Name: bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles
Uploaded: 2017-10-13T13:00:00
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Die Forschungsarbeit wurde durch das Zentrum Zuschuss von Tan Tock Seng Krankenhaus personalisiert Seed Finanzierung Programm 2015 unterstützt. Singapur Eye Research Institute Pilot Grant und Tan Tock Seng Krankenhaus Stellplatz für Fonds gewähren.

in dieser Studie verwendeten Protokolle wurden von den institutionellen Fachkollegiat Tan Tock Seng Krankenhaus, Singapur genehmigt.
 1. reißen Cytokine Analyse <ol><li>Sammlung von Tränen: <ol><li>bitten, das Thema sitzen bequem auf einem Untersuchungsstuhl und seinen/ihren Kopf gegen die Kopfstütze.</li>
		<li>Bitte das Thema zum Nachschlagen, vorsichtig öffnen die Schirmer-Streifen (aus Filterpapier Whatman Nr. 41) und legen Sie das abgerundete Ende des Streifens auf...

Zytokine sind kleine zelluläre sekretierten Proteine und potente Immunmodulatoren Regulierung Immunantworten. 32 die Expressionsprofile von verschiedenen Zytokinen in Träne, die Proben sind im Zusammenhang mit verschiedenen pathologischen Zuständen des Auges und Studien über Cytokine Profile helfen zu verstehen, die Mechanismen der Pathogenese der Krankheit, den Zustand der okulären Gesundheit bestimmen, Schwere der Erkrankung, Diagnose und Verlauf. 2 , <sup...

Tränen sind von der Tränendrüse und Zubehör Drüsen produziert und die äußere Oberfläche des Auges zu beschichten. Tränenfilm besteht aus einer äußeren Lipidschicht und einer inneren wässrigen Schicht, die lösliche Proteine enthält, Schleimstoffe und Membran gebunden Schleimstoffe. Tränen verhindern mikrobielle Invasion, Nährstoffe liefern und bieten Schmierung an der Augenoberfläche. Tränen fungieren als Schnittstelle zwischen der Luft und Gewebe für den Sauerstofftransport in die Hornhaut. 1 die Tränenfilm besteht aus Proteinen, Kohlenhydraten, Lipiden und Elektrolyte. Die Zuordnung zwischen Träne Proteine mit Okular und systemische Erkrankungen wie trockenes Augenkrankheit, vernal Konjunktivitis, Glaukom, Diabetes Mellitus, Schilddrüsen-assoziierten Orbitopathy und Krebs wurde in mehreren Studien identifiziert. 2 , 3 , Träne fließen Streifen (Schirmer Streifen) oder 4 Träne Proben können durch Microcapillary Rohre erfasst werden. Darüber hinaus ist der Schirmer-Test ein Standardverfahren durchgeführt in der Hornhaut und refraktive Chirurgie Kliniken, deren, die Ergebnisse für Zytokin Analyse Assays verwendet werden können. Nicht-invasive Probenentnahme, Zugänglichkeit der Bio-Probe und der Verband der Träne Komposition mit verschiedenen physiologischen und pathologischen Bedingungen machen Film eine potentielle Quelle von Biomarkern für verschiedene augenfällige und systemische Krankheiten reißen. 4 , 5 , 6
Träne Zytokine spielt eine wichtige Rolle bei der Untersuchung der okulären Oberfläche Gesundheit und entzündlichen Erkrankungen der verschiedenen augenfälligen Krankheiten. 7 abnorme Konzentrationen von verschiedenen Zytokinen in Träne Proben wurden berichtet, mit trockenen Augen, vernal Keratokonjunktivitis (VKC), atopische Keratokonjunktivitis (AKC), saisonale allergische Konjunktivitis und Uveitis einhergehen. 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 Träne Proteine können von den traditionellen Methoden wie Massenspektrometrie, westliche Beflecken und Enzym-linked Immunosorbentprobe Assays (ELISA) analysiert werden. 14 , 15 sind jedoch die Grenzen dieser Methoden, schlechte Empfindlichkeit und ein größeres Volumen der Probe für die Analyse von mehreren Träne Zytokinen bei jedem Patienten erforderlich. 16 , 17 Bead basierte Multiplex-Assays wurden entwickelt, um mehrere Analyten in komplexen Mischung Proben analysieren und erfolgreich auf Träne Proben analysieren mehrere Zytokine bei verschiedenen Krankheiten angewendet. 6 , 18 A Kombination der Sandwich ELISA und Flow Cytometry Techniken ermöglichen diese Tests zu empfindlicher als ELISA für die Quantifizierung von mehreren Analyten in einer einzigen Probe. 19 diese Methode kann auf einer Vielzahl von klinischen Proben und Zelle Kultur Überstände und hilft bei der Untersuchung von Immunantworten in mehreren pathophysiologischen Bedingungen angewendet werden. 20 , 21 , 22 , 23 , 24
Es gibt mehrere Studien vergleichen Wulst basierte Multiplex mit ELISA Tests und haben eine Korrelation zwischen den Methoden berichtet. Loo Et Al. verglichen Wulst Multiplex-Assays mit konventionellen ELISA zum Nachweis von Adiponectin, resistin, Leptin und Ghrelin im menschlichen Serum bzw. Plasma-Proben und eine starke Korrelation (R &#62; 0,9) zwischen der Assays. 25 Dupont Et Al. berichteten eine starke Korrelation zwischen Wulst basierte Multiplex-Assays und ELISA zum Nachweis von IL-1β, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IFN-ϒ und TNF-α in Phytohemagglutinin und Lipopolysaccharid angeregt Vollblut gesammelt von schwangeren Frauen. 26 Pickering Et Al. berichteten eine weitere starke Korrelation zwischen Wulst basierte Multiplex-Assays und ELISA zum Nachweis von Serum-Antikörper gegen Haemophilus Influenza Typ B Polysaccharid (R = 0.96), Kombinationsimpfung von Clostridium Tetani (R = 0.96), und Corynebacterium Diphtheriae (R = 0,91). 27 Biagini Et Al. berichteten eine hohe positive Korrelation (R = 0.852) zwischen Wulst basierte Multiplex-Assays und ELISA zum Nachweis von Bacillus Anthracis Anti-PA IgG in Serumproben. 28 Wang Et Al. berichteten eine Korrelation zwischen Wulst basierte Multiplex-Assays und ELISA zum Nachweis von Alzheimer-Krankheit Biomarker Amyloid-β 42 (R = 0.77), total Tau (R = 0,94), und Tau auf Aminosäure 181 phosphoryliert (R = 0,82) in Liquor cerebrospinalis Proben. 29 diese Studien haben gezeigt, dass die Anwendbarkeit der Wulst Multiplex-Assays anhand verschiedener klinischen Proben, kleinere Probe Volumenanforderungen und eine Korrelation mit standard ELISA, die Perle basierte Multiplex-Assays eine vielversprechende machen Alternative zu traditionellen ELISA-Methoden zum Nachweis von mehreren Analyten in der unterschiedlichen Art der Proben in verschiedenen Krankheit Phänotypen. Hier beschreiben wir ein standardisiertes Protokoll für Perle basierte Multiplex-Assay für die Cytokine Profilerstellung für 41 Analyten in Träne Proben von gesunden Probanden mit Schirmer Streifen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Milliplex MAP human cytokine / chemokine magnetic bead panel -1 kit</td>
			<td>Merck, USA</td>
			<td>HCYTOMAG-60K-41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D luminex instrument&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xPonent software&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBXGenerator software</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Manager 6.1</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate shaker</td>
			<td>Corning, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TECAN Microplate Washer</td>
			<td>Tecan, Switzerland</td>
			<td>HydroSpeed</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Genie 2</td>
			<td>Scientific Industries inc, USA</td>
			<td>G560E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Mettler Toledo, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml microcentrifuge tube</td>
			<td>Axygen, USA</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schirmer tear flow test strip</td>
			<td>Eye Care and Cure, USA</td>
			<td>101657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Calibration Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Verfication Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ocular examination chair</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles

