Name: live-cell imaging of fungal cells to investigate modes of entry and subcellular localization of antifungal plant defensins
Uploaded: 2017-12-24T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins at JoVE.com

Vi takker Dr. R. Howard Berg, direktør for integrerte mikroskopi anlegget ved Donald Danforth Plant Science Center, for hans veiledning og hjelp med AC confocal mikroskopi. Forfatterne har noen interessekonflikt å erklære.

1. merking av Defensins med Fluorophores
<ol>
	<li>Velg en fluorophore som har minimal effekt på antimikrobielle egenskapene som opptak og lokalisering av defensin i levende cellen. Merk: Å velge optimal fluorophore avhenger av spesifikke eksperimentelle mål. Spectral og kjemiske egenskaper, photostability, størrelse og kostnad på fluorophore bør også vurderes.</li>
	<li>Etiketten defensin med den valgte fluorophore ved hjelp av en passende peptid merking kit tilgjengelig fra kommersielle leverandører. Alter...

<ol>
	<li>Jones, J. D. G., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plant+immune+system.">The plant immune system.</a> Nature. 444 (7117), 323-329 (2006).</li><li>Tavormina, P., De Coninck, B., Nikonorova, N., De Smet, I., Cammue, B. P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Plant+Peptidome:+An+expanding+repertoire+of+structural+features+and+biological+functions.">The Plant Peptidome: An expanding repertoire of structural features and biological functions.</a> Plant cell. 27 (8), 2095-2118 (2015).</li><li>Van Der Weerden, N. L., Bleackley, M. R., Anderson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+and+mechanisms+of+action+of+naturally+occurring+antifungal+peptides.">Properties and mechanisms of action of naturally occurring antifungal peptides.</a> Cell. and Mol. Life Sci. 70 (19), 3545-3570 (2013).</li><li>Van der Weerden, N. L., Anderson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+defensins:+Common+fold,+multiple+functions.">Plant defensins: Common fold, multiple functions.</a> Fungal Biol Rev. 26 (4), 121-131 (2013).</li><li>De Coninck, B., Cammue, B. P. A., Thevissen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modes+of+antifungal+action+and+in+planta+functions+of+plant+defensins+and+defensin-like+peptides.">Modes of antifungal action and in planta functions of plant defensins and defensin-like peptides.</a> Fungal Biol Rev. 26 (4), 109-120 (2013).</li><li>Kaur, J., Sagaram, U. S., Shah, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+plant+defensins+be+used+to+engineer+durable+commercially+useful+fungal+resistance+in+crop+plants?.">Can plant defensins be used to engineer durable commercially useful fungal resistance in crop plants?.</a> Fungal Biol. Rev. 25 (3), 128-135 (2011).</li><li>Vriens, K., Cammue, B. P. A., Thevissen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+plant+defensins:+Mechanisms+of+action+and+production.">Antifungal plant defensins: Mechanisms of action and production.</a> Molecules. 19 (8), 12280-12303 (2014).</li><li>Sagaram, U. S., Kaur, J., Shah, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+plant+defensins:+Structure-activity+relationships,+modes+of+action,+and+biotech+applications.">Antifungal plant defensins: Structure-activity relationships, modes of action, and biotech applications.</a> ACS Symp. Ser. 1095, 317-336 (2012).</li><li>Thevissen, K., Francois, I. E. J. A., Aerts, A. M., Cammue, B. P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungal+sphingolipids+as+targets+for+the+development+of+selective+antifungal+therapeutics.">Fungal sphingolipids as targets for the development of selective antifungal therapeutics.</a> Curr. Drug Targets. 6 (8), 923-928 (2005).</li><li>Thevissen, K., Kristensen, H. H., Thomma, B. P. H. J., Cammue, B. P. A., Francois, I. E. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+antifungal+plant+and+insect+defensins.">Therapeutic potential of antifungal plant and insect defensins.</a> Drug Discov. Today. 12 (21-22), 966-971 (2007).</li><li>Aerts, A. M., Fran&#231;ois, I. E. J. A., Cammue, B. P. A., Thevissen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mode+of+antifungal+action+of+plant,+insect+and+human+defensins.">The mode of antifungal action of plant, insect and human defensins.</a> Cell. Mol. Life Sci. 65 (13), 2069-2079 (2008).</li><li>Van Der Weerden, N. L., Lay, F. T., Anderson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plant+defensin,+NaD1,+enters+the+cytoplasm+of+Fusarium+oxysporum+hyphae.">The plant defensin, NaD1, enters the cytoplasm of Fusarium oxysporum hyphae.</a> J. Biol. Chem. 283 (21), 14445-14452 (2008).</li><li>Lobo, D. S., Pereira, I. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+Pisum+sativum+Defensin+1+Interacts+with+Neurospora+crassa+Cyclin+F+Related+to+the+Cell+Cycle.">Antifungal Pisum sativum Defensin 1 Interacts with Neurospora crassa Cyclin F Related to the Cell Cycle.</a> Biochemistry. 46 (4), 987-996 (2007).