Name: bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles
Uploaded: 2017-10-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles at JoVE.com

研究活動は、タン ・ トク ・ セン病院個別のシード資金調達プログラム 2015; からセンターの助成金によって支えられました。シンガポールの目の研究所パイロット助成と基金のタン ・ トク ・ セン病院ピッチを付与します。

、シンガポールのタン ・ トク ・ セン病院倫理委員会で承認された本研究で使用するプロトコル。
 1 涙サイトカイン解析 <ol><li>涙のコレクション: <ol><li>試験椅子座ると彼/彼女の頭はヘッドレストを配置する件名をお願いします。</li>。
		<li>見て、慎重に開いて (ワットマン濾紙号 41 製) シルマー ストリップ ストリップの丸い端を眼の下の円蓋に置き、5 ?...

サイトカインは、小さな細胞から分泌されるタンパク質と免疫応答を調節する強力な免疫変調器です。32涙目と病気の発症のメカニズムを理解し、眼の健康の状態を判断するために役立つプロファイル サイトカインに関する研究の様々 な病態に関連しているサンプルで様々 なサイトカインの発現疾患の重症度、診断と進行。2,5低...

涙は、涙腺と付属腺によって生成され、眼の外側の表面をコートします。涙液膜は外側の脂質層の可溶性タンパク質が含まれています内部の水層で構成され、ムチンと膜結合ムチン。涙は、微生物の侵入を防ぐため栄養素を供給し、眼の表面に潤滑を提供します。涙は、空気と角膜への酸素輸送のための組織間のインターフェイスとして機能します。1涙液層はタンパク質、炭水化物、脂質、電解質の成ってです。緑内障、ドライアイ、春季カタル、糖尿病のような眼と全身疾患との涙液タンパク質間の関連付け、甲状腺関連眼窩と癌がいくつかの研究で確認されました。2,3,4涙のサンプルが収集できるマイクロキャピ ラリー チューブまたは涙の流れストリップ (シルマー ストリップ)。また、シルマーのテストは、角膜・屈折矯正手術診療所、結果はサイトカイン解析アッセイに使用可能性があります実行される標準的な手順です。非侵襲的なサンプルのコレクション、バイオ試料のアクセシビリティと様々 な生理学的、病理学的条件と組成物を引き裂く協会作る映画いくつかの眼と全身疾患のバイオ マーカーの潜在的なソースを引き裂きます。4,5,6
サイトカインは、涙は、眼表面の健康と様々 な眼疾患の炎症性条件の研究に重要な役割を果たしています。7涙のサンプルでいくつかのサイトカインの異常な濃度は、ドライアイ、春季カタル (VKC)、アトピー性角結膜炎 (AKC)、季節性アレルギー性結膜炎、ぶどう膜炎に関連する報告されました。8,9,10,11,12,13涙液タンパク質は、質量分析法、ウェスタンブロット法・酵素抗体法 (elisa 法) のような従来の方法で分析できます。14,15しかし、これらのメソッドの制限、感度不良、各患者における複数の涙サイトカインの解析に必要なサンプル量が多い。16,17ビーズによるマルチプレックスアッセイ複雑な混合試料の複数検体を分析するために開発され正常に異なった病気で複数のサイトカインを分析する涙サンプルに適用。6,サンドイッチ elisa 法の18 A の組み合わせと流れ cytometry 技術は、単一サンプル複数検体の定量化のための ELISA よりも敏感になることこれらのアッセイを有効にします。19様々 ないくつかの病態生理学的条件における免疫応答における臨床サンプルや細胞培養上清にこの方法を適用できます。20,21,22,23,24
ELISA の試金方法の相関を報告している比較ビーズによる多重いくつか研究がなされています。トイレらに比べてビーズ レジスチン、人間の血清または血漿試料中のグレリンとレプチン、アディポネクチンの検出のため従来 elisa 法による多重アッセイをベースし、強い相関を報告 (r &#62; 0.9)、アッセイの間。25デュポンらの il-1 β の検出ビーズによるマルチプレックスアッセイと ELISA との間の強い相関関係を報告した IL 4、IL-5、IL-6、IL-10、IFN-ϒ、TNF-α フィトヘマグルチニンでリポ多糖刺激全血妊娠中の女性から収集されます。26 ・ ピカリングら報告ヘモフィルス インフルエンザb 型多糖類に対する血清抗体の検出のためビード基づくマルチプレックス アッセイと ELISA との間別の強い相関 (r = 0.96)、のトキソイド破傷風(r = 0.96)、およびジフテリア(r = 0.91)。27ビアジーニら報告高い正の相関 (r = 0.852) 基づくビーズ マルチプレックス アッセイと炭疽アンチ PA の IgG 血清試料中の検出のための ELISA の間。28王ら報告アミロイド β 42 のアルツハイマー病バイオ マーカーの検出のためビード基づくマルチプレックス アッセイと ELISA の相関 (r = 0.77)、総タウ (r = 0.94)、およびアミノ酸 181 にリン酸化タウ (r = 0.82) で脳脊髄液のサンプル。29これらの研究はビーズの適用によるマルチプレックスアッセイ様々 な有望なビードによるマルチプレックスアッセイを作る臨床サンプル、小さいサンプル ボリュームの要件、標準的な elisa 法との相関を示しています。異なる疾患表現型のサンプルの型が異なる場合の複数検体の検出のための従来の ELISA 法に代わる。ここでサイトカインのシルマー ストリップを使用して健康な被験者から集められた涙サンプルの 41 検体プロファイリングのビーズによる多重試金のための標準化されたプロトコルについて述べる。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Milliplex MAP human cytokine / chemokine magnetic bead panel -1 kit</td>
			<td>Merck, USA</td>
			<td>HCYTOMAG-60K-41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D luminex instrument&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xPonent software&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBXGenerator software</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Manager 6.1</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate shaker</td>
			<td>Corning, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TECAN Microplate Washer</td>
			<td>Tecan, Switzerland</td>
			<td>HydroSpeed</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Genie 2</td>
			<td>Scientific Industries inc, USA</td>
			<td>G560E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Mettler Toledo, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml microcentrifuge tube</td>
			<td>Axygen, USA</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schirmer tear flow test strip</td>
			<td>Eye Care and Cure, USA</td>
			<td>101657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Calibration Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Verfication Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ocular examination chair</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles

