Name: isolation and culture of primary mouse keratinocytes from neonatal and adult mouse skin
Uploaded: 2017-07-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin at JoVE.com

Bu çalışma ULUSAL ARTRİT, MİSKÜLOKELETAL VE CİLT HASTALIKLARI ENSTİTÜSÜ (R01AR069653 - Zhang LJ) ve Ulusal Sağlık Destek Enstitüleri (5T32AR062496-03 - CA) tarafından desteklenmiştir.

Tüm hayvan deneyleri, UCSD Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır. 1. Yenidoğan Cildinde Primer Fare KC İzolasyonu ve Kültürü <ol><li> C57B / 6 vahşi tipli fare suşundan post-doğum günündeki 0-2 yenidoğan makas kullanarak kesilerek kurban edin. Bilek ve ayak bileği eklemlerinin hemen üzerindeki kolları kesin, daha sonra kuyruk tamamen kesip küçük bir delik bırakın. </li><li> Tüm cildin soyulması için önce kuyruktaki delik...

<ol>
	<li>Mauro, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+barrier+perturbation+abolishes+the+Ca2++and+K++gradients+in+murine+epidermis:+quantitative+measurement+using+PIXE.">Acute barrier perturbation abolishes the Ca2+ and K+ gradients in murine epidermis: quantitative measurement using PIXE.</a> J Invest Dermatol. 111 (6), 1198-1201 (1998).</li><li>Menon, G. K., Grayson, S., Elias, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ionic+calcium+reservoirs+in+mammalian+epidermis:+ultrastructural+localization+by+ion-capture+cytochemistry.">Ionic calcium reservoirs in mammalian epidermis: ultrastructural localization by ion-capture cytochemistry.</a> J Invest Dermatol. 84 (6), 508-512 (1985).</li><li>Elias, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+epidermal+calcium+gradient+coincides+with+key+milestones+of+barrier+ontogenesis+in+the+rodent.">Formation of the epidermal calcium gradient coincides with key milestones of barrier ontogenesis in the rodent.</a> J Invest Dermatol. 110 (4), 399-404 (1998).</li><li>Hennings, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+regulation+of+growth+and+differentiation+of+mouse+epidermal+cells+in+culture.">Calcium regulation of growth and differentiation of mouse epidermal cells in culture.</a> Cell. 19 (1), 245-254 (1980).</li><li>Zhang, L. J., Bhattacharya, S., Leid, M., Ganguli-Indra, G., Indra, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ctip2+is+a+dynamic+regulator+of+epidermal+proliferation+and+differentiation+by+integrating+EGFR+and+Notch+signaling.">Ctip2 is a dynamic regulator of epidermal proliferation and differentiation by integrating EGFR and Notch signaling.</a> J Cell Sci. 125 (Pt 23), 5733-5744 (2012).</li><li>Lai, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commensal+bacteria+regulate+Toll-like+receptor+3-dependent+inflammation+after+skin+injury.">Commensal bacteria regulate Toll-like receptor 3-dependent inflammation after skin injury.</a> Nat Med. 15 (12), 1377-1382 (2009).</li><li>Bernard, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+radiation+damages+self+noncoding+RNA+and+is+detected+by+TLR3.">Ultraviolet radiation damages self noncoding RNA and is detected by TLR3.</a> Nat Med. 18 (8), (2012).</li><li>Zhang, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+Peptide+LL37+and+MAVS+Signaling+Drive+Interferon-beta+Production+by+Epidermal+Keratinocytes+during+Skin+Injury.">Antimicrobial Peptide LL37 and MAVS Signaling Drive Interferon-beta Production by Epidermal Keratinocytes during Skin Injury.</a> Immunity. 45 (1), 119-130 (2016).</li><li>Borkowski, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-Like+Receptor+3+Activation+Is+Required+for+Normal+Skin+Barrier+Repair+Following+UV+Damage.">Toll-Like Receptor 3 Activation Is Required for Normal Skin Barrier Repair Following UV Damage.</a> J Invest Dermatol. 135 (2), 569-578 (2015).</li><li>Borkowski, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+3+activation+is+required+for+normal+skin+barrier+repair+following+UV+damage.">Toll-like receptor 3 activation is required for normal skin barrier repair following UV damage.</a> J Invest Dermatol. 135 (2), 569-578 (2015).</li><li>Zillessen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+role+of+dipeptidyl+peptidase+4+(DPP4)+in+primary+human+(pre)adipocytes.">Metabolic role of dipeptidyl peptidase 4 (DPP4) in primary human (pre)adipocytes.