Name: isolation and culture of primary mouse keratinocytes from neonatal and adult mouse skin
Uploaded: 2017-07-14T14:00:00
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Ce travail a été soutenu par l&#39;octroi de l&#39;INSTITUT NATIONAL DE L&#39;ARTHRITE ET DES MALADIES MUSCULOSKÉLÉTIQUES ET DE LA PEAU (R01AR069653 à Zhang LJ) et des National Institutes of Health Support (5T32AR062496-03 à CA).

Toutes les expériences sur les animaux sont approuvées par le comité institutionnel des soins et de l&#39;utilisation des animaux de l&#39;UCSD. 1. Isolation et culture primaire de la souris KC contre la peau néonatale <ol><li> Sacrifiez les néonats post-nés 0-2 de la souche de souris de type sauvage C57B / 6 par décapitation à l&#39;aide de ciseaux. Coupez les membres juste au-dessus des articulations du poignet et de la cheville, puis coupez complètement la queue, laissant un pe...

<ol>
	<li>Mauro, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+barrier+perturbation+abolishes+the+Ca2++and+K++gradients+in+murine+epidermis:+quantitative+measurement+using+PIXE.">Acute barrier perturbation abolishes the Ca2+ and K+ gradients in murine epidermis: quantitative measurement using PIXE.</a> J Invest Dermatol. 111 (6), 1198-1201 (1998).</li><li>Menon, G. K., Grayson, S., Elias, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ionic+calcium+reservoirs+in+mammalian+epidermis:+ultrastructural+localization+by+ion-capture+cytochemistry.">Ionic calcium reservoirs in mammalian epidermis: ultrastructural localization by ion-capture cytochemistry.</a> J Invest Dermatol. 84 (6), 508-512 (1985).</li><li>Elias, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+epidermal+calcium+gradient+coincides+with+key+milestones+of+barrier+ontogenesis+in+the+rodent.">Formation of the epidermal calcium gradient coincides with key milestones of barrier ontogenesis in the rodent.</a> J Invest Dermatol. 110 (4), 399-404 (1998).</li><li>Hennings, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+regulation+of+growth+and+differentiation+of+mouse+epidermal+cells+in+culture.">Calcium regulation of growth and differentiation of mouse epidermal cells in culture.</a> Cell. 19 (1), 245-254 (1980).</li><li>Zhang, L. J., Bhattacharya, S., Leid, M., Ganguli-Indra, G., Indra, A. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+radiation+damages+self+noncoding+RNA+and+is+detected+by+TLR3.">Ultraviolet radiation damages self noncoding RNA and is detected by TLR3.</a> Nat Med. 18 (8), (2012).</li><li>Zhang, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+Peptide+LL37+and+MAVS+Signaling+Drive+Interferon-beta+Production+by+Epidermal+Keratinocytes+during+Skin+Injury.">Antimicrobial Peptide LL37 and MAVS Signaling Drive Interferon-beta Production by Epidermal Keratinocytes during Skin Injury.</a> Immunity. 45 (1), 119-130 (2016).</li><li>Borkowski, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-Like+Receptor+3+Activation+Is+Required+for+Normal+Skin+Barrier+Repair+Following+UV+Damage.">Toll-Like Receptor 3 Activation Is Required for Normal Skin Barrier Repair Following UV Damage.</a> J Invest Dermatol. 135 (2), 569-578 (2015).</li><li>Borkowski, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+3+activation+is+required+for+normal+skin+barrier+repair+following+UV+damage.">Toll-like receptor 3 activation is required for normal skin barrier repair following UV damage.</a> J Invest Dermatol. 135 (2), 569-578 (2015).</li><li>Zillessen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+role+of+dipeptidyl+peptidase+4+(DPP4)+in+primary+human+(pre)adipocytes.">Metabolic role of dipeptidyl peptidase 4 (DPP4) in primary human (pre)adipocytes.</a> Sci Rep. 6, 23074 (2016).</li><li>Wells, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+macrophage-inducible+C-type+lectin,+mincle,+is+an+essential+component+of+the+innate+immune+response+to+Candida+albicans.">The macrophage-inducible C-type lectin, mincle, is an essential component of the innate immune response to Candida albicans.</a> J Immunol. 180 (11), 7404-7413 (2008).</li><li>Vasioukhin, V., Bauer, C., Yin, M., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+actin+polymerization+is+the+driving+force+for+epithelial+cell-cell+adhesion.">Directed actin polymerization is the driving force for epithelial cell-cell adhesion.