Name: phase behavior of charged vesicles under symmetric and asymmetric solution conditions monitored with fluorescence microscopy
Uploaded: 2017-10-24T14:00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Phase Behavior of Charged Vesicles Under Symmetric and Asymmetric Solution Conditions Monitored with Fluorescence Microscopy at JoVE.com

هذا العمل هو جزء من اتحاد ماكسسينبيو، الذي تموله الوزارة الاتحادية للتعليم والبحوث الألمانية وجمعية ماكس بلانك.

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

النجاح في إنتاج جوفس لمرحلة الدولة الملاحظات تحت ظروف الملوحة العالية المتماثلة وغير المتماثلة
البروتوكولات المقدمة هنا يقدم استراتيجية لتقييم تأثير الملوحة العالية المخزن المؤقت وحل عدم التماثل في حالة المرحلة غشاء جوفس مشحونة عبر طائفة واسعة من التراكيب. واحدة من التحديات الرئيسية التي تواجه تحقيق هذا الهدف تم إنتاج جوفس مشحونة في المخازن المؤقتة للملوحة العالية.
ونحن بنجاح جوفس في محلول السكروز والعازلة عالية الملوحة التي تنتجها نهجاً تورم عفوية بسيطة، الذي يتضمن خطوة ترطيب قبل الفيلم الدهن المودعة وخطوة ترطيب نهائي بين عشية وضحاها لنمو حويصلة. من المهم ملاحظة أن ترسب الدهون وينبغي أن يتم على لوحة PTFE خشن لضمان انتشار المادة الدهنية حتى تؤتي الحويصلات أونيلاميلار. وعلاوة على ذلك، من الضروري تنفيذ كل خطوة أثناء إعداد حويصلة عند درجة حرارة حيث يكون الفيلم الدهن في حالة مرحلة متجانسة والسوائل. آخر، يمكن بوليديسبيرسي في تكوين السكان حويصلة والتحيز تحليل الدولة المرحلة النهائية من السكان. بروتوكول معين تورم عفوية من غلة جوفس أجمة حويصلة فيها من ناحية توفر إمكانية إعادة تعليق ذلك بكميات صغيرة للحصول على التركز الشديد تشتت حويصلة، ومن ناحية أخرى يوفر حلاً غير متماثل الشروط عبر الغشاء مع التقليل من التخفيف من حويصلات8،28. من الضروري أن خلال تمييع حويصلة أو حل خارجي تبادل، الداخل وخارج أوسمولاريتيس تظل متطابقة كما قد حمل مورفولوجيا التغييرات الناجمة عن عدم التطابق الاسموليه أو منع لو + Ld مرحلة الفصل41 ، أو في حالة ناقص التوتر الظروف، قد تؤدي إلى انفجار حويصلة.
هنا، أسفرت المحاولات الرامية إلى تحسين البروتوكولات اليكتروفورميشن في الحل الملوحة العالية إنتاج لا جوفس بينما تورم بولي-بمساعدة أسفرت عن الحويصلات مولتيلاميلار. على الرغم من أنه يتطلب وقت أطول للتحضير والنتائج على دفعات حويصلة من نوعية أدنى10،17، والنجاح في إنتاج الحويصلات مشحونة بعفوية وتورم يأتي مع مزايا إضافية. ويطالب بالحد الأدنى من الجهد بينما أسفر عن عائدات كافية للتحليلات الإحصائية دفعة، واشترط على عكس اليكتروفورميشن، لا معدات