Name: live-cell imaging of fungal cells to investigate modes of entry and subcellular localization of antifungal plant defensins
Uploaded: 2017-12-24T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins at JoVE.com

우리 박사 R. 하 워드 베 르 그, 도널드 댄 포트 식물 과학 센터, 그의 지도에 통합 현미경 시설의 감독 감사 하 고 도움이 confocal 현미경 검사 법. 저자는 선언에 충돌의 관심 있다.

1. 라벨 Defensins Fluorophores와의
<ol>
	<li>살아있는 세포 내부에 항균 성 속성으로 이해 및 지역화 defensin의 최소 효과가 fluorophore를 선택 합니다. 참고: 최적의 fluorophore 선택 특정 실험 목적에 따라 달라 집니다. 스펙트럼 및 화학 속성, photostability, 크기와는 fluorophore의 충전도 고려해 야 합니다.</li>
	<li>라벨 라벨 키트 상업용 공급 업체에서 제공 하는 적절 한 펩 티 드를 사용 하 여 선택한 fluorophore?...

<ol>
	<li>Jones, J. D. G., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plant+immune+system.">The plant immune system.</a> Nature. 444 (7117), 323-329 (2006).</li><li>Tavormina, P., De Coninck, B., Nikonorova, N., De Smet, I., Cammue, B. P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Plant+Peptidome:+An+expanding+repertoire+of+structural+features+and+biological+functions.">The Plant Peptidome: An expanding repertoire of structural features and biological functions.</a> Plant cell. 27 (8), 2095-2118 (2015).</li><li>Van Der Weerden, N. L., Bleackley, M. R., Anderson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+and+mechanisms+of+action+of+naturally+occurring+antifungal+peptides.">Properties and mechanisms of action of naturally occurring antifungal peptides.</a> Cell. and Mol. Life Sci. 70 (19), 3545-3570 (2013).</li><li>Van der Weerden, N. L., Anderson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+defensins:+Common+fold,+multiple+functions.">Plant defensins: Common fold, multiple functions.</a> Fungal Biol Rev. 26 (4), 121-131 (2013).</li><li>De Coninck, B., Cammue, B. P. A., Thevissen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modes+of+antifungal+action+and+in+planta+functions+of+plant+defensins+and+defensin-like+peptides.">Modes of antifungal action and in planta functions of plant defensins and defensin-like peptides.</a> Fungal Biol Rev. 26 (4), 109-120 (2013).</li><li>Kaur, J., Sagaram, U. S., Shah, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+plant+defensins+be+used+to+engineer+durable+commercially+useful+fungal+resistance+in+crop+plants?.">Can plant defensins be used to engineer durable commercially useful fungal resistance in crop plants?.</a> Fungal Biol. Rev. 25 (3), 128-135 (2011).</li><li>Vriens, K., Cammue, B. P. A., Thevissen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+plant+defensins:+Mechanisms+of+action+and+production.">Antifungal plant defensins: Mechanisms of action and production.</a> Molecules. 19 (8), 12280-12303 (2014).</li><li>Sagaram, U. S., Kaur, J., Shah, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+plant+defensins:+Structure-activity+relationships,+modes+of+action,+and+biotech+applications.">Antifungal plant defensins: Structure-activity relationships, modes of action, and biotech applications.</a> ACS Symp. Ser. 1095, 317-336 (2012).</li><li>Thevissen, K., Francois, I. E. J. A., Aerts, A. M., Cammue, B. P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungal+sphingolipids+as+targets+for+the+development+of+selective+antifungal+therapeutics.">Fungal sphingolipids as targets for the development of selective antifungal therapeutics.</a> Curr. Drug Targets. 6 (8), 923-928 (2005).</li><li>Thevissen, K., Kristensen, H. H., Thomma, B. P. H. J., Cammue, B. P. A., Francois, I. E. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+antifungal+plant+and+insect+defensins.">Therapeutic potential of antifungal plant and insect defensins.</a> Drug Discov. Today. 12 (21-22), 966-971 (2007).</li><li>Aerts, A. M., Fran&#231;ois, I. E. J. A., Cammue, B. P. A., Thevissen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mode+of+antifungal+action+of+plant,+insect+and+human+defensins.">The mode of antifungal action of plant, insect and human defensins.</a> Cell. Mol. Life Sci. 65 (13), 2069-2079 (2008).</li><li>Van Der Weerden, N. L., Lay, F. T., Anderson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plant+defensin,+NaD1,+enters+the+cytoplasm+of+Fusarium+oxysporum+hyphae.">The plant defensin, NaD1, enters the cytoplasm of Fusarium oxysporum hyphae.</a> J. Biol. Chem. 283 (21), 14445-14452 (2008).</li><li>Lobo, D. S., Pereira, I. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+Pisum+sativum+Defensin+1+Interacts+with+Neurospora+crassa+Cyclin+F+Related+to+the+Cell+Cycle.">Antifungal Pisum sativum Defensin 1 Interacts with Neurospora crassa Cyclin F Related to the Cell Cycle.</a> Biochemistry. 46 (4), 987-996 (2007).</li><li>El-Mounadi, K., Islam, K. T., Hernandez-Ortiz, P., Read, N. D., Shah, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+mechanisms+of+a+plant+defensin+MtDef4+are+not+conserved+between+the+ascomycete+fungi+Neurospora+crassa+and+Fusarium+graminearum.">Antifungal mechanisms of a plant defensin MtDef4 are not conserved between the ascomycete fungi Neurospora crassa and Fusarium graminearum.