</a> Cell. 100 (2), 209-219 (2000).</li><li>Zhuang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF+receptor+p55+plays+a+pivotal+role+in+murine+keratinocyte+apoptosis+induced+by+ultraviolet+B+irradiation.">TNF receptor p55 plays a pivotal role in murine keratinocyte apoptosis induced by ultraviolet B irradiation.</a> J Immunol. 162 (3), 1440-1447 (1999).</li><li>Lichti, U., Anders, J., Yuspa, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+short-term+culture+of+primary+keratinocytes,+hair+follicle+populations+and+dermal+cells+from+newborn+mice+and+keratinocytes+from+adult+mice+for+in+vitro+analysis+and+for+grafting+to+immunodeficient+mice.">Isolation and short-term culture of primary keratinocytes, hair follicle populations and dermal cells from newborn mice and keratinocytes from adult mice for in vitro analysis and for grafting to immunodeficient mice.</a> Nat Protoc. 3 (5), 799-810 (2008).</li><li>Dlugosz, A. A., Glick, A. B., Tennenbaum, T., Weinberg, W. C., Yuspa, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+utilization+of+epidermal+keratinocytes+for+oncogene+research.">Isolation and utilization of epidermal keratinocytes for oncogene research.</a> Methods Enzymol. 254, 3-20 (1995).</li><li>Jones, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+mouse+keratinocytes.">Isolation and culture of mouse keratinocytes.</a> CSH Protoc. 2008, (2008).</li><li>Pirrone, A., Hager, B., Fleckman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+mouse+keratinocyte+culture.">Primary mouse keratinocyte culture.</a> Methods Mol Biol. 289, 3-14 (2005).</li><li>Yuspa, S. H., Kilkenny, A. E., Steinert, P. M., Roop, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+murine+epidermal+differentiation+markers+is+tightly+regulated+by+restricted+extracellular+calcium+concentrations+in+vitro.">Expression of murine epidermal differentiation markers is tightly regulated by restricted extracellular calcium concentrations in vitro.</a> J Cell Biol. 109 (3), 1207-1217 (1989).</li><li>Yuspa, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signal+transduction+for+proliferation+and+differentiation+in+keratinocytes.">Signal transduction for proliferation and differentiation in keratinocytes.</a> Ann N Y Acad Sci. 548, 191-196 (1988).</li><li>Fang, N. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+enhances+mouse+keratinocyte+differentiation+in+vitro+to+differentially+regulate+expression+of+papillomavirus+authentic+and+codon+modified+L1+genes.">Calcium enhances mouse keratinocyte differentiation in vitro to differentially regulate expression of papillomavirus authentic and codon modified L1 genes.</a> Virology. 365 (1), 187-197 (2007).</li><li>Kolly, C., Suter, M. M., Muller, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation,+cell+cycle+exit,+and+onset+of+terminal+differentiation+in+cultured+keratinocytes:+pre-programmed+pathways+in+control+of+C-Myc+and+Notch1+prevail+over+extracellular+calcium+signals.">Proliferation, cell cycle exit, and onset of terminal differentiation in cultured keratinocytes: pre-programmed pathways in control of C-Myc and Notch1 prevail over extracellular calcium signals.</a> J Invest Dermatol. 124 (5), 1014-1025 (2005).</li><li>Marcelo, C. L., Gold, R. C., Fairley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+1.2+mmol/l+calcium,+triamcinolone+acetonide,+and+retinoids+on+low-calcium+regulated+keratinocyte+differentiation.">Effect of 1.2 mmol/l calcium, triamcinolone acetonide, and retinoids on low-calcium regulated keratinocyte differentiation.</a> Br J Dermatol. 111, 64-72 (1984).</li></ol>

L&#39;épiderme de la peau fonctionne comme une barrière critique pour séparer et protéger le corps de l&#39;environnement extérieur et des dommages causés par la perte d&#39;eau, les agents pathogènes, la chaleur et l&#39;irradiation UV. Les KC sont la lignée cellulaire prédominante de l&#39;épiderme, et la culture primaire de KC épidermiques est un outil utile pour étudier et comprendre les processus biologiques de formation de barrière et la réponse des KC aux insultes environnementales in vitro...

