Name: phase behavior of charged vesicles under symmetric and asymmetric solution conditions monitored with fluorescence microscopy
Uploaded: 2017-10-24T14:00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Phase Behavior of Charged Vesicles Under Symmetric and Asymmetric Solution Conditions Monitored with Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Dette arbejde er en del af MaxSynBio-konsortiet, der er i fællesskab finansieret af Forbundsministeriet for uddannelse og forskning af Tyskland og Max Planck Society.

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Vellykket produktion af GUVs til fase stat bemærkninger under symmetriske og asymmetriske high-saltholdighedsforhold
Protokollerne præsenteres her introducerer en strategi til at vurdere høj saltholdighed buffer og løsning asymmetri indflydelse på tilstanden membran fase af ladede GUVs over en bred vifte af kompositioner. En af de største udfordringer for at nå dette mål var produktionen af ladede GUVs i high-saltholdighed buffere.
Vi produceret med succes GUVs i rørsukkeropløsning og høj-saltvand buffer af en enkel spontan hævelse tilgang, som omfatter en forudgående hydrering skridt af deponerede lipid film og en overnight endelige hydrering skridt for vesikel vækst. Det er vigtigt at bemærke, at lipid depositionen bør ske på en ru PTFE plade at sikre selv lipid spredning for at give unilamellar vesikler. Derudover er det vigtigt at udføre hvert skridt under vesikel forberedelse ved en temperatur, hvor filmens lipid er i en homogen og flydende fase. Ellers, vesikel befolkning kan være polydisperse i sammensætning og bias endelige befolkning fase stat analyse. Den angivne protokol for den spontane hævelse af GUVs udbytter en vesikel klump, som på den ene side giver mulighed for at suspendere det i små mængder til at opnå stærkt koncentreret vesikel dispersioner, og på den anden side giver asymmetriske løsning forhold på tværs af membranen samtidig minimere fortyndingen af vesikler8,28. Det er vigtigt at under vesikel fortynding eller eksterne løsning udveksle, inde og uden for osmolarities forbliver matchede som morfologi ændringer forårsaget af osmolaritet uoverensstemmelser kan fremkalde eller forhindre Lo + Ld fase adskillelse41 eller, i tilfælde af hypotonic betingelser, kan føre til vesikel brister.
Her, resulterede forsøg på at optimere electroformation protokoller i høj saltholdighed løsning i produktionen af nogen GUVs mens PVA-assisteret hævelse givet multilamellar vesikler. Selv om det kræver længere forberedelse gange og resultater i vesikel partier af lavere kvalitet10,17, den vellykkede produktion af ladede vesikler af spontan leveres hævelse med ekstra fordele. Det kræver minimal indsats mens medfører tilstrækkelig udbytter til analyser, statistiske batch, og i modsætning til electroformation, ingen sofistikeret udstyr eller optimering var påkrævet. Derudover observeret ingen forureninger af lipid oxidation42,43. Ifølge litteraturen er der ingen forskelle mellem lipid kompositioner af vesikler og de tilsvarende bestande, hvorfra de blev dyrket7,17. Derudover vesikel dannelsen på en PTFE substrat ikke om optagelse af eventuelle forureninger i modsætning til gel-assisteret hævelse metoder hvor udenlandske molekyler kan indføres af substrat23. Electroformation leveres med yderligere ulemper relateret til overdreven vesikel fortynding ved oprettelse af asymmetriske løsning betingelser. GUVs produceret af electroformation er som regel til stede som en homogen spredning (i modsætning til stærkt koncentreret vesikel suspensionen i form af en klump, der dannes i spontane hævelse). Enhver fortynding af den eksterne løsning ville væsentligt fortyndet antallet af vesikler så godt. Desuden, i løbet af dette arbejde, det blev observeret, DOPG/eSM/Chol GUVs produceret af electroformation i saccharose blev ustabil, hvis fortyndes i høj saltholdighed buffer. Fluorescens fra lipid patches på objektglas angivet at vesikler ville briste før deres besigtigelse var muligt. Sådan ustabilitet kan tilskrives en forhøjet membran spænding af vesikler udarbejdet af electroformation i forhold til dem, der opnås ved spontan hævelse10.
Selvom vesikel fortynding er en nem og hurtig metode til at oprette asymmetriske GUV løsning betingelser, det kun udretter en ekstern delløsning exchange, omend i en høj brøkdel (her: 95%, figur 2), som efter fortynding, spor af det hævelse løsning vil forblive. Valget af graden af den eksterne løsning exchange er et trade-off mellem pipettering op vesikel klump sammen med den hævelse løsning (afsnit 2) og ikke udvande det alt for meget. Derfor indførte vi en alternativ mikrofluid tilgang diskuteret andetsteds i detaljer37 , der giver mulighed for en hurtig og fuldstændig eksterne løsning exchange under GUV fase stat observationer at kontrollere fase stat bemærkninger for fortyndet vesikler. Observationer af fase stat variationer når du skifter fra symmetrisk til asymmetriske løsning betingelser var faktisk observeret for at være enige. Derudover begge metoder til at generere asymmetriske løsning betingelser vises her, er sammenligneligt hurtig (Sammenlign Ref.8) og kommer med ingen kendte risici af lokale sammensætning ændringer (Sammenlign referencer30,31), stigning i membranen spænding (Sammenlign henvisning32), eller lokal varme (Sammenlign henvisning33), hvad angår de alternative metoder omtalt i indledningen. Under diffusering mikrofluid er en osmotiske balance mellem vesikel interiør og eksteriør ikke kun afgørende for at undgå fase stat artefakter som nævnt ovenfor, men også deflation forårsaget af hypertonisk løsning betingelser kan forårsage de fangne GUVs at glide gennem stillingerne efter en ekstern løsning udveksling.
