Name: bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles
Uploaded: 2017-10-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles at JoVE.com

Araştırma çalışmaları Merkezi hibe Tan Tock Seng hastane kişiselleştirilmiş tohum finansman programı 2015 tarafından desteklenen; Singapur göz Araştırma Enstitüsü Pilot hibe fonu için Tan Tock Seng hastane adım grant.

Bu çalışmada kullanılan protokolleri Tan Tock Seng hastane, Singapur Kurumsal değerlendirme Komitesi tarafından kabul edildi.
 1. gözyaşı sitokin analizi <ol><li>gözyaşları topluluğu: <ol><li>rahat bir muayene sandalyeye oturun ve yanlarında karşı seçtiğin bu kullanıcı kafasını yerleştirmek için konu sormak.</li>
		<li>Konu aramak, dikkatle (Whatman filtre kağıttan 41.liğe yapılmış) Schirmer şeritler açın ve şerit yuvarlak sonu üzerinde g?...

Sitokinler küçük hücresel salgılanan proteinler ve bağışıklık yanıtı düzenleyen güçlü bağışıklık modülatörler vardır. 32 ifade profilleri çeşitli sitokinlerin gözyaşı örnekleri çeşitli patolojik şartları göz ve sitokin hastalık patogenezinde mekanizmaları anlamak, oküler sağlık durumunu belirlemek için yardımcı profilleri üzerinde çalışmalar ile ilgili olarak, hastalık şiddeti, tanı ve ilerleme. 2 , <sup class="xr...

