Name: live-cell imaging of fungal cells to investigate modes of entry and subcellular localization of antifungal plant defensins
Uploaded: 2017-12-24T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins at JoVE.com

אנו מודים ד ר ר הווארד ברג, מנהל מתקן מיקרוסקופ משולבת במרכז דונלד Danforth צמח המדע, להדרכה שלו ולעזור עם מיקרוסקופיה קונפוקלית. המחברים יש אין ניגוד אינטרסים להכריז.

1. תיוג של Defensins עם Fluorophores
<ol>
	<li>בחר fluorophore בעל השפעה מינימלית על המאפיינים מיקרוביאלית כמו גם ספיגת ועל לוקליזציה של defensin בתוך התא החי. הערה: בחירת fluorophore האופטימלי תלוי מטרות ספציפיות ניסיוני. ספקטרלי והכימיות, פוטוסטביליטי, אחראי על fluorophore וגודל גם להתייחס.</li>
	<li>תווית defensin עם fluorophore שנב?...

<ol>
	<li>Jones, J. D. G., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plant+immune+system.">The plant immune system.</a> Nature. 444 (7117), 323-329 (2006).</li><li>Tavormina, P., De Coninck, B., Nikonorova, N., De Smet, I., Cammue, B. P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Plant+Peptidome:+An+expanding+repertoire+of+structural+features+and+biological+functions.">The Plant Peptidome: An expanding repertoire of structural features and biological functions.</a> Plant cell. 27 (8), 2095-2118 (2015).</li><li>Van Der Weerden, N. L., Bleackley, M. R., Anderson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+and+mechanisms+of+action+of+naturally+occurring+antifungal+peptides.">Properties and mechanisms of action of naturally occurring antifungal peptides.</a> Cell. and Mol. Life Sci. 70 (19), 3545-3570 (2013).</li><li>Van der Weerden, N. L., Anderson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+defensins:+Common+fold,+multiple+functions.">Plant defensins: Common fold, multiple functions.</a> Fungal Biol Rev. 26 (4), 121-131 (2013).</li><li>De Coninck, B., Cammue, B. P. A., Thevissen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modes+of+antifungal+action+and+in+planta+functions+of+plant+defensins+and+defensin-like+peptides.">Modes of antifungal action and in planta functions of plant defensins and defensin-like peptides.</a> Fungal Biol Rev. 26 (4), 109-120 (2013).</li><li>Kaur, J., Sagaram, U. S., Shah, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+plant+defensins+be+used+to+engineer+durable+commercially+useful+fungal+resistance+in+crop+plants?.">Can plant defensins be used to engineer durable commercially useful fungal resistance in crop plants?.</a> Fungal Biol. Rev. 25 (3), 128-135 (2011).</li><li>Vriens, K., Cammue, B. P. A., Thevissen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+plant+defensins:+Mechanisms+of+action+and+production.">Antifungal plant defensins: Mechanisms of action and production.</a> Molecules. 19 (8), 12280-12303 (2014).</li><li>Sagaram, U. S., Kaur, J., Shah, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+plant+defensins:+Structure-activity+relationships,+modes+of+action,+and+biotech+applications.">Antifungal plant defensins: Structure-activity relationships, modes of action, and biotech applications.</a> ACS Symp. Ser. 1095, 317-336 (2012).</li><li>Thevissen, K., Francois, I. E. J. A., Aerts, A. M., Cammue, B. P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungal+sphingolipids+as+targets+for+the+development+of+selective+antifungal+therapeutics.">Fungal sphingolipids as targets for the development of selective antifungal therapeutics.</a> Curr. Drug Targets. 6 (8), 923-928 (2005).</li><li>Thevissen, K., Kristensen, H. H., Thomma, B. P. H. J., Cammue, B. P. A., Francois, I. E. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+antifungal+plant+and+insect+defensins.">Therapeutic potential of antifungal plant and insect defensins.</a> Drug Discov. Today. 12 (21-22), 966-971 (2007).</li><li>Aerts, A. M., Fran&#231;ois, I. E. J. A., Cammue, B. P. A., Thevissen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mode+of+antifungal+action+of+plant,+insect+and+human+defensins.">The mode of antifungal action of plant, insect and human defensins.</a> Cell. Mol. Life Sci. 65 (13), 2069-2079 (2008).</li><li>Van Der Weerden, N. L., Lay, F. T., Anderson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plant+defensin,+NaD1,+enters+the+cytoplasm+of+Fusarium+oxysporum+hyphae.">The plant defensin, NaD1, enters the cytoplasm of Fusarium oxysporum hyphae.</a> J. Biol. Chem. 283 (21), 14445-14452 (2008).</li><li>Lobo, D. S., Pereira, I. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+Pisum+sativum+Defensin+1+Interacts+with+Neurospora+crassa+Cyclin+F+Related+to+the+Cell+Cycle.">Antifungal Pisum sativum Defensin 1 Interacts with Neurospora crassa Cyclin F Related to the Cell Cycle.</a> Biochemistry. 46 (4), 987-996 (2007).</li><li>El-Mounadi, K., Islam, K. T., Hernandez-Ortiz, P., Read, N. D., Shah, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+mechanisms+of+a+plant+defensin+MtDef4+are+not+conserved+between+the+ascomycete+fungi+Neurospora+crassa+and+Fusarium+graminearum.">Antifungal mechanisms of a plant defensin MtDef4 are not conserved between the ascomycete fungi Neurospora crassa and Fusarium graminearum.