Name: bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles
Uploaded: 2017-10-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles at JoVE.com

أعمال البحث التي تدعمها "منحة المركز" من تان توك سنج مستشفى شخصية بذرة تمويل البرنامج عام 2015؛ منح سنغافورة العين بحوث المعهد الطيار غرانت وتأن توك سنج مستشفى الملعب للصندوق.

البروتوكولات المستخدمة في هذه الدراسة وقد أقرها المجلس الاستعراض المؤسسي مستشفى تان توك سنج، سنغافورة-
 1-تحليل سيتوكين "المسيل للدموع" <ol><li>جمع الدموع: <ol><li>طرح هذا الموضوع الجلوس بشكل مريح على كرسي فحص ووضع رأسه صفحته/صفحتها ضد مسند الرأس.</li>
		<li>طرح هذا الموضوع ا?...

السيتوكينات هي البروتينات يفرزها الخلوية الصغيرة والمغيرون محصنة قوية تنظم الاستجابات المناعية. 32 ملامح التعبير السيتوكينات المختلفة في المسيل للعينات المرتبطة بمختلف الحالات المرضية للعين ودراسات عن سيتوكين التشكيلات الجانبية لتساعد على فهم آليات إمراضية المرض، وتحديد ...

الدموع تنتجها الغدة الدمعية والغدد الملحقة ومعطف على السطح الخارجي للعين. فيلم المسيل للدموع ويتكون من طبقة دهن خارجي وطبقة مائية داخلية يتضمن البروتينات القابلة للذوبان، موكنيس والغشاء ملزمة موكنيس. دموع منع الغزو الميكروبي وتوريد المواد الغذائية وتوفير تزييت لسطح العين. دموع العمل كوسيط بين الهواء والأنسجة لنقل الأوكسجين إلى القرنية. تتكون من البروتينات والكربوهيدرات والدهون والأملاح 1 الفيلم المسيل للدموع. الرابطة بين البروتينات المسيل للدموع بأمراض العين والجهازية مثل الزرق، مرض جفاف العين، التهاب الملتحمة ربيعي، ومرض البول السكري، تم التعرف على أوربيتوباثي المرتبطة بالغدة الدرقية، وسرطان في العديد من الدراسات. 2 , 3 , 4 ويمكن جمع عينات المسيل للدموع بأنابيب ميكروكابيلاري أو شرائط تدفق المسيل للدموع (شرائط شيرمر). بالإضافة إلى ذلك، هو اختبار شيرمر إجراء قياسية المنجز في القرنية وعيادات الجراحة الانكسارية، النتائج التي قد تستعمل لفحوصات التحليل سيتوكين. جمع العينات عدم الغازية، إمكانية الحصول على بيو-العينة، والرابطة لتكوين المسيل للدموع مع مختلف الظروف الفسيولوجية والمرضية تجعل الدموع الفيلم مصدرا محتملاً للمؤشرات الحيوية لعدة أمراض العين والجهازية. 4 , 5 , 6
المسيل للدموع السيتوكينات دوراً هاما في دراسة الصحة سطح العين والظروف الملتهبة من أمراض العين المختلفة. 7 أبلغ عن تركيزات غير طبيعية من السيتوكينات عدة في عينات المسيل للدموع مرتبطة بمرض العين الجافة ورمد ربيعي (فكك) ورمد التاتبيه (AKC)، والتهاب الملتحمة التحسسي الموسمي والتهاب القزحية. 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 يمكن أن تحلل البروتينات المسيل للدموع بالطرق التقليدية مثل الطيف الكتلي، النشاف الغربية وفحوصات الممتز المرتبط بالانزيم (ELISA). 14 , 15 ولكن القيود المفروضة على هذه الأساليب هي حساسية الفقراء وحجم أكبر من العينة المطلوبة لتحليل متعددة السيتوكينات المسيل للدموع في كل مريض. 16 , 17 حبة على أساس متعدد فحوصات أعدت لتحليل التحاليل متعددة في عينات خليط معقد وتطبيقها بنجاح على عينات المسيل للدموع لتحليل السيتوكينات متعددة في مختلف الأمراض. 6 , 18 ألف الجمع بين ساندويتش أليسا وتقنيات قياس التدفق تمكين هذه فحوصات لتصبح أكثر حساسية من أليسا للتحديد الكمي لتحليلها متعددة في نموذج واحد. 19 ويمكن تطبيق هذا الأسلوب على مجموعة متنوعة من العينات السريرية و supernatants ثقافة الخلية ويساعد في دراسة الاستجابات المناعية في العديد من الشروط الفيزيولوجية المرضية. 20 , 21 , 22 , 23 , 24