La peau est le plus grand organe du corps avec l&#39;épiderme comme couche extérieure. L&#39;épiderme joue un rôle essentiel dans la formation d&#39;une barrière épidermique intacte pour séparer le corps de l&#39;environnement et empêche ainsi la perte d&#39;eau et protège contre les insultes environnementales telles que les allergènes, les agents pathogènes et l&#39;exposition aux UVB. L&#39;épiderme se développe à partir d&#39;une seule couche de kératinocytes basaux indifférenciés (KC) en un épithélium stratifié multicouches constitué d&#39;une couche basale, suivie d&#39;une couche épineuse, d&#39;une couche granulaire et d&#39;un stratum corneum. Les KC basales, constituées à la fois par des cellules souches épidermiques et par des cellules amplificatrices de transit, sont prolifératives et indifférenciées. À mesure que les KC basal sortent du cycle cellulaire, les cellules s&#39;engagent à se différencier et migrent progressivement vers la surface de l&#39;épiderme, accompagnées de la maturation des jonctions cellule-cellule et de la formation d&#39;une barrière de perméabilité épidermique (EPB). Les KC à la couche épineuse expriment des différences précocesMarqueurs d&#39;ions tels que la kératine 10 (K10); Lorsque les KC migrent vers la couche granulaire, les cellules expriment des marqueurs de différenciation tardive tels que Filaggrin (FLG), Loricrin (LOR) et Involucrin (INV). À la stratum corneum, les KC deviennent des cornéocytes terminés en différé, qui sont finalement rejetés par desquamation à mesure que de nouvelles cellules les remplacent. Le calcium est considéré comme l&#39;agent le plus physiologique dans l&#39;épiderme et déclenche une différenciation in vitro et in vivo d&#39;une manière similaire. Dans l&#39;épiderme cutané normal, les ions calcium forment un «gradient de concentration» caractéristique, augmentant en concentration vers la surface de la peau 1 , 2 , 3 . La concentration de calcium provient de niveaux faibles dans les sous-couches les plus basses (couches basales et épineuses) jusqu&#39;à un pic dans la couche granulaire supérieure, puis tombe à des niveaux négligeables dans la couche la plus superficielle (stratum corneum).<html> Le gradient de calcium se développe également de manière coïncidente avec l&#39;émergence d&#39;une barrière de perméabilité des composants, qui soutient que la signalisation de calcium joue un rôle essentiel dans la différenciation KC. In vitro , le faible calcium (0,02-0,1 mM) maintient la prolifération des KC basiques comme monocouche, alors que le calcium élevé (&gt; 0,1 mM) induit un engagement rapide et irréversible des cellules à la différenciation terminale, comme en témoigne la formation et l&#39;induction de la jonction étroite De LOR et INV sur un traitement de calcium élevé aux KC basiques 4 , 5 . En plus de la formation de barrière, les KC épidermiques sont également un élément important du système immunitaire inné de la peau. En réponse à des agents pathogènes ou à des modèles moléculaires associés endommagés (DAMP) libérés lors d&#39;une irradiation ou d&#39;une lésion UVB, les KC peuvent produire de grandes quantités de cytokines inflammatoires, telles que TNFα, IL6 et IFNβ, conduisant à une activation du système immunitaire&gt; 6 , 7 , 8 , 9 . Bien qu&#39;une signalisation inflammatoire appropriée des KC soit requise pour le dépistage des agents pathogènes, une réponse inflammatoire incontrôlée peut déclencher le développement de maladies de la peau auto-inflammatoires, telles que le psoriasis et la rosacée 6 , 8 . Dans l&#39;ensemble, les KC jouent un rôle essentiel dans le maintien de la barrière cutanée intacte et l&#39;initiation d&#39;une réponse immunitaire contre l&#39;invasion des agents pathogènes ou les insultes environnementales. Par conséquent, la culture primaire des KC épidermiques est une technique utile pour étudier la biologie épithéliale, la différenciation KC, ainsi que les réponses immunitaires innées stimulées par KC. L&#39;isolement et la culture des KC épidermiques primaires de souris peuvent être un processus difficile en raison de la sensibilité et de la sensibilité de KC à divers stimulants externes. Ici, nous décrivons une méthode pour isoler et culture-KC de la peau néonatal de la souris ouPeau de queue de souris adulte. Pour l&#39;isolement KC pour adultes, nous n&#39;utilisons pas la peau dorsale de la souris car l&#39;isolement de quantités suffisantes de KC viables à partir de ce tissu peut être difficile pour les raisons suivantes: Premièrement, la peau dorsale adulte à la phase de repos du cycle des cheveux (telogène) se compose d&#39;un Épiderme mince avec seulement 1-2 couches de cellules, conduisant à un faible rendement cellulaire et une séparation inefficace de l&#39;épiderme du derme, étape cruciale pour l&#39;isolement KC réussi. Deuxièmement, la densité du follicule capillaire élevée sur la peau dorsale adulte contribue davantage à la difficulté à séparer l&#39;épiderme du derme. Au lieu de cela, nous utilisons systématiquement la peau de la queue comme source de KC de souris adultes car cet épithélium est plus épais avec 3 à 5 couches de KC épidermiques. Il a également une densité de follicule capillaire plus faible, ce qui n&#39;interfère pas avec la séparation épidermique, ce qui permet l&#39;isolement KC de toute peau de queue de souris adulte, quel que soit l&#39;âge et le stade de cyclisme des cheveux de la souris. La neona isoléeLes KC sont ensemencés dans des plats de culture revêtus de gélatine, tandis que les plats revêtus de collagène sont utilisés pour semer des KC adultes isolés en raison de la capacité altérée des cellules adultes à adhérer par rapport à leurs homologues néonatals. Pour la culture de KC de souris, le milieu basal de calcium faible est complété par dGS, qui contient le facteur de croissance épidermique (EGF), la transferrine bovine, le facteur de croissance analogue à l&#39;insulinec1 (IGF1), la prostaglandine E2 (PGE2), l&#39;albumine de sérum bovin (BSA) et l&#39;hydrocortisone. Entre 2 à 4 jours après le plaquage initial, la plupart des KC différenciés peuvent être éliminés pendant les changements quotidiens du milieu, et les cellules adhérentes restantes présentent une morphologie typique en cobond 4 , prolifèrent et n&#39;expriment pas le marqueur de différenciation précoce K10.