متطورة أو التحسين. وعلاوة على ذلك، لم يلاحظ أي التلوث باكسدة الدهن42،43. ووفقا للأدب لا توجد اختلافات بين التراكيب الدهن من حويصلات والأرصدة المقابلة من حيث أنها كانت تزرع7،17. وعلاوة على ذلك، لا يطالب تكوين حويصلة على الركازة PTFE إدراج أي التلوث خلافا لأساليب تورم جل المساعدة حيث يمكن إدخال الجزيئات الأجنبية من الركازة23. ويأتي اليكتروفورميشن مع زيادة العيوب المتصلة بإضعاف حويصلة المفرط عند إنشاء شروط الحل غير متماثل. جوفس اليكتروفورميشن التي تنتجها موجودة عادة تشتت متجانسة (على النقيض من تعليق حويصلة مركزة للغاية في شكل أجمة تشكلت خلال تورم عفوية). أي تمييع الحل الخارجي يضعف إلى حد كبير عدد الحويصلات كذلك. وعلاوة على ذلك، على مدى هذا العمل فقد لوحظ أن جوفس دوبج/eSM/تشول تنتجها اليكتروفورميشن في السكروز أصبحت غير مستقرة إذا كانت مخففة في المخزن المؤقت للملوحة العالية. الأسفار من بقع الدهون على الشريحة المجهر أشارت إلى أن الحويصلات سوف انفجر قبل انتهاء التفتيش البصري لم يكن ممكناً. يمكن أن يعزى عدم الاستقرار هذا إلى توتر غشاء مرتفعة من حويصلات أعده اليكتروفورميشن بالمقارنة مع تلك التي حصل عليها تورم عفوية10.
على الرغم من أن إضعاف حويصلة نهج سهلة وسريعة لإنشاء ظروف الحل جيوف غير المتناظر، تنجز بتبادل حل جزئي خارجي، فقط لو بنسبة عالية (هنا: 95%، الشكل 2)، وإلى تمييع، آثار وستظل تورم الحل. اختيار درجة تبادل الحلول الخارجية هو مفاضلة بين بيبيتينج حتى أجمة حويصلة جنبا إلى جنب مع الحل تورم (القسم 2) وعدم إذابته كثيرا. ومن ثم، قمنا بعرض نهج بديلة موائع جزيئية مناقشتها في مكان آخر في التفصيل37 التي تسمح لتبادل حلول خارجية سريعة وكاملة خلال المرحلة جيوف الدولة الملاحظات للتحقق من ملاحظات الدولة المرحلة لتمييع حويصلات. ولوحظت الملاحظات من مرحلة الدولة الاختلافات عند تغيير من متماثل لشروط الحل غير المتناظر الواقع متفقة. بالإضافة إلى ذلك، كل الأساليب إيجاد حل غير المتناظر الشروط المبينة هنا هي سريعة نسبيا (مقارنة الرقم8)، وتأتي مع أي مخاطر معروفة لتغييرات التكوين المحلي (قارن الإشارات30،31)، زيادة في التوتر الغشاء (قارن الإشارة32)، أو التدفئة المحلية (قارن مرجع33)، أما بالنسبة للأساليب البديلة وناقش في المقدمة. أثناء محاصرة موائع جزيئية، توازن ناضح بين حويصلة الداخلية والخارجية ليست ضرورية فقط لتجنب مرحلة الدولة القطع الأثرية كما ذكر أعلاه ولكن أيضا الانكماش الناجم عن ظروف الحل مكثف قد يسبب جوفس المحاصرين كشف من خلال الوظائف بعد تبادل حلول خارجية.
