Name: bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles
Uploaded: 2017-10-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles at JoVE.com

Het onderzoekswerk werd gesteund door het centrum subsidie van Tan Tock Seng ziekenhuis gepersonaliseerd zaad financiering programma 2015; Singapore oog onderzoek instituut Pilot Grant en Tan Tock Seng ziekenhuis Pitch voor Fonds verlenen.

de protocollen die worden gebruikt in deze studie werden goedgekeurd door de board van de institutionele beoordeling van Tan Tock Seng ziekenhuis, Singapore.
 1. scheur Cytokine analyse <ol><li>collectie van tranen: <ol><li>vragen het onderwerp te comfortabel zitten op de stoel van een onderzoek en zijn/haar hoofd tegen de hoofdsteun.</li>
		<li>Vraag het onderwerp opzoeken, zorgvuldig openen de Schirmer strips (gemaakt van het filtreerpapier Whatman nr. 41) en plaats het a...

Cytokines zijn kleine cellulaire secreted eiwitten en krachtige immuun modulatoren, regulering van de immuunrespons. 32 de expressieprofielen van diverse cytokinen in scheur monsters zijn gerelateerd aan verscheidene pathologische condities van het oog en studies over cytokine profielen helpen om te begrijpen van de mechanismen van de pathogenese van de ziekte, het vaststellen van oogbeschadigingen en/of gezondheid, Ernst van de ziekte, de diagnose en de progressie. 2 ...

