Name: bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles
Uploaded: 2017-10-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles at JoVE.com

Научно-исследовательская работа была поддержана центр грант от Тан Tock Сенг больница персонализированные семян финансирования программы к 2015 году; Сингапур глаз исследовательский институт пилот Грант и Тан Ток Сенг больницы шаг за фонда субсидии.

протоколы, используемые в данном исследовании были утверждены институционального обзора Советом больницы Тан Ток Сенг, Сингапур.
 1. рвать Cytokine анализ <ol><li>коллекции слез: <ol><li>спросить предмет комфортно сидеть на стуле экспертизы и место его головой подголовн?...

Цитокины являются маленькие сотовой секретируемые белки и мощным иммунных модуляторов, регулировании иммунной реакции. 32 выражение профили различных цитокинов в слезу образцы связаны с различных патологических состояний глаз и исследования cytokine, профили помогают понят?...

Слезы производятся слезных желез и аксессуаров желез и пальто внешней поверхности глаза. Слезной пленки состоит из наружной липидного слоя и внутренний водный слой, который включает в себя растворимые белки, муцин и мембраной связаны муцин. Слезы предотвращения вторжения микробов, поставки питательных веществ и обеспечивают смазку поверхности глаза. Слезы действовать как интерфейс между воздухом и ткани для транспорта кислорода к роговице. 1 слезной пленки состоит из белков, углеводов, липидов и электролитов. Ассоциация между слезоточивый белки с глазной и соматических заболеваний, как глаукома, заболевания сухой глаз, весеннем конъюнктивите, сахарный диабет, офтальмопатии связанных с щитовидной железы и рака была обнаружена в нескольких исследованиях. 2 , 3 , 4 слезоточивый образцы могут быть собраны, микрокапиллярной трубы или разрыв потока полосы (Ширмер полоски). Кроме того Ширмер испытаний является стандартной процедурой в роговице и рефракционной хирургии клиники, результаты которого могут использоваться для анализа анализов цитокина. Неинвазивная проб, доступность био-образца и Ассоциация слезоточивый композиции с различных физиологических и патологических условиях сделать слезной пленки потенциальным источником биомаркеров для нескольких глазных и соматических заболеваний. 4 , 5 , 6
Слеза цитокинов играет важную роль в изучении глазной поверхности здоровья и воспалительных процессов различных глазных заболеваний. 7 аномальные концентрации ряда цитокинов в образцах слезоточивый сообщалось ассоциироваться с сухой глаз болезни, весенний кератоконъюнктивит (VKC), атопический кератоконъюнктивит (АКС), сезонный аллергический конъюнктивит и увеита. 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 слезоточивый белки могут быть проанализированы традиционными методами как масс-спектрометрии, Западный blotting и энзим соединенный иммуноферментного анализа (ИФА). 14 , 15 однако ограничения этих методов являются бедные чувствительность и больший объем выборки, необходимых для анализа нескольких слезоточивый цитокинов у каждого пациента. 16 , 17 мультиплекс анализов шарик на основе разработаны для анализа нескольких аналитов в сложной смеси образцов и успешно применяется на слезоточивый образцы для анализа нескольких цитокинов в различных заболеваний. 6 , 18 A сочетание сэндвич ELISA и потока цитометрии методы позволяют эти анализы стать более чувствительными, чем ELISA для количественного определения нескольких аналитов в одном образце. 19 этот метод может применяться на различных клинических образцов и supernatants культуры клеток и помогает в изучении иммунных реакций в некоторых патофизиологических условий. 20 , 21 , 22 , 23 , 24
Есть несколько исследований, сравнение шарик на основе мультиплекс assays ELISA и сообщили о корреляции между методами. Лоо et al. по сравнению шарик на основе мультиплекс пробирного с обычными ELISA для обнаружения адипонектина, resistin, лептина и Грелин в образцах сыворотки или плазмы и сообщил сильная корреляция (r &#62; 0,9) между анализов. 25 Dupont et al. сообщили сильная корреляция между мультиплекс шарик на основе анализов и ELISA для обнаружения ИЛ 1β, Ил-4, Ил-5, IL-6, Ил-10, ИФН ϒ и ФНО α в фитогемагглютинина и липополисахарида стимулировали цельной крови собранные из беременных женщин. 26 Пикеринг et al. сообщили еще сильная корреляция между шарик на основе мультиплекс пробирного и ELISA для обнаружения сыворотке антител к гемофилического гриппа типа b полисахарид (r = 0,96), анатоксинов Столбнячная палочка (r = 0,96) и Corynebacterium diphtheriae (r = 0,91). 27 Бьяджини et al. сообщили высокая положительная корреляция (r = 0.852) между шарик на основе мультиплекс пробирного и ELISA для обнаружения Bacillus anthracis анти PA IgG в образцах сыворотки. 28 Wang et al. сообщили корреляцию между шарик на основе мультиплекс пробирного и ELISA для обнаружения болезни Альцгеймера биомаркеров амилоид β 42 (r = 0,77), Общая Тау (r = 0,94) и Тау фосфорилированных на аминокислоты 181 (r = 0,82) в образцов спинномозговой жидкости. 29 эти исследования продемонстрировали, что применимость шарик мультиплекс анализов на основе различных клинических образцов, меньшего объема требований образца и корреляция с стандартным ELISA, которые делают мультиплекс анализов шарик на основе перспективных альтернативой для традиционных методов ELISA для обнаружения нескольких аналитов в различных типов образцов в различных заболеваний фенотипов. Здесь мы описываем стандартизированный протокол для бисера на основе мультиплекс assay для цитокина профилирования для 41 аналитов в пробах слезоточивый из здоровых испытуемых с помощью Ширмер полоски.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Milliplex MAP human cytokine / chemokine magnetic bead panel -1 kit</td>
			<td>Merck, USA</td>
			<td>HCYTOMAG-60K-41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D luminex instrument&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xPonent software&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBXGenerator software</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Manager 6.1</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate shaker</td>
			<td>Corning, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TECAN Microplate Washer</td>
			<td>Tecan, Switzerland</td>
			<td>HydroSpeed</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Genie 2</td>
			<td>Scientific Industries inc, USA</td>
			<td>G560E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Mettler Toledo, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml microcentrifuge tube</td>
			<td>Axygen, USA</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schirmer tear flow test strip</td>
			<td>Eye Care and Cure, USA</td>
			<td>101657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Calibration Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Verfication Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ocular examination chair</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles

