Name: live-cell imaging of fungal cells to investigate modes of entry and subcellular localization of antifungal plant defensins
Uploaded: 2017-12-24T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins at JoVE.com

Vi tackar Dr. R. Howard Berg, direktör för integrerad mikroskopi anläggningen på Donald Danforth Plant Science Center, för hans vägledning och hjälp med konfokalmikroskopi. Författarna har ingen intressekonflikt att deklarera.

1. märkning av Defensins med Fluorophores
<ol>
	<li>Välj en fluorophore som har minsta effekt på de antimikrobiella egenskaperna samt upptag och lokalisering av defensin inuti den levande cellen. Obs: Att välja optimala fluorophore beror på särskilda experimentella mål. Den spektrala och kemiska egenskaper, photostability, storlek och kostnad av fluorophore bör också övervägas.</li>
	<li>Etiketten defensin med valda fluorophore med en lämplig peptid märkning kit finns från kommersiella leverantörer. A...

<ol>
	<li>Jones, J. D. G., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plant+immune+system.">The plant immune system.</a> Nature. 444 (7117), 323-329 (2006).</li><li>Tavormina, P., De Coninck, B., Nikonorova, N., De Smet, I., Cammue, B. P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Plant+Peptidome:+An+expanding+repertoire+of+structural+features+and+biological+functions.">The Plant Peptidome: An expanding repertoire of structural features and biological functions.</a> Plant cell. 27 (8), 2095-2118 (2015).</li><li>Van Der Weerden, N. L., Bleackley, M. R., Anderson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+and+mechanisms+of+action+of+naturally+occurring+antifungal+peptides.">Properties and mechanisms of action of naturally occurring antifungal peptides.</a> Cell. and Mol. Life Sci. 70 (19), 3545-3570 (2013).</li><li>Van der Weerden, N. L., Anderson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+defensins:+Common+fold,+multiple+functions.">Plant defensins: Common fold, multiple functions.</a> Fungal Biol Rev. 26 (4), 121-131 (2013).</li><li>De Coninck, B., Cammue, B. P. A., Thevissen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modes+of+antifungal+action+and+in+planta+functions+of+plant+defensins+and+defensin-like+peptides.">Modes of antifungal action and in planta functions of plant defensins and defensin-like peptides.</a> Fungal Biol Rev. 26 (4), 109-120 (2013).</li><li>Kaur, J., Sagaram, U. S., Shah, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+plant+defensins+be+used+to+engineer+durable+commercially+useful+fungal+resistance+in+crop+plants?.">Can plant defensins be used to engineer durable commercially useful fungal resistance in crop plants?.</a> Fungal Biol. Rev. 25 (3), 128-135 (2011).</li><li>Vriens, K., Cammue, B. P. A., Thevissen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+plant+defensins:+Mechanisms+of+action+and+production.">Antifungal plant defensins: Mechanisms of action and production.</a> Molecules. 19 (8), 12280-12303 (2014).</li><li>Sagaram, U. S., Kaur, J., Shah, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+plant+defensins:+Structure-activity+relationships,+modes+of+action,+and+biotech+applications.">Antifungal plant defensins: Structure-activity relationships, modes of action, and biotech applications.</a> ACS Symp. Ser. 1095, 317-336 (2012).</li><li>Thevissen, K., Francois, I. E. J. A., Aerts, A. M., Cammue, B. P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungal+sphingolipids+as+targets+for+the+development+of+selective+antifungal+therapeutics.">Fungal sphingolipids as targets for the development of selective antifungal therapeutics.</a> Curr. Drug Targets. 6 (8), 923-928 (2005).</li><li>Thevissen, K., Kristensen, H. H., Thomma, B. P. H. J., Cammue, B. P. A., Francois, I. E. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+antifungal+plant+and+insect+defensins.">Therapeutic potential of antifungal plant and insect defensins.</a> Drug Discov. Today. 12 (21-22), 966-971 (2007).</li><li>Aerts, A. M., Fran&#231;ois, I. E. J. A., Cammue, B. P. A., Thevissen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mode+of+antifungal+action+of+plant,+insect+and+human+defensins.">The mode of antifungal action of plant, insect and human defensins.</a> Cell. Mol. Life Sci. 65 (13), 2069-2079 (2008).</li><li>Van Der Weerden, N. L., Lay, F. T., Anderson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plant+defensin,+NaD1,+enters+the+cytoplasm+of+Fusarium+oxysporum+hyphae.">The plant defensin, NaD1, enters the cytoplasm of Fusarium oxysporum hyphae.</a> J. Biol. Chem. 283 (21), 14445-14452 (2008).</li><li>Lobo, D. S., Pereira, I. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+Pisum+sativum+Defensin+1+Interacts+with+Neurospora+crassa+Cyclin+F+Related+to+the+Cell+Cycle.">Antifungal Pisum sativum Defensin 1 Interacts with Neurospora crassa Cyclin F Related to the Cell Cycle.</a> Biochemistry. 46 (4), 987-996 (2007).