Tranen worden geproduceerd door de traanklier en accessoire klieren en jas van de buitenkant van het oog. Traanfilm bestaat uit een buitenste lipide-laag en een waterige binnenlaag die oplosbare eiwitten bevat, mucinen en membraan gebonden mucinen. Tranen voorkomen van microbiële invasie, voedingsstoffen te verstrekken en geven smering aan de oculaire oppervlakte. Tranen fungeren als intermediair tussen de lucht en weefsel voor zuurstoftransport naar het hoornvlies. 1 traanfilm is samengesteld uit eiwitten, koolhydraten, lipiden en elektrolyten. De associatie tussen scheur eiwitten met oogbeschadigingen en/of en systemische ziekten zoals glaucoom, droge oogziekte, vernal conjunctivitis, diabetes mellitus, schildklier-geassocieerde orbitopathy en kanker is geconstateerd in verschillende studies. 2 , 3 , 4 scheur monsters kunnen worden genomen door microcapillary buizen of scheur stroom strips (Schirmer strips). Daarnaast is de Schirmertest een standaardprocedure in het hoornvlies en de refractieve chirurgie klinieken, waarvan de resultaten kunnen worden gebruikt voor de cytokine analyse tests uitgevoerd. Niet-invasieve sample collectie, toegankelijkheid van het bio-model, en de vereniging van scheur samenstelling met verschillende fysiologische en pathologische omstandigheden maken scheuren film een potentiële bron van biomarkers voor verschillende oogbeschadigingen en/of en systemische ziekten. 4 , 5 , 6
Scheur cytokines speelt een belangrijke rol bij het bestuderen van de oculaire oppervlakte gezondheid en inflammatoire voorwaarden van verschillende oogbeschadigingen en/of ziekten. 7 abnormale concentraties van verschillende cytokines in scheur monsters werden gemeld te worden geassocieerd met droge oogziekte, vernal keratoconjunctivitis (VKC), atopische keratoconjunctivitis (AKC), seizoensgebonden allergische conjunctivitis en uveitis. 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 scheur eiwitten kunnen door traditionele methoden als massaspectrometrie, het westelijke bevlekken en enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) worden geanalyseerd. 14 , 15 de beperkingen van deze methoden zijn echter slechte gevoeligheid en een grotere hoeveelheid monster nodig zijn voor de analyse van meerdere scheur cytokines in elke patiënt. 16 , 17 kraal gebaseerd multiplex assays zijn ontwikkeld om meerdere analyten in complex mengsel monsters te analyseren en met succes toegepast op scheuren monsters te analyseren van meerdere cytokines in verschillende ziekten. 6 , 18 A combinatie van sandwich-ELISA en stroom cytometry technieken kunnen deze testen worden gevoeliger dan ELISA voor de kwantificering van meerdere analyten in één sample. 19 deze methode kan worden toegepast op een verscheidenheid van klinische monsters en cel cultuur supernatant en helpt in de studie van de immuunrespons in meerdere pathofysiologische omstandigheden. 20 , 21 , 22 , 23 , 24
Er zijn verschillende studies vergelijken kraal gebaseerd multiplex testen met ELISA en hebben gemeld een correlatie tussen de methoden. Loo et al. vergeleken kraal gebaseerd multiplex assay met conventionele ELISA voor de opsporing van adiponectin, resistin, leptine en ghreline in menselijke specimens van serum of plasma en gemeld van een sterke correlatie (r &#62; 0.9) tussen de testen. 25 Dupont et al. rapporteerde een sterke correlatie tussen kraal gebaseerd multiplex assays en ELISA voor de opsporing van IL-1β, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IFN-ϒ en TNF-α in phytohemagglutinin en lipopolysaccharide gestimuleerd volbloed verzameld van zwangere vrouwen. 26 Pickering et al. rapporteerde een andere sterke correlatie tussen kraal gebaseerd multiplex assay en ELISA voor de opsporing van serum antilichamen tegen Haemophilus influenzae type b polysaccharide (r = 0,96), toxoids van Clostridium tetani (r = 0,96), en Corynebacterium diphtheriae (r = 0.91). 27 Biagini et al. rapporteerde een hoge positieve correlatie (r = 0.852) tussen kraal gebaseerd multiplex assay en ELISA voor de opsporing van Bacillus anthracis anti-PA IgG in serummonsters. 28 Wang et al. rapporteerde een correlatie tussen kraal gebaseerd multiplex assay en ELISA voor de opsporing van de ziekte van Alzheimer biomarkers amyloid-β 42 (r = 0.77), totale tau (r = 0.94), en tau phosphorylated op aminozuur 181 (r = 0.82) in monsters van de cerebrospinale vloeistof. 29 deze studies hebben aangetoond dat de toepasselijkheid van de kraal multiplex assays gebaseerd op diverse klinische monsters, kleinere steekproef volume eisen en een correlatie met standaard ELISA, waardoor kraal gebaseerd multiplex assays een veelbelovende alternatief voor de traditionele methoden van de ELISA voor de opsporing van meerdere analyten in verschillende soort monsters in andere ziekte fenotypen. Hier beschrijven we een gestandaardiseerd protocol voor kraal gebaseerd multiplex assay voor het cytokine profielen voor 41 analyten in scheur monsters verzameld van gezonde proefpersonen gebruik Schirmer strips.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Milliplex MAP human cytokine / chemokine magnetic bead panel -1 kit</td>
			<td>Merck, USA</td>
			<td>HCYTOMAG-60K-41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D luminex instrument&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xPonent software&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBXGenerator software</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Manager 6.1</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate shaker</td>
			<td>Corning, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TECAN Microplate Washer</td>
			<td>Tecan, Switzerland</td>
			<td>HydroSpeed</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Genie 2</td>
			<td>Scientific Industries inc, USA</td>
			<td>G560E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Mettler Toledo, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml microcentrifuge tube</td>
			<td>Axygen, USA</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schirmer tear flow test strip</td>
			<td>Eye Care and Cure, USA</td>
			<td>101657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Calibration Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Verfication Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ocular examination chair</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles

Traanfilm is een complex mengsel van lipiden, eiwitten en mineralen, die betrekking heeft op het buitenoppervlak van het oog, waardoor smering, voeding en bescherming aan de onderliggende cellen. Analyse van tranen is een opkomende gebied voor de identificatie van biomarkers voor de voorspelling, diagnose en prognose voor verschillende oogbeschadigingen en/of ziekten. Tranen zijn gemakkelijk te bereiken en hun collectie is niet-invasief. Daarom zijn oprukkende technologieën wint aan bekendheid voor de identificatie van meerdere analyten in tranen te bestuderen van de veranderingen in de samenstelling van het eiwit of metaboliet en haar connectie met pathologische condities. Scheur cytokines zijn ideale biomarkers voor de gezondheid van de oculaire oppervlakte bestuderen en ook helpen bij het begrijpen van de mechanismen van de verschillende oogbeschadigingen en/of oppervlakte stoornissen zoals droge oogziekte en vernal conjunctivitis. Kraal gebaseerd multiplex assays hebben de mogelijkheid voor het opsporen van meerdere analyten in een kleine hoeveelheid monster met een hogere gevoeligheid. Hier beschrijven we een gestandaardiseerd protocol voor scheur sample collectie, extractie en analyse van cytokine profielen met behulp van een kraal op basis van multiplex assay.