وهناك عدة دراسات مقارنة حبة على أساس متعدد فحوصات مع أليسا وأبلغت عن وجود ارتباط بين الأساليب. حبة et al. ، مقارنة مع الحمام على أساس مقايسة متعدد مع أليسا التقليدية للكشف عن الاديبونكتين، ريسيستين، اللبتين وجريلين في عينات المصل أو البلازما البشرية وذكرت علاقة قوية (r &#62; 0.9) بين فحوصات. 25 دوبون وآخرون عن ارتباط قوي بين حبة على أساس متعدد فحوصات وإليزا للكشف عن إيل-1β، إيل-4، وايل-5، وايل-6، إيل-10، إيفن-ϒ، وتنف-α في فيتوهيماجلوتينين وليبوبوليساكتشاريدي وحفز كل الدم جمع من النساء الحوامل. 26 بيكرينغ وآخرون عن آخر علاقة قوية بين حبة على أساس متعدد المقايسة وإليزا للكشف عن أضداد المصل النزلة بنوع السكاريد (r = 0.96)، toxoids الكزازيه clostridium (r = 0.96)، و وتدية خناقية (r = 0.91). 27 بياجيني وآخرون عن ارتباط إيجابي عالية (r = 0.852) بين حبة على أساس متعدد المقايسة وإليزا للكشف عن عصيات الجمرة الخبيثة المضادة-PA مفتش في عينات مصل الدم. 28 وانغ وآخرون عن ارتباط بين حبة على أساس متعدد المقايسة وإليزا للكشف عن مرض الزهايمر المؤشرات الحيوية اميلويد بيتا 42 (r = 0.77)، مجموع تاو (r = 0.94)، وتأو فوسفوريلاتيد في الحمض الأميني 181 (r = 0.82) في عينات السائل الدماغي النخاعي. 29 هذه الدراسات قد أظهرت مدى انطباق حبة استناداً إلى فحوصات متعدد متنوعة من العينات السريرية ومتطلبات حجم عينة أصغر وارتباط مع أليسا القياسية، التي تجعل حبة على أساس متعدد فحوصات مبشرة بالخير بديل للطرق التقليدية إليزا للكشف عن تحليلها متعددة في نوع مختلف من العينات في أمراض مختلفة تعمل. هنا يمكننا وصف بروتوكول موحد للمقايسة حبة على أساس متعدد سيتوكين التنميط لتحليلها 41 في المسيل للدموع عينات جمعت من الأصحاء باستخدام شرائط شيرمر.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Milliplex MAP human cytokine / chemokine magnetic bead panel -1 kit</td>
			<td>Merck, USA</td>
			<td>HCYTOMAG-60K-41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D luminex instrument&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xPonent software&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBXGenerator software</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Manager 6.1</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate shaker</td>
			<td>Corning, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TECAN Microplate Washer</td>
			<td>Tecan, Switzerland</td>
			<td>HydroSpeed</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Genie 2</td>
			<td>Scientific Industries inc, USA</td>
			<td>G560E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Mettler Toledo, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml microcentrifuge tube</td>
			<td>Axygen, USA</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schirmer tear flow test strip</td>
			<td>Eye Care and Cure, USA</td>
			<td>101657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Calibration Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Verfication Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ocular examination chair</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles

الفيلم المسيل للدموع هو خليط معقد من الدهون والبروتينات والمعادن الذي يغطي السطح الخارجي للعين، وبالتالي توفير تزييت والتغذية والحماية للخلايا الأساسية. تحليل للدموع مجالاً ناشئاً للتعرف على المؤشرات الحيوية للتنبؤ، والتشخيص، والتشخيص لأمراض العين المختلفة. دموع يمكن الوصول إليها بسهولة وجمعها غير الغازية. ولذلك، تكتسب التكنولوجيات المتقدمة مكانة بارزة للتعرف على تحليلها متعددة في البكاء لدراسة التغيرات في تركيبة البروتين أو المستقلب وارتباطها بالحالات المرضية. السيتوكينات المسيل للدموع هي المؤشرات الحيوية مثالية لدراسة صحة سطح العين، ويساعد أيضا في فهم آليات مختلفة اضطرابات سطح العين مثل مرض جفاف العين والتهاب الملتحمة ربيعي. حبة على أساس متعدد فحوصات لديها القدرة على الكشف عن تحليلها متعددة في كمية صغيرة من العينة مع حساسية أعلى. هنا يمكننا وصف بروتوكول موحد لجمع العينات المسيل للدموع، واستخراج وتحليل التنميط سيتوكين استخدام حبة على أساس مقايسة متعدد.

