Name: a morphometric and cellular analysis method for the murine mandibular condyle
Uploaded: 2018-01-11T12:30:00
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Os autores gostaria de agradecer Dr. David Rowe para gentilmente fornecer os ratos transgénicos e Li Chen pela assistência histológica.
A pesquisa reportada nesta publicação foi apoiada pelo Instituto Nacional de Dental & pesquisa Craniofacial do institutos nacionais da saúde sob prêmio número K08DE025914 e pela Associação Americana de fundação ortodôntico para Sumit Yadav.

Comitê institucional cuidados de animais do centro de saúde da Universidade de Connecticut aprovou todos os procedimentos de animais.
1. compressão estática TMJ carregamento: Boca forçada a abrir
Nota: Ratos transgénicos quatro semanas de idade, abrigando fluorescentes repórteres para colágeno (Col2a1XCol10a1), gentilmente cedidos pelo Dr. David Rowe (Universidade de Connecticut), foram utilizados para os experimentos descritos neste manuscrito (n = 8; 4 macho...

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	<li>LeResche, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+Temporomandibular+Disorders:+Implications+for+the+Investigation+of+Etiologic+Factors.">Epidemiology of Temporomandibular Disorders: Implications for the Investigation of Etiologic Factors.</a> Crit Rev Oral Biol Med. 8 (3), 291-305 (1997).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+functional+loading+causes+differential+effects+in+the+subchondral+bone+and+condylar+cartilage+in+the+temporomandibular+joint+from+young+mice.">Altered functional loading causes differential effects in the subchondral bone and condylar cartilage in the temporomandibular joint from young mice.</a> Osteoarthr Cartil. 17 (3), 354-361 (2009).</li><li>Pirttiniemi, P., Kantomaa, T., Sorsa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+decreased+loading+on+the+metabolic+activity+of+the+mandibular+condylar+cartilage+in+the+rat.">Effect of decreased loading on the metabolic activity of the mandibular condylar cartilage in the rat.</a> Eur J Orthod. 26 (1), 1-5 (2004).</li><li>Chavan, S. J., Bhad, W. A., Doshi, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+temporomandibular+joint+changes+in+Twin+Block+and+Bionator+appliance+therapy:+a+magnetic+resonance+imaging+study.">Comparison of temporomandibular joint changes in Twin Block and Bionator appliance therapy: a magnetic resonance imaging study.</a> Prog Orthod. 15 (57), (2014).</li><li>Dutra, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+Matrix+Response+of+the+Mandibular+Condylar+Cartilage+to+Botulinum+Toxin.">Cellular and Matrix Response of the Mandibular Condylar Cartilage to Botulinum Toxin.</a> PLoS ONE. 11 (10), 0164599 (2016).</li><li>Benjamin, M., Ralphs, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+fibrocartilage+cells.">Biology of fibrocartilage cells.</a> Int Rev Cytol. 233, 1-45 (2004).</li><li>Shen, G., Darendeliler, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Adaptive+Remodeling+of+Condylar+Cartilage-+A+Transition+from+Chondrogenesis+to+Osteogenesis.">The Adaptive Remodeling of Condylar Cartilage- A Transition from Chondrogenesis to Osteogenesis.</a> J Dent Res. 84 (8), 691-699 (2005).</li><li>Utreja, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+and+matrix+response+of+temporomandibular+cartilage+to+mechanical+loading.">Cell and matrix response of temporomandibular cartilage to mechanical loading.</a> Osteoarthr Cartil. 24 (2), 335-344 (2016).</li><li>Kaul, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Altered+Loading+on+Mandibular+Condylar+Cartilage.">The Effect of Altered Loading on Mandibular Condylar Cartilage.</a> PLoS ONE. 11 (7), 0160121 (2016).</li><li>Dyment, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Throughput,+Multi-Image+Cryohistology+of+Mineralized+Tissues.">High-Throughput, Multi-Image Cryohistology of Mineralized Tissues.</a> J Vis Exp. , e54468 (2016).</li><li>Kawamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+new+adhesive+film+for+the+preparation+of+multi-purpose+fresh-frozen+sections+from+hard+tissues,+whole-animals,+insects+and+plants.">Use of a new adhesive film for the preparation of multi-purpose fresh-frozen sections from hard tissues, whole-animals, insects and plants.</a> Arch Histol Cytol. 66 (2), 123-143 (2003).</li><li>Hayman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tartrate-resistant+acid+phosphatase+(TRAP)+and+the+osteoclast/immune+cell+dichotomy.">Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) and the osteoclast/immune cell dichotomy.</a> Autoimmunity. 41 (3), 218-223 (2008).</li></ol>

