Name: fizzy extraction of volatile organic compounds combined with atmospheric pressure chemical ionization quadrupole mass spectrometry
Uploaded: 2017-07-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fizzy Extraction of Volatile Organic Compounds Combined with Atmospheric Pressure Chemical Ionization Quadrupole Mass Spectrometry at JoVE.com

Vi vill tacka Taiwans ministerium för vetenskap och teknik (bidragsnummer: MOST 104-2628-M-009-003-MY4) för det ekonomiska stödet till detta arbete.

Detta protokoll förutsätter att alla steg utförs i enlighet med relevanta laboratoriesäkerhetsbestämmelser. Några av stegen använder kommersiella instrument - i sådana fall måste tillverkarens riktlinjer följas. Vid hantering av giftiga kemikalier måste säkerhetsdatabladets riktlinjer följas. Den specialtillverkade utrustningen 4 måste användas försiktigt; Speciellt vid hantering av trycksatta gaser och levande elektriska ledningar. 1. Framställning av ...

<ol>
	<li>McCallum, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decompression+sickness:+a+review.">Decompression sickness: a review.</a> Brit J Industr Med. 25, 4-21 (1968).</li><li>Pawliszyn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Comprehensive Sampling and Sample Preparation. , (2012).</li><li>Wang, T., Lenahan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+volatile+halocarbons+in+water+by+purge-closed+loop+gas+chromatography.">Determination of volatile halocarbons in water by purge-closed loop gas chromatography.</a> Bull Environ Contam Toxicol. 32, 429-438 (1984).</li><li>Chang, C. -. H., Urban, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fizzy+extraction+of+volatile+and+semivolatile+compounds+into+the+gas+phase.">Fizzy extraction of volatile and semivolatile compounds into the gas phase.</a> Anal Chem. 88, 8735-8740 (2016).</li><li>Zougagh, M., Valc&#225;rcel, M., R&#237;os, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supercritical+fluid+extraction:+a+critical+review+of+its+analytical+usefulness.">Supercritical fluid extraction: a critical review of its analytical usefulness.</a> Trends Anal Chem. 23, 399-405 (2004).</li><li>Urban, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Universal+electronics+for+miniature+and+automated+chemical+assays.">Universal electronics for miniature and automated chemical assays.</a> Analyst. 140, 963-975 (2015).</li><li>Urban, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-built+labware+stimulates+creativity.">Self-built labware stimulates creativity.</a> Nature. 532, 313 (2016).</li><li>Chen, H., Venter, A., Cooks, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extractive+electrospray+ionization+for+direct+analysis+of+undiluted+urine,+milk+and+other+complex+mixtures+without+sample+preparation.">Extractive electrospray ionization for direct analysis of undiluted urine, milk and other complex mixtures without sample preparation.</a> Chem Commun. , 2042-2044 (2006).</li><li>Haddad, R., Sparrapan, R., Kotiaho, T., Eberlin, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Easy+ambient+sonic-spray+ionization-membrane+interface+mass+spectrometry+for+direct+analysis+of+solution+constituents.">Easy ambient sonic-spray ionization-membrane interface mass spectrometry for direct analysis of solution constituents.</a> Anal Chem. 80, 898-903 (2008).</li><li>Dixon, R. B., Sampson, J. S., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+multiply+charged+peptides+and+proteins+by+radio+frequency+acoustic+desorption+and+ionization+for+mass+spectrometric+detection.">Generation of multiply charged peptides and proteins by radio frequency acoustic desorption and ionization for mass spectrometric detection.