Name: isolation and culture of primary mouse keratinocytes from neonatal and adult mouse skin
Uploaded: 2017-07-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin at JoVE.com

Detta arbete stöddes av NATIONAL INSTITUT OF ARTHRITIS AND MUSCULOSKELETAL AND SKIN DISEASES grant (R01AR069653 till Zhang LJ) och National Institutes of Health Support (5T32AR062496-03 till CA).

Alla djurförsök är godkända av UCSD Institutionella djurvård och användningskommitté. 1. Primär mus-KC-isolering och -kultur från neonatal hud <ol><li> Offra postnatala dag 0-2 nyfödda från C57B / 6 vildtypsmusstammen genom dekapitation med användning av sax. Klipp av lemmarna strax ovanför handleden och fotled, och skära sedan av svansen helt och lämna ett litet hål. </li><li> För att avlägsna hela huden, sätt in en vass sax genom hålet i svansen och skär hude...

<ol>
	<li>Mauro, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+barrier+perturbation+abolishes+the+Ca2++and+K++gradients+in+murine+epidermis:+quantitative+measurement+using+PIXE.">Acute barrier perturbation abolishes the Ca2+ and K+ gradients in murine epidermis: quantitative measurement using PIXE.</a> J Invest Dermatol. 111 (6), 1198-1201 (1998).</li><li>Menon, G. K., Grayson, S., Elias, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ionic+calcium+reservoirs+in+mammalian+epidermis:+ultrastructural+localization+by+ion-capture+cytochemistry.">Ionic calcium reservoirs in mammalian epidermis: ultrastructural localization by ion-capture cytochemistry.</a> J Invest Dermatol. 84 (6), 508-512 (1985).</li><li>Elias, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+epidermal+calcium+gradient+coincides+with+key+milestones+of+barrier+ontogenesis+in+the+rodent.">Formation of the epidermal calcium gradient coincides with key milestones of barrier ontogenesis in the rodent.</a> J Invest Dermatol. 110 (4), 399-404 (1998).</li><li>Hennings, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+regulation+of+growth+and+differentiation+of+mouse+epidermal+cells+in+culture.">Calcium regulation of growth and differentiation of mouse epidermal cells in culture.</a> Cell. 19 (1), 245-254 (1980).</li><li>Zhang, L. J., Bhattacharya, S., Leid, M., Ganguli-Indra, G., Indra, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ctip2+is+a+dynamic+regulator+of+epidermal+proliferation+and+differentiation+by+integrating+EGFR+and+Notch+signaling.">Ctip2 is a dynamic regulator of epidermal proliferation and differentiation by integrating EGFR and Notch signaling.</a> J Cell Sci. 125 (Pt 23), 5733-5744 (2012).</li><li>Lai, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commensal+bacteria+regulate+Toll-like+receptor+3-dependent+inflammation+after+skin+injury.">Commensal bacteria regulate Toll-like receptor 3-dependent inflammation after skin injury.</a> Nat Med. 15 (12), 1377-1382 (2009).</li><li>Bernard, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+radiation+damages+self+noncoding+RNA+and+is+detected+by+TLR3.">Ultraviolet radiation damages self noncoding RNA and is detected by TLR3.</a> Nat Med. 18 (8), (2012).</li><li>Zhang, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+Peptide+LL37+and+MAVS+Signaling+Drive+Interferon-beta+Production+by+Epidermal+Keratinocytes+during+Skin+Injury.">Antimicrobial Peptide LL37 and MAVS Signaling Drive Interferon-beta Production by Epidermal Keratinocytes during Skin Injury.</a> Immunity. 45 (1), 119-130 (2016).</li><li>Borkowski, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-Like+Receptor+3+Activation+Is+Required+for+Normal+Skin+Barrier+Repair+Following+UV+Damage.">Toll-Like Receptor 3 Activation Is Required for Normal Skin Barrier Repair Following UV Damage.</a> J Invest Dermatol. 135 (2), 569-578 (2015).</li><li>Borkowski, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+3+activation+is+required+for+normal+skin+barrier+repair+following+UV+damage.">Toll-like receptor 3 activation is required for normal skin barrier repair following UV damage.</a> J Invest Dermatol. 135 (2), 569-578 (2015).</li><li>Zillessen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+role+of+dipeptidyl+peptidase+4+(DPP4)+in+primary+human+(pre)adipocytes.">Metabolic role of dipeptidyl peptidase 4 (DPP4) in primary human (pre)adipocytes.