</a> Mol. Microbiol. 100 (3), 542-559 (2016).</li><li>Baxter, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Tomato+Defensin+TPP3+Binds+Phosphatidylinositol+(4,5)-Bisphosphate+via+a+Conserved+Dimeric+Cationic+Grip+Conformation+To+Mediate+Cell+Lysis.">The Tomato Defensin TPP3 Binds Phosphatidylinositol (4,5)-Bisphosphate via a Conserved Dimeric Cationic Grip Conformation To Mediate Cell Lysis.</a> Mol. and Cell. Biol. 35 (11), 1964-1978 (2015).</li><li>Kvansakul, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+of+phosphatidic+acid+by+NsD7+mediates+the+formation+of+helical+defensin-lipid+oligomeric+assemblies+and+membrane+permeabilization.">Binding of phosphatidic acid by NsD7 mediates the formation of helical defensin-lipid oligomeric assemblies and membrane permeabilization.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 113, 11202-11207 (2016).</li><li>Poon, I. K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphoinositide-mediated+oligomerization+of+a+defensin+induces+cell+lysis.">Phosphoinositide-mediated oligomerization of a defensin induces cell lysis.</a> eLife. 3, e01808 (2014).</li><li>Mu&#241;oz, A., Read, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+and+analysis+shed+light+on+the+complexity+and+dynamics+of+antimicrobial+Peptide+action.">Live-cell imaging and analysis shed light on the complexity and dynamics of antimicrobial Peptide action.</a> Front. Immunol. 3, 248 (2012).</li><li>Hayes, B. M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+mechanism+of+action+of+the+plant+defensin+NaD1+as+a+new+member+of+the+antifungal+drug+arsenal+against+candida+albicans.">Identification and mechanism of action of the plant defensin NaD1 as a new member of the antifungal drug arsenal against candida albicans.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 57 (8), 3667-3675 (2013).</li><li>Mu&#241;oz, A., Marcos, J. F., Read, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentration-dependent+mechanisms+of+cell+penetration+and+killing+by+the+de+novo+designed+antifungal+hexapeptide+PAF26.">Concentration-dependent mechanisms of cell penetration and killing by the de novo designed antifungal hexapeptide PAF26.</a> Mol. Microbiol. 85 (1), 89-106 (2012).</li><li>Eaton, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+guanine+nucleotide+exchange+factor+RIC8+regulates+conidial+germination+through+G&#945;+proteins+in+Neurospora+crassa.">The guanine nucleotide exchange factor RIC8 regulates conidial germination through G&#945; proteins in Neurospora crassa.</a> PLoS One. 7 (10), e48026 (2012).</li><li>Leslie, J. F., Summerell, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Fusarium. laboratory manual. , (2006).</li><li>Broekaert, W. F., Terras, F. R. G., Cammue, B. P. A., Vanderleyden, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+quantitative+assay+for+fungal+growth+inhibition.">An automated quantitative assay for fungal growth inhibition.</a> FEMS Microbiol.Lett. 69 (1-2), 55-59 (1990).</li><li>Sagaram, U. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+studies+of+a+phosphatidic+acid-binding+antifungal+plant+defensin+MtDef4:+Identification+of+an+RGFRRR+motif+governing+fungal+cell+entry.">Structural and functional studies of a phosphatidic acid-binding antifungal plant defensin MtDef4: Identification of an RGFRRR motif governing fungal cell entry.</a> PLoS One. 8 (12), 1-22 (2013).</li><li>Uchida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soft+X-ray+tomography+of+phenotypic+switching+and+the+cellular+response+to+antifungal+peptoids+in+Candida+albicans.">Soft X-ray tomography of phenotypic switching and the cellular response to antifungal peptoids in Candida albicans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 106 (46), 19375-19380 (2009).</li><li>Nair, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Better+prediction+of+sub-cellular+localization+by+combining+evolutionary+and+structural+information.">Better prediction of sub-cellular localization by combining evolutionary and structural information.</a> Proteins Struct. Funct. Bioinform. 53 (4), 917-930 (2003).</li><li>Scott, M. S., Calafell, S. J., Thomas, D. Y., Hallett, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refining+protein+subcellular+localization.">Refining protein subcellular localization.</a> PLoS Comput. Biol. 1 (6), e66 (2005).</li><li>Shagaghi, N., Bhave, M., Palombo, E., Clayton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revealing+the+sequence+of+interactions+of+PuroA+peptide+with+Candida+albicans+cells+by+live-cell+imaging.">Revealing the sequence of interactions of PuroA peptide with Candida albicans cells by live-cell imaging.</a> Sci. Rep. 7, 43542 (2017).</li></ol>