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 20, 597-600 (2009).</li><li>Wu, C. -. I., Wang, Y. -. S., Chen, N. G., Wu, C. -. Y., Chen, C. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+ionization+of+biomolecules.">Ultrasound ionization of biomolecules.</a> Rapid Commun Mass Spectrom. 24, 2569-2574 (2010).</li><li>Lo, T. -. J., Chen, T. -. Y., Chen, Y. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+salt+effects+in+ultrasonication-assisted+spray+ionization+mass+spectrometry.">Study of salt effects in ultrasonication-assisted spray ionization mass spectrometry.</a> J Mass Spectrom. 47, 480-483 (2012).</li><li>Urban, P. L., Chen, Y. -. C., Wang, Y. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Time-Resolved Mass Spectrometry: From Concept to Applications. , (2016).</li><li>Peacock, P. M., Zhang, W. -. J., Trimpin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+ionization+for+mass+spectrometry.">Advances in ionization for mass spectrometry.</a> Anal Chem. 89, 372-388 (2017).</li><li>Hu, J. -. B., Chen, S. -. Y., Wu, J. -. T., Chen, Y. -. C., Urban, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+system+for+extraction+and+instantaneous+analysis+of+millimeter-sized+samples.">Automated system for extraction and instantaneous analysis of millimeter-sized samples.</a> RSC Adv. 4, 10693-10701 (2014).</li><li>Chen, S. -. Y., Urban, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On-line+monitoring+of+Soxhlet+extraction+by+chromatography+and+mass+spectrometry+to+reveal+temporal+extract+profiles.">On-line monitoring of Soxhlet extraction by chromatography and mass spectrometry to reveal temporal extract profiles.</a> Anal Chim Acta. 881, 74-81 (2015).</li><li>Hsieh, K. -. T., Liu, P. -. H., Urban, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+on-line+liquid-liquid+extraction+system+for+temporal+mass+spectrometric+analysis+of+dynamic+samples.">Automated on-line liquid-liquid extraction system for temporal mass spectrometric analysis of dynamic samples.</a> Anal Chim Acta. 894, 35-43 (2015).</li><li>Veach, B. T., Mudalige, T. K., Rye, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RapidFire+mass+spectrometry+with+enhanced+throughput+as+an+alternative+to+liquid&#8722;liquid+salt+assisted+extraction+and+LC/MS+analysis+for+sulfonamides+in+honey.">RapidFire mass spectrometry with enhanced throughput as an alternative to liquid&#8722;liquid salt assisted extraction and LC/MS analysis for sulfonamides in honey.</a> Anal Chem. , (2017).</li><li>Carroll, D. I., Dzidic, I., Stillwell, R. N., Horning, M. G., Horning, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subpicogram+detection+system+for+gas+phase+analysis+based+upon+atmospheric+pressure+ionization+(API)+mass+spectrometry.">Subpicogram detection system for gas phase analysis based upon atmospheric pressure ionization (API) mass spectrometry.</a> Anal Chem. 46, 706-710 (1974).</li><li>Carroll, D. I., Dzidic, I., Stillwell, R. N., Haegele, K. D., Horning, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atmospheric+pressure+ionization+mass+spectrometry.+Corona+discharge+ion+source+for+use+in+a+liquid+chromatograph-mass+spectrometer-computer+analytical+system.">Atmospheric pressure ionization mass spectrometry. Corona discharge ion source for use in a liquid chromatograph-mass spectrometer-computer analytical system.</a> Anal Chem. 47, 2369-2373 (1975).</li><li>Hakim, I. A., McClure, T., Liebler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+dietary+D-limonene+intake+for+epidemiological+studies.">Assessing dietary D-limonene intake for epidemiological studies.</a> J Food Compos Anal. 13, 329-336 (2000).</li></ol>