</li><li>El-Mounadi, K., Islam, K. T., Hernandez-Ortiz, P., Read, N. D., Shah, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+mechanisms+of+a+plant+defensin+MtDef4+are+not+conserved+between+the+ascomycete+fungi+Neurospora+crassa+and+Fusarium+graminearum.">Antifungal mechanisms of a plant defensin MtDef4 are not conserved between the ascomycete fungi Neurospora crassa and Fusarium graminearum.</a> Mol. Microbiol. 100 (3), 542-559 (2016).</li><li>Baxter, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Tomato+Defensin+TPP3+Binds+Phosphatidylinositol+(4,5)-Bisphosphate+via+a+Conserved+Dimeric+Cationic+Grip+Conformation+To+Mediate+Cell+Lysis.">The Tomato Defensin TPP3 Binds Phosphatidylinositol (4,5)-Bisphosphate via a Conserved Dimeric Cationic Grip Conformation To Mediate Cell Lysis.</a> Mol. and Cell. Biol. 35 (11), 1964-1978 (2015).</li><li>Kvansakul, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+of+phosphatidic+acid+by+NsD7+mediates+the+formation+of+helical+defensin-lipid+oligomeric+assemblies+and+membrane+permeabilization.">Binding of phosphatidic acid by NsD7 mediates the formation of helical defensin-lipid oligomeric assemblies and membrane permeabilization.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 113, 11202-11207 (2016).</li><li>Poon, I. K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphoinositide-mediated+oligomerization+of+a+defensin+induces+cell+lysis.">Phosphoinositide-mediated oligomerization of a defensin induces cell lysis.</a> eLife. 3, e01808 (2014).</li><li>Mu&#241;oz, A., Read, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+and+analysis+shed+light+on+the+complexity+and+dynamics+of+antimicrobial+Peptide+action.">Live-cell imaging and analysis shed light on the complexity and dynamics of antimicrobial Peptide action.</a> Front. Immunol. 3, 248 (2012).</li><li>Hayes, B. M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+mechanism+of+action+of+the+plant+defensin+NaD1+as+a+new+member+of+the+antifungal+drug+arsenal+against+candida+albicans.">Identification and mechanism of action of the plant defensin NaD1 as a new member of the antifungal drug arsenal against candida albicans.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 57 (8), 3667-3675 (2013).</li><li>Mu&#241;oz, A., Marcos, J. F., Read, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentration-dependent+mechanisms+of+cell+penetration+and+killing+by+the+de+novo+designed+antifungal+hexapeptide+PAF26.">Concentration-dependent mechanisms of cell penetration and killing by the de novo designed antifungal hexapeptide PAF26.</a> Mol. Microbiol. 85 (1), 89-106 (2012).</li><li>Eaton, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+guanine+nucleotide+exchange+factor+RIC8+regulates+conidial+germination+through+G&#945;+proteins+in+Neurospora+crassa.">The guanine nucleotide exchange factor RIC8 regulates conidial germination through G&#945; proteins in Neurospora crassa.</a> PLoS One. 7 (10), e48026 (2012).</li><li>Leslie, J. F., Summerell, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Fusarium. laboratory manual. , (2006).</li><li>Broekaert, W. F., Terras, F. R. G., Cammue, B. P. A., Vanderleyden, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+quantitative+assay+for+fungal+growth+inhibition.">An automated quantitative assay for fungal growth inhibition.</a> FEMS Microbiol.Lett. 69 (1-2), 55-59 (1990).</li><li>Sagaram, U. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+studies+of+a+phosphatidic+acid-binding+antifungal+plant+defensin+MtDef4:+Identification+of+an+RGFRRR+motif+governing+fungal+cell+entry.">Structural and functional studies of a phosphatidic acid-binding antifungal plant defensin MtDef4: Identification of an RGFRRR motif governing fungal cell entry.</a> PLoS One. 8 (12), 1-22 (2013).</li><li>Uchida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soft+X-ray+tomography+of+phenotypic+switching+and+the+cellular+response+to+antifungal+peptoids+in+Candida+albicans.">Soft X-ray tomography of phenotypic switching and the cellular response to antifungal peptoids in Candida albicans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 106 (46), 19375-19380 (2009).</li><li>Nair, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Better+prediction+of+sub-cellular+localization+by+combining+evolutionary+and+structural+information.">Better prediction of sub-cellular localization by combining evolutionary and structural information.</a> Proteins Struct. Funct. Bioinform. 53 (4), 917-930 (2003).</li><li>Scott, M. S., Calafell, S. J., Thomas, D. Y., Hallett, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refining+protein+subcellular+localization.">Refining protein subcellular localization.</a> PLoS Comput. Biol. 1 (6), e66 (2005).</li><li>Shagaghi, N., Bhave, M., Palombo, E., Clayton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revealing+the+sequence+of+interactions+of+PuroA+peptide+with+Candida+albicans+cells+by+live-cell+imaging.">Revealing the sequence of interactions of PuroA peptide with Candida albicans cells by live-cell imaging.</a> Sci. Rep. 7, 43542 (2017).</li></ol>