<table width="633">
	<tbody>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="width:171px;height:100px;">C57BL/6 neonates or adult wildtype mice</td>
			<td style="width:177px;">Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:119px;">000664</td>
			<td style="width:167px;">Wildtype mice (originally purchased from Jackson Laboratory) are breeded and maintained in animal vivarium at UCSD.</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="width:171px;height:60px;">KC basal medium (EpiLife)</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">MEPICF500</td>
			<td style="width:167px;">basal medium for keratinocyte culture with 0.06 mM CaCl2</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="width:171px;height:60px;">Defined Growth Supplement (dGS)</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">S0125</td>
			<td style="width:167px;">defined growth supplements for culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Dispase powder</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">17105041</td>
			<td style="width:167px;">enzyme to dissociate the epidermis from dermis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Attachment Factor</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">S006100</td>
			<td style="width:167px;">gelatin-based coating material</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Coating Matrix</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">R011K</td>
			<td style="width:167px;">Collagen-based coating material</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="width:171px;height:80px;">TrypLE</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">12604-013</td>
			<td style="width:167px;">A gentle trypsin-like enzyme to dissociate keratinocytes from epidermal sheet</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">100 &#956;m Cell Strainer Nylon mesh</td>
			<td style="width:177px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">352360</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="width:171px;height:60px;">CCK-8 cell viability Kit</td>
			<td style="width:177px;">Dojindo Molecular Technologies, Rockville, MD</td>
			<td style="width:119px;">CK04-11</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Mouse TNF (Mono/Mono) ELISA Set II</td>
			<td style="width:177px;">BD Biosciences, San Jose, CA</td>
			<td style="width:119px;">555268</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Corded Hand-Held UV Lamps</td>
			<td style="width:177px;">Spectronics, Westbury, NY</td>
			<td style="width:119px;">EB-280C</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:171px;height:20px;">8-watt UV tubes</td>
			<td style="width:177px;">Spectronics, Westbury, NY</td>
			<td style="width:119px;">BLE-8T312</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Light Inverted Microscope for cell culture</td>
			<td style="width:177px;">ZEISS, Jena, Germany</td>
			<td style="width:119px;">Axio Observer</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:171px;height:20px;">Fluorescent Microscope</td>
			<td style="width:177px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">BX41</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and culture of primary mouse keratinocytes from neonatal and adult mouse skin