على الرغم من أن تورم عفوية قد طبقت بنجاح أن ينمو بدون تهمة حويصلات من نظام شول/دوبك/الإدارة السليمة بيئياً، وفي حالات أخرى، عدم وجود تهم قد تنال من جيوف تورم نظراً لعدم الناتجة من التنافر بين بليرس الفردية44 . تمديد فترة ما قبل تورم أو إدخال هيدجروبس دهن ضخمة قد مواجهة هذه المسألة45. وعلاوة على ذلك، قد تختلف استقرار حويصلة بعد إضعاف بحلول مختلفة عن تلك المستخدمة تورم للتراكيب المختلفة الدهن وتمييع وسائط الإعلام، ونحن لم التحقيق هنا. ونحن أيضا لم تستكشف إمكانية ضبط القطر جوف متوسط مع طريقة إعداد المقدمة هنا. ولكن المعلمات مثل تكوين حويصلة وتورم الحل من المحتمل أن تؤثر على النتائج. قد تسفر عن تطبيق أساليب بديلة46 حويصلات أكبر للدهون والحلول المستخدمة هنا، بيد أنها قد تأتي مع العيوب الأخرى المرتبطة بهذه الطريقة. يوفر النهج المبين أعلاه لإنتاج جوفس في ظروف الملوحة العالية المتماثلة وغير المتماثلة أداة محتملة لإجراء مزيد من الدراسات حويصلات مكونة من التراكيب المختلفة الدهن وتفرقوا في وسائل الإعلام المختلفة. كما أننا لم تستكشف هذه الإمكانيات، والمحاكمات في المستقبل سوف تظهر عموما كيف يمكن تطبيق أساليب إعداد وتمييع جيوف.
مراقبة المرحلة فصل في درجات حرارة متفاوتة
وتوجد الأجهزة تجريبية مختلفة مناسبة لدراسة جوفس في درجات حرارة متفاوتة. بينما هذه الأجهزة عادة لا وصف بالتفصيل داخل الأدب، يعرض العمل الحالي جمعية أساسية المنطبقة على مثل هذه الدراسات.
_content "> قياسات التحكم تظهر أن درجة حرارة هذا المنزل صممت وصنعت الدائرة تحديداً يسيطر الحرارة وتدرجات حرارة داخل الدائرة ضمن القرار درجة الحرارة التجريبية. أنه يكفل أن الظروف الحرارية التجريبية تتسق مع قراءة الحرارة.
خلال تقييم جيوف المرحلة الدول عبر نطاق واسع من درجات حرارة، من المهم أن الحويصلات ملاحظتها هي اكويليبراتيد جيدا بعد أن تم تغيير درجة الحرارة. إحدى الطرق الممكنة لضمان ذلك هو التحقق من التباطؤ. إذا كان التباطؤ الحالي، ينبغي أن تراجع الخطوات درجة الحرارة و/أو زيادة مرات الموازنة. كدرجة الحرارة تأسيس التحكم في هذا العمل بالحرارة المستندة إلى الماء، يقتصر نطاق درجات الحرارة العامل مثالي 0-100 درجة مئوية. هذا ويمكن توسيع النطاق باستخدام السوائل الأخرى مراقبة درجة الحرارة مثل النفط أو عن طريق استخدام الأجهزة الأخرى، مثل جهاز بلتيير. في الممارسة العملية، كما يحد درجة حرارة العامل التكثيف ممكن أو التبخر. وبالإضافة إلى ذلك، حدوث تدرج درجة الحرارة ثابت الدولة عبر دائرة المراقبة لدرجات الحرارة بعيداً عن درجة حرارة الغرفة، يصبح أكثر احتمالاً. أيضا، قد أضرت معدات التصوير في درجات الحرارة القصوى. لنطاقات درجة الحرارة النموذجية الملائمة للدهن حويصلة الدراسات (~ 10-50 درجة مئوية7،9) ينبغي النظر في الأضرار التي لحقت معدات للمراقبة لكن عادة ليس من المتوقع.
حويصلة مجال المراقبة الفنية
