Name: a cell culture model of resistance arteries
Uploaded: 2017-09-08T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Cell Culture Model of Resistance Arteries at JoVE.com

وأيده هذا العمل "الوطني للقلب"، الرئة والدم المعهد منح 14PRE20420024 زمالة بريدوكتورال R01088554، T32HL007284، وجمعية القلب الأمريكية. ونشكر خصوصا "سانت جود الخلوية التصوير المشتركة البحوث الأساسية"، بما في ذلك ويكفيلد راندال وهورنر ليندا لصور المجهر الإلكتروني، وآدم ستراوب للمساعدة مع الصور الفلورة الممثل واغر Pooneh لها تعليقات قيمة على البروتوكول المخطوطة.

1-"طلاء الخلايا" فككك <ol><li>الثقافة كبير 225 سم 2 قوارير من المفوضية الأوروبية و SMC تحت ظروف معقمة في 37 درجة مئوية، حتى روافد 70-90%. ضمان أن تستخدم المفوضية الأوروبية أكثر من SMC؛ في حالة استخدام المفوضية الأوروبية البشرية الأولية و SMC، عادة 3 قوارير كبيرة من المفوضية الأوروبية إلى 1 قارو...

<ol>
	<li>Isakson, B. E., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterocellular+contact+at+the+myoendothelial+junction+influences+gap+junction+organization.">Heterocellular contact at the myoendothelial junction influences gap junction organization.</a> Circ Res. 97 (1), 44-51 (2005).</li><li>Little, T. L., Xia, J., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dye+tracers+define+differential+endothelial+and+smooth+muscle+coupling+patterns+within+the+arteriolar+wall.">Dye tracers define differential endothelial and smooth muscle coupling patterns within the arteriolar wall.</a> Circ Res. 76 (3), 498-504 (1995).</li><li>Heberlein, K. R., Straub, A. C., Isakson, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myoendothelial+junction:+breaking+through+the+matrix?.">The myoendothelial junction: breaking through the matrix?.</a> Microcirculation. 16 (4), 307-322 (2009).</li><li>Straub, A. C., Zeigler, A. C., Isakson, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myoendothelial+junction:+connections+that+deliver+the+message.">The myoendothelial junction: connections that deliver the message.</a> Physiology (Bethesda). 29 (4), 242-249 (2014).</li><li>Isakson, B. E., Ramos, S. I., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++and+inositol+1,4,5-trisphosphate-mediated+signaling+across+the+myoendothelial+junction.">Ca2+ and inositol 1,4,5-trisphosphate-mediated signaling across the myoendothelial junction.</a> Circ Res. 100 (2), 246-254 (2007).</li><li>Dora, K. A., Doyle, M. P., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevation+of+intracellular+calcium+in+smooth+muscle+causes+endothelial+cell+generation+of+NO+in+arterioles.">Elevation of intracellular calcium in smooth muscle causes endothelial cell generation of NO in arterioles.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 94 (12), 6529-6534 (1997).</li><li>Sonkusare, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elementary+Ca2++signals+through+endothelial+TRPV4+channels+regulate+vascular+function.">Elementary Ca2+ signals through endothelial TRPV4 channels regulate vascular function.</a> Science. 336 (6081), 597-601 (2012).</li><li>Ledoux, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+architecture+of+inositol+1,4,5-trisphosphate+signaling+in+restricted+spaces+of+myoendothelial+projections.">Functional architecture of inositol 1,4,5-trisphosphate signaling in restricted spaces of myoendothelial projections.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (28), 9627-9632 (2008).</li><li>Boerman, E. M., Everhart, J. E., Segal, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+age+decreases+local+calcium+signaling+in+endothelium+of+mouse+mesenteric+arteries+in+vivo.">Advanced age decreases local calcium signaling in endothelium of mouse mesenteric arteries in vivo.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 310 (9), H1091-H1096 (2016).</li><li>Toussaint, F., Charbel, C., Blanchette, A., Ledoux, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CaMKII+regulates+intracellular+Ca(2)(+)+dynamics+in+native+endothelial+cells.">CaMKII regulates intracellular Ca(2)(+) dynamics in native endothelial cells.</a> Cell Calcium. 58 (3), 275-285 (2015).</li><li>Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+Cell+Vascular+Smooth+Muscle+Cell+Co-Culture+Assay+For+High+Throughput+Screening+Assays+For+Discovery+of+Anti-Angiogenesis+Agents+and+Other+Therapeutic+Molecules.">Endothelial Cell Vascular Smooth Muscle Cell Co-Culture Assay For High Throughput Screening Assays For Discovery of Anti-Angiogenesis Agents and Other Therapeutic Molecules.</a> Int J High Throughput Screen. 2010 (1), 171-181 (2010).</li><li>Biwer, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+functionally+distinct+pools+of+eNOS+in+endothelium+are+facilitated+by+myoendothelial+junction+lipid+composition.">Two functionally distinct pools of eNOS in endothelium are facilitated by myoendothelial junction lipid composition.</a> Biochim Biophys Acta. 1861 (7), 671-679 (2016).</li><li>Straub, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+expression+of+haemoglobin+alpha+regulates+nitric+oxide+signalling.">Endothelial cell expression of haemoglobin alpha regulates nitric oxide signalling.