Selv om spontan hævelse har været anvendt med succes til at vokse tomt kan vesikler fra en DOPC/eSM/Chol system, i andre tilfælde, fraværet af gebyrer forringe GUV hævelse på grund af den deraf følgende manglende frastødning mellem de enkelte dobbeltlag44 . Forlængelse pre hævelse eller indfører pladskrævende lipid headgroups kan imødegå dette problem45. Derudover kan vesikel stabilitet efter deres fortynding i løsninger adskiller sig fra den, der anvendes for hævelse variere for forskellige lipid kompositioner og fortynding medier, som vi ikke har undersøgt her. Vi har også ikke undersøgt muligheden for tuning GUV gennemsnitsdiameteren med metoden forberedelse præsenteres her. Men parametre som vesikel sammensætning og hævelse løsning er tilbøjelige til at påvirke resultaterne. Anvendelsen af alternative metoder46 kan give større vesikler for lipider og løsninger, der anvendes her, men de kan komme med andre ulemper forbundet med metoden. Den ovenfor beskrevne metode til at producere GUVs i symmetriske og asymmetriske high-saltholdighedsforhold giver en potentiel værktøj for yderligere undersøgelser af vesikler består af forskellige lipid kompositioner og spredt i forskellige medier. Da vi ikke har udforsket mulighederne, vil fremtidige forsøg vise hvordan generelt GUV forberedelse og fortynding metoder kan anvendes.
Observere faseadskillelse på varierende temperaturer
Der findes forskellige eksperimentelle opsætninger egnet til at studere GUVs ved forskellige temperaturer. Mens disse opsætninger der ikke almindeligvis er beskrevet indgående i litteraturen, præsenterer det nuværende arbejde en grundlæggende forsamling gældende for sådanne undersøgelser.
_content "> kontrol målinger viser, at temperaturen i dette in-house designet og bygget kammer er netop kontrolleret af en termostat og temperatur forløb inde i kammeret er inden for den eksperimentelle temperatur beslutning. Det sikres at de termiske forsøgsbetingelser er konsistent med læsning af termostaten.
Under vurderingen af GUV fase stater over et bredt temperaturinterval er det vigtigt, at de observerede vesikler godt ekvilibreres når temperaturen er blevet ændret. En mulig måde at sikre dette er at kontrollere, om hysterese. Hvis hysterese er til stede, temperatur skridt bør være faldet og/eller ækvilibrering gange øget. Som temperatur er kontrol i dette arbejde etableret af en vandbaseret termostat, rækken af arbejdende temperaturer er ideelt set begrænset til 0 - 100 ° C. Dette interval kan udvides ved hjælp af andre temperatur kontrol væsker såsom olie eller ved at ansætte andre opsætninger, f.eks. en Peltier enheden. I praksis, er at arbejdstemperatur også begrænset af mulige kondens eller fordampning. Derudover for temperaturer langt væk fra stuetemperatur bliver forekomsten af en steady state temperaturgradient på tværs af bemærkning afdeling mere sandsynligt. Også, den imaging udstyr kan skades ved ekstreme temperaturer. For typiske temperaturområder passende for lipid vesikel undersøgelser (~ 10-50 ° C7,9) skader til observation udstyr bør overvejes men er typisk ikke forventes.
Vesikel domæne observation artefakter
Der er en række kilder til observation artefakter ved hjælp af wide-felt Fluorescens mikroskopi. Først og fremmest bør man være opmærksom på at den maksimale opløsning r for objektet ansøgt om besigtigelse af vesikel fase stater bestemmer detektionsgraensen for lipid domæner i henhold til: 
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56034/56034eq2v2.jpg"> hvor λ er emission bølgelængde, og NA er numerisk blænde af målet. En typisk mål med en 40 x forstørrelse og en NA på 0,6, som registrerer grøn udledning lyse omkring 560 nm ville nå en optisk opløsning af ~0.6 µm. dermed, undersøgelser, der sammenligner fase stater af vesikler fremstillet af særligt lipid blandinger blandt forskellige betingelser skal bruge det samme mål for samme lipid blandingen.
En anden genstand er forekomsten af lipid domæner som følge af lipid foto-oxidation skyldes en udvidet eksponering for excitation lys41. Foto-skade forekommer fortrinsvis på umættede carbonhydrider lipid fraspaltning. I virkeligheden, for nogle lipid kompositioner, sådan domæne dannelsen af oprindeligt homogene vesikler blev observeret her efter en længere periode af excitation lys eksponering (~ 30 s). For at imødegå dette problem, var excitation-lyset holdt fokuseret på én synsfelt for kun et par sekunder for fase stats vurdering. Derfor var DiIC18 egnet til vores formål. Andre farvestoffer, men kan være meget mere følsomme og skal måske håndteres på lavere excitation intensiteter og med kortere excitations lys eksponering gange.
Mekanisk shear stress fra pipette overførsel af vesikler blander potentielt domæner midlertidigt, dermed fordreje tilsyneladende vesikel fase adfærd. For nogle partier, forskellige vesikler viste forskellige fase adfærd 0 min og 5 min efter pipette overføre på mikroskop-coverslip. Også har den shear stress induceret af den flydende flow i mikrofluid enheden vist sig at resultere i domæne blanding47. Vesikler bør stå uforstyrret i et tilstrækkeligt tidsrum for ækvilibrering før observation. Inden for denne undersøgelse, blev vesikler fanget på mikrofluid enhed efterladt uforstyrret i 1 time efter vesikel lastning og løsning udvekslinger før observation.
At undgå nogle af de ovennævnte vanskeligheder samt begrænsning af lys diffraktion grænse, alternative metoder såsom Kernemagnetisk resonans-spektroskopi48 eller super opløsning mikroskopi teknikker49 kunne være ansat.
Konklusion og outlook
Det præsenterede arbejde viser et sæt af metoder, der giver mulighed for analyse af høj saltholdighed symmetriske og asymmetriske løsning betingelser indflydelse på membran faseadskillelse. Alle de præsenterede metoder er velegnede til andre anvendelser. Mikrofluid enheden giver for eksempel en platform for at studere kinetik af domæne opståen og forsvinden ved induktion af løsning asymmetri. Domænet udseende som en funktion af saltkoncentration kunne også undersøges måde. Alle metoder kan også bruges til at kigge på indflydelse på fase adfærd ved hjælp af enhver anden løsninger af interesse.