</a> Sci Rep. 6, 23074 (2016).</li><li>Wells, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+macrophage-inducible+C-type+lectin,+mincle,+is+an+essential+component+of+the+innate+immune+response+to+Candida+albicans.">The macrophage-inducible C-type lectin, mincle, is an essential component of the innate immune response to Candida albicans.</a> J Immunol. 180 (11), 7404-7413 (2008).</li><li>Vasioukhin, V., Bauer, C., Yin, M., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+actin+polymerization+is+the+driving+force+for+epithelial+cell-cell+adhesion.">Directed actin polymerization is the driving force for epithelial cell-cell adhesion.</a> Cell. 100 (2), 209-219 (2000).</li><li>Zhuang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF+receptor+p55+plays+a+pivotal+role+in+murine+keratinocyte+apoptosis+induced+by+ultraviolet+B+irradiation.">TNF receptor p55 plays a pivotal role in murine keratinocyte apoptosis induced by ultraviolet B irradiation.</a> J Immunol. 162 (3), 1440-1447 (1999).</li><li>Lichti, U., Anders, J., Yuspa, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+short-term+culture+of+primary+keratinocytes,+hair+follicle+populations+and+dermal+cells+from+newborn+mice+and+keratinocytes+from+adult+mice+for+in+vitro+analysis+and+for+grafting+to+immunodeficient+mice.">Isolation and short-term culture of primary keratinocytes, hair follicle populations and dermal cells from newborn mice and keratinocytes from adult mice for in vitro analysis and for grafting to immunodeficient mice.</a> Nat Protoc. 3 (5), 799-810 (2008).</li><li>Dlugosz, A. A., Glick, A. B., Tennenbaum, T., Weinberg, W. C., Yuspa, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+utilization+of+epidermal+keratinocytes+for+oncogene+research.">Isolation and utilization of epidermal keratinocytes for oncogene research.</a> Methods Enzymol. 254, 3-20 (1995).</li><li>Jones, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+mouse+keratinocytes.">Isolation and culture of mouse keratinocytes.</a> CSH Protoc. 2008, (2008).</li><li>Pirrone, A., Hager, B., Fleckman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+mouse+keratinocyte+culture.">Primary mouse keratinocyte culture.</a> Methods Mol Biol. 289, 3-14 (2005).</li><li>Yuspa, S. H., Kilkenny, A. E., Steinert, P. M., Roop, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+murine+epidermal+differentiation+markers+is+tightly+regulated+by+restricted+extracellular+calcium+concentrations+in+vitro.">Expression of murine epidermal differentiation markers is tightly regulated by restricted extracellular calcium concentrations in vitro.</a> J Cell Biol. 109 (3), 1207-1217 (1989).</li><li>Yuspa, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signal+transduction+for+proliferation+and+differentiation+in+keratinocytes.">Signal transduction for proliferation and differentiation in keratinocytes.</a> Ann N Y Acad Sci. 548, 191-196 (1988).</li><li>Fang, N. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+enhances+mouse+keratinocyte+differentiation+in+vitro+to+differentially+regulate+expression+of+papillomavirus+authentic+and+codon+modified+L1+genes.">Calcium enhances mouse keratinocyte differentiation in vitro to differentially regulate expression of papillomavirus authentic and codon modified L1 genes.</a> Virology. 365 (1), 187-197 (2007).</li><li>Kolly, C., Suter, M. M., Muller, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation,+cell+cycle+exit,+and+onset+of+terminal+differentiation+in+cultured+keratinocytes:+pre-programmed+pathways+in+control+of+C-Myc+and+Notch1+prevail+over+extracellular+calcium+signals.">Proliferation, cell cycle exit, and onset of terminal differentiation in cultured keratinocytes: pre-programmed pathways in control of C-Myc and Notch1 prevail over extracellular calcium signals.</a> J Invest Dermatol. 124 (5), 1014-1025 (2005).</li><li>Marcelo, C. L., Gold, R. C., Fairley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+1.2+mmol/l+calcium,+triamcinolone+acetonide,+and+retinoids+on+low-calcium+regulated+keratinocyte+differentiation.">Effect of 1.2 mmol/l calcium, triamcinolone acetonide, and retinoids on low-calcium regulated keratinocyte differentiation.</a> Br J Dermatol. 111, 64-72 (1984).</li></ol>