涙液膜は、潤滑、栄養、基になるセルに保護を実現、目の外部表面を覆う脂質、タンパク質やミネラルの複雑な混合物です。涙の分析は、予測、診断、および様々 な眼疾患の予後バイオ マーカーの同定のための新興エリアです。涙は簡単にアクセスできる、非侵襲的な彼らのコレクション。したがって、高度なテクノロジは変化タンパク質や代謝物組成と病態との関連を研究する涙の複数検体の同定に隆起を集めています。涙サイトカインは、眼の表面の健康を研究するための理想的なバイオ マーカーでもドライアイと春季カタルのような別の眼表面疾患のメカニズムを理解するのに役立ちます。ビーズによるマルチプレックスアッセイは、感度の高いサンプルの少量の複数検体の検出の能力を持っています。ここで涙サンプル コレクションの標準化されたプロトコルについて述べる、サイトカインは、ビーズを使用したプロファイリングの抽出と分析による多重アッセイ。

涙流れストリップを使用して 4 健常者の 8 件目から採取した涙とサイトカイン レベルは、上記のプロトコルを使用して分析しました。すべての被験者は男性および 4 人の被験者の年齢は 36、42、44、52 歳それぞれ。眼表面の健康とドライアイ疾患を評価した臨床試験 (涙映画解散時間、シルマー テスト、角膜染色、結膜染色、蓋/マイボーム腺検査、角膜の涙徴候と視?...

Watch this Scientific Journal Video about Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles at JoVE.com

Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles

涙映画サイトカインの解析は、様々 な眼疾患の勉強に役立ちます。ビーズによるマルチプレックスアッセイは簡便かつ高感度、少量サンプルの複数のターゲットのテストを有効にします。ここで涙映画サイトカインを使用してプロファイリングするためのプロトコルを説明ビーズ基づくマルチプレックス アッセイ。

ビーズ ベースの涙サイトカイン解析マルチプレックス アッセイ

Tear film is a complex mixture of lipids, proteins and minerals which covers the external surface of the eye, thereby providing lubrication, nutrition and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

????????V???????????????????I????????????????PCR????<em&gt;???????</em

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

ハイスループット定量的リアルタイムRT-PCRアッセイのタイプIおよびIIIインターフェロンサブタイプの発現プロファイルを決定するための

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Automated Cell Enrichment of Cytomegalovirus-specific T cells for Clinical Applications using the Cytokine-capture System

サイトカインキャプチャシステムを用いた臨床応用のためのサイトメガロウイルス特異的T細胞の自動化された細胞濃縮

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...

Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions

NK細胞の機能を監視するためのサイトメトリーに基づくアッセイを流します

Natural killer (NK) cells are an important part of the human tumor immune surveillance system. NK cells are able to distinguish between healthy and ...

A Fluorescence-based Lymphocyte Assay Suitable for High-throughput Screening of Small Molecules

小分子のハイスループットスクリーニングのための適切な蛍光ベースのリンパ球アッセイ

High-throughput screening (HTS) is currently the mainstay for the identification of chemical entities capable of modulating biochemical reactions or ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

蛍光ベースのノイラミニダーゼ阻害アッセイ抗ウイルスのノイラミニダーゼ阻害剤クラスにインフルエンザウイルスの感受性を評価します

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Multiplex Cytokine Profiling of Stimulated Mouse Splenocytes Using a Cytometric Bead-based Immunoassay Platform

フローサイトメトリーによる免疫プラットフォームを使用して刺激マウス脾細胞のサイトカインがプロファイリングを多重化します。

Bead-based immunoassays employ the same basic principle as sandwich immunoassays. Capture beads, which can be differentiated by size and internal ...

Single-cell Analysis of Immunophenotype and Cytokine Production in Peripheral Whole Blood via Mass Cytometry

イムノフェノ タイプと大量のフローサイトメトリーによる末梢血中のサイトカイン産生の単一細胞解析

Cytokines play a pivotal role in the pathogenesis of autoimmune diseases. Hence, the measurement of cytokine levels has been the focus of multiple studies ...

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

フローサイトメトリーベースアッセイによる熱帯 熱マラリア原 虫に対する自然獲得食細胞症誘導抗体の測定

The protocol describes how to set up and run a flow cytometry-based phagocytosis assay of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes (IEs) opsonized by ...

A DNA/Ki67-Based Flow Cytometry Assay for Cell Cycle Analysis of Antigen-Specific CD8 T Cells in Vaccinated Mice

ワクチン接種マウスにおける抗原特異的CD8 T細胞の細胞周期解析のためのDNA/Ki67ベースのフローサイトメトリーアッセイ

The cell cycle of antigen-specific T cells in vivo has been examined by using a few methods, all of which possess some limitations. Bromodeoxyuridine ...

ビーズ ベースの涙サイトカイン解析マルチプレックス アッセイ

ビーズベースの涙サイトカイン解析マルチプレックスアッセイ