وهناك عدد من المصادر لمراقبة القطع الأثرية باستخدام مجهر الأسفار واسع المجال. أولاً وقبل كل شيء، واحد ينبغي أن يكون علم أن يحدد الحد الأقصى للقرار صاد للكائن تطبيق للتفتيش البصري للدول مرحلة حويصلة حد الكشف عن مجالات الدهن وفقا ل: 
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56034/56034eq2v2.jpg"> λ هو الطول الموجي الانبعاثات، حيث NA هو الفتحة الرقمية للهدف. هدفا نموذجية مع 40 x التكبير ونا من 0.6 الذي يكتشف الانبعاثات خضراء خفيفة حوالي 560 نانومتر ستصل الدقة بصرية من ~0.6 ميكرومتر. ومن ثم، الدراسات التي تقارن بين الدول مرحلة من حويصلات مصنوعة من خلائط الدهن خاصة بين مختلف شروط يجب استخدام نفس الهدف لخليط دهن نفسه.
قطعة أثرية أخرى هو حدوث مجالات الدهن نتيجة للتأكسد الدهن نتيجة تعرض لمدة طويلة للإثارة الخفيفة41. صور--الضرر يحدث تفضيلي على الهيدروكربونات غير المشبعة دهن مويتيس. وفي الواقع، بعض التراكيب الدهنية، مثل تشكيل المجال من حويصلات متجانسة في البداية فقد لوحظ هنا بعد فترة طويلة من التعرض للضوء للإثارة (~ 30 ثانية). وللتصدي لهذه المسألة، أبقى على ضوء الإثارة مركزة في حقل واحد لعرض لبضع ثوان فقط لتقييم مرحلة الدولة. ومن ثم، كان ديك18 مناسبة لأغراضنا. الأصباغ الأخرى، ومع ذلك، قد تكون أكثر حساسية وقد تحتاج إلى معالجة في أدنى درجات الإثارة ومع الإثارة أقصر التعرض للضوء مرات.
يحتمل أن تختلط إجهاد القص الميكانيكية من نقل ماصة الحويصلات المجالات مؤقتاً، مما يشوه سلوك مرحلة حويصلة الظاهر. لبعض دفعات، أظهرت حويصلات مختلف السلوكيات مرحلة مختلفة 0 دقيقة و 5 دقائق بعد ماصة نقل إلى ساترة المجهر. كما ثبت القص الإجهاد الناجم عن تدفق السوائل في الجهاز موائع جزيئية ينتج المجال خلط47. ينبغي أن تترك حويصلات دون عائق لكمية كافية من الوقت للموازنة قبل الملاحظة. ضمن هذه الدراسة، تركت حويصلات المحاصرين على الجهاز موائع جزيئية دون عائق ح 1 بعد تحميل حويصلة والتبادلات الحل قبل الملاحظة.
لتجنب بعض الصعوبات المذكورة أعلاه، فضلا عن القيود المفروضة بالحد حيود الضوء، والطرق البديلة مثل مطيافية الرنين المغناطيسي النووي48 أو تقنيات الفحص المجهري سوبر القرار49 يمكن استخدامها.
الاستنتاجات والتوقعات
ويوضح عمل قدم مجموعة من الأساليب التي تسمح لتحليل تأثير ظروف الملوحة العالية الحل المتماثلة وغير المتماثلة على انفصال الغشاء. الأساليب المقدمة كلها مناسبة لتطبيقات أخرى. على سبيل المثال، يوفر الجهاز موائع جزيئية منبرا لدراسة حركية تشكيل المجال والاختفاء عند تنظيم دورات تعريفية لحل عدم التناظر. أيضا، يمكن دراسة المظهر المجال كدالة لتركيز الملح بهذه الطريقة. يمكن أيضا استخدام كافة الأساليب للبحث في تأثير على سلوك مرحلة استخدام أي حلول أخرى للفائدة.