Huden epidermis fungerar som en kritisk barriär för att separera och skydda kroppen från omvärlden och skador från vattenförlust, patogener, värme och UV-bestrålning. KC: erna är övervägande celllinje av epidermis, och primära kulturen av epidermala KC är ett användbart verktyg för att studera och förstå de biologiska processerna för barriärbildning och KCs respons på miljöbelastningar in vitro . Här beskriver vi metoder för att isolera och odla primära epide...

Huden är det största organet i kroppen med epidermis som yttersta lagret. Epidermis spelar en kritisk roll för att bilda en intakt epidermärbarriär för att separera kroppen från miljön och därigenom förhindra vattenförlust och skyddar mot miljöbelastningar, såsom allergener, patogener och UVB-exponering. Epidermis utvecklas från ett enda lager av odifferentierade basala keratinocyter (KCs) till ett flerskiktat stratifierat epitel som består av ett basalskikt följt av ett spinöst skikt, granulärt skikt och stratum corneum. Basala KCs, som består av både epidermala stamceller och transitionsförstärkande celler, är proliferativa och odifferentierade. När basala KCs lämnar cellcykeln, begår cellerna differentiering och migreras gradvis mot ytan av epidermis, åtföljd av mognad av cellcellsförbindelser och bildande av en epidermal permeabilitetsbarriär (EPB). KC: erna vid det roterande skiktet uttrycker tidig differentiärJonmarkörer såsom Keratin 10 (K10); När KC: erna migrerar till det granulära skiktet uttrycker cellerna sena differentieringsmarkörer såsom Filaggrin (FLG), Loricrin (LOR) och Involucrin (INV). Vid stratum corneum blir KC: erna terminalt differentierade corneocyter, vilka slutligen avlägsnas genom desquamation då nya celler ersätter dem. Kalcium anses vara det mest fysiologiska medlet i epidermis och utlöser differentiering in vitro och in vivo på ett liknande sätt. I normala hudutfall bildar kalciumjoner en karakteristisk &quot;koncentrationsgradient&quot;, vilket ökar i koncentrationen mot hudytan 1 , 2 , 3 . Kalciumkoncentrationen stiger från låga nivåer i de lägsta underlagen (basala och spinösa lager) till en topp i det övre granulära skiktet och faller sedan till försumliga nivåer i det mest ytliga skiktet (stratum corneum).<html> Kalciumgradienten utvecklas också tillfälligt med uppkomsten av en komponentpermeabilitetsbarriär, vilket stöder att kalciumsignaleringen spelar en kritisk roll för KC-differentiering. In vitro upprätthåller lågt kalcium (0,02-0,1 mM) proliferationen av basala KC som ett monoskikt, medan högt kalcium (&gt; 0,1 mM) inducerar ett snabbt och irreversibelt åtagande av cellerna till terminal differentiering, såsom demonstreras genom snävkopplingsbildning och induktion Av LOR och INV på högkalciumbehandling till basala KCs 4 , 5 . Förutom barriärbildning är epidermala KC också en viktig del av hudens medfödda immunsystem. Som svar på patogener eller skadade associerade molekylmönster (DAMP) som frisätts vid UVB-bestrålning eller skada kan KCs producera stora mängder inflammatoriska cytokiner, såsom TNFa, IL6 och IFNp, vilket leder till immunsystemaktivering&gt; 6 , 7 , 8 , 9 . Även om korrekt inflammatorisk signalering från KC är nödvändig för patogenavstånd kan okontrollerat inflammatoriskt svar utlösa utvecklingen av autoinflammatoriska hudsjukdomar, såsom psoriasis och rosacea 6 , 8 . Sammantaget spelar KCs en viktig roll för att upprätthålla den intakta hudbarriären och initiera ett immunsvar vid patogeneration eller miljöinsatser. Därför är primärkultur av epidermala KCs en användbar teknik för att studera epitelial biologi, KC-differentiering, såväl som KC-stimulerade medfödda immunsvar. Isoleringen och kulturen av primära musepidermala KC kan vara en utmanande process på grund av KC: s mottaglighet och känslighet för olika externa stimulanser. Här beskrivs en metod för att isolera och odla KC från antingen neonatal mushud ellerVuxen mus svans hud. För isolering av vuxna KC använder vi inte musens dorsala hud eftersom isolering av tillräckliga mängder av livskraftiga KC från denna vävnad kan vara svårt av följande skäl: För det första består den vuxna dorsala huden i vilafasen av hårcykeln (telogen) av en Tunn epidermis med endast 1-2 lager av celler, vilket leder till lågcellsutbyte och ineffektiv separation av epidermis från dermis, vilket är det kritiska steget för framgångsrik KC-isolering. För det andra bidrar den höga hårfollikeldensiteten som är närvarande på vuxen dorsal hud ytterligare svårigheten att separera epidermier från dermis. I stället använder vi rutinmässigt svanshud som källa för vuxna muskolor, eftersom detta epitel är tjockare med 3-5 lager av epidermala KC. Det har också en lägre hårfollikeltäthet, vilket inte stämmer överens med epidermiseparationen, vilket möjliggör KC-isolering från vilken som helst vuxen mushals, oberoende av musens ålders- och hårcykeltrafik. Den isolerade neonaTal KCs utsöndras till gelatinbelagda odlingsrätter medan kollagenbelagda rätter används för att frö isolerade vuxna KCs på grund av den vuxna cellens nedsatta förmåga att vidhäfta jämfört med deras neonatala motsvarigheter. För att odla mus-KCs kompletteras lågt kalciumbasalt medium med dGS, som innehåller epidermal tillväxtfaktor (EGF), bovint transferrin, insulinliknande tillväxtfaktor1 (IGF1), prostaglandin E2 (PGE2), bovint serumalbumin (BSA) och hydrokortison. Mellan 2-4 dagar efter den initiala pläteringen kan de flesta av de differentierade KC: erna tvättas bort under dagliga mediumförändringar och de återstående vidhäftande cellerna visar typisk kullerstenmorfologi 4 , prolifererar och uttrycker inte den tidiga differentieringsmarkören K10.