Le kératinocyte (KC) est le type de cellule prédominante dans l&#39;épiderme, la couche la plus externe de la peau. Les KC épidermiques jouent un rôle essentiel dans la défense de la peau en formant une barrière cutanée intacte contre les insultes environnementales, telles que l&#39;irradiation UVB ou les agents pathogènes, et aussi en déclenchant une réponse inflammatoire à ces insultes. Nous décrivons ici des méthodes pour isoler les KC de la peau néonatal de la souris et de la peau de queue de souris adulte. Nous décrivons également des conditions de culture utilisant des suppléments de croissance définis (dGS) par rapport au sérum bovin fœtal chelexé (cFBS). Fonctionnellement, nous montrons que les KC néonatals et adultes répondent très bien à une différenciation terminale élevée due au calcium, à une formation de jonction étroite et à une stratification. En outre, les KC adulte cultivés sont sensibles à la mort cellulaire déclenchée par les UVB et peuvent libérer de grandes quantités de TNF lors de l&#39;irradiation UVB. Ensemble, les méthodes décrites ici seront utiles aux chercheurs pour la mise en place d&#39;un modèle in vitroS pour étudier la biologie épidermique chez la souris néonatal et / ou la souris adulte.

La différenciation terminale induite par le calcium élevé des KC néonatals et adultes. L&#39;épiderme de souris primaire KCs plaquée et maintenue à 0,06 mM de CaCl 2 a augmenté en monocouche, et les cellules individuelles ont une forme polygonale avec un espace intercellulaire distinct, montrant un aspect pavimenteux lorsque confluentes (figure 1A et la figure 2A). L&#39;élévation du CaCl <s...

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Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

Les kératinocytes épidermiques forment une barrière fonctionnelle de la peau et sont positionnés à la ligne de front de la défense de l&#39;hôte contre les insultes environnementales externes. Nous décrivons ici des méthodes d&#39;isolement et de culture primaire de kératinocytes épidermiques provenant de peau de souris néonatale et adulte, et l&#39;induction de la différenciation terminale et la réponse inflammatoire déclenchée par les UVB des kératinocytes.

Isolation et culture des kératinocytes de la souris primaire de la peau de souris néonatale et adulte

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This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

Isolation des myofibroblastes primaires de souris et de tissus du côlon humain

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolement et culture des cellules souches épithéliales dentaire de l&#39;adulte de souris Incisive

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

Isolement et culture de cardiomyocytes adultes de souris pour Signalisation cellulaire et<em&gt; In vitro</em&gt; Hypertrophie cardiaque

Technological advances have made genetically modified mice, including transgenic and gene knockout mice, an essential tool in many research fields. Adult ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

L&#39;isolement et la culture primaire de cellules endothéliales aortiques de souris

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Isolation, Culture and Transduction of Adult Mouse Cardiomyocytes

L&#39;isolement, la culture et la transduction des adultes cardiomyocytes souris

Cultured cardiomyocytes can be used to study cardiomyocyte biology using techniques that are complementary to in vivo systems. For example, the purity and ...