</li><li>El-Mounadi, K., Islam, K. T., Hernandez-Ortiz, P., Read, N. D., Shah, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+mechanisms+of+a+plant+defensin+MtDef4+are+not+conserved+between+the+ascomycete+fungi+Neurospora+crassa+and+Fusarium+graminearum.">Antifungal mechanisms of a plant defensin MtDef4 are not conserved between the ascomycete fungi Neurospora crassa and Fusarium graminearum.</a> Mol. Microbiol. 100 (3), 542-559 (2016).</li><li>Baxter, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Tomato+Defensin+TPP3+Binds+Phosphatidylinositol+(4,5)-Bisphosphate+via+a+Conserved+Dimeric+Cationic+Grip+Conformation+To+Mediate+Cell+Lysis.">The Tomato Defensin TPP3 Binds Phosphatidylinositol (4,5)-Bisphosphate via a Conserved Dimeric Cationic Grip Conformation To Mediate Cell Lysis.</a> Mol. and Cell. Biol. 35 (11), 1964-1978 (2015).</li><li>Kvansakul, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+of+phosphatidic+acid+by+NsD7+mediates+the+formation+of+helical+defensin-lipid+oligomeric+assemblies+and+membrane+permeabilization.">Binding of phosphatidic acid by NsD7 mediates the formation of helical defensin-lipid oligomeric assemblies and membrane permeabilization.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 113, 11202-11207 (2016).</li><li>Poon, I. K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphoinositide-mediated+oligomerization+of+a+defensin+induces+cell+lysis.">Phosphoinositide-mediated oligomerization of a defensin induces cell lysis.</a> eLife. 3, e01808 (2014).</li><li>Mu&#241;oz, A., Read, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+and+analysis+shed+light+on+the+complexity+and+dynamics+of+antimicrobial+Peptide+action.">Live-cell imaging and analysis shed light on the complexity and dynamics of antimicrobial Peptide action.</a> Front. Immunol. 3, 248 (2012).</li><li>Hayes, B. M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+mechanism+of+action+of+the+plant+defensin+NaD1+as+a+new+member+of+the+antifungal+drug+arsenal+against+candida+albicans.">Identification and mechanism of action of the plant defensin NaD1 as a new member of the antifungal drug arsenal against candida albicans.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 57 (8), 3667-3675 (2013).</li><li>Mu&#241;oz, A., Marcos, J. F., Read, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concentration-dependent+mechanisms+of+cell+penetration+and+killing+by+the+de+novo+designed+antifungal+hexapeptide+PAF26.">Concentration-dependent mechanisms of cell penetration and killing by the de novo designed antifungal hexapeptide PAF26.</a> Mol. Microbiol. 85 (1), 89-106 (2012).</li><li>Eaton, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+guanine+nucleotide+exchange+factor+RIC8+regulates+conidial+germination+through+G&#945;+proteins+in+Neurospora+crassa.">The guanine nucleotide exchange factor RIC8 regulates conidial germination through G&#945; proteins in Neurospora crassa.</a> PLoS One. 7 (10), e48026 (2012).</li><li>Leslie, J. F., Summerell, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Fusarium. laboratory manual. , (2006).</li><li>Broekaert, W. F., Terras, F. R. G., Cammue, B. P. A., Vanderleyden, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+quantitative+assay+for+fungal+growth+inhibition.">An automated quantitative assay for fungal growth inhibition.</a> FEMS Microbiol.Lett. 69 (1-2), 55-59 (1990).</li><li>Sagaram, U. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+studies+of+a+phosphatidic+acid-binding+antifungal+plant+defensin+MtDef4:+Identification+of+an+RGFRRR+motif+governing+fungal+cell+entry.">Structural and functional studies of a phosphatidic acid-binding antifungal plant defensin MtDef4: Identification of an RGFRRR motif governing fungal cell entry.</a> PLoS One. 8 (12), 1-22 (2013).</li><li>Uchida, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soft+X-ray+tomography+of+phenotypic+switching+and+the+cellular+response+to+antifungal+peptoids+in+Candida+albicans.">Soft X-ray tomography of phenotypic switching and the cellular response to antifungal peptoids in Candida albicans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 106 (46), 19375-19380 (2009).</li><li>Nair, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Better+prediction+of+sub-cellular+localization+by+combining+evolutionary+and+structural+information.">Better prediction of sub-cellular localization by combining evolutionary and structural information.</a> Proteins Struct. Funct. Bioinform. 53 (4), 917-930 (2003).</li><li>Scott, M. S., Calafell, S. J., Thomas, D. Y., Hallett, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refining+protein+subcellular+localization.">Refining protein subcellular localization.</a> PLoS Comput. Biol. 1 (6), e66 (2005).</li><li>Shagaghi, N., Bhave, M., Palombo, E., Clayton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revealing+the+sequence+of+interactions+of+PuroA+peptide+with+Candida+albicans+cells+by+live-cell+imaging.">Revealing the sequence of interactions of PuroA peptide with Candida albicans cells by live-cell imaging.</a> Sci. Rep. 7, 43542 (2017).</li></ol>