Tränenfilm ist ein komplexes Gemisch von Lipiden, Proteinen und Mineralien umfasst die äußere Oberfläche des Auges, wodurch Schmierung, Ernährung und Schutz für die darunter liegenden Zellen. Analyse der Tränen ist eine aufstrebende Gegend für die Identifizierung von Biomarkern für die Vorhersage, Diagnose und Prognose von verschiedenen augenfälligen Krankheiten. Tränen sind leicht zugänglich und ihre Sammlung ist nicht-invasiv. Daher sind fortschreitende Technologien zur Identifikation von mehreren Analyten in Tränen, Veränderungen im Protein oder Metaboliten Zusammensetzung und seine Verbindung mit pathologischen Bedingungen studieren gewinnt an Bedeutung. Träne Zytokine sind ideale Biomarker für die Gesundheit der Augenoberfläche zu studieren und auch in das Verständnis der Mechanismen von verschiedenen augenfälligen Oberfläche Erkrankungen wie trockenes Augenkrankheit und vernal Konjunktivitis helfen. Wulst basierte Multiplex-Assays sind in der Lage mehrere Analyten in einer kleinen Menge der Probe mit einer höheren Empfindlichkeit zu erkennen. Hier beschreiben wir ein standardisiertes Protokoll der Träne Musterkollektion, Extraktion und Analyse des Cytokine profiling eine Perle mit Multiplex-Assays basieren.

Träne Proben wurden von 8 Augen von 4 gesunden Probanden mit Aufreißstreifen Fluss gesammelt und Zytokin Ebenen wurden unter Verwendung des oben genannten Protokolls analysiert. Alle Probanden waren männlich und das Alter der vier Probanden betrug 36, 42, 44 und 52 Jahren beziehungsweise. Okuläre Oberfläche Gesundheit und trockenes Auge Krankheit wurde durch klinische Tests (Tear Film Pause, Zeit, Schirmer Test, Hornhaut Färbung, Bindehaut Färbung, Deckel/Meibom-Drüse-Prüfung, Ho...

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Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles

Analyse der Tränenfilm hilft Zytokine in verschiedene augenfällige Krankheiten zu studieren. Wulst basierte Multiplex-Assays sind einfach und empfindlich und ermöglichen das Testen von mehreren Zielen in Proben mit kleinen Volumina. Hier beschreiben wir ein Protokoll für Tear Film Zytokin Profilierung eines mit Wulst basierte Multiplex-Assays.

Wulst basierte Multiplex-Assays für die Analyse der Träne Cytokine Profile

Tear film is a complex mixture of lipids, proteins and minerals which covers the external surface of the eye, thereby providing lubrication, nutrition and ...

Research

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Forschung

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Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

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Automatisierte Zellanreicherung des Cytomegalovirus-spezifischen T-Zellen für die klinische Anwendung mit der Zytokin-Capture-System

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...

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Durchflusszytometrie-basierte Assay zur Überwachung von NK-Zell-Funktionen

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The protocol describes how to set up and run a flow cytometry-based phagocytosis assay of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes (IEs) opsonized by ...

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Ein DNA/Ki67-basierter Durchflusszytometrie-Assay zur Zellzyklusanalyse von Antigen-spezifischen CD8-T-Zellen bei geimpften Mäusen

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