이 연구에 붙일 레이블된 항진균 defensins 사용 하 여 신뢰할 수 있는 라이브 셀 이미징 방법론 곰 팡이 세포에 이러한 펩 티이 드의 국제화의 속도 론을 공부 하 고 그들의 subcellular 목표를 결정 하는 설명 했다. 이 방법은 일시적으로 그리고 공간 defensins와 곰 팡이 세포 사이 상호 작용의 역동성을 시각화 하는 강력한 도구입니다.
다양 한 방법은 국제화 식물 defensins 곰 팡이 세?...

식물 미생물 식물 병원 체1에 대 한 방어에 대 한 정교한 타고 난 면역 체계를 진화 했다. 그들은 수많은 유전자 인코딩 호스트 방어 펩 putative 항균 활동2익스프레스. 실제로, 많은 이러한 펩 티이 드의 항균 활동 생체 외에서3표시합니다. Defensins 식물 왕국4호스트 방어 펩 티 드의 가장 큰 그룹 중 구성 됩니다. 이 시스테인-부자, 양이온 펩 티 드 곰 팡이 대 한 강력한 성장 억제 활동 전시 및 micromolar 농도 및 이러한 병원 균5,6에 대 한 방어의 첫 번째 라인 중 하나에서 oomycete 병원 체. 그들의 강력한 항진균 활동 때문에 defensins agribiotechnological 저항 하는 질병 작물을 생성 하기 위해 응용 프로그램에 악용 될 수 있습니다. 여러 식물 defensins의 제정 overexpression 유전자 변형 작물6온실 및 필드 테스트에 질병 저항을 향상 시키기 위해 표시 되었습니다. 그것은 완전히 작물 보호를 위한 효과적인 도구로 서 자신의 잠재력을 활용 하기 위해서는 이러한 항진균 펩 티 드의 행동 (MOA)의 메커니즘을 해명 하는 것이 중요. 그러나, 이러한 식물 defensins MOA 제대로 이해 하 고. 현재 증거 그들이 다른 MOA5,6,,78전시 제안 합니다. 일부 defensins extracellularly 버섯에 행동 하 고 특정 세포 벽/플라즈마 막 주민 sphingolipids 대상, 막 무결성 고 세포 독성 경로9,,1011활성화 됩니다. 그러나 최근에,, 곰 팡이 세포로 이동 하는 항진균 defensins 발견된12,,1314있다. 일부 이러한 defensins 바인딩할 막 상주 생리 인지질, oligomeric 단지를 형성 하 고 플라즈마 막15,,1617permeabilize. 따라서, 식물 defensins의 MOA의 몇 가지 측면 해명 되어 있다. 그러나, 식물 defensins 가능성이의 MOA 아직 식별 및 포괄적인 모델에 통합 이벤트의 복잡 한 세트를 포함 한다. 특히, 이러한 펩 티이 드의 셀룰러 목표의 우리의 이해에 큰 간격이 남아 있습니다.
진보와 함께 최근 현미경 검사 법 기술 및 새로운 형광 프로브 개발, 라이브 세포 이미징 기술은 지금 자주 사용 된다 항균 성 펩 티 드 (암페어)의 모아 공부 하. 이러한 기술을 보완 형태에 항진균 펩타이드의 효과 분석 하는 주로 고용 immunolocalization, 전자 현미경, 원자 힘 현미경 또는 x 선 단층 촬영18등 널리 사용 되는 방법 및 세포 벽 무결성, 원형질 막 permeabilization로 셀 성장/분기 패턴 변경의 연구를 포함 하 여 고 죽이 곰 팡이 세포의 성장. 그럼에도 불구 하 고, 이러한 연구는 특정 시간 시점에서 셀 defensin 도전 하 응답 그들의 동적 변화를 모니터링 하는 같은 셀에 이미징 시간 경과 수행 하는 대신 펩 티 드와 치료 후 이미징에 국한 되었습니다. 최근 몇 년 동안, 라이브 셀 이미징 confocal 현미경 검사 법을 사용 하 여 함께에서 붙일 레이블된 펩 티 드의 사용은 앰프-미생물 상호 작용의 역동성의 실시간 시각화를 활성화 하 고. 둘 다 자연스럽 게 정화 하 고 화학적으로 합성된 항진균 펩 티 드 형광 라벨 태그 될 수 있습니다 (예를 들어, DyLight, rhodamine, BODIPY, 또는 알 렉 사 Fluor 기반 염료) 직접 세포와의 상호 작용 하는 동안 시간 경과 의해 관찰 하 고 라이브 셀 이미지입니다. 이러한 펩 티 드를 표시의 사용은 크게 모드 항목, subcellular 지 방화, 세포내 매매, 및 살아있는 곰 팡이 세포 내 항진균 작업의 사이트를 포함 하 여 그들의 MOA의 다양 한 측면의 우리의 이해를 증가 18.