</a> Sci Rep. 6, 23074 (2016).</li><li>Wells, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+macrophage-inducible+C-type+lectin,+mincle,+is+an+essential+component+of+the+innate+immune+response+to+Candida+albicans.">The macrophage-inducible C-type lectin, mincle, is an essential component of the innate immune response to Candida albicans.</a> J Immunol. 180 (11), 7404-7413 (2008).</li><li>Vasioukhin, V., Bauer, C., Yin, M., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+actin+polymerization+is+the+driving+force+for+epithelial+cell-cell+adhesion.">Directed actin polymerization is the driving force for epithelial cell-cell adhesion.</a> Cell. 100 (2), 209-219 (2000).</li><li>Zhuang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF+receptor+p55+plays+a+pivotal+role+in+murine+keratinocyte+apoptosis+induced+by+ultraviolet+B+irradiation.">TNF receptor p55 plays a pivotal role in murine keratinocyte apoptosis induced by ultraviolet B irradiation.</a> J Immunol. 162 (3), 1440-1447 (1999).</li><li>Lichti, U., Anders, J., Yuspa, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+short-term+culture+of+primary+keratinocytes,+hair+follicle+populations+and+dermal+cells+from+newborn+mice+and+keratinocytes+from+adult+mice+for+in+vitro+analysis+and+for+grafting+to+immunodeficient+mice.">Isolation and short-term culture of primary keratinocytes, hair follicle populations and dermal cells from newborn mice and keratinocytes from adult mice for in vitro analysis and for grafting to immunodeficient mice.</a> Nat Protoc. 3 (5), 799-810 (2008).</li><li>Dlugosz, A. A., Glick, A. B., Tennenbaum, T., Weinberg, W. C., Yuspa, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+utilization+of+epidermal+keratinocytes+for+oncogene+research.">Isolation and utilization of epidermal keratinocytes for oncogene research.</a> Methods Enzymol. 254, 3-20 (1995).</li><li>Jones, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+mouse+keratinocytes.">Isolation and culture of mouse keratinocytes.</a> CSH Protoc. 2008, (2008).</li><li>Pirrone, A., Hager, B., Fleckman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+mouse+keratinocyte+culture.">Primary mouse keratinocyte culture.</a> Methods Mol Biol. 289, 3-14 (2005).</li><li>Yuspa, S. H., Kilkenny, A. E., Steinert, P. M., Roop, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+murine+epidermal+differentiation+markers+is+tightly+regulated+by+restricted+extracellular+calcium+concentrations+in+vitro.">Expression of murine epidermal differentiation markers is tightly regulated by restricted extracellular calcium concentrations in vitro.</a> J Cell Biol. 109 (3), 1207-1217 (1989).</li><li>Yuspa, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signal+transduction+for+proliferation+and+differentiation+in+keratinocytes.">Signal transduction for proliferation and differentiation in keratinocytes.</a> Ann N Y Acad Sci. 548, 191-196 (1988).</li><li>Fang, N. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+enhances+mouse+keratinocyte+differentiation+in+vitro+to+differentially+regulate+expression+of+papillomavirus+authentic+and+codon+modified+L1+genes.">Calcium enhances mouse keratinocyte differentiation in vitro to differentially regulate expression of papillomavirus authentic and codon modified L1 genes.</a> Virology. 365 (1), 187-197 (2007).</li><li>Kolly, C., Suter, M. M., Muller, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation,+cell+cycle+exit,+and+onset+of+terminal+differentiation+in+cultured+keratinocytes:+pre-programmed+pathways+in+control+of+C-Myc+and+Notch1+prevail+over+extracellular+calcium+signals.">Proliferation, cell cycle exit, and onset of terminal differentiation in cultured keratinocytes: pre-programmed pathways in control of C-Myc and Notch1 prevail over extracellular calcium signals.</a> J Invest Dermatol. 124 (5), 1014-1025 (2005).</li><li>Marcelo, C. L., Gold, R. C., Fairley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+1.2+mmol/l+calcium,+triamcinolone+acetonide,+and+retinoids+on+low-calcium+regulated+keratinocyte+differentiation.">Effect of 1.2 mmol/l calcium, triamcinolone acetonide, and retinoids on low-calcium regulated keratinocyte differentiation.</a> Br J Dermatol. 111, 64-72 (1984).</li></ol>