I denne studien var en pålitelig live-celle bildebehandling metode med bruk av fluorescently merket soppdrepende defensins beskrevet å studere the kinetics av internalisering av disse peptider i fungal cellene og å finne sine subcellular mål. Denne metoden er et kraftig verktøy for å visualisere dynamikken i samspillet mellom defensins og fungal cellene timelig og romlig.
Ulike metoder har blitt brukt til å studere internalisering og intracellulær lokalisering av anlegg defensins i fun...

Planter har utviklet et sofistikert medfødte immunsystem forsvar mot microbial plante patogener1. De uttrykke mange gen-kodet vert forsvar peptider med antatte antimikrobielle aktivitet2. Faktisk, mange av disse peptider vise antimikrobielle aktivitet i vitro3. Defensins utgjør en av de største gruppene av vert forsvar peptider i anlegget rike4. Disse cystein-rik, kationisk peptider utstillingen potente vekst hemmende aktivitet mot sopp og oomycete patogener micromolar konsentrasjoner og representerer en av de første linjene av forsvar mot disse patogener5,6. På grunn av sin potente soppdrepende aktivitet, kan defensins utnyttes i agribiotechnological programmer for å generere sykdom avlinger. Grunnleggende overuttrykte flere anlegg defensins har vist seg å forbedre sykdomsresistens i drivhus og feltet testene paradoks6. Det er viktig å løse virkningsmekanismer (MOA) av disse antifungal peptider å fullt utnytte sitt potensial som effektive verktøy for avlingsvern. Imidlertid er MOA av disse plante defensins dårlig forstått. Gjeldende bevis antyder at de viser ulike MOA5,6,7,8. Noen defensins handle extracellularly på sopp og målrette bestemte cellen vegg/plasma membran bosatt sphingolipider, forstyrre membran integritet og aktivere cellulære toksisitet trasé9,10,11. Nylig imidlertid har soppdrepende defensins som translocate i fungal cellene vært oppdaget12,13,14. Noen av disse defensins binde til membran-resident bioaktive fosfolipider, danne oligomeric komplekser og permeabilize plasma membraner15,16,17. Dermed har noen aspekter av MOA av anlegget defensins utredet. Men innebære MOA av anlegget defensins sannsynlig et komplekst sett av hendelser som ennå ikke er identifisert og integrert i en omfattende modell. Spesielt er det fortsatt et stort gap i vår forståelse av mobilnettet målene av disse peptider.
Med nylige fremskritt i mikroskopi teknologi og utvikling av nye fluorescerende sonder brukes live-celle Bildeteknikker nå ofte til å studere MOA av antimikrobielle peptider (ampere). Disse teknikkene utfylle brukte metoder som immunolocalization, elektronmikroskop, atomic force mikroskopi eller X-ray tomografi18, som har vært ansatt hovedsakelig for å analysere effekten av soppdrepende peptider på morfologi og veksten av fungal cellene inkludert studiet av cellevegg integritet, endringer i celle vekst/forgrening mønstre, samt plasma membran permeabilization og drepe. Likevel, disse studiene har vært begrenset til imaging celler på et bestemt tidspunkt etter behandling med peptider i stedet for å utføre time-lapse imaging i de samme cellene til å overvåke deres dynamiske endringer i respons til defensin utfordring. De siste årene, har bruken av fluorescently merket peptider i forbindelse med levende celle imaging bruker AC confocal mikroskopi aktivert sanntids visualisering av dynamikken i AMP-mikrobe interaksjoner. Både naturlig renset og kjemisk syntetisert soppdrepende peptider kan være merket med fluorescerende (f.eks, DyLight, rhodamine, BODIPY eller Alexa Fluor basert fargestoffer) og direkte observert under deres samhandling med celler av time-lapse Live-celle bildebehandling. Bruk av dette merket peptider har betydelig økt vår forståelse av de ulike aspektene ved deres MOA inkludert oppføring, subcellular lokalisering, intracellulær smugling og nettsteder av soppdrepende handling i levende fungal cellene 18.
