Name: bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles
Uploaded: 2017-10-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles at JoVE.com

עבודות המחקר נתמך על ידי המענק מרכז של טאן תיק תק סנג החולים מותאמת אישית מטכנאים זרע מימון תוכנית 2015; סינגפור העין מחקר מכון טייס גרנט וגובה טאן תיק תק סנג החולים לקרן הענק.

בפרוטוקולים המשמשים במחקר זה אושרו על-ידי ועדת הבדיקה המוסדי של החולים סנג טוק טאן, סינגפור.
 1-ניתוח ציטוקין לקרוע <ol><li>אוסף של דמעות: <ol><li>לשאול את הנושא כדי לשבת בנוחיות על כיסא הבדיקה מקום הראש כנגד משענת הראש.</li>
		<li>שאל את הנושא לחפש בקפידה לפתוח את רצועות Schirmer (...

ציטוקינים הם החלבונים המופרש קטנה חזק מאפננים המערכת החיסונית ויסות תגובות מערכת החיסון. 32 את פרופילי ביטוי של ציטוקינים שונים בדמעה דגימות קשורות לתנאים פתולוגיים שונים של העין, מחקרים על ציטוקין פרופילים לעזור להבין את מנגנוני פתוגנזה המחלה, לקבוע את המצב של בריאות עינית, ...