Слезной пленки представляет собой сложную смесь липидов, белков и минералов, которая охватывает внешней поверхности глаза, тем самым обеспечивая смазки, питания и защиты в базовой ячейки. Анализ слез является новой областью для идентификации биомаркеров для прогнозирования, диагностики и прогноз различных глазных заболеваний. Слезы легко доступны и их коллекции является неинвазивным. Таким образом продвижение технологии приобретают известность для идентификации нескольких аналитов в слезах для изучения изменений в составе белка или метаболита и его связь с патологических состояний. Слезоточивый цитокины являются идеальным биомаркеров для изучения здоровья глазной поверхности, а также помочь в понимании механизмов различных глазной поверхности расстройств, таких как сухой глаз болезни и весеннем конъюнктивите. Шарик на основе мультиплекс анализов имеют возможность обнаружения нескольких аналитов в небольшое количество образцов с высокой чувствительностью. Здесь мы описываем стандартизированный протокол взятия образца, извлечения и анализа цитокина профилирования с использованием бисера мультиплекс пробирного.

Слеза образцы были собраны от 8 глаз 4 здоровых испытуемых, используя слезоточивый поток полос и уровни цитокина были проанализированы с использованием упомянутых выше протокола. Все предметы были мужского пола и возраста четырех предметов было 36, 42, 44 и 52 лет соответс?...

Watch this Scientific Journal Video about Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles at JoVE.com

Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles

Анализ слезоточивый фильм цитокинов помогает в изучении различных глазных заболеваний. Мультиплекс шарик на основе простых и чувствительной и включить тестирование нескольких целей в образцах с небольшими объемами. Здесь мы описываем протокол для слезоточивый фильм цитокина профилирования с использованием бисера на основе мультиплекс пробирного.

Шарик на основе мультиплекс пробирного анализа слезоточивый цитокинового профиля

Tear film is a complex mixture of lipids, proteins and minerals which covers the external surface of the eye, thereby providing lubrication, nutrition and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

??????????? ??? ??? ??????????? ??????????????? ??????? ????????? ??? ????? I ?? V ? ??????????-??????????<em&gt; ?????????? ???????????</em

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

Высокая пропускная способность Количественный реальном времени RT-PCR анализа для определения профилей экспрессии типов I и III интерферона подтипов

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Automated Cell Enrichment of Cytomegalovirus-specific T cells for Clinical Applications using the Cytokine-capture System

Автоматизированная Обогащение Ячейка Цитомегаловирус-специфические Т-клетки для клинического применения с использованием системы цитокинов захвата

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...

Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions

Проточной цитометрии на основе анализа на мониторинге NK клеточных функций

Natural killer (NK) cells are an important part of the human tumor immune surveillance system. NK cells are able to distinguish between healthy and ...

A Fluorescence-based Lymphocyte Assay Suitable for High-throughput Screening of Small Molecules

Флуоресцентным на основе анализа Лимфоцит Подходит для высокопроизводительного скрининга малых молекул

High-throughput screening (HTS) is currently the mainstay for the identification of chemical entities capable of modulating biochemical reactions or ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

Флуоресцентный на основе нейраминидазы Анализ ингибирования для оценки восприимчивости вирусов гриппа к нейраминидазы Ингибитор классу противовирусных препаратов

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Multiplex Cytokine Profiling of Stimulated Mouse Splenocytes Using a Cytometric Bead-based Immunoassay Platform

Мультиплекс цитокина профилирование Splenocytes стимулировали мыши с использованием платформы на базе гранулярных шарик иммуноанализа

Bead-based immunoassays employ the same basic principle as sandwich immunoassays. Capture beads, which can be differentiated by size and internal ...

Single-cell Analysis of Immunophenotype and Cytokine Production in Peripheral Whole Blood via Mass Cytometry

Анализ одной ячейки иммунофенотип и производство цитокинов в периферической крови в целом через массовые цитометрии

Cytokines play a pivotal role in the pathogenesis of autoimmune diseases. Hence, the measurement of cytokine levels has been the focus of multiple studies ...

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

Измерение естественно приобретенных фагоцитоз-индуцирующих антител к паразитам Plasmodium falciparum с помощью анализа на основе цитометрии потока

The protocol describes how to set up and run a flow cytometry-based phagocytosis assay of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes (IEs) opsonized by ...

A DNA/Ki67-Based Flow Cytometry Assay for Cell Cycle Analysis of Antigen-Specific CD8 T Cells in Vaccinated Mice

Анализ проточной цитометрии на основе ДНК/Ki67 для анализа клеточного цикла антиген-специфических CD8 Т-клеток у вакцинированных мышей

The cell cycle of antigen-specific T cells in vivo has been examined by using a few methods, all of which possess some limitations. Bromodeoxyuridine ...