من أي وقت مضى منذ مراقبة المجالات ميكرون الحجم في حويصلات سائل مفصولة بالمرحلة أونيلاميلار العملاقة (جوفس) بالفحص المجهري الأسفار، استخدمت جوفس كنظام نموذجي للتحقيق في الدهن طوف فرضية1،2 , 3 . منطقة بها بلير بذاتها تكمن في أن النطاق من الخلايا البيولوجية، فمناسبة يقلد أغشية البلازما تتميز اﻷطواف المفترضة. تم إجراء العديد من الدراسات على هذه جوفس مع حويصلات مبعثرة في المياه النقية أو السكروز أو حلول منخفضة الملوحة4،5،6،،من78. هذه الظروف، ومع ذلك، لا تعكس التعرض ذات الصلة فسيولوجيا من بيوميمبرانيس إلى بيئات عالية الملوحة وعدم التماثل في الحل عبر غشاء كما الشروط للخلايا.
في هذا العمل وفي منشور سابق من لدينا مجموعة9، بحثت دول المرحلة مشحونة جوفس متعددة المكونات كدالة على وجود عدم تناسق الملح والحل عبر الغشاء. وأعدت جوفس من خلائط نسب مختلفة من ديوليويلفوسفاتيديلجليسيرول (دوبج)، والبيض سفينجوميلين (eSM)، ونسبة الكولسترول في الدم (شول) في محلول السكروز (مع الاسموليه لموسم 210/كغ) أو العازلة عالية الملوحة (100 ملم كلوريد الصوديوم، 10 مم تريس، درجة الحموضة 7.5، 210 موسم/كغ). اختيار المحتوى الدهني له ما يبرره من البيانات التي تم الحصول عليها في مرحلة الرسم التخطيطي لهذا الخليط6،8.
عدد من الطرق لإعداد جوفس متوفرة في الأدب10،،من1112 (لاحظ أنه هنا، لا نعتبر تلك التي تنطوي على نقل الدهون من القائم على النفط إلى مرحلة مائي 13 , 14 بسبب الخطر الكامن من مخلفات النفط المتبقي في الغشاء مما قد يؤثر على سلوك المرحلة). ويرتبط إعداد جوفس في المخزن المؤقت للملوحة العالية مع التحديات المحددة. لحلول منخفضة القوة الأيونية، يعرض15،طريقة اليكتروفورميشن16 طريقة سريعة لتحضير جوفس في الغلات العالية مع تذكر عيوب10،17. الأسلوب الذي يستند إلى إيداع طبقة من الدهون على سطح موصل (مسرى) وتجفيف لهم وترطيب لهم مع محلول مائي حين تطبيق حقل التيار متردد. ومع ذلك، يتطلب هذا الأسلوب إجراء تعديلات إذا الملح موجود في ال18،محلول مائي19. فمن المفترض أن القوة الدافعة لنمو حويصلة من اليكتروفورميشن هو اليكتروسموسيس16 التي تعرقله في كوندوكتيفيتيس ارتفاع20. ومن ثم، اليكتروسويلينج جوفس في الحلول عالية الملوحة ليس نهجاً واضحة أنها تتطلب التحسين لتركيزات الملح مختلفة موجودة في الحل تورم. حويصلة ساعد جل تورم21،22 بديل محتمل اليكتروفورميشن مع أسرع حتى تشكيل مرات. يبني هذا النهج على ترطيب الفيلم الدهن المعززة عند استخدام هلام ([اغروس] أو كحول البولي فينيل (PVA)) كركيزة. ومع ذلك، تأتي هذه النهج، مع خطر تلوث الغشاء في حالة القائم على [اغروس] تورم23 حدود و/أو درجة الحرارة كما في حالة تورم المستندة إلى بولي. وبالمثل، بروتوكولا لتنمو جوفس على الركازة ورقة السيلولوز في الآونة الأخيرة أنشئت24. القضايا العامة المتعلقة بهذه الطريقة هي عدم وجود رقابة على نقاء الركيزة وكذلك استخدام كميات كبيرة من الدهون. في هذا العمل، وسوف يعرض ويقدم مزايا الأسلوب الأكثر تقليدية لإعداد جيوف، إلا وهي عفوية تورم الأسلوب25،26. وهو يتألف من جفاف طبقة دهن على الركازة نافرة، ترطيب أنه في الجو بخار الماء، وتورم اللاحقة في تورم الحل المنشود (انظر الشكل 1 والتفاصيل في قسم البروتوكول). هذا الأسلوب لا يتيح السيطرة على توزيع حجم حويصلة والنتائج في حويصلات أصغر عموما بالمقارنة مع الأساليب ويساعد فيها الإنتاج الحقل الكهربائي، يعني البوليمر الركازة أو موائع جزيئية. ومع ذلك، حويصلة نوعية وحجم مناسبة لفحص حالة المرحلة الغشاء كما استكشفت هنا.
خلق التفاوت بين الحلول عبر غشاء حويصلة يرتبط مع بعض التحديات، وكذلك. يتمثل أحد النهج استخداماً تمييع تعليق حويصلة في27،الحل الخارجي المطلوب28مباشرة. ومع ذلك، وهذا يقلل أيضا من كثافة توزيع حويصلة. استراتيجية أخرى لبطء تبادل الحل الخارجي حول جوفس استقروا في الجزء السفلي من خلية التدفق التي تسمح للحل في--وأووتفلوكس. لتفادي إزعاج أو حتى فقدان الحويصلات مع التدفق، هي معدلات التدفق المنخفض التطبيقية8، مما يجعل هذا النهج عدم كفاية الوقت. علاوة على ذلك، لم يكن أي من هذين النهجين ضمانات تبادل الحلول الكاملة الخارجية. حلاً واضحا شل حويصلات تفاديا لفقدان لهم أثناء تبادل حلول خارجية. على سبيل المثال، يمكن أن تكون مربوطة بيوتينيلاتيد جوفس على سطح المغلفة ستريبتافيدين29. ومع ذلك، قد يؤدي هذا النهج إلى الاختلافات التركيبية في يجري التقيد بها وبالتالي قطع الغشاء غير التقيد30،31. تطبيق المغناطيسي أو المجالات الكهربائية فخ النتائج حويصلات في فرض الغشاء التوتر32. استخدام الملقط الضوئية إلى اعتراض حويصلة يتطلب وجود مقبض تعلق (أي حبة)، بينما قد تشمل استخدام نقالات الضوئية التدفئة المحلية33. كما يمكن أن يتحقق ملائمة جوفس بتزايد عليها في أسلاك البلاتين دون مفرزة النهائي34. لكن هذا غلة الحويصلات التي ليست معزولة، والتي ترتبط عادة بالأسلاك أو غيرها حويصلات بأنابيب رقيقة الدهن (الحبال).