<table width="633">
	<tbody>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="width:171px;height:100px;">C57BL/6 neonates or adult wildtype mice</td>
			<td style="width:177px;">Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:119px;">000664</td>
			<td style="width:167px;">Wildtype mice (originally purchased from Jackson Laboratory) are breeded and maintained in animal vivarium at UCSD.</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="width:171px;height:60px;">KC basal medium (EpiLife)</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">MEPICF500</td>
			<td style="width:167px;">basal medium for keratinocyte culture with 0.06 mM CaCl2</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="width:171px;height:60px;">Defined Growth Supplement (dGS)</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">S0125</td>
			<td style="width:167px;">defined growth supplements for culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Dispase powder</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">17105041</td>
			<td style="width:167px;">enzyme to dissociate the epidermis from dermis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Attachment Factor</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">S006100</td>
			<td style="width:167px;">gelatin-based coating material</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Coating Matrix</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">R011K</td>
			<td style="width:167px;">Collagen-based coating material</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="width:171px;height:80px;">TrypLE</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">12604-013</td>
			<td style="width:167px;">A gentle trypsin-like enzyme to dissociate keratinocytes from epidermal sheet</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">100 &#956;m Cell Strainer Nylon mesh</td>
			<td style="width:177px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">352360</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="width:171px;height:60px;">CCK-8 cell viability Kit</td>
			<td style="width:177px;">Dojindo Molecular Technologies, Rockville, MD</td>
			<td style="width:119px;">CK04-11</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Mouse TNF (Mono/Mono) ELISA Set II</td>
			<td style="width:177px;">BD Biosciences, San Jose, CA</td>
			<td style="width:119px;">555268</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Corded Hand-Held UV Lamps</td>
			<td style="width:177px;">Spectronics, Westbury, NY</td>
			<td style="width:119px;">EB-280C</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:171px;height:20px;">8-watt UV tubes</td>
			<td style="width:177px;">Spectronics, Westbury, NY</td>
			<td style="width:119px;">BLE-8T312</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Light Inverted Microscope for cell culture</td>
			<td style="width:177px;">ZEISS, Jena, Germany</td>
			<td style="width:119px;">Axio Observer</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:171px;height:20px;">Fluorescent Microscope</td>
			<td style="width:177px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">BX41</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and culture of primary mouse keratinocytes from neonatal and adult mouse skin

