80%になるように片持ち面を配置します。スキャン速度を毎秒 300 ナノメートルに設定します。引っ張り実験を行い、得られたピエゾ位置とフォトダイオード信号を測定します。測定全体を通して1時間ごとに実験バッファーを流体細胞に追加して、サンプルが乾燥しないようにします。I91ポリタンパク質の記録における展開イベントと、3つのI91ドメインがNI10C分子を両側に横たわっているポリタンパク質の、ワーム様鎖モデルを取り付けた。両方の記録は、I91の特性力と輪郭の長さの増分を示し、AFMキャリブレーションが成功したことを示す。N110C分子を含むポリタンパク質の記録は、新しい事象が展開する目的のタンパク質からのものであることを確認するのに十分なI91事象を示した。アンキリン反復の平均輪郭長は約10.5ナノメートルで、展開力は8~25ピコニュートンの間であった。隣接するタンパク質の展開イベントは、単一分子イベントをフィンガープリントする肯定的なコントロールを提供するので、ポリタンパク質を使用することが不可欠です。これがなければ、データは誤解を受けやすい。

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固体核磁気共鳴分光法による高分子アセンブリの原子スケール構造の研究

Supramolecular protein assemblies play fundamental roles in biological processes ranging from host-pathogen interaction, viral infection to the ...

Capturing the Interaction Kinetics of an Ion Channel Protein with Small Molecules by the Bio-layer Interferometry Assay

バイオ層干渉法による小分子とイオン チャネル蛋白質の相互作用の動力学をキャプチャ

The bio-layer interferometry (BLI) assay is a valuable tool for measuring protein-protein and protein-small molecule interactions. Here, we first describe ...

Covalent Immobilization of Proteins for the Single Molecule Force Spectroscopy

力の単一分子分光法のための蛋白質の共有結合固定

In recent years, atomic force microscopy (AFM) based single molecule force spectroscopy (SMFS) extended our understanding of molecular properties and ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

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Probing The Structure And Dynamics Of Nucleosomes Using Atomic Force Microscopy Imaging

構造と原子間力顕微鏡イメージングによるヌクレオソームのダイナミクスを調べる

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Imaging of Extracellular Vesicles by Atomic Force Microscopy

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Single-Molecule Tracking Microscopy - A Tool for Determining the Diffusive States of Cytosolic Molecules

単一分子トラッキング顕微鏡 - 細胞細胞分子の拡散状態を決定するツール

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Atomic Absorbance Spectroscopy to Measure Intracellular Zinc Pools in Mammalian Cells

哺乳類細胞内の細胞内亜鉛プールを測定するための原子吸光度分光法

Transition metals are essential micronutrients for organisms but can be toxic to cells at high concentrations by competing with physiological metals in ...

Evaluation of Protein&#8211;Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Evaluation of ProteinÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

膜上消化技術を用いてのタンパク質・タンパク質相互作用の評価

Numerous intracellular proteins physically interact in accordance with their intracellular and extracellular circumstances. Indeed, cellular functions ...

Characterizing Individual Protein Aggregates by Infrared Nanospectroscopy and Atomic Force Microscopy

赤外線ナノ分光法と原子間力顕微鏡による個々のタンパク質凝集物の特徴付け

The phenomenon of protein misfolding and aggregation results in the formation of highly heterogeneous protein aggregates, which are associated with ...