</a> Mol. Microbiol. 100 (3), 542-559 (2016).</li><li>Baxter, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Tomato+Defensin+TPP3+Binds+Phosphatidylinositol+(4,5)-Bisphosphate+via+a+Conserved+Dimeric+Cationic+Grip+Conformation+To+Mediate+Cell+Lysis.">The Tomato Defensin TPP3 Binds Phosphatidylinositol (4,5)-Bisphosphate via a Conserved Dimeric Cationic Grip Conformation To Mediate Cell Lysis.</a> Mol. and Cell. Biol. 35 (11), 1964-1978 (2015).</li><li>Kvansakul, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+of+phosphatidic+acid+by+NsD7+mediates+the+formation+of+helical+defensin-lipid+oligomeric+assemblies+and+membrane+permeabilization.">Binding of phosphatidic acid by NsD7 mediates the formation of helical defensin-lipid oligomeric assemblies and membrane permeabilization.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 113, 11202-11207 (2016).</li><li>Poon, I. K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphoinositide-mediated+oligomerization+of+a+defensin+induces+cell+lysis.">Phosphoinositide-mediated oligomerization of a defensin induces cell lysis.</a> eLife. 3, e01808 (2014).</li><li>Mu&#241;oz, A., Read, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+and+analysis+shed+light+on+the+complexity+and+dynamics+of+antimicrobial+Peptide+action.">Live-cell imaging and analysis shed light on the complexity and dynamics of antimicrobial Peptide action.</a> Front. Immunol. 3, 248 (2012).</li><li>Hayes, B. M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+mechanism+of+action+of+the+plant+defensin+NaD1+as+a+new+member+of+the+antifungal+drug+arsenal+against+candida+albicans.">Identification and mechanism of action of the plant defensin NaD1 as a new member of the antifungal drug arsenal against candida albicans.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 57 (8), 3667-3675 (2013).</li><li>Mu&#241;oz, A., Marcos, J. F., Read, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentration-dependent+mechanisms+of+cell+penetration+and+killing+by+the+de+novo+designed+antifungal+hexapeptide+PAF26.">Concentration-dependent mechanisms of cell penetration and killing by the de novo designed antifungal hexapeptide PAF26.</a> Mol. Microbiol. 85 (1), 89-106 (2012).</li><li>Eaton, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+guanine+nucleotide+exchange+factor+RIC8+regulates+conidial+germination+through+G&#945;+proteins+in+Neurospora+crassa.">The guanine nucleotide exchange factor RIC8 regulates conidial germination through G&#945; proteins in Neurospora crassa.</a> PLoS One. 7 (10), e48026 (2012).</li><li>Leslie, J. F., Summerell, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Fusarium. laboratory manual. , (2006).</li><li>Broekaert, W. F., Terras, F. R. G., Cammue, B. P. A., Vanderleyden, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+quantitative+assay+for+fungal+growth+inhibition.">An automated quantitative assay for fungal growth inhibition.</a> FEMS Microbiol.Lett. 69 (1-2), 55-59 (1990).</li><li>Sagaram, U. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+studies+of+a+phosphatidic+acid-binding+antifungal+plant+defensin+MtDef4:+Identification+of+an+RGFRRR+motif+governing+fungal+cell+entry.">Structural and functional studies of a phosphatidic acid-binding antifungal plant defensin MtDef4: Identification of an RGFRRR motif governing fungal cell entry.</a> PLoS One. 8 (12), 1-22 (2013).</li><li>Uchida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soft+X-ray+tomography+of+phenotypic+switching+and+the+cellular+response+to+antifungal+peptoids+in+Candida+albicans.">Soft X-ray tomography of phenotypic switching and the cellular response to antifungal peptoids in Candida albicans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 106 (46), 19375-19380 (2009).</li><li>Nair, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Better+prediction+of+sub-cellular+localization+by+combining+evolutionary+and+structural+information.">Better prediction of sub-cellular localization by combining evolutionary and structural information.</a> Proteins Struct. Funct. Bioinform. 53 (4), 917-930 (2003).</li><li>Scott, M. S., Calafell, S. J., Thomas, D. Y., Hallett, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refining+protein+subcellular+localization.">Refining protein subcellular localization.</a> PLoS Comput. Biol. 1 (6), e66 (2005).</li><li>Shagaghi, N., Bhave, M., Palombo, E., Clayton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revealing+the+sequence+of+interactions+of+PuroA+peptide+with+Candida+albicans+cells+by+live-cell+imaging.">Revealing the sequence of interactions of PuroA peptide with Candida albicans cells by live-cell imaging.</a> Sci. Rep. 7, 43542 (2017).</li></ol>