قدم عمل يسلط الضوء على استراتيجيات للتغلب على القيود المذكورة أعلاه. أولاً نقدم وصفاً مفصلاً لطريقة تورم عفوية تكييفها والأمثل لإنتاج جوفس في المخازن المؤقتة للملوحة العالية. ثم نقدم أسلوبين لإنشاء شروط الحل غير متماثل بتمييع بسيطة أو استخدام جهاز موائع جزيئية بكفاءة. لأن هدفنا هو تحليل لحالة المرحلة غشاء جوفس في حل مختلف الظروف، وتصف المقاطع اللاحقة معايير نجاح التحليل الإحصائي وتلميحات الحالية لتجنب تصنيف كاذبة.
التحليلات التي أجريت تحت ظروف متحاور كذلك تحت درجات حرارة متفاوتة. بينما درجة حرارة مئويةأونترول هو استخداماً، وتفاصيل حول الدوائر التجريبية-التحكم في درجة الحرارة نادراً ما يوصف. ويرد هنا، بإعداد بني داخلية لمراقبة جوفس في ظروف الحرارة المختلفة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-(1&#39;-rac-glycerol), sodium salt</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>840475C</td>
			<td>abbreviated as DOPG in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chicken egg sphingomyelin</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>860061</td>
			<td>abbreviated as eSM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cholesterol (ovine wool, &#62; 98 %)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>700000</td>
			<td>abbreviated as Chol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,1&#129;&#39;-dioctadecyl-3,3,3&#39;,3&#39;-tetramethylindocarbocyanine perchlorate</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>D-282</td>
			<td>abbreviated as DiIC18</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform, HPLC grade (&#8805; 99.8 %)</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl (&#62; 99.8 %)</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl (37 %)</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris (&#8805; 99.9 %)</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose (&#8805; 99.5 %)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Threaded vial 45x27 mm, 15 mL</td>
			<td>Kimble</td>
			<td></td>
			<td>Soda flat bottom, white screw cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>MP220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmometer</td>
			<td>Gonotec</td>
			<td>Osmomat030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epi-fluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Observer D1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 40x, 0.6 NA</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LD Achroplan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 40x, 0.75 NA</td>
			<td>Leica</td>
			<td>506174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 63x, 0.9 NA</td>
			<td>Leica</td>
			<td>506148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide, 56x26 mm, 0.17 &#177; 0.01 mm</td>
			<td>Menzel-Gl&#228;ser</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slip, 22x22 mm, 0.17 &#177; 0.01 mm</td>
			<td>Menzel-Gl&#228;aser</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm &#34;M&#34;</td>
			<td>Bremix Flexible Packaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes, 5 mL, 10 mL</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.45 &#181;m syringe filter</td>
			<td>GVS North America</td>
			<td>Cameo 25AS, 1213723</td>
			<td>Acetate, sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