최근, 여러 연구 공장 defensins 포함 하는 다양 한 항진균 펩 티 드는 살고 곰 팡이 세포12,14,,1920내 면 나타났습니다. 이러한 defensins 가능성이의 MOA 세포내 목표와 상호 작용을 포함 한다. 우리 최근 두 ascomycete 버섯, Neurospora crassa 과 Fusarium graminearum에 MtDef4 defensin 식물의 항진균 액션을 보고 있다. MtDef4 곰 팡이 셀 항목 및이 균14subcellular 지 방화에 대 한 다른 경로 사용 하 여 표시 했다. 화학적으로 사용이 연구 합성 tetramethyl rhodamine (TAMRA)-중요 한 형광 염료 (막 선택적 염료, FM4-64; 막 permeant 염료, SYTOX 그린 셀 죽음 기자 염료, 요오드 화물 propidium)와 함께에서 MtDef4를 표시 하 고 신진 대사 억제제입니다. 이러한 분석의 MtDef4, 세포내 수송의 그것의 기계 장치 및 그것의 subcellular 대상14의 국제화 활동을 보여주었다.
여기, confocal 현미경 검사 법을 사용 하 여 라이브 셀 이미징에 대 한 프로토콜 제공 됩니다. 프로토콜 공장 defensin 곰 팡이 상호 작용, 특히 공부를 중요 한 형광 염료, 전 좌의 경로와 defensins 곰 팡이 세포에서의 세포내 표적 조합에 붙일 레이블된 펩 티 드를 이용 한다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>FM4-64 Dye</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>T13320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DyLight 550 Antibody Labeling Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>84530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Microwell Dishes</td>
			<td>Mat TeK</td>
			<td>P35G-1.5-10-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mira cloth</td>
			<td>EMD Millipore Corp</td>
			<td>475855-1R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP8-X confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ software</td>
			<td>FiJi</td>
			<td></td>
			<td>For Image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris software</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>For Image analysis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of fungal cells to investigate modes of entry and subcellular localization of antifungal plant defensins