במחקר זה, מתודולוגיה אמינה של הדמיה לחיות תאים עם השימוש fluorescently שכותרתו defensins פטריות שתואר ללמוד את קינטיקה של ההפנמה של פפטידים אלה לתוך תאים פטרייתי וכדי לקבוע את המטרות subcellular. שיטה זו היא כלי רב עוצמה כדי להמחיש את הדינמיקה של האינטראקציה בין defensins ותאים פטרייתי חנותם והמרגשים.
<p class="...

הצמחים התפתחו מערכת חיסונית מולדת מתוחכמים להגנה נגד פתוגנים צמח חיידקים1. הם מבטאים רבים פפטידים ההגנה מארח גן מקודד עם פעילות מיקרוביאלית בשם2. ואכן, רבים של פפטידים אלה מציגים פעילות מיקרוביאלית במבחנה3. Defensins מהווים את אחת הקבוצות הגדולות של פפטידים ההגנה מארח הממלכה של הצמח4. אלה פפטידים עשיר ציסטאין, cationic להפגין פעילות מעכבות צמיחה חזקה נגד פטרייתי, פתוגנים oomycete ריכוזי micromolar, ייצגו אחת השורות הראשונות של הגנה מפני פתוגנים אלה,5,6. בשל פעילותם נגד פטריות חזק, אפשר לנצל defensins ביישומים agribiotechnological ליצירת גידולים עמידים בפני מחלות. ביטוי המכונן של מספר defensins הצמח הוכח כדי לשפר את ההתנגדות המחלה בבדיקות החממה ושדה של העברה6. חשוב לפענח את מנגנוני הפעולה (מואה) של פפטידים פטריות אלה על מנת מלא לרתום את הפוטנציאל שלהם ככלים יעילים עבור הגנת הצומח. עם זאת, מואה של אלה defensins צמח הם הבינו כהלכה. הראיות הנוכחי עולה כי הם מציגים שונות מואה5,6,7,8. כמה defensins לפעול extracellularly פטריות לכוון דופן התא הספציפי/פלזמה ממברנה sphingolipids תושב, לשבש הקרומיות, להפעיל רעילות הסלולר מסלולים9,10,11. לאחרונה, עם זאת, defensins פטריות זה translocate לתוך תאים פטרייתי היה שהתגלו12,13,14. חלק defensins אלה לאגד תושב קרום phospholipids ביו, יוצרים קומפלקסים oligomeric, permeabilize ממברנות פלזמה15,16,17. לפיכך, היבטים מסוימים של מואה של הצמח defensins יש כבר מבואר. עם זאת, מואה של הצמח defensins סביר כוללות מערך מורכב של אירועים אשר עדיין לא מזוהה, משולב לתוך מודל מקיף. בפרט, נותר פער רציני בהבנה שלנו של המטרות הסלולר של פפטידים אלה.
עם ההתקדמות מיקרוסקופ טכנולוגיות ופיתוח של הגששים פלורסנט חדש, טכניקות הדמיה לחיות תאים עכשיו משמשים לעתים קרובות כדי ללמוד מואה של פפטידים מיקרוביאלית (אמפר). טכניקות אלה משלימים שיטות שימוש נרחב כגון immunolocalization, מיקרוסקופ אלקטרונים, מיקרוסקופ כוח אטומי או רנטגן טומוגרפיה18, אשר יש כבר מועסקים בעיקר כדי לנתח את ההשפעות של פפטידים פטריות על המורפולוגיה, הצמיחה של תאים פטרייתי כולל המחקר של דופן התא שלמות, שינוי דפוסי צמיחה/מסעף תא, כמו גם קרום פלזמה permeabilization ולהרוג. למרות זאת, מחקרים אלה היה מוגבל הדמיה תאים בשלב זמן מסוים לאחר הטיפול עם פפטידים במקום ביצוע זמן לשגות הדמיה על אותם התאים כדי לעקוב אחר שינויים דינמיים שלהם בתגובה defensin אתגר. בשנים האחרונות השימוש פפטידים fluorescently שכותרתו בשיתוף עם חיים תא הדמיה באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית אפשרה ויזואליזציה בזמן אמת של הדינמיקה של המגבר – חיידק אינטראקציות. שניהם באופן טבעי טהור ו מסונתז כימית פפטידים פטריות יכול להיות מתויג עם תוויות פלורסנט (למשל, DyLight, rhodamine, BODIPY או אלקסה עבור חיל הים על בסיס צבע), ישירות ציין במהלך האינטראקציה שלהם עם תאים על-ידי בצילום מואץ הדמיה לחיות תאים. השימוש אלה שכותרתו פפטידים גדל באופן משמעותי את ההבנה שלנו של היבטים שונים של שלהם מואה כולל מצב של ערך, לוקליזציה subcellular, וגדילת ואתרים של פעולה נגד פטריות בתוך תאים חיים פטרייתי 18.