Cilt epidermisi vücudu dış ortamdan ayırmak ve korumak, su kaybı, patojenler, ısı ve UV ışınlarından hasar oluşturmak için kritik bir bariyer olarak işlev görür. KC&#39;ler epidermisin baskın hücre soylarıdır ve epidermal KC&#39;lerin birincil kültürü, bariyer oluşumunun biyolojik süreçlerini ve KC&#39;lerin in vitro ortamda hakaretlere tepkisini incelemek ve anlamak için yararlı bir araçtır. Burada neonatal ve erişkin fare derisinden birincil epiderma...

Cilt, vücudun en büyük organıdır ve dış tabaka olarak epidermisdir. Epidermis, vücudu çevreden ayırmak için sağlam bir epidermal bariyer oluşturmada kritik bir rol oynar ve böylece su kaybını önler ve alerjen, patojen ve UVB maruziyeti gibi çevresel hasarlardan korunma sağlar. Epidermis, farklılaşmamış bazal keratinositlerden (KCs) oluşan tek bir katmandan, bazal tabaka, bunu takiben bir östrus tabakası, granüler tabaka ve stratum corneum&#39;dan oluşan çok tabakalı bir tabakalı epitele dönüşür. Hem epidermal kök hücrelerden hem de transit amplifikatör hücrelerden oluşan bazal KC&#39;ler proliferatif ve farklılaşmamıştır. Bazal KC&#39;ler hücre döngüsünden çıkarken hücreler farklılaşmaya çalışırlar ve hücre-hücre kavşaklarının olgunlaşması ve bir epidermal geçirgenlik bariyeri (EPB) oluşumu eşliğinde epidermisin yüzeyine doğru giderek yer değiştirirler. Eğik tabakadaki KC&#39;ler, erken diferansiyasyonu ifade ederIyon belirteçleri, örneğin Keratin 10 (K10); KC&#39;ler granül tabakaya göç ederken, hücreler Filaggrin (FLG), Lorikrin (LOR) ve Involucrin (INV) gibi geç farklılaşma belirteçlerini ekspres eder. Stratum corneum&#39;da, KC&#39;ler terminal olarak diferensiye edilmiş korneositler haline gelir ve bunlar, sonunda yeni hücreler yerine geçtikten sonra süsleme yoluyla dökülür. Kalsiyum, epidermisin en fizyolojik ajanı olarak düşünülür ve benzer şekilde in vitro ve in vivo farklılaşmaları tetikler. Normal deri epidermisinde, kalsiyum iyonları karakteristik bir &quot;konsantrasyon gradyanı&quot; oluşturur ve konsantrasyonda deri yüzeyine doğru artar 1 , 2 , 3 . Kalsiyum konsantrasyonu, en alttaki tabakalardan (bazal ve spinöz katmanlar) düşük seviyelerden üst granüler katmandaki bir tepeye yükselir ve en yüzeysel katmanda (stratum corneum) ihmal edilebilir seviyelere düşer.<html> Kalsiyum degradasyonu, aynı zamanda, kalsiyum sinyallemesinin KC diferansiyasyonunda kritik bir rol oynadığını destekleyen bir bileşen geçirgenlik bariyerinin ortaya çıkması ile çakışarak gelişir. İn vitro düşük kalsiyum (0.02-0.1 mM) bazal KC&#39;lerin tek tabaka halinde çoğalmasını sağlarken, yüksek kalsiyum (&gt; 0.1 mM), hücrelerin terminal birleşimine hızlı ve geri döndürülemez bir taahhütte bulunur, bu da sıkı birleşim oluşumu ve indüksiyon ile gösterilir LOR ve INV&#39;nin bazal KC 4 , 5&#39;e yüksek kalsiyum muamelesi üzerine uygulanması. Bariyer oluşumuna ek olarak, epidermal