</a> Nature. 491 (7424), 473-477 (2012).</li><li>Isakson, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localized+expression+of+an+Ins(1,4,5)P3+receptor+at+the+myoendothelial+junction+selectively+regulates+heterocellular+Ca2++communication.">Localized expression of an Ins(1,4,5)P3 receptor at the myoendothelial junction selectively regulates heterocellular Ca2+ communication.</a> J Cell Sci. 121 (Pt 21), 3664-3673 (2008).</li><li>Axel, D. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+cell-rich+and+lipid-rich+plaques+in+a+transfilter+coculture+system+with+human+vascular+cells.">Induction of cell-rich and lipid-rich plaques in a transfilter coculture system with human vascular cells.</a> J Vasc Res. 33 (4), 327-339 (1996).</li><li>Hastings, N. E., Simmers, M. B., McDonald, O. G., Wamhoff, B. R., Blackman, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis-prone+hemodynamics+differentially+regulates+endothelial+and+smooth+muscle+cell+phenotypes+and+promotes+pro-inflammatory+priming.">Atherosclerosis-prone hemodynamics differentially regulates endothelial and smooth muscle cell phenotypes and promotes pro-inflammatory priming.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 293 (6), C1824-C1833 (2007).</li><li>Herzog, D. P., Dohle, E., Bischoff, I., Kirkpatrick, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+communication+in+a+coculture+system+consisting+of+outgrowth+endothelial+cells+and+primary+osteoblasts.">Cell communication in a coculture system consisting of outgrowth endothelial cells and primary osteoblasts.</a> Biomed Res Int. , 320123 (2014).</li><li>Jacot, J. G., Wong, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+injury+induces+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+in+highly+localized+regions+of+a+direct+contact+co-culture+system.">Endothelial injury induces vascular smooth muscle cell proliferation in highly localized regions of a direct contact co-culture system.</a> Cell Biochem Biophys. 52 (1), 37-46 (2008).</li><li>Scott-Drechsel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+flow+co-culture+system+for+studying+mechanobiology+effects+of+pulse+flow+waves.">A new flow co-culture system for studying mechanobiology effects of pulse flow waves.</a> Cytotechnology. 64 (6), 649-666 (2012).</li><li>van Buul-Wortelboer, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstitution+of+the+vascular+wall+in+vitro.+A+novel+model+to+study+interactions+between+endothelial+and+smooth+muscle+cells.">Reconstitution of the vascular wall in vitro. A novel model to study interactions between endothelial and smooth muscle cells.</a> Exp Cell Res. 162 (1), 151-158 (1986).</li><li>Wilhelm, I., Fazakas, C., Krizbai, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+models+of+the+blood-brain+barrier.">In vitro models of the blood-brain barrier.</a> Acta Neurobiol Exp (Wars). 71 (1), 113-128 (2011).</li><li>Heberlein, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mRNA+binding+protein+complex+promotes+localized+plasminogen+activator+inhibitor-1+accumulation+at+the+myoendothelial+junction.">A novel mRNA binding protein complex promotes localized plasminogen activator inhibitor-1 accumulation at the myoendothelial junction.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (5), 1271-1279 (2012).</li><li>Straub, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalized+connexin+43+s-nitrosylation/denitrosylation+regulates+heterocellular+communication+in+the+vessel+wall.">Compartmentalized connexin 43 s-nitrosylation/denitrosylation regulates heterocellular communication in the vessel wall.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31 (2), 399-407 (2011).</li><li>Cucina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+increases+the+migration+and+proliferation+of+smooth+muscle+cells+through+the+mediation+of+growth+factors+released+by+endothelial+cells.">Vascular endothelial growth factor increases the migration and proliferation of smooth muscle cells through the mediation of growth factors released by endothelial cells.</a> J Surg Res. 109 (1), 16-23 (2003).</li><li>Heberlein, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasminogen+activator+inhibitor-1+regulates+myoendothelial+junction+formation.">Plasminogen activator inhibitor-1 regulates myoendothelial junction formation.</a> Circ Res. 106 (6), 1092-1102 (2010).</li><li>Isakson, B. E., Best, A. K., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+protein+on+actin+bridges+between+endothelium+and+smooth+muscle+in+arterioles+demonstrates+heterogeneous+connexin+expression+and+phosphorylation.">Incidence of protein on actin bridges between endothelium and smooth muscle in arterioles demonstrates heterogeneous connexin expression and phosphorylation.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 294 (6), H2898-H2904 (2008).</li><li>Biwer, L. A., Isakson, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum-mediated+signalling+in+cellular+microdomains.">Endoplasmic reticulum-mediated signalling in cellular microdomains.</a> Acta Physiol (Oxf). 219 (1), 162-175 (2017).</li></ol>