Nogensinde siden observation af micron mellemstore domæner i væske-væske fase-adskilt giant unilamellar vesikler (GUVs) af Fluorescens mikroskopi, er GUVs blevet brugt som et modelsystem til at undersøge lipid tømmerflåde hypotese1,2 , 3 . Da området i deres fritstående tolagede ligger i intervallet af det biologiske celler, er de egnede efterligner af plasma membraner byder de hypotetisk flåder. Talrige undersøgelser på sådanne GUVs er blevet udført med vesikler spredt i rent vand, saccharose eller lav-saltholdighed løsninger4,5,6,7,8. Disse betingelser, dog afspejler ikke fysiologisk relevante eksponering for Biomembraner høj saltholdighed miljøer og trans-membran løsning asymmetri som er betingelserne for celler.
I dette arbejde og i en tidligere publikation fra vores gruppe9blev fase stater i opladet stand GUVs undersøgt som en funktion af tilstedeværelsen af salt og løsning asymmetri på tværs af membranen. GUVs blev fremstillet af blandinger af forskellige nøgletal for dioleoylphosphatidylglycerol (DOPG), æg sphingomyelin (eSM) og kolesterol (Chol) i enten rørsukkeropløsning (med osmolaritet 210 mOsm/kg) eller høj saltholdighed buffer (100 mM NaCl, 10 mM Tris, pH 7,5, 210 mOsm/kg). Lipid valg var begrundet i de data, der allerede er opnået på fase diagram af denne blanding6,8.
En række metoder til fremstilling af GUVs findes i litteraturen10,11,12 (Bemærk at her, vi vil ikke betragte dem, der vedrører overførsel af lipider fra en olie-baserede til en vandig fase 13 , 14 på grund af farligheden af de resterende olierester i den membran, der kan påvirke fase adfærd). Forberedelse af GUVs i høj saltholdighed buffer er forbundet med særlige udfordringer. For løsninger af lav ionisk styrke præsenterer electroformation metode15,16 en hurtig måde at forberede GUVs i høje udbytter med lille fejl10,17. Metoden er baseret på deponere et lag af lipider på en ledende overflade (elektrode), tørring dem og fugtgivende dem med en vandig opløsning mens anvendelse en AC felt. Denne metode kræver imidlertid justeringer hvis salt er til stede i vandig opløsning18,19. Det antages, at den drivende kraft for vesikel vækst af electroformation er elektroosmose16 som er hæmmet på høj grænseledningsevner20. Electroswelling af GUVs i høj saltholdighed løsninger er derfor ikke en ligetil tilgang som det kræver optimering for forskellige salt koncentrationerne i opløsningen hævelse. Gel-assisteret vesikel hævelse21,22 er en potentiel alternativ til electroformation med endnu hurtigere dannelse gange. Denne tilgang bygger på øget lipid film hydrering når en gel (Agarosen eller polyvinylalkohol (PVA)) bruges som substrat. Disse tilgange, men kommer med risiko for membran kontaminering ved agarosegelelektroforese-baserede hævelse23 og/eller temperatur grænser som i tilfældet med PVA-baserede hævelse. Tilsvarende, en protokol til at vokse GUVs på cellulose papir substrat er for nylig blevet etableret24. Generelle spørgsmål om denne metode er manglen kontrol over substrat renhed samt brugen af store mængder af lipid. I dette arbejde, vil vi indføre og præsentere fordelene ved den mest traditionelle metode for GUV forberedelse, nemlig den spontane hævelse metode25,26. Det består af tørring et lipid lag på en lipophobic substrat, fugtende det i vanddamp atmosfære, og efterfølgende hævelse i den ønskede hævelse løsning (Se figur 1 og detaljer i afsnittet protokol). Denne metode giver ikke kontrol over vesikel størrelse distribution og resulterer i samlet set mindre vesikler i forhold til metoder, hvor produktionen er bistået af elektrisk felt, polymer substrat eller mikrofluid betyder. Men vesikel kvalitet og størrelse er passende til at undersøge tilstanden membran fase som udforskede her.