KCler de cildin doğuştan gelen bağışıklık sisteminin önemli bir bileşenidir. UVB ışınlaması veya yaralanması üzerine salınan patojenlere veya hasar görmüş moleküler kalıplara (DAMP&#39;ler) yanıt olarak, KCs TNFa, IL6 ve IFNβ gibi inflamatuar sitokinleri büyük miktarda üreterek immün sistem aktivasyonuna yol açabilir&gt; 6 , 7 , 8 , 9 . KC&#39;lerden uygun iltihap sinyali patojen temizlemesi için gerekli olmakla birlikte, kontrol edilemeyen inflamatuar yanıt, sedef hastalığı ve rosacea 6 , 8 gibi oto-inflamatuar cilt hastalıklarının gelişimini tetikleyebilir. Genel olarak, KCler bozulmamış cilt bariyerini korumada ve patojen istilasına veya çevresel hakaretlere karşı bir bağışıklık tepkisi başlatmada hayati bir rol oynamaktadır. Bu nedenle, epidermal KC&#39;lerin birincil kültürü, epitel biyolojisini, KC farklılaşmasını ve ayrıca KC uyarılı doğal immün yanıtları incelemek için yararlı bir tekniktir. Primer fare epidermal KC&#39;lerin izolasyonu ve kültürü, KC&#39;nin çeşitli harici uyarıcılara duyarlılığı ve hassasiyeti nedeniyle zor bir süreç olabilir. Burada, yenidoğan fare derisinden KC&#39;leri izole etmek ve kültürlemek için bir yöntem anlatılmaktadır.Yetişkin fare kuyruğu cildi. Yetişkin KC izolasyonu için, fare dorsal deri kullanmıyoruz, çünkü bu dokudan yeterli miktarda canlı KC&#39;lerin izole edilmesi aşağıdaki nedenlerle zor olabilir: Birincisi, saç döngüsünün (telogen) dinlenme fazındaki yetişkin dorsal deri, Sadece 1-2 kat hücreli ince epidermis, düşük hücre verimi ve epidermisin dermisden ayrılmasına neden olur ki bu başarılı KC izolasyon için kritik adımdır. İkincisi, yetişkin dorsal deri üzerinde bulunan yüksek kıl follikülü yoğunluğu, epidermisin dermisden ayrılma zorluğuna daha fazla katkıda bulunur. Bunun yerine, yetişkin fare KC&#39;leri için kuyruk derisini rutin olarak kullanırız, çünkü bu epitel 3-5 epidermal KC tabakasıyla daha kalıntır. Ayrıca epidermal ayrılmaya müdahale etmeyen daha düşük bir saç follikülü yoğunluğu vardır, böylece fare yaşına ve saç döngüsüne bakılmaksızın yetişkin fare kuyruk derisinden KC izolasyonuna izin verir. İzole edilmiş neonaTal KC&#39;ler, jelatin kaplı kültür bulaşıkları üzerine ekilirken kolajen kaplı bulaşıklar yetişkin hücrelerin yenidoğan muadillerine kıyasla zayıf kalma yeteneklerinden dolayı izole yetişkin KC&#39;leri tohumlamak için kullanılır. Kültür fare KC&#39;lerine düşük kalsiyum bazal ortam, epidermal büyüme faktörü (EGF), sığır transferini, insülin benzeri büyüme faktörü (IGF1), prostaglandin E2 (PGE2), sığır serum albümini (BSA) ve hidrokortizon içeren dGS ile takviye edilmiştir. İlk kaplamadan 2-4 gün sonra, farklılaşmış KC&#39;lerin çoğu, günlük orta değişimler sırasında yıkanabilir ve kalan yapışık hücreler, tipik Arnavut kaldırımı morfolojisi 4 gösterir , çoğalmakta ve erken farklılaşma markörü K10&#39;u ifade etmemektedir.