Gözyaşı gözyaşı bezi ve Aksesuar bezleri tarafından üretilen ve gözün dış yüzeyi ceket. Gözyaşı film bir dış lipit katmanı ve çözünür proteinler içerir bir iç sulu tabaka oluşur, mucins ve membran mucins bağlı. Gözyaşları mikrobiyal işgali önlemek, besin kaynağı ve oküler yüzey için yağlama sağlar. Hava ve oksijen taşıma için kornea dokusu arasında arayüz olarak gözyaşı hareket. 1 gözyaşı film proteinler, karbonhidratlar, lipitler ve elektrolitler oluşur. Gözyaşı proteinler ile oküler ve sistemik hastalıklar arasındaki ilişkiyi gibi Glokom, Kuru göz hastalığı, vernal konjonktivit, diabet, tiroid ilişkili orbitopathy ve kanser birkaç çalışmalar belirlenmiştir. 2 , 3 , 4 gözyaşı örneği microcapillary tüpler tarafından toplanabilir veya gözyaşı akışı (Schirmer şeritler) şeritler. Ayrıca,'ın Schirmer testi'kornea ve Refraktif Cerrahi Klinikler, bunların sonuçlarını sitokin analiz deneyleri için kullanılabilir standart bir işlemdir. Non-invaziv örnek koleksiyonu, biyo-numune erişilebilirliğini ve çeşitli fizyolojik ve patolojik koşulları ile gözyaşı kompozisyon Derneği yapmak film biyolojik birkaç oküler ve sistemik hastalıklar için potansiyel bir kaynak gözyaşı. 4 , 5 , 6
Gözyaşı sitokinler oküler yüzey sağlık ve çeşitli oküler hastalıklar inflamatuvar koşulları önemli bir rol oynar. 7 gözyaşı örneği içinde çeşitli sitokinlerin anormal konsantrasyonları kuru göz hastalığı, vernal keratokonjonktivit (VKC), Atopik keratokonjonktivit (AKC), mevsimsel Alerjik konjonktivit ve Üveit ile ilişkili olduğu bildirildi. 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 gözyaşı proteinler kütle spektrometresi, western Blot ve enzim bağlı immunosorbent deneyleri (ELISA) gibi geleneksel yöntemlerle analiz edilebilir. 14 , 15 ancak, bu yöntemlerin zavallı duyarlılık ve her hastada birden fazla gözyaşı sitokinler analizi için gerekli örnek daha büyük bir hacim sınırlamalardır. 16 , 17 dayalı boncuk multiplex deneyleri karmaşık karışımı örneklerinde birden çok analitler analiz etmek için geliştirilmiş ve farklı hastalıklar içinde birden çok sitokinler analiz etmek için gözyaşı örneği başarıyla uygulanan. 6 , 18 A birleştirme-in sandviç ELISA ve Akış Sitometresi teknikleri bu deneyleri ELISA için tek bir örneğinde birden çok analitler miktar daha duyarlı olmaya olanak sağlar. 19 klinik örnekler ve hücre kültür supernatants ve bağışıklık yanıtı birkaç patofizyolojik koşullarında çalışmada yardımcı olur çeşitli bu yöntem uygulanabilir. 20 , 21 , 22 , 23 , 24
Karşılaştırma tabanlı boncuk multiplex ELISA ile deneyleri ve yöntemleri arasında bir korelasyon bildirdin birçok çalışma vardır. Loo karşılaştırıldığında vd. boncuk resistin, leptin ve Grelin insan serum veya plazma numuneleri, geleneksel ELISA adiponektin, tespiti ile çok katmanlı tahlil tabanlı ve güçlü bir korelasyon bildirdi (r &#62; 0,9) deneyleri arasında. 25 Dupont ve ark. temel boncuk multiplex deneyleri ve ELISA arasında güçlü bir korelasyon IL-1β, tespiti için rapor, IL-5, Il-6, Il-4 IL-10, IFN-ϒ ve TNF-α phytohemagglutinin ve lipopolysaccharide uyarılmış tam kan hamile kadınlar toplanan. 26 Pickering ve ark. dayalı boncuk multiplex tahlil ve ELISA arasında başka bir güçlü korelasyon Haemophilus influenza tip b polisakkarit serum antikor tespiti için rapor (r = 0,96), toxoids Clostridium parasitize (r = 0,96) ve Corynebacterium diphtheriae (r = 0.91). 27 Biagini vd. yüksek pozitif korelasyon bildirdi (r = 0.852) dayalı boncuk multiplex tahlil ve ELISA Bacillus anthracis anti-PA IgG serum örneklerinde tespiti için arasında. 28 Wang ve ark. temel boncuk multiplex tahlil ve ELISA arasında bir ilişki Alzheimer hastalığı biyolojik amiloid-β 42 tespiti için rapor (r 0.77 =), toplam tau (r = 0,94) ve amino asit 181 fosforile tau (r = 0,82) içinde beyin omurilik sıvısı örnekleri. 29 boncuk uygulanabilirliği multiplex deneyleri bir umut verici dayalı boncuk multiplex deneyleri yapmak klinik örnekler, küçük örnek hacim gereksinimleri ve standart ELISA ile bir korelasyon çeşitli üzerinde dayalı bu çalışmalar göstermiştir geleneksel ELISA yöntemleri farklı hastalık fenotipleri örneklerinde farklı tür birden çok analitler tespiti için bir alternatif. Burada tarif biz sitokin sağlıklı bir konu Schirmer şeritler kullanarak toplanan gözyaşı örnekleri 41 analitler için profil oluşturma için temel boncuk multiplex tahlil için standart bir protokol.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Milliplex MAP human cytokine / chemokine magnetic bead panel -1 kit</td>
			<td>Merck, USA</td>
			<td>HCYTOMAG-60K-41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D luminex instrument&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xPonent software&#160;</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBXGenerator software</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Plex Manager 6.1</td>
			<td>BIO-RAD, France</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate shaker</td>
			<td>Corning, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TECAN Microplate Washer</td>
			<td>Tecan, Switzerland</td>
			<td>HydroSpeed</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Genie 2</td>
			<td>Scientific Industries inc, USA</td>
			<td>G560E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>Mettler Toledo, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml microcentrifuge tube</td>
			<td>Axygen, USA</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schirmer tear flow test strip</td>
			<td>Eye Care and Cure, USA</td>
			<td>101657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Calibration Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexmap 3D Verfication Kit</td>
			<td>Luminex Corp, Austin, TX, USA</td>
			<td>40-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ocular examination chair</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bead based multiplex assay for analysis of tear cytokine profiles

Gözyaşı film böylece yağlama, beslenme ve koruma altındaki hücreler için sağlayarak göz, Dış yüzeyini kaplayan bir karmaşık yağlar, proteinler ve mineraller karışımıdır. Gözyaşları analizini biyolojik tahmin, tanı ve Prognozunda çeşitli oküler hastalıklar için tanımlanması için gelişmekte olan bir alandır. Gözyaşı kolayca ulaşılabilir ve onların non-invaziv oluşur. Bu nedenle, gelişen teknolojileri protein veya metaboliti kompozisyon ve patolojik koşulları ile dernek değişiklikleri incelemek için gözyaşları içinde birden çok analitler tanımlanması için önem kazanmaktadır. Gözyaşı sitokinler oküler yüzey sağlık eğitim için ideal biyolojik ve kuru göz hastalığı ve vernal konjonktivit gibi farklı oküler yüzey bozuklukları mekanizmaları anlama konusunda da yardımcı olur. Boncuk dayalı multiplex deneyleri birden çok analitler örnek küçük bir miktar ile daha yüksek bir hassasiyet algılama yeteneğine sahip. Burada tarif biz standart bir protokol gözyaşı örnek toplama, çıkarma ve sitokin bir boncuk kullanarak profil oluşturma analizi multiplex tahlil göre.