작은 시스테인-부자 defensins 모든 식물에 호스트 방어 펩 티 드의 가장 큰 그룹 중 하나입니다. 많은 식물 defensins 곰 팡이 병원 균의 넓 스펙트럼에 대 한 강력한 생체 외에서 항진균 성 활동을 전시 하 고 따라서 유전자 변형 작물에 항진균 성 대리인으로 사용 될 가능성이 있다. 질병 제어를 위한 식물 defensins의 잠재력을 활용 하기 위해 그들의 행동 (MOA)의 메커니즘을 명료 하 게 결정적 이다. 고급 현미경 검사 법 기술의 도래와 함께 라이브 셀 이미징 식물 defensins의 항진균 MOA의 역학을 이해 하기 위한 강력한 도구가 되고있다. 여기, confocal 현미경 검사 법 기반 라이브 세포 이미징 방법 중요 한 형광 염료와 함께에서 두 붙일 레이블된 공장 defensins (MtDef4 및 MtDef5)를 사용 하 여 설명 합니다. 이 기술은 실시간 시각화 및 곰 팡이 세포에 MtDef4 및 MtDef5 국제화의 동적 이벤트의 분석을 수 있습니다. 중요 한 것은,이 분석 결과 다양 한 국제화 활동, 항목의 모드와 이러한 펩 티이 드의 subcellular 지 방화를 포함 하 여 정보를 생성 합니다. 다른 셀 생물 학적 도구를 이러한 방법 역학과 이러한 펩 티이 드의 MOA의 복잡성에 대 한 중요 한 통찰력 제공. 이러한 도구는 또한 다른 버섯에 대 한 이러한 펩 티이 드의 MOA 비교 하 사용할 수 있습니다.

라이브 셀 이미징 추적 하 고 국제화 및 두 defensins, MtDef4 및 MtDef5, 개자리속 truncatula;에서 subcellular 지 방화 비교 실시 되었다 버섯 모양 세포. TMR MtDef4 MtDef5 Dylight550으로 표시 했습니다 동안 합성 화학적으로 되었다 (Dylight550-MtDef5). Conidia 막 선택적 염료 FM4-64와 함께에서 어느 defensin 함께 알을 품을 했다. 그림 1 TMR MtDef4가 다른 밀매 경로 N. cra...

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Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins

식물 defensins 병원 균에 대 한 식물 방어에 중요 한 역할을 재생. 대 한 항진균 요원, 액션 (MOA)의 그들의 모드를 이해로 이러한 항진균 펩 티 드의 효과적인 사용이 중요 합니다. 여기, 라이브 세포 이미징 방법 공부 이러한 펩 티이 드의 MOA의 중요 한 측면을 설명 합니다.

조사 항목의 모드와 항진균 공장 Defensins의 Subcellular 지 방화 하는 곰 팡이 세포의 라이브 셀 이미징

Small cysteine-rich defensins are one of the largest groups of host defense peptides present in all plants. Many plant defensins exhibit potent in vitro ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

라이브 셀 이미징 및 배아 상피 세포의 정량 분석 Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

연구

생물학

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

라이브 세포의 저장소로 작동하는 칼슘 항목의 형광 기반의 측정 : 교양 암 세포에서 골격근 섬유에

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

초기 자식 작용 이벤트의 셀 이미징 라이브 : Omegasomes을 넘어

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

Scanning Electron Microscopy (SEM) Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

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문제있는 공장, 난균 강 및 곰팡이 샘플에 대한 전자 현미경 (SEM) 프로토콜을 스캔

Common problems in the processing of biological samples for observations with the scanning electron microscope (SEM) include cell collapse, treatment of ...

Utilizing pHluorin-tagged Receptors to Monitor Subcellular Localization and Trafficking

pHluorin 태그가 수용체를 활용하여하는 세포 현지화 및 인신 매매를 모니터링하기

Understanding membrane protein trafficking, assembly, and expression requires an approach that differentiates between those residing in intracellular ...

Live-cell Imaging of Platelet Degranulation and Secretion Under Flow

흐름하에있는 혈소판 탈식 및 분비의 라이브 셀 이미징

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Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures

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There has long been a crucial tradeoff between spatial and temporal resolution in imaging. Imaging beyond the diffraction limit of light has traditionally ...

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곰팡이 개체군 구조를 조사하기 위해 토양에서 배양 가능한 효모와 곰팡이를 분리합니다.

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균종속영양 식물 조직의 곰팡이 집락화 및 종자의 공생 발아를 해석하기 위한 현미경 기술

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Visualization of Cellular Interactions Between the Maize Sheaths and Fungi

Detached Maize Sheaths for Live-Cell Imaging of Infection by Fungal Foliar Maize Pathogens

Investigating Fungal Pathogenicity Mechanisms in Maize (Video) | JoVE

곰팡이 잎 옥수수 병원체에 의한 감염의 살아있는 세포 이미징을 위한 분리된 옥수수 덮개

We have optimized a protocol to inoculate maize leaf sheaths with hemibiotrophic and necrotrophic foliar pathogenic fungi. The method is modified from one ...