דמעות מיוצרים על ידי בלוטת הדמעות ובלוטות אביזר, מעיל המשטח החיצוני של העין. דמעה הסרט מורכב רובד חיצוני השומנים ושכבה פנימית מימית הכוללת חלבונים מסיסים, mucins ממברנה שיאוגדו mucins. דמעות למנוע פלישה חיידקים, לספק חומרים מזינים וספק שימון השטח עינית. דמעות לפעול כממשק בין האוויר לבין רקמות עבור העברת החמצן בקרנית. 1 הסרט קרע מורכב של חלבונים, פחמימות, שומנים, אלקטרוליטים. הקשר בין דמעה חלבונים עם עינית ומחלות מערכתיות כמו גלאוקומה, מחלה עין יבשה, האביב, סוכרת, orbitopathy הקשורים בלוטת התריס וסרטן זוהתה במספר מחקרים. 2 , 3 , 4 דגימות מדמיע יכול להיות שנאספו על ידי צינורות microcapillary או דמעה זרימה רצועות (Schirmer רצועות). בנוסף, המבחן של Schirmer הוא נוהל שגרתי שבוצעה קרנית, ניתוח לתיקון הראייה בלייזר במרפאות, התוצאות אשר עשוי לשמש ציטוקין ניתוח מבחני. אוסף דגימה לא פולשנית, נגישות של הדגימה הביו והאגודה הקומפוזיציה מדמיע במגוון מצבים פיזיולוגיים ופתולוגיים להפוך קורעים סרט מקור פוטנציאלי של סמנים ביולוגיים עבור כמה מחלות עינית ומערכתית. 4 , 5 , 6
דמעה ציטוקינים ממלא תפקיד חשוב ללמוד את עינית משטח ובריאות במצבים דלקתיים במחלות שונות עינית. 7 ריכוזים חריגים של ציטוקינים מספר הדגימות מדמיע דווחו להיות מזוהה עם מחלת עיניים יבשות, סולט לייק סיטי keratoconjunctivitis (VKC), keratoconjunctivitis אטופית (AKC), דלקת הלחמית אלרגית עונתית של uveitis. 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 חלבונים מדמיע ניתן לנתח אותם באמצעות שיטות מסורתיות כמו ספקטרומטר מסה, סופג המערבי, מבחני מקושרים-אנזים immunosorbent (אליסה). 14 , 15 . עם זאת, המגבלות של שיטות אלה הן רגישות המסכן נפח גדול יותר של מדגם הנדרש לניתוח של ציטוקינים מדמיע מרובים של כל מטופל. 16 , 17 חרוז המבוסס על מבחני מולטיפלקס יש פותחה כדי לנתח analytes מרובים בדגימות תערובת מורכבת, הוחלו בהצלחה על דגימות מדמיע כדי לנתח ציטוקינים מרובים במחלות שונות. 6 , 18 א' שילוב של כריך אליסה וטכניקות cytometry זרימה מאפשרים אלה מבחני להיות רגיש יותר אליסה עבור כימות של analytes מרובים בדוגמה אחת. 19 בשיטה זו ניתן להחיל על מגוון של דוגמאות קליניות, supernatants התרבות תאים ומסייע במחקר של התגובות החיסון מספר תנאים הקשורים pathophysiological. 20 , 21 , 22 , 23 , 24
ישנם מספר מחקרים בהשוואת מולטיפלקס חרוז המבוסס על מבחני עם אליסה, דיווחו על מתאם בין השיטות. חרוז. et al. בהשוואה loo מבוסס assay מולטיפלקס עם אליסה קונבנציונליים עבור הגילוי של אדיפונקטין, resistin, לפטין, גרלין בדגימות סרום או פלזמה האנושי ודיווח מתאם חזק (r &#62; 0.9) בין מבחני. 25 דיווחו דופונט. et al. מתאם חזק בין מבחני מולטיפלקס חרוז מבוסס ואליסה איתור IL-1β, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IFN-ϒ ו- TNF-α phytohemagglutinin ו ליפופוליסכריד המרצת דם אסף מנשים הרות. 26 . פיקרינג et al. דיווח אחר מתאם חזק בין חרוז מבוסס assay מולטיפלקס ואליסה לאיתור נוגדנים בסרום Haemophilus שפעת סוג b רב-סוכר (r = 0.96), toxoids של Clostridium tetani (r = 0.96), ו- Corynebacterium diphtheriae (r = 0.91). 27 . Biagini et al. דיווח על מתאם חיובי גבוה (r = 0.852) בין חרוז מבוסס assay מולטיפלקס ואליסה גילוי של Bacillus anthracis אנטי-PA IgG בסרום הדגימות. 28 . וואנג et al. דיווח על מתאם בין חרוז מבוסס assay מולטיפלקס ואליסה איתור של מחלת אלצהיימר סמנים ביולוגיים עמילואיד-β 42 (r = 0.77), הכולל טאו (r = 0.94), טאו phosphorylated-חומצת אמינו 181 (r = 0.82) ב . דגימות נוזל מוחי שדרתי 29 מחקרים אלו הוכיחו שהישימות של חרוז סמך מבחני מולטיפלקס מגוון של דוגמאות קליניות, דרישות האחסון מדגם קטן יותר קשר עם אליסה סטנדרטי, ההופכים את מבחני מולטיפלקס חרוז המבוסס על התחלה מבטיחה. חלופה לשיטות אליסה מסורתי איתור analytes מרובים בסוג שונה של דוגמאות פנוטיפים מחלות שונות. כאן נתאר עבור assay מולטיפלקס חרוז המבוסס על ציטוקין פרופיל עבור analytes 41 מדמיע הדגימות שנאספו מן הנבדקים בריא באמצעות רצועות Schirmer פרוטוקול סטנדרטית.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Milliplex MAP human cytokine / chemokine magnetic bead panel -1 kit</td>
			<td>Merck, USA</td>
			<td>HCYTOMAG-60K-41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D luminex instrument&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xPonent software&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBXGenerator software</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Manager 6.1</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate shaker</td>
			<td>Corning, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TECAN Microplate Washer</td>
			<td>Tecan, Switzerland</td>
			<td>HydroSpeed</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Genie 2</td>
			<td>Scientific Industries inc, USA</td>
			<td>G560E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Mettler Toledo, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml microcentrifuge tube</td>
			<td>Axygen, USA</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schirmer tear flow test strip</td>
			<td>Eye Care and Cure, USA</td>
			<td>101657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Calibration Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Verfication Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ocular examination chair</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles

הסרט דמעה הוא תערובת מורכבת של שומנים, חלבונים ומינרלים אשר מכסה על המשטח החיצוני של העין, ובכך מספק שימון, הזנה והגנה של התאים המשמשים כבסיס. ניתוח של דמעות הוא אזור המתעוררים לצורך זיהוי סמנים ביולוגיים עבור חיזוי, אבחון, הפרוגנוזה של מחלות שונות עינית. דמעות נגישים בקלות והוא באוסף שלהם לא פולשנית. לכן, לקידום טכנולוגיות הם צובר לגדולה עבור זיהוי של analytes מספר בדמעות ללמוד שינויים בהרכב חלבון או מטבוליט וכן את השיוך שלו עם מצבים פתולוגיים. דמעה ציטוקינים הם סמנים ביולוגיים אידיאלי ללמוד על פני השטח עינית הבריאות וגם לעזור בהבנת המנגנונים של הפרעות משטח עינית שונות כמו מחלת עין יבשה ואת האביב. חרוז המבוסס על מבחני מולטיפלקס יש את היכולת של גילוי analytes מרובים בכמות קטנה של הדגימה עם רגישות גבוהה יותר. כאן נתאר פרוטוקול מתוקננת של אוסף דגימה דמעה, חילוץ וניתוח של ציטוקין פרופיל משתמש חרוז מבוסס מולטיפלקס וזמינותו.