Scheur monsters werden verzameld uit 8 ogen van 4 gezonde proefpersonen gebruik scheur stroom strips en cytokine niveaus werden geanalyseerd met behulp van het hierboven genoemde protocol. Alle onderwerpen zijn mannelijke en de leeftijd van de vier onderwerpen was 36, 42, 44 en 52 jaar respectievelijk. Oogbeschadigingen en/of oppervlakte gezondheid en droge ogen ziekte werd beoordeeld door klinische tests (scheur film breken tijd, Schirmer van test, hoornvlies verkleuring, conjunctivale k...

Watch this Scientific Journal Video about Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles at JoVE.com

Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles

Analyse van de traanfilm cytokines helpt bij het bestuderen van verschillende oogbeschadigingen en/of ziekten. Kraal gebaseerd multiplex assays zijn eenvoudig en gevoelige en activeer het testen van meerdere doelen in monsters met kleine volumes. Hier beschrijven we een protocol voor scheur film cytokine profielen met behulp van een kraal gebaseerd multiplex assay.

Kraal gebaseerd Multiplex Assay voor analyse van Tear Cytokine profielen

Tear film is a complex mixture of lipids, proteins and minerals which covers the external surface of the eye, thereby providing lubrication, nutrition and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex PCR-test voor het typen van Staphylococcus Cassette Chromosome Mec Types I tot en met V in Methicilline-resistente<em&gt; Staphylococcus aureus</em

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

High-throughput Kwantitatieve real-time RT-PCR assay voor het bepalen van expressieprofielen van de typen I en III interferon subtypen

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Automated Cell Enrichment of Cytomegalovirus-specific T cells for Clinical Applications using the Cytokine-capture System

Geautomatiseerde Cel Verrijking van Cytomegalovirus-specifieke T-cellen voor klinische toepassingen met het cytokine-beeldverwerkingssysteem

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...

Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions

Flowcytometrie-gebaseerde test voor het toezicht op NK celfuncties

Natural killer (NK) cells are an important part of the human tumor immune surveillance system. NK cells are able to distinguish between healthy and ...

A Fluorescence-based Lymphocyte Assay Suitable for High-throughput Screening of Small Molecules

Een fluorescentie gebaseerde lymfocyt Assay geschikt voor high-throughput screening van kleine moleculen

High-throughput screening (HTS) is currently the mainstay for the identification of chemical entities capable of modulating biochemical reactions or ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

Fluorescentie gebaseerde neuraminidase remmingstest om de gevoeligheid van de influenza virussen zijn voorgesteld om de neuraminidase remmer Class of Antivirals

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Multiplex Cytokine Profiling of Stimulated Mouse Splenocytes Using a Cytometric Bead-based Immunoassay Platform

Multiplex Cytokine profilering van gestimuleerd muis Splenocytes met behulp van een kraal cytometrische gebaseerde Immunoassay Platform

Bead-based immunoassays employ the same basic principle as sandwich immunoassays. Capture beads, which can be differentiated by size and internal ...

Single-cell Analysis of Immunophenotype and Cytokine Production in Peripheral Whole Blood via Mass Cytometry

Eencellige analyse van Immunophenotype en Cytokine productie in perifere bloed via massale Cytometry

Cytokines play a pivotal role in the pathogenesis of autoimmune diseases. Hence, the measurement of cytokine levels has been the focus of multiple studies ...

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

Het meten van natuurlijk verworven phagocytose-inducerende antilichamen tegen Plasmodium falciparum parasieten door een Flow Cytometrie-Gebaseerde Test

The protocol describes how to set up and run a flow cytometry-based phagocytosis assay of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes (IEs) opsonized by ...

A DNA/Ki67-Based Flow Cytometry Assay for Cell Cycle Analysis of Antigen-Specific CD8 T Cells in Vaccinated Mice

Een DNA/Ki67-gebaseerde flowcytometrietest voor celcyclusanalyse van antigeenspecifieke CD8 T-cellen bij gevaccineerde muizen

The cell cycle of antigen-specific T cells in vivo has been examined by using a few methods, all of which possess some limitations. Bromodeoxyuridine ...