Name: phase behavior of charged vesicles under symmetric and asymmetric solution conditions monitored with fluorescence microscopy
Uploaded: 2017-10-24T14:00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Phase Behavior of Charged Vesicles Under Symmetric and Asymmetric Solution Conditions Monitored with Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Questo lavoro fa parte del Consorzio MaxSynBio, che è finanziato congiuntamente dal Ministero federale dell'educazione e ricerca di Germania e della Max Planck Society.

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Produzione di successo di GUV per le osservazioni di stato di fase in condizioni di alta salinità simmetriche e asimmetriche
I protocolli presentati qui introduce una strategia per valutare l'influenza della asimmetria di buffer e soluzione di alta salinità sullo stato della fase di membrana di carica GUV sopra una vasta gamma di composizioni. Una delle sfide principali per raggiungere questo obiettivo era la produzione di carica GUV nei buffer di alta salinità.
Abbiamo prodotto con successo GUV nella soluzione di saccarosio e alta-soluzione salina tampone da un semplice approccio spontaneo gonfiore, che include un passaggio di pre-idratazione del film depositato del lipido e un passo finale idratazione durante la notte per la crescita delle vescicole. È importante notare che la deposizione di lipidi dovrebbe essere fatto su una piastra PTFE irruvidita per garantire dei lipidi anche diffondendo per produrre vescicole unilamellari. Inoltre, è essenziale per eseguire ogni passo durante la preparazione delle vescicole a temperatura dove il film lipidico è in uno stato di fase omogenea e fluida. Altrimenti, la popolazione di vescicola può essere polidispersi nella composizione e l'analisi dello stato di popolazione finale fase di polarizzazione. Il protocollo specifico per il gonfiore spontanea dei rendimenti GUV un ciuffo di vescicola che da un lato offre la possibilità di risospendere in piccoli volumi per ottenere altamente concentrato dispersioni della vescicola e d'altra parte fornisce soluzione asimmetrica condizioni attraverso la membrana riducendo al minimo la diluizione di vescicole8,28. È essenziale che durante la diluizione della vescicola o soluzione esterna scambiare, all'interno e all'esterno osmolarities restano abbinati come cambiamenti di morfologia causati da differenze di osmolarità possono indurre o prevenire Lo + Ld fase separazione41 o, in caso di ipotonico condizioni, può portare a rottura della vescicola.
Qui, tentativi di ottimizzare i protocolli di electroformation in soluzione alta salinità ha provocato la produzione di no GUV mentre gonfiore PVA-assistita ha reso vescicole multilamellari. Anche se richiede tempi più lunghi di preparazione e risultati in lotti della vescicola di inferiore qualità10,17, il successo della produzione di vescicole cariche di spontanea gonfiore è dotato di ulteriori vantaggi. Richiede uno sforzo minimo mentre con conseguente resa sufficiente per analisi statistica lotto e, a differenza di electroformation, senza attrezzature sofisticate o ottimizzazione sono stati richiesti. Inoltre, contaminazioni da ossidazione del lipido non sono stati osservati42,43. Secondo la letteratura ci sono differenze tra composizioni delle vescicole lipidiche e le scorte di corrispondente da cui essi erano cresciuti7,17. Inoltre, la formazione della vescicola su un substrato PTFE non richiede l'inserimento di eventuali contaminazioni in contrasto con metodi gonfiori gel-assistita dove molecole estranee possono essere introdotte dal substrato23. Electroformation è dotato di ulteriori svantaggi legati alla diluizione eccessiva della vescicola durante la creazione di condizioni di soluzione asimmetrica. GUV prodotto da electroformation sono solitamente presenti come una dispersione omogenea (in contrasto con la sospensione di vescicola altamente concentrato sotto forma di un ciuffo formata durante il gonfiamento spontanea). Qualsiasi diluizione della soluzione esterna diluirebbe sostanzialmente il numero delle vescicole pure. Inoltre, nel corso di questo lavoro che è stato osservato che DOPG/MES/Chol GUV prodotto da electroformation in saccarosio è diventato instabile se diluito in un tampone di alta salinità. Fluorescenza da patch del lipido sul vetrino da microscopio indicato che le vescicole sarebbero scoppiata prima loro ispezione visiva era possibile. Tale instabilità può essere ascritta a una tensione elevata membrana delle vescicole preparato da electroformation rispetto a quelli ottenuti da gonfiore spontanea10.