At skabe asymmetri mellem løsninger over vesikel membranen er forbundet med visse udfordringer. En almindeligt anvendt metode er direkte fortynding af vesikel suspension i ønskede eksterne løsning27,28. Dette falder dog også vesikel distribution tæthed. En anden strategi er langsomt udveksle den eksterne løsning omkring GUVs slog sig ned i bunden af en flow-celle, der giver mulighed for løsning ind - og udstrømningen. For at undgå at forstyrre eller endda miste vesikler med strømmen, er lav strømningshastigheder anvendt8, hvilket gør denne tilgang tid-ineffektive. Desuden, ingen af disse tilgange garanterer fuld ekstern løsning exchange. En indlysende løsning er at immobilisere vesikler for at undgå at miste dem under en ekstern løsning udveksling. For eksempel, kan biotinylated GUVs bindes op på en streptavidin-belagt overflade29. Men denne tilgang kan føre til kompositoriske variationer på den overholdt og dermed ikke overholdt membranen segmenter30,31. Anvendelsen af magnetiske eller elektriske felter til at fælde blærer resultater i at pålægge membran spænding32. Beskæftiger optiske pincet til at fælde en vesikel kræver at have en håndtaget fastgjort (dvs. en perle), mens brugen af optiske bårer kan involvere lokale varme33. Diffusering af GUVs kan også ske ved at dyrke dem på platin ledninger uden endelige detachement34. Dette giver dog vesikler som ikke er isoleret, og der er normalt forbundet med ledningerne eller andre vesikler af tynde lipid rør (bindsler).
Præsenteres arbejdet fremhæver strategier for at overvinde de førnævnte begrænsninger. Først præsenterer vi en detaljeret beskrivelse af den spontane hævelse metode tilpasset og optimeret til produktion af GUVs i høj saltholdighed buffere. Vi præsentere to tilgange til at effektivt skabe asymmetriske løsning af simple fortynding eller udnyttelse af en mikrofluid enhed. Fordi vores mål er en analyse af tilstanden membran fase af GUVs i forskellige løsning betingelser, beskriver de efterfølgende afsnit kriterier for vellykket statistisk analyse og nuværende tips til at undgå falske kategorisering.
Analyser blev udført under isotermiske betingelser og under varierende temperaturer. Mens temperatur control er almindeligvis ansat, oplysninger om eksperimentel temperaturkontrol kamre er sjældent beskrevet. Her præsenteres en in-house bygget setup til at overholde GUVs ved forskellige temperatur betingelser.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-(1&#39;-rac-glycerol), sodium salt</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>840475C</td>
			<td>abbreviated as DOPG in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chicken egg sphingomyelin</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>860061</td>
			<td>abbreviated as eSM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cholesterol (ovine wool, &#62; 98 %)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>700000</td>
			<td>abbreviated as Chol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,1&#129;&#39;-dioctadecyl-3,3,3&#39;,3&#39;-tetramethylindocarbocyanine perchlorate</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>D-282</td>
			<td>abbreviated as DiIC18</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform, HPLC grade (&#8805; 99.8 %)</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl (&#62; 99.8 %)</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl (37 %)</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris (&#8805; 99.9 %)</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose (&#8805; 99.5 %)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Threaded vial 45x27 mm, 15 mL</td>
			<td>Kimble</td>
			<td></td>
			<td>Soda flat bottom, white screw cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>MP220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmometer</td>
			<td>Gonotec</td>
			<td>Osmomat030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epi-fluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Observer D1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 40x, 0.6 NA</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LD Achroplan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 40x, 0.75 NA</td>
			<td>Leica</td>
			<td>506174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 63x, 0.9 NA</td>
			<td>Leica</td>
			<td>506148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide, 56x26 mm, 0.17 &#177; 0.01 mm</td>
			<td>Menzel-Gl&#228;ser</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slip, 22x22 mm, 0.17 &#177; 0.01 mm</td>
			<td>Menzel-Gl&#228;aser</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm &#34;M&#34;</td>
			<td>Bremix Flexible Packaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes, 5 mL, 10 mL</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.45 &#181;m syringe filter</td>
			<td>GVS North America</td>
			<td>Cameo 25AS, 1213723</td>
			<td>Acetate, sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