I denna studie beskrevs en tillförlitlig live-cell bildgivande metod med användning av fluorescently märkt svampdödande defensins att studera kinetiken för internalisering av dessa peptider i svampceller och bestämma deras subcellulär mål. Denna metod är ett kraftfullt verktyg för att visualisera dynamiken i samspelet mellan defensins och svampceller temporally och rumsligt.
Olika metoder har använts för att studera internalisering och intracellulära lokalisering av anläggningen ...

Växter har utvecklats en sofistikerad medfödda immunsystemet för försvar mot mikrobiell växt patogener1. De uttrycker många gen-kodade värden försvar peptider med förmodad antimikrobiell aktivitet2. Faktiskt, många av dessa peptider Visa antimikrobiell aktivitet in vitro-3. Defensins utgör en av de största grupperna av värd försvar peptider i växt riket4. Dessa cystein-rika, katjoniska peptider uppvisar potent tillväxt hämmande aktivitet mot svamp och oomycete patogener på mikromolära koncentrationer och utgör en av de första raderna i försvar mot dessa patogener5,6. På grund av deras potent antifungal aktivitet, kan defensins utnyttjas i agribiotechnological applikationer att generera sjukdomsresistenta grödor. Konstituerande överuttryck av flera växt defensins har visat sig förbättra motståndskraft mot sjukdomar i växthus och fältet test av transgena grödor6. Det är viktigt att nysta verkningsmekanismer (MOA) av dessa svampdödande peptider för att fullt ut utnyttja deras potential som effektiva verktyg för växtskydd. Dock är MOA av dessa växt-defensins dåligt känd. Aktuella bevis tyder på att de uppvisar olika MOA5,6,7,8. Vissa defensins agera extracellularly på svampar och rikta specifika cellväggen platt membran bosatt Sfingolipider, störa membran integritet och aktivera cellulär toxicitet vägar9,10,11. Nyligen, svampdödande defensins som translocate in svampceller har dock upptäckt12,13,14. Några av dessa defensins binder till membran-resident bioaktiva fosfolipider, bildar Oligomera komplex och permeabilize plasma membran15,16,17. Alltså, vissa aspekter av MOA av växten defensins har klargjorts. Dock innebära MOA av växten defensins sannolikt en komplex uppsättning händelser som ännu inte har identifierats och integreras i en omfattande modell. I synnerhet fortfarande finns det en stor lucka i vår förståelse av de cellulära målen i dessa peptider.
Senaste framstegen inom mikroskopi teknik och utveckling av nya fluorescerande sonder används live-cell avbildningstekniker nu ofta för att studera MOA av antimikrobiella peptider (ampere). Dessa tekniker komplettera allmänt använda metoder såsom immunolocalization, elektronmikroskopi, atomic force microscopy eller röntgen datortomografi18, som har använts mest för att analysera effekterna av svampdödande peptider på Morfologi och tillväxten av svamp celler inklusive studien av cellväggen integritet, förändringar i cell tillväxt/förgrening mönster, liksom plasmamembranet vilket och döda. Dessa studier har dock begränsats till imaging celler vid en viss tid efter behandling med peptiderna i stället för att utföra time-lapse imaging på samma celler att övervaka deras dynamiska förändringar i svar på defensin utmaning. Under de senaste åren har användningen av fluorescently märkt peptider i samband med levande cell imaging använder konfokalmikroskopi aktiverat realtid visualisering av dynamiken i AMP – mikrobinteraktioner. Både naturligt renat och kemiskt syntetiserade svampdödande peptider kan vara märkta med fluorescerande etiketter (t.ex., DyLight, rodamin, BODIPY eller Alexa Fluor baserat färgämnen) och direkt observeras under deras interaktion med celler av time-lapse Live-cell imaging. Användning av dessa märkt peptider har ökat vår förståelse av de olika aspekterna av deras MOA inklusive läge av posten, subcellulär lokalisering, intracellulära människohandel och platser av svampdödande åtgärder inom levande svampceller avsevärt 18.