Anche se la diluizione della vescicola è un approccio semplice e veloce per creare condizioni di soluzione asimmetriche GUV, compie solo un cambio parziale soluzione esterna, seppur per un'alta frazione (qui: 95%, Figura 2), in quanto al momento di diluizione, tracce del gonfiore soluzione rimarrà. La scelta del grado di cambio la soluzione esterna è un compromesso tra il pipettaggio fino il ciuffo di vescicola insieme alla soluzione gonfiore (sezione 2) e non diluirla troppo. Quindi, abbiamo introdotto un approccio alternativo microfluidici discusso altrove in dettaglio37 che permette per un cambio veloce e completa soluzione esterna durante le osservazioni GUV fase stato di verificare le osservazioni dello stato fase per diluito vescicole. Le osservazioni delle variazioni di stato di fase quando cambia da simmetrica in condizioni di soluzione asimmetrica in effetti sono state osservate per essere d'accordo. Inoltre, entrambi i metodi per generare condizioni di soluzione asimmetrica mostrate qui sono relativamente veloci (confronta Rif.8) e venire con nessun rischi noti delle alterazioni di composizione locali (confrontare riferimenti30,31), aumentare la tensione della membrana (confronta riferimento32), o riscaldamento locale (confronta riferimento33), per quanto riguarda i metodi alternativi descritti nell'introduzione. Durante l'intrappolamento di microfluidica, un equilibrio osmotico tra esterno e interno delle vescicole non è solo essenziale per evitare artefatti di stato fase come accennato in precedenza, ma anche deflazione causata da condizioni di soluzione ipertonica potrebbe causare il GUV intrappolati a scivolare attraverso il post dopo un cambio di soluzione esterna.
Anche se il gonfiore spontanea è stata applicata correttamente per crescere uncharged vescicole da un sistema DOPC/MES/Chol, in altri casi, l'assenza di oneri possono compromettere GUV gonfiore a causa della mancanza risultante di repulsione tra i singoli strati lipidici44 . Proroga del periodo pre-gonfiore o introdurre headgroups ingombranti del lipido può ricambiare questo problema45. Inoltre, la stabilità della vescicola dopo la loro diluizione in soluzioni diverse da quella utilizzata per gonfiore può differire per composizioni diverse lipidiche e diluizione media, che non abbiamo studiato qui. Inoltre non abbiamo esplorato la possibilità di tuning il diametro GUV medio con il metodo di preparazione presentato qui. Ma parametri quali la composizione della vescicola e gonfiore soluzione sono suscettibili di influenzare i risultati. L'applicazione di metodi alternativi46 può produrre vescicole più grandi per i lipidi e le soluzioni utilizzati qui, tuttavia, possono venire con altri inconvenienti connessi con il metodo. L'approccio sopra descritto per produrre GUV in condizioni di alta salinità simmetriche e asimmetriche fornisce un potenziale strumento per ulteriori studi di vescicole costituito da composizioni lipidiche diversi e dispersi in diversi media. Come non abbiamo esplorato le possibilità, le prove future verranno mostrerà come generalmente possono essere applicati i metodi di preparazione e diluizione di GUV.
Osservando la separazione di fase a temperature variabili
Esistono diverse configurazioni sperimentali adatti a studiare GUV a temperature variabili. Mentre queste configurazioni non sono comunemente descritte in dettaglio all'interno della letteratura, il lavoro attuale presenta un assembly di base applicabile per tali studi.
riconoscibili "> controllo misurazioni mostrano che la temperatura di questo in-House progettata e costruita da camera è proprio controllata da un termostato e gradienti di temperatura all'interno della camera sono all'interno della risoluzione temperatura sperimentale. È accertato che le condizioni termiche sperimentali sono coerenti con la lettura del termostato.