4 sağlıklı deneklerin gözyaşı akışı şeritler kullanarak 8 gözlerinden gözyaşı örneği toplanmıştır ve sitokin düzeyleri yukarıda belirtilen iletişim kuralı kullanılarak analiz edildi. Tüm konular erkek ve dört konu yaş 36, 42, 44 ve 52 idi sırasıyla. Oküler yüzey sağlık ve kuru göz hastalığı göre klinik testler (gözyaşı film kıracak zaman, Schirmer'ın testi, kornea boyama, Konjonktival boyama, kapak/meibomian bezinin muayene, kornea gözyaşı iş...

Watch this Scientific Journal Video about Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles at JoVE.com

Bead Based Multiplex Assay for Analysis of Tear Cytokine Profiles

Sitokinler çeşitli oküler hastalıklar eğitim yardımcı olur gözyaşı film analizi. Boncuk dayalı multiplex deneyleri basit ve hassas ve küçük hacimli örneklerde birden çok hedef test etkinleştirin. Burada biz bir protokolü kullanarak bir profil oluşturma gözyaşı film sitokin için tarif boncuk dayalı multiplex tahlil.

Boncuk Multiplex tahlil için gözyaşı sitokin profilleri analizi dayalı

Tear film is a complex mixture of lipids, proteins and minerals which covers the external surface of the eye, thereby providing lubrication, nutrition and ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Metisiline diren

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

Yüksek verim Kantitatif Gerçek zamanlı RT-PCR Testi Türleri I ve III İnterferon Alttipleriyle İfadesi Profilleri belirlenmesi için

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Automated Cell Enrichment of Cytomegalovirus-specific T cells for Clinical Applications using the Cytokine-capture System

Sitokin yakalama Sistemi kullanılarak Klinik Uygulamalar için Sitomegalovirüs özgü otomatik Hücre Zenginleştirme T hücreleri

The adoptive transfer of pathogen-specific T cells can be used to prevent and treat opportunistic infections such as cytomegalovirus (CMV) infection ...

Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions

Akış NK Hücre Fonksiyonları İzleme Testi Sitometri tabanlı

Natural killer (NK) cells are an important part of the human tumor immune surveillance system. NK cells are able to distinguish between healthy and ...

A Fluorescence-based Lymphocyte Assay Suitable for High-throughput Screening of Small Molecules

Küçük moleküllerin yüksek verimli tarama için uygun bir floresan bazlı lenfositi analizi

High-throughput screening (HTS) is currently the mainstay for the identification of chemical entities capable of modulating biochemical reactions or ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

Floresans tabanlı Nöraminidaz İnhibisyonu Tahlili antivirallerin nöraminidaz inhibitörü Class Nezle Virüslerinden eğilimi değerlendirilebilir

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

Multiplex Cytokine Profiling of Stimulated Mouse Splenocytes Using a Cytometric Bead-based Immunoassay Platform

Multiplex sitokin Immunoassay sitometrik boncuk tabanlı platformu kullanarak uyarılmış fare Splenocytes profil oluşturma

Bead-based immunoassays employ the same basic principle as sandwich immunoassays. Capture beads, which can be differentiated by size and internal ...

Single-cell Analysis of Immunophenotype and Cytokine Production in Peripheral Whole Blood via Mass Cytometry

Tek hücreli Immunophenotype ve sitokin üretimde kitle sitometresi ile periferik tam kan analizi

Cytokines play a pivotal role in the pathogenesis of autoimmune diseases. Hence, the measurement of cytokine levels has been the focus of multiple studies ...

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

Measuring Naturally Acquired Phagocytosis-Inducing Antibodies to Plasmodium falciparum Parasites by a Flow Cytometry-Based Assay

Akış SitometriSi-Bazlı Bir Test ile Plasmodium falciparum Parazitlerine Doğal Olarak Edinilmiş Fagositoz-Indükleyen Antikorların Ölçülmesi

The protocol describes how to set up and run a flow cytometry-based phagocytosis assay of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes (IEs) opsonized by ...

A DNA/Ki67-Based Flow Cytometry Assay for Cell Cycle Analysis of Antigen-Specific CD8 T Cells in Vaccinated Mice

Aşılanmış Farelerde Antijene Özgü CD8 T Hücrelerinin Hücre Döngüsü Analizi için DNA/Ki67 Tabanlı Akış Sitometrisi Tahlili

The cell cycle of antigen-specific T cells in vivo has been examined by using a few methods, all of which possess some limitations. Bromodeoxyuridine ...