לאחרונה, מספר מחקרים הראו כי פפטידים פטריות שונות כולל צמח defensins הם לנחלתו של חיים תאים פטרייתי12,14,19,20. מואה של אלה defensins סביר כרוכות באינטראקציה עם מטרות תאיים. לאחרונה דיווחנו בפעולה נגד פטריות של צמח defensin MtDef4 שני בפטרייה ascomycete, Neurospora crassa , Fusarium graminearum. MtDef4 הוצגה לשימוש מסלולים שונים עבור ערך התא פטרייתי ולוקליזציה subcellular אלה פטריות14. במחקר זה נעשה שימוש כימי מסונתז tetramethyl rhodamine (טמרה)-הנקרא MtDef4 בשילוב עם צבעי פלורסנט חיוני (קרום בררני לצבוע, FM4-64; צבע ממברנה-permeant, SYTOX ירוק תא מותו כתב לצבוע, יודיד propidium), מעכבי חילוף החומרים. ניתוחים אלה הפגינו את קינטיקה של ההפנמה של MtDef4, שלה מנגנונים תאיים תחבורה שלו מטרות subcellular14.
כאן מוצג עבור הדמיה לחיות תאים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית פרוטוקול. הפרוטוקול מנצל פפטידים שכותרתו fluorescently בשילוב עם צבעי פלורסנט חיוני ללמוד אינטראקציות צמח defensin-פטרייתי, בפרט, המסלולים של טרנסלוקציה המטרות תאיים של defensins בתאים פטרייתי.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>FM4-64 Dye</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>T13320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DyLight 550 Antibody Labeling Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>84530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Microwell Dishes</td>
			<td>Mat TeK</td>
			<td>P35G-1.5-10-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mira cloth</td>
			<td>EMD Millipore Corp</td>
			<td>475855-1R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP8-X confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ software</td>
			<td>FiJi</td>
			<td></td>
			<td>For Image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris software</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>For Image analysis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of fungal cells to investigate modes of entry and subcellular localization of antifungal plant defensins

Defensins ציסטאין-עשיר קטנים הם אחת הקבוצות הגדולות של פפטידים ההגנה מארח נוכח כל הצמחים. Defensins הצמח רבים שהפגינו חזק במבחנה פטריות פעילות נגד רחבת ספקטרום של פתוגנים ופטריות, ולכן יש פוטנציאל לשמש סוכני פטריות מערכת העברה. על מנת לרתום את מלוא הפוטנציאל של הצמח defensins לבקרת מחלות, חשוב להבהיר שלהם מנגנון פעולה (מואה). עם כניסתו של טכניקות מתקדמות במיקרוסקופ, הדמיה לחיות תאים הפך להיות כלי רב עוצמה להבנת הדינמיקה של מואה פטרת של הצמח defensins. כאן, שיטת הדמיה של תאים חיים מבוסס מיקרוסקופיה קונפוקלית מתואר באמצעות שני defensins צמח שכותרתו fluorescently (MtDef4 ו- MtDef5) בשילוב עם צבעי פלורסנט חיוני. טכניקה זו מאפשרת הדמיה בזמן אמת וניתוח של האירועים הדינאמי של הפנמה MtDef4 ו- MtDef5 לתוך תאים פטרייתי. חשוב, וזמינותו זו יוצרת שפע של מידע, כולל הפנמה קינטיקה, מצב של ערך ולוקליזציה subcellular של פפטידים אלה. בשילוב עם כלים אחרים תא ביולוגי, שיטות אלה סיפקו תובנות קריטי הדינמיקה ואת המורכבות של מואה של פפטידים אלה. כלים אלה יכולים לשמש גם כדי להשוות מואה של פפטידים אלה נגד פטריות שונים.