Flere studier har nylig vist at ulike soppdrepende peptider inkludert anlegget defensins er internalisert bor fungal cellene12,14,19,20. MOA av disse defensins sannsynlig innebære interaksjon med intracellulære mål. Vi har nylig rapportert soppdrepende handlingen av en plante defensin MtDef4 i to ascomycete sopp, Neurospora crassa og Fusarium graminearum. MtDef4 ble vist å bruke ulike veier for sopp celleoppføring og subcellular lokalisering i disse sopp14. Denne studien brukte kjemisk syntetisert tetramethyl rhodamine (TAMRA)-merket MtDef4 i kombinasjon med viktig fluorescerende fargestoffer (membran selektiv fargestoff, FM4-64, membran-permeant fargestoff, SYTOX Green, celle død reporter fargestoff, propidium iodide) og Metabolsk hemmere. Disse analysene viste the kinetics av internalisering MtDef4, dens mekanismer for intracellulær transport og dens subcellular mål14.
Her, er en protokoll live-celle bildevisning AC confocal mikroskopi presentert. Protokollen utnytter fluorescently merket peptider i kombinasjon med viktig fluorescerende fargestoffer å studere anlegget defensin-fungal samspill, spesielt, veier av translokasjon og intracellulær mål for defensins i fungal cellene.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>FM4-64 Dye</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>T13320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DyLight 550 Antibody Labeling Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>84530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Microwell Dishes</td>
			<td>Mat TeK</td>
			<td>P35G-1.5-10-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mira cloth</td>
			<td>EMD Millipore Corp</td>
			<td>475855-1R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP8-X confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ software</td>
			<td>FiJi</td>
			<td></td>
			<td>For Image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris software</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>For Image analysis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of fungal cells to investigate modes of entry and subcellular localization of antifungal plant defensins

Liten cystein-rik defensins er en av de største gruppene av vert forsvar peptider i alle planter. Mange anlegg defensins exhibit potente i vitro soppdrepende aktivitet mot et bredt spekter av sopp patogener og derfor har potensial til å bli brukt som soppdrepende midler i paradoks. For å utnytte det fulle potensialet av anlegget defensins for sykdommer kontroll, er det avgjørende å belyse deres virkningsmekanismer (MOA). Med bruk av avansert mikroskopi teknikker, har live-celle bildebehandling blitt et kraftig verktøy for å forstå dynamikken i soppdrepende MOA av anlegget defensins. Her beskrives en AC confocal mikroskopi basert live-celle bildebehandling metode med to fluorescently merket anlegget defensins (MtDef4 og MtDef5) i kombinasjon med viktig fluorescerende fargestoffer. Denne teknikken gir sanntids visualisering og analyse av dynamisk hendelsene i MtDef4 og MtDef5 internalisering i fungal cellene. Viktigere, genererer denne analysen et vell av informasjon, inkludert internalisering kinetikk, modus av oppføringen og subcellular lokalisering av disse peptider. Andre cellen biologiske verktøy, har disse metodene gitt kritisk innsikt i dynamikken og kompleksiteten av MOA av disse peptider. Disse verktøyene kan også brukes til å sammenligne MOA av disse peptider mot ulike sopp.