phase behavior of charged vesicles under symmetric and asymmetric solution conditions monitored with fluorescence microscopy

Fase-adskilt giant unilamellar vesikler (GUVs) udstiller sameksisterende væske-bestilt og væske-uordnede domæner er en fælles biofysiske værktøj til at undersøge lipid tømmerflåde hypotese. Talrige undersøgelser, men forsømmer virkningen af fysiologiske løsning betingelser. På denne konto præsenterer den aktuelle arbejde effekten af høj-saltholdighed buffer og trans-membran løsning asymmetri på væske-væske faseadskillelse i ladede GUVs vokset fra dioleylphosphatidylglycerol, æg sphingomyelin og kolesterol. Virkningerne var studerede under isotermiske og varierende temperatur betingelser.
Vi beskriver udstyr og eksperimenterende strategier anvendes til overvågning stabiliteten af sameksisterende flydende domæner i opladet vesikler symmetriske og asymmetriske høj saltholdighed løsning betingelser. Dette omfatter en strategi for at forberede opladet stand GUVs i high-saltholdighed buffer ved høje temperaturer. Protokollen indebærer mulighed for at foretage en delvis udveksling af den eksterne løsning for en enkelt fortynding trin samtidig minimere vesikel fortynding. En alternativ tilgang er præsenteret, udnytter en mikrofluid enhed, der giver mulighed for en ekstern totalløsning udveksling. Effekterne løsning på faseadskillelse var også studerede under varierende temperaturer. Med henblik herpå præsenterer vi de grundlæggende design og nytten af en in-house indbygget temperatur kontrol kammer. Desuden vi reflektere vurdering af tilstanden GUV fase faldgruber forbundet med det og hvordan man kan omgå dem.