דמעה דגימות נאספו מעיני 8 4 נושאים בריא באמצעות רצועות זרימה דמעה, רמות ציטוקינים נותחו באמצעות פרוטוקול שהוזכרו לעיל. כל הנבדקים היו זכר והיה הגיל של הנושאים ארבע שנים 36, 42, 44, 52 בהתאמה. עין יבשה ובריאות משטח עינית המחלה הוערך על ידי מבחנים קליניים (מדמיע מעבר הסרט את הזמן, ?...

Watch this Scientific Journal Video about Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles at JoVE.com

Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles

ניתוח של הסרט מדמיע ציטוקינים מסייעת בלימוד עינית מחלות שונות. מבחני מולטיפלקס חרוז מבוסס הינם פשוטים רגיש ולאפשר בדיקה של מטרות מרובות בדגימות עם כמויות קטנות. כאן נתאר עבור מדמיע הסרט ציטוקין פרופיל של משתמש פרוטוקול חרוז מבוסס מולטיפלקס וזמינותו.

חרוז מבוסס Assay מולטיפלקס לניתוח של פרופילים ציטוקין דמעה

Tear film is a complex mixture of lipids, proteins and minerals which covers the external surface of the eye, thereby providing lubrication, nutrition and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex assay PCR ?????? ?? ???? Mec ???????? ???? Staphylococcal I ?V ?-methicillin<em&gt; ???????????</em

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

תפוקה גבוהה בזמן אמת כמותי RT-PCR Assay לקביעת פרופילי ביטוי של סוגי I ו- III תת סוגי אינטרפרון

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Automated Cell Enrichment of Cytomegalovirus-specific T cells for Clinical Applications using the Cytokine-capture System

העשרת תא אוטומטית של ציטומגלווירוס ספציפי תאי T ליישומים קליניים באמצעות מערכת ציטוקין ללכוד

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...

Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions

Flow Cytometry מבוסס Assay עבור הניטור של פונקציות תא NK

Natural killer (NK) cells are an important part of the human tumor immune surveillance system. NK cells are able to distinguish between healthy and ...

A Fluorescence-based Lymphocyte Assay Suitable for High-throughput Screening of Small Molecules

Assay לימפוציטים הקרינה מבוסס מתאים להקרנה תפוקה גבוהה של מולקולות קטנות

High-throughput screening (HTS) is currently the mainstay for the identification of chemical entities capable of modulating biochemical reactions or ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

קרינה המבוססת Assay Neuraminidase העיכוב להעריך את הרגישות של שפעת וירוסים אל Neuraminidase המונע המחלקה של תרופות אנטי-ויראליות

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Multiplex Cytokine Profiling of Stimulated Mouse Splenocytes Using a Cytometric Bead-based Immunoassay Platform

מגה-פלקס ציטוקין פרופיל של העכבר מגורה Splenocytes באמצעות פלטפורמה מבוססת-חרוז Cytometric מתכלה

Bead-based immunoassays employ the same basic principle as sandwich immunoassays. Capture beads, which can be differentiated by size and internal ...

Single-cell Analysis of Immunophenotype and Cytokine Production in Peripheral Whole Blood via Mass Cytometry

ניתוח מתא בודד של Immunophenotype וייצור ציטוקין בדם כל הפריפריה באמצעות Cytometry המונית

Cytokines play a pivotal role in the pathogenesis of autoimmune diseases. Hence, the measurement of cytokine levels has been the focus of multiple studies ...

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

מדידת נוגדנים הרום Phagocytosis-באופן טבעי כדי Plasmodium falciparum טפילי על ידי אסאי מבוסס ציטומטריה זרימה

The protocol describes how to set up and run a flow cytometry-based phagocytosis assay of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes (IEs) opsonized by ...

A DNA/Ki67-Based Flow Cytometry Assay for Cell Cycle Analysis of Antigen-Specific CD8 T Cells in Vaccinated Mice

בדיקת ציטומטריית זרימה מבוססת DNA/Ki67 לניתוח מחזור תאים של תאי CD8 T ספציפיים לאנטיגן בעכברים מחוסנים

The cell cycle of antigen-specific T cells in vivo has been examined by using a few methods, all of which possess some limitations. Bromodeoxyuridine ...