Este manuscrito descreve métodos para a medição de morfometria e análise celular dos côndilos mandibulares murino e mandíbulas. As medições radiográficas morfométricas também podem ser usadas para analisar outros ossos de pequenos animais experimentais. Além disso, a análise celular (célula quantificação e mapeamento de distância de cartilagem) não estão limitada a do côndilo mandibular roedor, mas pode ser usado para quantificar a cortes histológicos de tecidos diversos.
...

A TMJ é uma articulação de carga exclusiva localizada na região craniofacial e é formada de fibrocartilagem. O MCC da TMJ é essencial para a função da articulação, incluindo o movimento da mandíbula sem impedimentos ao falar e mastigar, mas geralmente é afetado por doenças degenerativas, incluindo osteoartrite1. A TMJ tem a capacidade de adaptação a estímulos externos e alterações de carga, levando a alterações estruturais e celulares para os componentes do MCC2,3,4,5. As propriedades de carga do MCC podem ser explicadas pelas interações entre seus componentes, incluindo a água, a rede de colágeno e densamente proteoglicanos. O MCC tem quatro zonas distintas de celulares que expressam diferentes tipos de proteínas de colágeno e não-colágeno: 1) a zona superficial ou articular; 2) a zona proliferativa, composta de células mesenquimais indiferenciadas e que responde ao carregar as demandas; 3) a zona de prehypertrophic, composto de condrócitos maduros expressando colágeno tipo 2; e 4) a hipertrófica de zona, a região onde os condrócitos hipertróficas expressando colágeno tipo 10 morrer e sofrer calcificação. A região não-mineralizado é rica em proteoglicanos que proporcionam resistência a forças compressivas6.
Há contínua mineralização na zona hipertrófica do MCC, onde ocorre a transição da condrogênese a osteogênese, garantindo a robusta estrutura mineral do osso subcondral do côndilo mandibular7. As mudanças celulares em regiões não mineralizadas e mineralizadas, finalmente, levam a alterações morfológicas e estruturais no côndilo mandibular e maxilar inferior. Manutenção da homeostase de todas as regiões celulares do MCC e a mineralização da parte subcondral são essenciais para a saúde, capacidade load-bearing e integridade da TMJ.
O modelo de rato transgénico colágeno múltipla (como descrito por Utreja et al) 8 é uma ótima ferramenta para usar para entender mudanças na expressão do colágeno, porque todos os transgenes são expressas em MCC. Para uma avaliação aprofundada e histológica, manchas histológicas são utilizadas para estudar a deposição de matriz, mineralização, proliferação celular, apoptose, e expressão de proteínas para as camadas de células diferentes do MCC.
Neste manuscrito, histológico e análises morfométricas são usadas para avaliar as alterações estruturais e celulares no MCC e subcondral osso do côndilo mandibular de ratos. Além disso, um método de quantificação de célula, para a análise de imagens histológicas fluorescentes e para mapear as corrediças do microscópio de luz, é descrito. A TMJ estática à compressão carregando o método, que provoca alterações celulares e morfológicas na MCC e subcondral osso9, também é ilustrada para validar nossos métodos.
Os métodos descritos aqui podem ser usados para determinar morfométricos e as alterações histológicas no côndilo mandibular e maxilar inferior de roedores ou para analisar outras regiões de ossificação endocondral e a morfologia dos tecidos mineralizados adicionais.