تم جمع عينات المسيل للدموع من أعين 8 من 4 مواضيع صحية باستخدام شرائط تدفق المسيل للدموع وحللت سيتوكين مستويات استخدام البروتوكول المشار إليه أعلاه. جميع المواضيع كانت الذكور وسن المواضيع الأربعة أعوام 36، 42 و 44 و 52 على التوالي. الصحة سطح العين والعين الجافة تم تقييم المرض ب...

Watch this Scientific Journal Video about Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles at JoVE.com

Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles

ويساعد تحليل السيتوكينات الفيلم المسيل للدموع في دراسة أمراض العين المختلفة. حبة على أساس متعدد فحوصات بسيطة وحساسة وتمكين اختبار أهداف متعددة في العينات بكميات صغيرة. هنا يمكننا وصف بروتوكول للمسيل للدموع الفيلم سيتوكين التنميط باستخدام حبة على أساس مقايسة متعدد.

حبة على أساس مقايسة متعدد لتحليل الملامح سيتوكين المسيل للدموع

Tear film is a complex mixture of lipids, proteins and minerals which covers the external surface of the eye, thereby providing lubrication, nutrition and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

?????? PCR ????? ??????? ?? ?????????? ????? ???????? ????? ?? ????? ??? ?????? ?? ????????? ??????<em&gt; ???????? ????????? ???????</em

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

عالية الإنتاجية الكمي في الوقت الحقيقي RT-PCR الفحص لتحديد ملامح التعبير من أنواع الأول والثالث الانترفيرون الأنواع الفرعية

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Automated Cell Enrichment of Cytomegalovirus-specific T cells for Clinical Applications using the Cytokine-capture System

الآلي إثراء خلية من الفيروس المضخم للخلايا محددة خلايا T للتطبيقات السريرية باستخدام نظام خلوى التقاط

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...

Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions

الفحص التدفق الخلوي استنادا لمراقبة وظائف الخلايا القاتلة الطبيعية

Natural killer (NK) cells are an important part of the human tumor immune surveillance system. NK cells are able to distinguish between healthy and ...

A Fluorescence-based Lymphocyte Assay Suitable for High-throughput Screening of Small Molecules

ومضان القائم على الخلايا الليمفاوية الفحص مناسبة لفحص إنتاجية عالية من الجزيئات الصغيرة

High-throughput screening (HTS) is currently the mainstay for the identification of chemical entities capable of modulating biochemical reactions or ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

مضان القائم على النورامينيداز تثبيط الفحص لتقييم مدى حساسية فيروسات الأنفلونزا إلى والنورامينيداز المانع فئة من الأدوية المضادة للفيروسات

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Multiplex Cytokine Profiling of Stimulated Mouse Splenocytes Using a Cytometric Bead-based Immunoassay Platform

متعدد سيتوكين التنميط من سبلينوسيتيس الماوس حفز استخدام منصة المستندة إلى حبة سيتوميتريك المناعة

Bead-based immunoassays employ the same basic principle as sandwich immunoassays. Capture beads, which can be differentiated by size and internal ...

Single-cell Analysis of Immunophenotype and Cytokine Production in Peripheral Whole Blood via Mass Cytometry

تحليل خلية واحدة من إيمونوفينوتيبي وإنتاج سيتوكين في الدم كله الطرفية عبر الخلوي الشامل

Cytokines play a pivotal role in the pathogenesis of autoimmune diseases. Hence, the measurement of cytokine levels has been the focus of multiple studies ...

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

قياس المكتسبة بشكل طبيعي Phagocytosis-تحريض الأجسام المضادة لبلاموديوم فالسيباروم الطفيليات من قبل تدفق Cytometry القائم على المقايسة

The protocol describes how to set up and run a flow cytometry-based phagocytosis assay of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes (IEs) opsonized by ...

A DNA/Ki67-Based Flow Cytometry Assay for Cell Cycle Analysis of Antigen-Specific CD8 T Cells in Vaccinated Mice

فحص قياس الخلايا التدفقي القائم على الحمض النووي/Ki67 لتحليل دورة الخلية لخلايا CD8 T الخاصة بالمضاد في الفئران الملقحة

The cell cycle of antigen-specific T cells in vivo has been examined by using a few methods, all of which possess some limitations. Bromodeoxyuridine ...