phase behavior of charged vesicles under symmetric and asymmetric solution conditions monitored with fluorescence microscopy

السائل-أمر بفصل المرحلة أونيلاميلار العملاقة حويصلات (جوفس) نستعرض تتعايش والمجالات اضطرابه السائل أداة البيوفيزيائية مشتركة للتحقيق في فرضية طوف الدهن. ومع ذلك، العديد من الدراسات، إهمال أثر الظروف الفسيولوجية الحل. في هذا الحساب، يعرض العمل الحالي تأثير الملوحة العالية العازلة وعبر غشاء حل عدم التماثل على سائل انفصال مشحونة جوفس نمت من ديولييلفوسفاتيديلجليسيرول، سفينجوميلين البيض والكوليسترول في الدم. وجرت دراسة الآثار تحت ظروف درجة الحرارة متحاور ومتفاوتة.
يمكننا وصف المعدات واستراتيجيات تجريبية قابلة للتطبيق لمراقبة استقرار المجالات السائل تتعايشان في حويصلات مشحونة تحت ظروف الحل الملوحة العالية المتماثلة وغير المتماثلة. ويشمل هذا نهج إعداد مشحونة جوفس متعددة المكونات في المخزن المؤقت للملوحة العالية في درجات حرارة عالية. البروتوكول يستلزم الخيار لإجراء تبادل الحل الخارجي بصورة جزئية بخطوة تخفيف بسيط مع التقليل من إضعاف حويصلة. ويرد كنهج بديل استخدام جهاز موائع جزيئية تسمح تبادل حلول خارجية كاملة. ودرست أيضا آثار الحل على انفصال تحت درجات حرارة متفاوتة. وتحقيقا لهذه الغاية، نحن نقدم التصميم الأساسي والأداة المساعدة لدائرة الرقابة الداخلية درجة الحرارة بنيت. وعلاوة على ذلك، علينا أن نفكر في تقييم الدولة المرحلة جيوف المزالق المرتبطة معها، وكيفية التغلب عليها.