<table width="633">
	<tbody>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="width:171px;height:100px;">C57BL/6 neonates or adult wildtype mice</td>
			<td style="width:177px;">Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:119px;">000664</td>
			<td style="width:167px;">Wildtype mice (originally purchased from Jackson Laboratory) are breeded and maintained in animal vivarium at UCSD.</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="width:171px;height:60px;">KC basal medium (EpiLife)</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">MEPICF500</td>
			<td style="width:167px;">basal medium for keratinocyte culture with 0.06 mM CaCl2</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="width:171px;height:60px;">Defined Growth Supplement (dGS)</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">S0125</td>
			<td style="width:167px;">defined growth supplements for culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Dispase powder</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">17105041</td>
			<td style="width:167px;">enzyme to dissociate the epidermis from dermis</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Attachment Factor</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">S006100</td>
			<td style="width:167px;">gelatin-based coating material</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Coating Matrix</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">R011K</td>
			<td style="width:167px;">Collagen-based coating material</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="width:171px;height:80px;">TrypLE</td>
			<td style="width:177px;">Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
			<td style="width:119px;">12604-013</td>
			<td style="width:167px;">A gentle trypsin-like enzyme to dissociate keratinocytes from epidermal sheet</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">100 &#956;m Cell Strainer Nylon mesh</td>
			<td style="width:177px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">352360</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="width:171px;height:60px;">CCK-8 cell viability Kit</td>
			<td style="width:177px;">Dojindo Molecular Technologies, Rockville, MD</td>
			<td style="width:119px;">CK04-11</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Mouse TNF (Mono/Mono) ELISA Set II</td>
			<td style="width:177px;">BD Biosciences, San Jose, CA</td>
			<td style="width:119px;">555268</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Corded Hand-Held UV Lamps</td>
			<td style="width:177px;">Spectronics, Westbury, NY</td>
			<td style="width:119px;">EB-280C</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:171px;height:20px;">8-watt UV tubes</td>
			<td style="width:177px;">Spectronics, Westbury, NY</td>
			<td style="width:119px;">BLE-8T312</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="width:171px;height:40px;">Light Inverted Microscope for cell culture</td>
			<td style="width:177px;">ZEISS, Jena, Germany</td>
			<td style="width:119px;">Axio Observer</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="width:171px;height:20px;">Fluorescent Microscope</td>
			<td style="width:177px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">BX41</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and culture of primary mouse keratinocytes from neonatal and adult mouse skin