Keratinocyt (KC) är den dominerande celltypen i epidermis, det yttersta skiktet i huden. Epidermal KCs spelar en viktig roll för att skydda huden genom att bilda en intakt hudbarriär mot miljöbelastningar, såsom UVB-bestrålning eller patogener, och även genom att initiera ett inflammatoriskt svar på de förolämpningarna. Här beskriver vi metoder för att isolera KC från neonatal mushud och från vuxen mushalshud. Vi beskriver också odlingsbetingelser med hjälp av definierade tilläggstillväxt (dGS) i jämförelse med chelexed fetalt bovint serum (cFBS). Funktionellt visar vi att både neonatala och vuxna KCs är starkt mottagliga för högkalciuminducerad terminal differentiering, snäv förbindning och stratifiering. Dessutom är odlade vuxna KCs mottagliga för UVB-utlösad celldöd och kan frisätta stora mängder TNF vid UVB-bestrålning. Tillsammans kommer metoderna som beskrivs här vara användbara för forskare för installationen av in vitro- modellenS att studera epidermisk biologi i neonatalmusen och / eller den vuxna musen.

Högkalciuminducerad terminal differentiering av neonatala och vuxna KCs. Den primära mus epidermal KCS pläterade och hölls vid 0,06 mM CaCl 2 växte som ett monoskikt, och individuella celler hade en polygonal form med distinkta intercellulära utrymmet, som visar en gatsten utseende när konfluenta (Figur 1A och Figur 2A). Upphöja CaCl2 till 0,2 mM inducerade en snabb morfologi förä...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin at JoVE.com

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

Epidermala keratinocyter bildar en funktionell hudbarriär och är placerade på framsidan av värdförsvar mot externa miljöskador. Här beskriver vi metoder för isolering och primärkultur av epidermala keratinocyter från neonatal och vuxen mushud och induktion av terminal differentiering och UVB-utlöst inflammatoriskt svar från keratinocyter.

Isolering och kultur av primära muskeratinocyter från neonatal och vuxen mushud

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

Isolering och odling av pulmonell endotelceller från neonatala möss

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolering och odling av vuxna Epithelial stamceller från mänskliga Skin

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation and Culture of Neonatal Mouse Cardiomyocytes

Isolering och odling av neonatala Mus Cardiomyocytes

Cultured neonatal cardiomyocytes have long been used to study  myofibrillogenesis and myofibrillar functions. Cultured cardiomyocytes allow  for easy ...

Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

Isolering, kultur, och funktionell karakterisering av vuxen mus Cardiomyoctyes

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolering och odling av mus Primära bukspottkörtel Acinar

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

Isolering av primära Myofibroblaster från mus och Human Colon Tissue

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolering och kultur av Dental epitelceller stamceller från vuxen mus Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

Isolering och kultur i vuxen mus Cardiomyocytes för cellsignalering och<em&gt; In vitro</em&gt; Hjärthypertrofi

Technological advances have made genetically modified mice, including transgenic and gene knockout mice, an essential tool in many research fields. Adult ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

Isolering och Primär kultur av mus aortaendotelceller

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Isolation, Culture and Transduction of Adult Mouse Cardiomyocytes

Isolering, kultur och Transduction av vuxna möss Cardiomyocytes

Cultured cardiomyocytes can be used to study cardiomyocyte biology using techniques that are complementary to in vivo systems. For example, the purity and ...