<html> Flera smarta sätt att leverera prov till en masspektrometer utvecklades i de studier som genomförts under de senaste tre decennierna ( t.ex. referenser 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 ). Ett av målen med dessa studier var att förenkla förberedelsen av prover för analys. ...

Olika fenomen som observeras i naturen och det dagliga livet är kopplade till gas-vätskeformiga jämvikter. Koldioxid löses i mjuka och alkoholhaltiga drycker under förhöjt tryck. När en flaska med en sådan kondensiv dryck öppnas pressar trycket ner och gasbubblorna rusar till vätskeytan. I detta fall förbättrar bruset organoleptiska egenskaper hos drycker. Utsläpp av gasbubblor är också den främsta orsaken till dekompressionssjukdom (&quot;böjarna&quot;) 1 . På grund av plötslig dekompression bildas bubblor i olika kroppar. De personer som lider av dekompressionssjukdomen behandlas i hyperbariska kamrar. Gasbubblor har olika tillämpningar inom analytisk kemi. Spridningsmetoder är särskilt beroende av att gasbubblor passerar genom flytande prov för att extrahera flyktiga föreningar 2 . Exempelvis kombineras en metod som kallas &quot;rensluten slinga&quot; med gaskromatografi för att möjliggöra snabb analys av diSsolved flyktiga ämnen 3 . Medan sparging kontinuerligt kan extrahera flyktiga ämnen över tiden begränsar den inte tid eller rum. Den frisatta gasfasen måste fångas och i vissa fall koncentreras genom att man applicerar ett temperaturprogram eller använder sorbenter. Det finns således ett behov av att introducera nya online-behandlingsstrategier, vilket kan minska antalet steg och samtidigt koncentrera flyktiga analyter i rymden eller tiden. För att ta itu med utmaningen att extrahera flyktiga föreningar från flytande prover och genomföra analys på nätet introducerade vi nyligen &quot;fizzy extraction&quot; 4 . Denna nya teknik utnyttjar brusproblemet. I korthet löses en bärargas (här koldioxid) först i provet genom applicering av övertryck och omröring av provet. Därefter dekomprimeras provkammaren abrupt. Den plötsliga dekomprimeringen leder till bildning av ett flertal bärargasbubblor<html> I provvätskan. Dessa bubblor hjälper till att frigöra upplösta analytarter från vätskan till gasfasen. De frisatta analyterna överförs omedelbart till masspektrometern, som producerar signaler i tidsdomänen. Eftersom frisättningen av analytsarten begränsas till en kort tidsperiod (några sekunder), har de tidssignalerna höga amplituder och höga signal-brusförhållanden. Trycket som är involverat i mängden extraktionsprocessen är mycket lågt (~ 150 kPa) 4 ; Mycket lägre än vid superkritisk fluidutvinning 5 (t ex ≥10 MPa). Tekniken kräver ingen användning av speciella förbrukningsartiklar (kolonner, patroner). Endast små volymer lösningsmedel används för utspädning och rengöring. Extraktionsanordningen kan monteras av kemister med medeltekniska färdigheter med användning av allmänt tillgängliga delar 4 ; Till exempel elektroniska moduler med öppen källkod&quot;&gt; 6 , 7. Fizzy extraction kan kopplas on-line med moderna masspektrometrar utrustade med APCI-gränssnitt. Eftersom gasfas extrakt överförs till jonkälla, förorenar inte mängden kolsyra extrakt väsentligt sårbar Delar av masspektrometern. Syftet med denna visualiserade experimentartikel är att vägleda tittarna om hur man genomför smutsig extraktion i en enkel analytisk uppgift. Medan kärnan i det svampiga extraktionssystemet är som beskrivet i vår tidigare rapport 4 har flera förbättringar införts för att göra operationen enklare. En mikrokontroller utrustad med en LCD-skärmskärm har införlivats i systemet för att visa nyckelutdragningsparametrarna i realtid. Alla funktioner är programmerade i microcontroller skript, och det finns inte längre något behov av att använda en extern dator till cAvlägsna extraktionssystemet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="963">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Water</td>
			<td style="width:197px;">Fisher</td>
			<td style="width:160px;">W6212</td>
			<td style="width:191px;">Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Ethanol</td>
			<td style="width:197px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:160px;">32221-2.5L</td>
			<td>Diluent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">(R)-(+)-Limonene</td>
			<td style="width:197px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:160px;">183164-100ML</td>
			<td>Standard</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Carbon dioxide</td>
			<td style="width:197px;">ChiaLung</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Carrier gas</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Cellulose tissue, Kimwipes Kimtech</td>
			<td style="width:197px;">Kimberly-Clark</td>
			<td>34120</td>
			<td>Used for cleaning</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Triple quadrupole mass spectrometer</td>
			<td style="width:197px;">Shimadzu</td>
			<td style="width:160px;">LCMS-8030</td>
			<td>Detection system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">Atmospheric pressure chemical ionization interface</td>
			<td style="width:197px;">Shimadzu</td>
			<td style="width:160px;">Duis</td>
			<td>Ion source</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">20-mL screw top headspace glass vial with septum cap</td>
			<td style="width:197px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:160px;">D-52379</td>
			<td>Sample vial</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">LabSolutions software</td>
			<td style="width:197px;">Shimadzu</td>
			<td>n/a</td>
			<td>version 5.82</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">PeakFit software</td>
			<td style="width:197px;">Systat Software</td>
			<td>n/a</td>
			<td>version 4.12</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:415px;">OriginPro software</td>
			<td style="width:197px;">OriginLab</td>
			<td>n/a</td>
			<td>version 8</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fizzy extraction of volatile organic compounds combined with atmospheric pressure chemical ionization quadrupole mass spectrometry

Kemisk analys av flyktiga och semivolatila föreningar upplösta i flytande prov kan vara utmanande. De upplösta komponenterna måste bringas till gasfasen och överföras effektivt till ett detekteringssystem. Fizzy extraction utnyttjar brusproblemet. Först upplöses en bärargas (här koldioxid) i provet genom applicering av övertryck och omröring av provet. För det andra dekomprimeras provkammaren abrupt. Dekompression leder till bildandet av ett flertal bärargasbubblor i provvätskan. Dessa bubblor hjälper till att frisätta den upplösta analytearten från vätskan till gasfasen. De frigjorda analyterna överförs omedelbart till atmosfärstryckets kemiska joniseringsgränssnitt av en triple quadrupole masspektrometer. Den joniserbara analytearten ger upphov till masspektrometriska signaler i tidsdomänen. Eftersom frisättningen av analytsarten uppträder under korta tidsperioder (några sekunderOnds), de tidsmässiga signalerna har höga amplituder och höga signal-till-brus-förhållanden. Amplituderna och områdena av de temporära topparna kan då korreleras med koncentrationer av analyterna i vätskeproverna som utsätts för kondensation, vilket möjliggör kvantitativ analys. Fördelarna med kolsyrad extraktion inkluderar: enkelhet, hastighet och begränsad användning av kemikalier (lösningsmedel).