فككك يحتوي على عدد من المزايا من حيث حظيا ميس في المختبر، ولكن هناك نقاط المناقشة عند تحديد إذا فككك يمكن أن تستخدم لتطبيق معين. على سبيل المثال، إذا كانت أنواع مختلفة من الخلايا لاستخدامها مع هذا النموذج، سوف تحتاج إلى الأمثل. وقد استخدمنا خلايا الإنسان الأولية، لكن من الممكن عزل الخ...

في الشرايين مقاومة صغيرة القطر، يفصل الصفيحة مرنة داخلية رقيقة (IEL) بطانية (EC) وخلايا العضلات الملساء (SMC). الخلايا يمكن المشروع من خلال الثقوب في هذه المصفوفة مطاطا وإجراء اتصالات هيولى مباشرة عبر الفجوة تقاطع القنوات1،2. ويطلق على هذا الهيكل الفريد مفرق ميوندوثيليال (مج). ميج صغيرة (حوالي 0.5 ميكرون × 0.5 ميكرومتر، اعتماداً على السرير والأوعية الدموية) والإسقاط الخلوية مكونة أساسا من خلايا بطانية ولكن قد تنشأ من العضلات الملساء، فضلا عن3،4. وقد تظاهر عدد من المحققين تعقيدات هائلة مما يشير إلى الشبكات التي تحدث بشكل انتقائي في ميج، مما يجعله في موقع أهمية خاصة لتيسير إشارات ثنائية الاتجاه بين البطانة والعضلات الملساء5 ،،من67،،من89،10.
ومع ذلك، تشريح ميكانيكية من مسارات الإشارات في ميج أمر صعب في شريان سليمة. نظراً ميج إسقاطاً خلوية، من غير الممكن حاليا لعزل في فيفو ميج من جدار الأوعية الدموية. ولهذا السبب، تم تطوير نموذج فككك1 . الأهم من ذلك، فككك يتطابق مورفولوجيا غشائي الفسيولوجية11 واستقطاب الإشارات بين قمي وأجزاء ميج الخلية12. كان هذا النموذج الفريد التي تسهل اكتشاف أن الهيموغلوبين ألفا في الخلية بطانية، الاستقطاب إلى ميج. هذا على النقيض من خلايا بطانية المستزرعة تقليديا التي لا تعبر عن الهيموغلوبين ألفا13. للباحثين المهتمين في البطانة ميكروفاسكولار، قد يكون من الأنسب استخدام الخلايا البطانية التي قد تم مثقف في فككك، خاصة إذا كان القصد هو تشريح مسارات الإشارات التي تحدث في الشرايين مقاومة صغيرة القطر.
استخدام قوي إدراج بلاستيكية تحتوي على عامل تصفية مع مسام صغيرة القطر (0.4 ميكرومتر في القطر) لأنواع الخلايا المتميزة ثقافة المشارك الثاني يمنع الخلايا من الهجرة بين الطبقات. أنه يؤدي إلى مسافة 10 ميكرون بين الخلايا، والتي هي أطول بكثير في فيفو، ولكن لا يزال يتطابق العديد من الخصائص في فيفو ميس، بما في ذلك الترجمة البروتين ورسول الثاني يشير إلى1 , 14-وبالإضافة إلى ذلك، يسمح فككك لاستهداف الخلية إشارات عن طريق إضافة مؤثر أو خصم لحجرة الهاتف الخلوي محددة خاصة بنوع. على سبيل المثال، تحميل الجماعة الأوروبية مع باتا-صباحا يخلب الكالسيوم، وحفز SMC مع فينيليفريني14. وعلى النقيض من الأوصاف الأخرى من ثقافة المشارك15،نماذج16،18،17،19،،من2021، وهذا يوفر تعليمات بشأن عزل الكسور متميزة مرناً والبروتين، بما في ذلك الكسر مج متميزة داخل المسام عامل التصفية. الإضافة لهذه التقنية فككك يسمح للتحقيق محددة من التغييرات في التعريب مرناً أو النسخ22والبروتين الفسفرة12،23و نشاط البروتين12. هذه المادة سوف تصف الطلاء من الجماعة الأوروبية على رأس عامل التصفية و SMC في الجزء السفلي، على الرغم من أن من الممكن أن الثقافة أنواع الخلايا اثنين في والتشكلات المختلفة11،،من1824.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>24mm diameter, 0.4&#181;m Transwell Polyester membrane filter insert</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3450</td>
			<td>This is one 6 well plate of inserts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>225cm2 flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well plates (without filter inserts)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary human coronary artery endothelial cells</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-2585</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary human coronary artery smooth muscle cells</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-2583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EBM-2 EC Basal media</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EC growth factors (EGM2 MV Single quots)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-4147</td>
			<td>Add to basal media before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SmBM SMC basal media</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMC growth factors (SmGM-2 SingleQuot)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-4149</td>
			<td>Add to basal media before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5% Trypsin-EDTA 10X</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15400-054</td>
			<td>Dilute to 2X with sterile dPBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>15170-208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>large petri dishes for SMC Plating (150mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine gelatin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G-9382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human fibronectin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356008</td>
			<td>5&#181;g/ml of fibronectin and store at -20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X Hanks&#39; Buffered salt solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14065-056</td>