Watch this Scientific Journal Video about Phase Behavior of Charged Vesicles Under Symmetric and Asymmetric Solution Conditions Monitored with Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Phase Behavior of Charged Vesicles Under Symmetric and Asymmetric Solution Conditions Monitored with Fluorescence Microscopy

كثيرا ما تهمل تجارب على مرحلة فصل أونيلاميلار العملاقة حويصلات (جوفس) الظروف الفسيولوجية الحل. ويعرض هذا العمل النهج لدراسة تأثير الملوحة العالية المخزن المؤقت على المرحلة سائل فصل في مشحونة جوفس متعددة المكونات كدالة عبر غشاء حل التباين ودرجة الحرارة.

مرحلة السلوك من حويصلات مشحونة بظروف الحل المتماثلة وغير المتماثلة رصدها بالفحص المجهري الأسفار

Phase-separated giant unilamellar vesicles (GUVs) exhibiting coexisting liquid-ordered and liquid-disordered domains are a common biophysical tool to ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Determination of the Gas-phase Acidities of Oligopeptides

تحديد الحموضة في مرحلة غاز من Oligopeptides

Amino acid residues located at different positions in folded proteins often exhibit different degrees of acidities. For example, a cysteine residue ...

Particles without a Box: Brush-first Synthesis of Photodegradable PEG Star Polymers under Ambient Conditions

الجسيمات دون مربع: التجميعي فرشاة والعشرين من Photodegradable PEG البوليمرات ستار في ظل الظروف المحيطة

Convenient methods for the rapid, parallel synthesis of diversely functionalized nanoparticles will enable discovery of novel formulations for drug ...

Mizoroki-Heck Cross-coupling Reactions Catalyzed by Dichloro{bis[1,1',1''-(phosphinetriyl)tripiperidine]}palladium Under Mild Reaction Conditions

Mizoroki-Heck Cross-coupling Reactions Catalyzed by Dichloro{bis[1,1',1''-phosphinetriyltripiperidine]}palladium Under Mild Reaction Conditions

Mizoroki-هيك ردود الفعل عبر اقتران يحفزه ديكلورو {مكرر [1،1 &#39;،&#39;&#39; 1 - (phosphinetriyl) tripiperidine]} البلاديوم تحت ظروف التفاعل معتدل

Dichloro-bis(aminophosphine) complexes of palladium with the general formula of [(P{(NC5H10)3-n(C6H11)n})2Pd(Cl)2] (where n = 0-2), belong to a new family ...

Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology

منهجية الاصطناعية لغير المتماثلة الفيروسين المستمدة الأنظمة الحيوية المزدوجة عبر الصلبة منهجية تستند الراتنج المرحلة

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. ...

A Simple Method for the Size Controlled Synthesis of Stable Oligomeric Clusters of Gold Nanoparticles under Ambient Conditions

طريقة بسيطة لحجم تجميع الشواهد من الكتل بلازميدة قليلة القسيمات مستقرة من جزيئات الذهب في ظل الظروف المحيطة

Reducing dilute aqueous HAuCl4 with sodium thiocyanate (NaSCN) under alkaline conditions produces 2 to 3 nm diameter nanoparticles. Stable grape-like ...

Construction and Systematical Symmetric Studies of a Series of Supramolecular Clusters with Binary or Ternary Ammonium Triphenylacetates

البناء ونظامية الدراسات متماثل من سلسلة من Supramolecular مجموعات مع ثنائي أو ترناري Triphenylacetates الأمونيوم

Functions of clusters in nano or sub-nano scale significantly depend on not only kinds of their components but also arrangements, or symmetry, of their ...

A Protocol for Electrochemical Evaluations and State of Charge Diagnostics of a Symmetric Organic Redox Flow Battery

بروتوكول لالكهروكيميائية التقييمات والدولة من تهمة تشخيص ومتماثل العضوية الأكسدة والاختزال تدفق البطارية

Redox flow batteries have been considered as one of the most promising stationary energy storage solutions for improving the reliability of the power grid ...

Probing the Structure and Dynamics of Interfacial Water with Scanning Tunneling Microscopy and Spectroscopy

سبر بنية وديناميات مياه السطح البيني مع مسح نفق مجهر والتحليل الطيفي

Water/solid interfaces are ubiquitous and play a key role in many environmental, biophysical, and technological processes. Resolving the internal ...

Fabricating High-viscosity Droplets using Microfluidic Capillary Device with Phase-inversion Co-flow Structure

اختﻻق قطرات اللزوجة عالية باستخدام "جهاز الشعرية موائع جزيئية" مع "هيكل تدفق" المشارك عكس المرحلة

The generation of monodisperse droplets with high viscosity has always been a challenge in droplet microfluidics. Here, we demonstrate a phase-inversion ...

Solid-phase Synthesis of [4.4] Spirocyclic Oximes

خلاصة المرحلة الصلبة [4.4] سبيروسيكليك أوكسيميس

A convenient synthetic route for spirocyclic heterocycles is well sought after due to the molecule&#39;s potential use in biological systems. By means of ...