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	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">MX20 Radiography System</td>
			<td style="width:219px;">Faxitron X-Ray LLC&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digimizer Image software&#160;</td>
			<td style="width:219px;">MedCalc Software</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">Shandon Cryomatrix embedding resin</td>
			<td style="width:219px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">6769006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">Manual microscope Axio Imager Z1</td>
			<td style="width:219px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:119px;">208562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">yellow fluorescent protein filter&#160; - EYFP</td>
			<td style="width:219px;">Chroma Technology Corp</td>
			<td style="width:119px;">49003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">cyan fluorescent protein filter - ECFP</td>
			<td style="width:219px;">Chroma Technology Corp</td>
			<td style="width:119px;">49001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">red fluoresecent protein filter - Cy5</td>
			<td style="width:219px;">Chroma Technology Corp</td>
			<td style="width:119px;">49009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">sodium acetate anhydrous</td>
			<td style="width:219px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="width:392px;height:23px;">sodium L-tartrate dibasic dihydrate&#160;</td>
			<td style="width:219px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">228729</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">sodium nitrite&#160;</td>
			<td style="width:219px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">237213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">ELF97 substrate</td>
			<td style="width:219px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">E6600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS kit</td>
			<td style="width:219px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">C10339&#160;</td>
			<td>includes EdU (5-ethynyl-2&#39;-deoxyuridine)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">DAPI (4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td style="width:219px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">Sodium phosphate dibasic&#160;</td>
			<td style="width:219px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">Sodium phosphate monobasic&#160;</td>
			<td style="width:219px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">71505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:392px;height:21px;">Toluidine Blue O&#160;</td>
			<td style="width:219px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T3260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="width:392px;height:25px;">Adobe Photoshop&#160;</td>
			<td style="width:219px;">Adobe Systems Incorporated</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:392px;height:24px;">Phosphate buffered saline tablets (PBS)</td>
			<td style="width:219px;">Research Products International</td>
			<td style="width:119px;">P32080-100T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CNA Beta III Nickel-Free Archwire</td>
			<td>Ortho Organizers, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GraphPad Prism&#160;</td>
			<td>GraphPad Software, Inc.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a morphometric and cellular analysis method for the murine mandibular condyle

Articulação temporomandibular (ATM) tem a capacidade de adaptação a estímulos externos, e carregar as alterações pode afetar a posição dos côndilos, bem como os componentes estruturais e celulares da cartilagem condilar mandibular (MCC). Este manuscrito descreve métodos para analisar estas mudanças e um método para alterar o carregamento da TMJ em camundongos (i.e., à compressão estática TMJ carregando). A avaliação estrutural ilustrada aqui é uma abordagem simples morfométricos que usa o software Digimizer e é executada em radiografias de ossos pequenos. Além disso, a análise de celulares muda levando a alterações na expressão do colágeno, a remodelação óssea, a divisão celular, e proteoglycan distribuição no MCC é descrita. A quantificação dessas mudanças em cortes histológicos - contando os pixels fluorescentes positivos usando imagem de software e o mapeamento de distância de medição e manchado área com Digimizer - também é demonstrado. Os métodos mostrados aqui não são limitados a TMJ murino, mas podem ser usados em ossos adicionais de pequenos animais experimentais e em outras regiões de ossificação endocondral.

Estatísticas descritivas foram realizadas para examinar a distribuição de medidas morfométricas (comprimento mandibular, condilar comprimento, largura condilar) e análise histológica. Os resultados foram comparados entre o grupo carregado (ou seja, ratos submetidos a carga compressiva com a mola de titânio beta) e grupo controle (ou seja, ratos de controle que não recebeu qualquer procedimento de correspondência). Diferenças estatisticamente significativas entr...

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A Morphometric and Cellular Analysis Method for the Murine Mandibular Condyle

Este manuscrito apresenta métodos para a Análise morfométrica e as mudanças celulares dentro do côndilo mandibular de roedores.

Um método de análise celular para o côndilo Mandibular murino e morfométricas

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