Nyligen har visat flera studier att olika svampdödande peptider inklusive växt defensins är internaliserad av living svampceller12,14,19,20. MOA av dessa defensins sannolikt innebär interaktion med intracellulära mål. Vi har nyligen rapporterat svampdödande effekten av en växt som defensin MtDef4 i två ascomycete svampar, Neurospora crassa och Fusarium graminearum. MtDef4 visades att använda olika vägar för svamp cellinmatning och subcellulär lokalisering i dessa svampar14. Denna studie använde kemiskt syntetiserade tetrametyl rodamin (TAMRA)-märkt MtDef4 i kombination med vitala fluorescerande färgämnen (membran selektiv färga, FM4-64, membran-diffusionskoefficient dye, SYTOX Green, cell death reporter färgämnet, propidium jodid) och metaboliska hämmare. Dessa analyser visat kineticsen av internalisering av MtDef4, dess mekanismer av intracellulära transport och dess subcellulär mål14.
Här, presenteras ett protokoll för live-cell bildåtergivning med konfokalmikroskopi. Protokollet använder tredjeparts fluorescently märkt peptider i kombination med vitala fluorescerande färgämnen att studera växt defensin-svamp interaktioner, i synnerhet, vägarna i flyttning och de intracellulära mål av defensins i svampceller.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>FM4-64 Dye</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>T13320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DyLight 550 Antibody Labeling Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>84530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Microwell Dishes</td>
			<td>Mat TeK</td>
			<td>P35G-1.5-10-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mira cloth</td>
			<td>EMD Millipore Corp</td>
			<td>475855-1R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP8-X confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ software</td>
			<td>FiJi</td>
			<td></td>
			<td>For Image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris software</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>For Image analysis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of fungal cells to investigate modes of entry and subcellular localization of antifungal plant defensins

Liten cystein-rika defensins är en av de största grupperna av värd försvar peptider finns i alla växter. Många växt defensins uppvisar potent i vitro antifungal aktivitet mot ett brett spektrum av svamp patogener och har därför potential att användas som antimykotika i transgena grödor. För att utnyttja den fulla potentialen av växten defensins för sjukdomar kontroll, är det viktigt att belysa deras verkningsmekanismer (MOA). Med tillkomsten av avancerad mikroskopi tekniker, har live-cell imaging blivit ett kraftfullt verktyg för att förstå dynamiken i den svampdödande MOA av växten defensins. Här, beskrivs en konfokalmikroskopi baserat live-cell imaging metoden med två fluorescently märkt växt defensins (MtDef4 och MtDef5) i kombination med vitala fluorescerande färgämnen. Denna teknik möjliggör realtid visualisering och analys av dynamiska händelser av MtDef4 och MtDef5 internalisering in svampceller. Viktigast av allt, genererar denna analys en mängd information, inklusive internalisering kinetik, funktionsläget av posten och subcellulär lokalisering av dessa peptider. Tillsammans med andra cell biologiska verktyg, har dessa metoder gett viktiga insikter om dynamiken och komplexiteten i MOA av dessa peptider. Dessa verktyg kan också användas för att jämföra MOA av dessa peptider mot olika svampar.