חיים תא הדמיה בוצע מעקב אחר ולהשוות את הפנמה ואת subcellular לוקליזציה של defensins שני, MtDef4, MtDef5, מ- אספסת truncatula; בתאים פטרייתי. TMR-MtDef4 היה מסונתז כימית בזמן MtDef5 סומן עם Dylight550 (Dylight550-MtDef5). Conidia היו מודגרות עם או defensin בשילוב עם קרום בררני לצבוע FM4-64. איור 1 מראה כי TMR-MtD...

Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins at JoVE.com

Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins

צמח defensins לשחק תפקיד חשוב בהגנה צמח נגד פתוגנים. עבור שימוש יעיל של אלה פפטידים נגד פטריות כמו סוכני פטריות, הבנת את מצבי הפעולה (מואה) היא קריטית. . הנה, שיטת הדמיה לחיות תאים מתואר ללמוד היבטים קריטיים מואה של פפטידים אלה.

הדמיה לחיות תאים תאים פטרייתי לחקור מצבים של ערך ולוקליזציה Subcellular של הצמח נגד פטריות Defensins

Small cysteine-rich defensins are one of the largest groups of host defense peptides present in all plants. Many plant defensins exhibit potent in vitro ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Live-תא הדמיה וניתוח כמותי של תאים אפיתל עובריים ב Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

הקרינה מבוסס מדידה הכניסה חנות המופעל הסידן בתאים חיים: מתא הסרטן תרבותי כדי סיב שריר שלד

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

לחיות תא הדמיה של אירועי autophagy מוקדמים: Omegasomes ומעבר

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

Scanning Electron Microscopy (SEM) Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

Scanning Electron Microscopy SEM Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

מיקרוסקופ אלקטרוני סורק הפרוטוקולים (SEM) עבור בעייתי הצמח, Oomycete, וכן דוגמאות פטרייתיים

Common problems in the processing of biological samples for observations with the scanning electron microscope (SEM) include cell collapse, treatment of ...

Utilizing pHluorin-tagged Receptors to Monitor Subcellular Localization and Trafficking

ניצול רצפטורים-tagged pHluorin לפקח subcellular לוקליזציה וסחר

Understanding membrane protein trafficking, assembly, and expression requires an approach that differentiates between those residing in intracellular ...

Live-cell Imaging of Platelet Degranulation and Secretion Under Flow

Live-cell הדמיה של degranulation טסיות והפרשה תחת זרימה

Blood platelets are essential players in hemostasis, the formation of thrombi to seal vascular breaches. They are also involved in thrombosis, the ...

Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures

הדמיית תאים חיים ברזולוציה סופר-רזולוציה של מבנים תת-תאיים

There has long been a crucial tradeoff between spatial and temporal resolution in imaging. Imaging beyond the diffraction limit of light has traditionally ...

Isolation of Culturable Yeasts and Molds from Soils to Investigate Fungal Population Structure

בידוד של שמרים ועובשים הניתנים לעיבוד מאדמות כדי לחקור את מבנה האוכלוסייה הפטרייתית

Soil is host to an incredible amount of microbial life, with each gram containing up to billions of bacterial, archaeal, and fungal cells. Multicellular ...

Microscopy Techniques for Interpreting Fungal Colonization in Mycoheterotrophic Plants Tissues and Symbiotic Germination of Seeds

טכניקות מיקרוסקופיה לפענוח התיישבות פטרייתית ברקמות צמחים מיקוהטרוטרופיים ונביטה סימביוטית של זרעים

Structural botany is an indispensable perspective to fully understand the ecology, physiology, development, and evolution of plants. When researching ...

Visualization of Cellular Interactions Between the Maize Sheaths and Fungi

Detached Maize Sheaths for Live-Cell Imaging of Infection by Fungal Foliar Maize Pathogens

Investigating Fungal Pathogenicity Mechanisms in Maize (Video) | JoVE

נדן תירס מנותק להדמיית תאים חיים של זיהום על ידי פתוגנים פטרייתיים של תירס פוליארי

We have optimized a protocol to inoculate maize leaf sheaths with hemibiotrophic and necrotrophic foliar pathogenic fungi. The method is modified from one ...