Watch this Scientific Journal Video about Phase Behavior of Charged Vesicles Under Symmetric and Asymmetric Solution Conditions Monitored with Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Phase Behavior of Charged Vesicles Under Symmetric and Asymmetric Solution Conditions Monitored with Fluorescence Microscopy

Eksperimenter på fase adskilt giant unilamellar vesikler (GUVs) ofte forsømmer fysiologiske løsning betingelser. Dette arbejde præsenterer tilgange for at studere effekten af høj-saltholdighed buffer på væske-væske faseadskillelse i opladet stand GUVs som en funktion af trans-membran løsning asymmetri og temperatur.

Fase Behavior af ladede vesikler symmetriske og asymmetriske løsning betingelser overvåges med Fluorescens mikroskopi

Phase-separated giant unilamellar vesicles (GUVs) exhibiting coexisting liquid-ordered and liquid-disordered domains are a common biophysical tool to ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Determination of the Gas-phase Acidities of Oligopeptides

Bestemmelse af gas-fase syrer af Oligopeptider

Amino acid residues located at different positions in folded proteins often exhibit different degrees of acidities. For example, a cysteine residue ...

Particles without a Box: Brush-first Synthesis of Photodegradable PEG Star Polymers under Ambient Conditions

Partikler uden boks: Brush-første syntese af lysnedbrydelig PEG stjerne Polymers under omgivelsesbetingelser

Convenient methods for the rapid, parallel synthesis of diversely functionalized nanoparticles will enable discovery of novel formulations for drug ...

Mizoroki-Heck Cross-coupling Reactions Catalyzed by Dichloro{bis[1,1',1''-(phosphinetriyl)tripiperidine]}palladium Under Mild Reaction Conditions

Mizoroki-Heck Cross-coupling Reactions Catalyzed by Dichloro{bis[1,1',1''-phosphinetriyltripiperidine]}palladium Under Mild Reaction Conditions

Mizoroki-Heck krydskoblingsreaktioner katalyseret af dichlor {bis [1,1 &#39;, 1&#39;&#39; - (phosphinetriyl) tripiperidine]} palladium Under milde reaktionsbetingelser

Dichloro-bis(aminophosphine) complexes of palladium with the general formula of [(P{(NC5H10)3-n(C6H11)n})2Pd(Cl)2] (where n = 0-2), belong to a new family ...

Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology

Syntetisk Metode til Asymmetrisk Ferrocen Afledte Bio-konjugat systemer via Solid Phase Resin-metode

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. ...

A Simple Method for the Size Controlled Synthesis of Stable Oligomeric Clusters of Gold Nanoparticles under Ambient Conditions

En simpel metode til størrelse Kontrolleret Syntese af stabile Oligomere Klynger af guld nanopartikler under omgivende betingelser

Reducing dilute aqueous HAuCl4 with sodium thiocyanate (NaSCN) under alkaline conditions produces 2 to 3 nm diameter nanoparticles. Stable grape-like ...

Construction and Systematical Symmetric Studies of a Series of Supramolecular Clusters with Binary or Ternary Ammonium Triphenylacetates

Byggeri og systematisk Symmetriske Undersøgelser af en serie af supramolekylære Clusters med Binary eller Ternære Ammonium Triphenylacetates

Functions of clusters in nano or sub-nano scale significantly depend on not only kinds of their components but also arrangements, or symmetry, of their ...

A Protocol for Electrochemical Evaluations and State of Charge Diagnostics of a Symmetric Organic Redox Flow Battery

En protokol til elektrokemiske Evalueringer og Staten Charge Diagnostik af en symmetrisk Økologisk Redox Flow Batteri

Redox flow batteries have been considered as one of the most promising stationary energy storage solutions for improving the reliability of the power grid ...

Probing the Structure and Dynamics of Interfacial Water with Scanning Tunneling Microscopy and Spectroscopy

Sondering struktur og dynamik Interfacial vand med Scanning Tunneling Mikroskopi og spektroskopi

Water/solid interfaces are ubiquitous and play a key role in many environmental, biophysical, and technological processes. Resolving the internal ...

Fabricating High-viscosity Droplets using Microfluidic Capillary Device with Phase-inversion Co-flow Structure

Opdigte høj viskositet Droplets bruger mikrofluid kapillær enhed med fase-inversion Co flow struktur

The generation of monodisperse droplets with high viscosity has always been a challenge in droplet microfluidics. Here, we demonstrate a phase-inversion ...

Solid-phase Synthesis of [4.4] Spirocyclic Oximes

Fast-fase syntese af [4.4] Spirocyclic Oximes

A convenient synthetic route for spirocyclic heterocycles is well sought after due to the molecule&#39;s potential use in biological systems. By means of ...