			<td>Dilute to 1x with sterile water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X Dulbecco&#39;s Phosphate buffered saline (dPBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14200-075</td>
			<td>Dilute to 1x with sterile water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Curved Scalpel (30mm cutting edge) with handle</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>MDS15210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>17-467-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell lifter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell scraper</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50mL conical tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10mm petri dishes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>35-1008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rneasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA lysis reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td>Make 4% solution with dPBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>04-355-305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cavicide disinfectant</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>131000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA protein lysis buffer</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R0278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonic dismembranator</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>Model 50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X PBS for harvesting EC/SMC and immunocytochemistry</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td>does not need to be sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding/Sectioning/Staining</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>P31-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated tissue processer</td>
			<td>Excelsior</td>
			<td>ES</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding station + cold plate</td>
			<td>Leica</td>
			<td>HistoCore Arcadia</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Tek Accu-Edge Microtome blade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-961 or 25608-964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>22-230-900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12-548-5E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold mounting medium</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>P36931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other Solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>**Perform all steps in sterile conditions if using the solution on live cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile dPBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Autoclave water to sterilize. Using the sterile water make DPBS (450mL sterile water: 50mL 10X DPBS), mix and filter sterilize (0.2&#181;m filter). 
			Final concentration: 1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sterile HBSS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Autoclave water to sterilize. Using the sterile water make HBSS (450mL sterile water: 50mL 10X HBSS), mix and filter sterilize (0.2&#181;m filter). 
			Final concentration: 1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin stock solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Use 50mL of sterile water to fibronectin to make stock of 1mL aliquots, then freeze until needed 
			Final concentration: 100&#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin to coat SMC side of VCCC</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>thaw one aliquot and add 1mL of fibronectin (100&#181;g/mL) to 19mLs of 1X HBSS to reach a final concentration of 5&#181;g/mL. 
			Final concentration: 5&#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2x Trypsin EDTA solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Dilute the 10X 0.5% Trypsin-EDTA to 2X with 1X dPBS (40mL DPBS: 10mL 10X Trypsin) . 
			Final concentration: 2X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blocking/antibody solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>(9mL 1X PBS, 25mL Triton X100, 50mg bovine serum albumin, 500mL normal serum)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine gelatin to coat EC VCCC</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Mix 0.5g bovine gelatin into 100mL distilled water. Autoclave prior to first use and store at room temperature. Keep in sterile conditions. 
			Final concentration: 0.50%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X PBS for harvesting cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>does not need to be sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a cell culture model of resistance arteries