I början testas fizzy extraktionssystemet med en standardlösning. Därefter analyseras det verkliga urvalet och det verkliga provet med standard. Områdena för de temporära topparna av extraktionshändelser korreleras med koncentrationer av analyterna i vätskeproverna som utsätts för svamputvinning, vilket möjliggör kvantitativ analys. Här utförde vi dubbel standardtillägg för att demonstrera kvantitativa egenskaper hos tekniken ( Figur 7 ). Den...

Watch this Scientific Journal Video about Fizzy Extraction of Volatile Organic Compounds Combined with Atmospheric Pressure Chemical Ionization Quadrupole Mass Spectrometry at JoVE.com

Fizzy Extraction of Volatile Organic Compounds Combined with Atmospheric Pressure Chemical Ionization Quadrupole Mass Spectrometry

Fizzy extraction är en ny laboratorie teknik för analys av flyktiga och semivolatila föreningar. En bärargas löses i vätskeprovet genom applicering av övertryck och omröring av provet. Provkammaren dekomprimeras sedan. Analytarten befrias till gasfasen på grund av bristning.

Fizzy Extraction av flyktiga organiska föreningar kombinerat med atmosfärstryck Kemisk ionisering Quadrupole Mass Spectrometry

Chemical analysis of volatile and semivolatile compounds dissolved in liquid samples can be challenging. The dissolved components need to be brought to ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

High-pressure Sapphire Cell for Phase Equilibria Measurements of CO2/Organic/Water Systems

High-pressure Sapphire Cell for Phase Equilibria Measurements of CO2/Organic/Water Systems

Högtrycks Sapphire Cell för fasjämvikter Mätningar av CO<sub&gt; 2</sub&gt; / Ekologisk / Water Systems

The high pressure sapphire cell apparatus was constructed to visually determine the composition of multiphase systems without physical sampling. ...

Analysis of Volatile and Oxidation Sensitive Compounds Using a Cold Inlet System and Electron Impact Mass Spectrometry

Analys av flyktiga och Oxidation Känsliga Föreningar med kall Inlet System och Electron Impact masspektrometri

This video presents a protocol for the mass spectrometrical analysis of volatile and oxidation sensitive compounds using electron impact ionization. The ...

A Study of the Complexation of Mercury(II) with Dicysteinyl Tetrapeptides by Electrospray Ionization Mass Spectrometry

A Study of the Complexation of MercuryII with Dicysteinyl Tetrapeptides by Electrospray Ionization Mass Spectrometry

En studie av komplex Merkurius (II) med Dicysteinyl Tetrapeptider från elektrosprayjonisering masspektrometri

In this study we evaluated a method for the characterization of complexes, formed in different relative ratios of mercury(II) to dicysteinyl tetrapeptide, ...

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical Methylation and Physical Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance Techniques

Sekvensering av växt Wall Heteroxylans Använda enzym, Chemical (metylering) och fysiska (masspektrometri, kärnmagnetisk resonans) Tekniker

This protocol describes the specific techniques used for the characterization of reducing end (RE) and internal region glycosyl sequence(s) of ...

Visualization of Ambient Mass Spectrometry with the Use of Schlieren Photography

Visualisering av Ambient masspektrometri med användning av schlierenfotografering

This manuscript outlines how to visualize mass spectrometry ambient ionization sources using schlieren photography. In order to properly optimize the mass ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

Realtid andedräkt analys med hjälp av sekundära Nanoelectrospray jonisering kopplat till hög upplösning masspektrometri

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Characterization of Synthetic Polymers via Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight (MALDI-TOF) Mass Spectrometry

Characterization of Synthetic Polymers via Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight MALDI-TOF Mass Spectrometry

Karakterisering av syntetiska polymerer via Matrix assisterad Laser Desorption jonisering tid för flygning (MALDI-TOF) masspektrometri

There are many techniques that can be employed in the characterization of synthetic homopolymers, but few provide as useful of information for end group ...

An Efficient Sample Preparation Method to Enhance Carbohydrate Ion Signals in Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry

En effektiv prov förberedelse metod att förbättra kolhydrat Ion signaler i Matrix-assisted Laser Desorption/jonisering masspektrometri

Sample preparation is a critical process in mass spectrometry (MS) analysis of carbohydrates. Although matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) ...

High-throughput and Comprehensive Drug Surveillance Using Multisegment Injection-Capillary Electrophoresis-Mass Spectrometry

Hög genomströmning och omfattande drog övervakning med Multisegment injektion-kapillär elektrofores masspektrometri

New analytical methods are urgently needed to enable high-throughput, yet comprehensive drug screening, given an alarming opioid and prescription drug ...