Live celle imaging ble utført å spore og sammenligne internalisering og subcellular lokalisering av to defensins, MtDef4 og MtDef5, fra Medicago truncatula; i fungal cellene. TMR-MtDef4 var kjemisk syntetisert mens MtDef5 var merket med Dylight550 (Dylight550-MtDef5). Conidia ble inkubert med enten defensin i kombinasjon med membran selektiv fargestoff FM4-64. Figur 1 viser at TMR-MtDef4 har ulike menneskehandel veier i N. crassa forhold t...

Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins at JoVE.com

Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins

Anlegget defensins spille en viktig rolle i anlegget forsvar mot patogener. For effektiv bruk av disse antifungal peptider som soppdrepende midler, forstå deres moduser handling (MOA) er kritisk. Her er en live-celle bildebehandling metode beskrevet for å studere viktige sider ved MOA av disse peptider.

Live-celle avbilding av Fungal cellene å undersøke moduser av oppføringen og Subcellular lokalisering av soppdrepende anlegget Defensins

Small cysteine-rich defensins are one of the largest groups of host defense peptides present in all plants. Many plant defensins exhibit potent in vitro ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Fluorescens-basert Måling av Store-opererte Calcium Entry i levende celler: fra Helstøpt Cancer Cell til Skeletal Muscle Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

Leve Cell Imaging av Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

Scanning Electron Microscopy (SEM) Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

Scanning Electron Microscopy SEM Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

Skanning elektronmikroskopi (SEM) Protokoller for Problema Plant, eggsporesopper, og Fungal Samples

Common problems in the processing of biological samples for observations with the scanning electron microscope (SEM) include cell collapse, treatment of ...

Utilizing pHluorin-tagged Receptors to Monitor Subcellular Localization and Trafficking

Utnytte pHluorin-merket reseptorer å overvåke subcellulære lokalisering og menneskehandel

Understanding membrane protein trafficking, assembly, and expression requires an approach that differentiates between those residing in intracellular ...

Live-cell Imaging of Platelet Degranulation and Secretion Under Flow

Levende celle-bildebehandling av blodplategradering og sekresjon under strømning

Blood platelets are essential players in hemostasis, the formation of thrombi to seal vascular breaches. They are also involved in thrombosis, the ...

Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures

Superoppløsning live celleavbildning av subcellulære strukturer

There has long been a crucial tradeoff between spatial and temporal resolution in imaging. Imaging beyond the diffraction limit of light has traditionally ...

Isolation of Culturable Yeasts and Molds from Soils to Investigate Fungal Population Structure

Isolering av dyrkbar gjær og mugg fra jord for å undersøke sopppopulasjonsstruktur

Soil is host to an incredible amount of microbial life, with each gram containing up to billions of bacterial, archaeal, and fungal cells. Multicellular ...

Microscopy Techniques for Interpreting Fungal Colonization in Mycoheterotrophic Plants Tissues and Symbiotic Germination of Seeds

Mikroskopi teknikker for tolkning av soppkolonisering i mykoheterotrofe plantevev og symbiotisk spiring av frø

Structural botany is an indispensable perspective to fully understand the ecology, physiology, development, and evolution of plants. When researching ...

Visualization of Cellular Interactions Between the Maize Sheaths and Fungi

Detached Maize Sheaths for Live-Cell Imaging of Infection by Fungal Foliar Maize Pathogens

Investigating Fungal Pathogenicity Mechanisms in Maize (Video) | JoVE

Frittliggende maiskjeder for levende celleavbildning av infeksjon av soppbladmaispatogener

We have optimized a protocol to inoculate maize leaf sheaths with hemibiotrophic and necrotrophic foliar pathogenic fungi. The method is modified from one ...