Keratinosit (KC), cildin en dış tabakası olan epidermisdeki baskın hücre türüdür. Epidermal KCler, UVB ışınlaması veya patojenler gibi çevresel hasarlara karşı bozulmamış bir cilt bariyeri oluşturarak cilt savunmasını sağlamada ve ayrıca bu hakaretlere karşı iltihaplı bir tepki başlatarak kritik bir rol oynamaktadır. Burada, yenidoğan fare derisinden ve erişkin fare kuyruğu derisinden KC&#39;leri izole etme yöntemlerini açıklıyoruz. Ayrıca, tanımlanmış büyüme takviyeleri (dGS) kullanarak, çoğaltılmış fetüs sığır serumu (cFBS) ile kültür koşullarını tarif ederiz. İşlevsel olarak, hem yenidoğan hem de erişkin KC&#39;lerin yüksek kalsiyumun indüklediği terminal farklılaşması, sıkı birleşim oluşumu ve tabakalaşmaya son derece tepkisel olduğunu göstermektedir. Ek olarak, kültürlenmiş yetişkin KC&#39;ler UVB ile tetiklenen hücre ölümüne duyarlıdır ve UVB ışınlaması üzerine büyük miktarda TNF salabilirler. Birlikte, burada açıklanan yöntemler araştırmacılar için in vitro model kurulumu için yararlı olacaktırYenidoğan fare ve / veya yetişkin fare epidermal biyoloji incelemek için.

Yenidoğanın ve erişkin KC&#39;lerin yüksek kalsiyum indükte terminal farklılaşması. KCs kaplanmıştır ve 0.06 mM CaCl2 muhafaza primer fare, epidermal bir tek tabaka olarak büyüdü ve tek tek hücreler bir kaldırım taşı görünümünü gösteren, farklı hücre içi alana sahip çok kenarlı bir şekle sahiptir zaman konfluent (Şekil 1A ve Şekil 2A). CaCl2 0.2 mm kaldırma...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin at JoVE.com

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

Epidermal keratinositler fonksiyonel bir cilt bariyeri oluştururlar ve dış çevresel hakaretlere karşı ana savunmanın ön saflarında yer alırlar. Burada, neonatal ve erişkin fare derisinden epidermal keratinositlerin izolasyonu ve birincil kültürü için yöntemleri ve keratinositlerden gelen terminal farklılaşmayı ve UVB tetiklemeli enflamatuar yanıtın indüksiyonunu tarif ediyoruz.

Yenidoğan ve Erişkin Fare Ciltlerindeki Primer Fare Keratinositlerin İzolasyonu ve Kültürü

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Culture of Pulmonary Endothelial Cells from Neonatal Mice

Yenidoğan Fareler Pulmoner Endotel Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Endothelial cells provide a useful research model in many areas of vascular biology. Since its first isolation 1, human umbilical vein endothelial cells ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

İnsan Cilt Yetişkin Epitel Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation and Culture of Neonatal Mouse Cardiomyocytes

İzolasyon ve Kültür Yenidoğan Fare kardiyomiyositlerin

Cultured neonatal cardiomyocytes have long been used to study  myofibrillogenesis and myofibrillar functions. Cultured cardiomyocytes allow  for easy ...

Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

İzolasyon, Kültür ve Yetişkin Fare Cardiomyoctyes Fonksiyonel Karakterizasyonu

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Fare Primer Pankreas Asiner Hücreleri İzolasyon ve Kültür

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

Fare ve İnsan Kolon Doku Primer miyofibroblastlar İzolasyonu

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Yetişkin Fare insizör Diş Epitel Kök Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

İzolasyon ve Kültür Yetişkin Fare Hücre Sinyal için kardiyomiyositlerin ve<em&gt; In vitro</em&gt; Kalp hipertrofisi

Technological advances have made genetically modified mice, including transgenic and gene knockout mice, an essential tool in many research fields. Adult ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

İzolasyon ve Fare aort endotel hücreleri İlköğretim Kültür

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Isolation, Culture and Transduction of Adult Mouse Cardiomyocytes

İzolasyon, Kültür ve Yetişkin Fare kardiyomiyositlerde İletimi

Cultured cardiomyocytes can be used to study cardiomyocyte biology using techniques that are complementary to in vivo systems. For example, the purity and ...