تقاطع ميوندوثيليال (ميج)، ميكرودومين مما يشير إلى فريدة من نوعها في القطر الصغير مقاومة الشرايين، يسلك التعريب من البروتينات المحددة وعمليات إرسال الإشارات التي يمكن التحكم في لهجة الأوعية الدموية وضغط الدم. كما هو إسقاط أما من الخلية البطانية أو العضلات الملساء، وسبب الصغيرة الحجم (في المتوسط، منطقة ~ 1 ميكرومتر2)، ميج من الصعب على الدراسة في عزلة. ومع ذلك، قمنا بتطوير نموذج ثقافة خلية تسمى الخلية الأوعية الدموية ثقافة المشارك (فككك) الذي يسمح في المختبر تشكيل ميج واستقطاب الخلية البطانية وتشريح لإشارات البروتينات والعمليات في جدار الأوعية الدموية للمقاومة الشرايين. فككك لديها العديد من التطبيقات، ويمكن تكييفها لتناسب أنواع مختلفة من الخلايا. النموذج يتكون من نوعين من الخلايا المزروعة على طرفي نقيض من عامل تصفية مع 0.4 ميكرومتر المسام فيها في المختبر ميس يمكن أن تشكل. هنا ونحن تصف كيفية إنشاء فككك عبر طلاء الخلايا وعزله بطانية، ميج، والكسور العضلات الملساء، التي يمكن استخدامها لعزل البروتين أو النشاط ثم فحوصات. يمكن أن تكون ثابتة عامل التصفية مع طبقات الخلية سليمة، جزءا لا يتجزأ، ومقطعة لتحليل إيممونوفلوريسسينت. الأهم من ذلك، العديد من الاكتشافات من هذا الطراز تم التأكد من استخدام الشرايين المقاومة سليمة، مما يؤكد أهميتها الفسيولوجية.

يكون إدراج عامل التصفية المستخدم فككك الصغيرة، 0.4 ميكرومتر الثقوب. ويبين الشكل 1A، نظرة الوجه أون لاقحم تصفية فككك، المسام التي يمكن أن تشكل ميج في المختبر. ويصور التخطيطي خلايا العضلات الملساء المطلية على الجانب السفلي من عامل التصفية بيوم واحد...

Watch this Scientific Journal Video about A Cell Culture Model of Resistance Arteries at JoVE.com

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

ويرد نموذج ثقافة خلية مقاومة الشرايين، السماح بالتشريح لإشارات المسارات في البطانة، العضلات الملساء، أو بين البطانة والعضلات الملساء (ملتقى ميوندوثيليال). التطبيق الانتقائي ليضع أو عزل البروتين أو المجهر الإلكتروني الفلورة يمكن الاستفادة من استخدام هذا النموذج ثقافة الخلية.

نموذج خلية ثقافة مقاومة الشرايين

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

نموذج الفأر من في الرحم زراعة

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

متعدد الفوتون التصوير من غزو خلايا الورم في الفأر نموذج مثلي الفم سرطان الخلايا الحرشفية

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

تجهيز رأب الثدي لحد من استئصال الثدي والأنسجة البشرية للثقافة الخليوي

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

Videomorphometric Analysis of Hypoxic Pulmonary Vasoconstriction of Intra-pulmonary Arteries Using Murine Precision Cut Lung Slices

تحليل مجسم الفيديو لنقص الأكسجين الرئوي من الشرايين داخل الرئة باستخدام مورين الدقة قطع شرائح الرئة

Acute alveolar hypoxia causes pulmonary vasoconstriction (HPV) - also known as von Euler-Liljestrand mechanism - which serves to match lung perfusion to ...

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

تقييم استجابة عضلي وVasoactivity في الشرايين المقاومة مساريقي عن طريق تخطيط العضل الضغط

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Assessment of Perigenital Sensitivity and Prostatic Mast Cell Activation in a Mouse Model of Neonatal Maternal Separation

تقييم محيط بالغدد التناسلية حساسية والبروستات ماست تنشيط خلية في نموذج الفأر من فصل الأمهات حديثي الولادة

Chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS) has a lifetime prevalence of 14% and is the most common urological diagnosis for men under the ...

A Human Glioblastoma Organotypic Slice Culture Model for Study of Tumor Cell Migration and Patient-specific Effects of Anti-Invasive Drugs

A غليوبلاستوما الإنسان أورغانوتيبيك نموذج شريحة شريحة لدراسة هجرة الخلايا السرطانية والآثار الخاصة بالمريض من الأدوية المضادة للغزو

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

العزلة والثقافة من الخلايا البطانية الأولية من الشرايين والأوردة الكلاب

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

تقييم آليات مراقبة الأوعية الدموية استخدام الفحص المجهري الفيديو الشرايين المقاومة المعزولة من الفئران

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other ...

Muscle Imbalances: Testing and Training Functional Eccentric Hamstring Strength in Athletic Populations

الاختلالات العضلات: اختبار وتدريب القوة الوظيفية أوتار غريب الأطوار في السكان الرياضي

Many hamstring injuries that occur during physical activity occur while the muscles are lengthening, during eccentric hamstring muscle actions. Opposite ...