Levande cellen imaging genomfördes att spåra och jämföra internalisering och subcellulär lokalisering av två defensins, MtDef4 och MtDef5, från Medicago truncatula; i svampceller. TMR-MtDef4 var kemiskt syntetiserade medan MtDef5 var märkt med Dylight550 (Dylight550-MtDef5). Conidia inkuberades med antingen defensin i kombination med membran selektiv färga FM4-64. Figur 1 visar att TMR-MtDef4 har olika människohandel vägar i N. crassa<...

Watch this Scientific Journal Video about Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins at JoVE.com

Live-cell Imaging of Fungal Cells to Investigate Modes of Entry and Subcellular Localization of Antifungal Plant Defensins

Anläggningen defensins spela en viktig roll i växten försvar mot patogener. För effektiv användning av dessa svampdödande peptider som antimykotika, förstå deras verkningssätt (MOA) är kritisk. Här, beskrivs en live-cell bildgivande metod för att studera kritiska aspekter av MOA av dessa peptider.

Live-cell avbildning av svampceller att undersöka lägen träder och subcellulär lokalisering av svampdödande växt Defensins

Small cysteine-rich defensins are one of the largest groups of host defense peptides present in all plants. Many plant defensins exhibit potent in vitro ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Live-cell imaging och kvantitativ analys av embryonala epitelceller i Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Fluorescens-baserad Mätning av Store-drivs kalcium Entry i levande celler: från odlade Cancer Cell till skelettmuskulatur Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

Levande cell imaging av Early autophagy Evenemang: Omegasomes och Beyond

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

Scanning Electron Microscopy (SEM) Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

Scanning Electron Microscopy SEM Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

Svepelektronmikroskopi (SEM) Protokoll för Problematiskt Plant, Algsvampar, och Svamp Prover

Common problems in the processing of biological samples for observations with the scanning electron microscope (SEM) include cell collapse, treatment of ...

Utilizing pHluorin-tagged Receptors to Monitor Subcellular Localization and Trafficking

Med hjälp av pHluorin-märkta receptorer för att övervaka subcellulära lokalisering och handel

Understanding membrane protein trafficking, assembly, and expression requires an approach that differentiates between those residing in intracellular ...

Live-cell Imaging of Platelet Degranulation and Secretion Under Flow

Live-cellbildning av blodplättdiplanering och utsöndring under flöde

Blood platelets are essential players in hemostasis, the formation of thrombi to seal vascular breaches. They are also involved in thrombosis, the ...

Super-Resolution Live Cell Imaging of Subcellular Structures

Superupplösning Live Cell Imaging av subcellulära strukturer

There has long been a crucial tradeoff between spatial and temporal resolution in imaging. Imaging beyond the diffraction limit of light has traditionally ...

Isolation of Culturable Yeasts and Molds from Soils to Investigate Fungal Population Structure

Isolering av odlingsbara jästar och mögel från jordar för att undersöka svamppopulationsstruktur

Soil is host to an incredible amount of microbial life, with each gram containing up to billions of bacterial, archaeal, and fungal cells. Multicellular ...

Microscopy Techniques for Interpreting Fungal Colonization in Mycoheterotrophic Plants Tissues and Symbiotic Germination of Seeds

Mikroskopitekniker för tolkning av svampkolonisering i mykoheterotrofa växtvävnader och symbiotisk spiring av frön

Structural botany is an indispensable perspective to fully understand the ecology, physiology, development, and evolution of plants. When researching ...

Visualization of Cellular Interactions Between the Maize Sheaths and Fungi

Detached Maize Sheaths for Live-Cell Imaging of Infection by Fungal Foliar Maize Pathogens

Investigating Fungal Pathogenicity Mechanisms in Maize (Video) | JoVE

Löstagbara majshöljen för avbildning av levande celler av infektion orsakad av bladsvampspatogener för majs

We have optimized a protocol to inoculate maize leaf sheaths with hemibiotrophic and necrotrophic foliar pathogenic fungi. The method is modified from one ...