Durante la valutazione degli Stati di fase GUV sopra un ampio intervallo di temperature, è importante che le vescicole osservate sono ben equilibrate dopo la temperatura è stata cambiata. Un possibile modo per garantire questo è per cercare di isteresi. Se l'isteresi sono presente, i passaggi di temperatura devono essere ridotta e/o tempi di equilibrazione aumentati. Come temperatura controllo in quest'opera è stabilito da un termostato a base d'acqua, la gamma di temperature di esercizio è idealmente limitata a 0 - 100 ° C. Questa gamma può essere espansa utilizzando altri liquidi controllo temperatura olio o che impiegano altre configurazioni, ad esempio un dispositivo Peltier. In pratica, la temperatura di lavoro è limitata anche dalla possibile la condensazione o l'evaporazione. Inoltre, per temperature lontano dalla temperatura ambiente, la presenza di un gradiente di temperatura allo stato stazionario attraverso la camera di osservazione diventa più probabile. Inoltre, le apparecchiature di imaging possono essere danneggiata a temperature estreme. Per intervalli di temperatura tipici appropriati per studi di vescicola del lipido (~ 10-50 ° C7,9) danni all'apparecchiatura di osservazione dovrebbero essere considerato ma in genere non sono previsto.
Artefatti di osservazione di dominio della vescicola
Ci sono una serie di fonti per manufatti di osservazione utilizzando la microscopia a fluorescenza grandangolari. Prima di tutto, uno dovrebbe essere consapevole che la risoluzione massima r dell'oggetto applicato per l'ispezione visiva della vescicola fase stati determina il limite di rilevamento di domini lipidici secondo: 
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56034/56034eq2v2.jpg"> dove λ è la lunghezza d'onda di emissione, e NA è l'apertura numerica dell'obiettivo. Un tipico obiettivo con un 40x ingrandimento e un NA di 0,6 che rileva l'emissione verde chiaro intorno 560 nm avrebbe raggiunto una risoluzione ottica di ~0.6 µm. quindi, studi che confrontano gli Stati di fase delle vescicole fatto da miscele di particolare lipidi tra diversi condizioni devono utilizzare lo stesso obiettivo per la stessa miscela di lipidi.
Un altro elemento è la presenza di domini lipidici come conseguenza di foto-ossidazione del lipido a causa di una lunga esposizione alla luce di eccitazione41. Foto-danno si verifica preferenzialmente su molecole di idrocarburo insaturo del lipido. Infatti, per alcune composizioni del lipido, tale formazione di dominio delle vescicole inizialmente omogenee è stato osservato qui dopo un lungo periodo di esposizione alla luce di eccitazione (~ 30 s). Per contrastare tale problema, la luce di eccitazione è stata mantenuta focalizzata in un campo di vista per solo pochi secondi per la valutazione dello stato della fase. Quindi, DiIC18 era adatto per i nostri scopi. Altri coloranti, tuttavia, possono essere molto più sensibile e potrebbero essere necessario essere gestita a bassa intensità di eccitazione e con tempi di esposizione alla luce di eccitazione.
Sollecitazione meccanica dal trasferimento delle vescicole pipetta mescola potenzialmente domini temporaneamente, quindi falsare il comportamento di fase di apparente della vescicola. Per alcune partite, diverse vescicole hanno mostrato comportamenti differenti di fase 0 min e 5 min dopo pipetta trasferire sul microscopio coprivetrino. Anche la sollecitazione di taglio indotta dal flusso del fluido nel dispositivo microfluidico ha dimostrata di provocare il dominio47di miscelazione. Vescicole dovrebbero essere lasciate indisturbate per un sufficiente lasso di tempo di equilibramento prima dell'osservazione. All'interno di questo studio, vescicole intrappolate sul dispositivo microfluidico sono rimasti indisturbate per 1 h dopo il caricamento della vescicola e gli scambi di soluzione prima dell'osservazione.
Per evitare alcune delle suddette difficoltà così come la restrizione imposta dal limite di diffrazione della luce, metodi alternativi come la spettroscopia di risonanza magnetica nucleare48 o super risoluzione microscopia tecniche49 potrebbe essere impiegato.
Conclusioni e prospettive
Il lavoro presentato dimostra un insieme di metodi che permette l'analisi dell'influenza delle condizioni di alta salinità soluzione simmetrica e asimmetrica sulla separazione di fase della membrana. Tutti i metodi presentati sono adatti per altre applicazioni. Il dispositivo microfluidico, ad esempio, fornisce una piattaforma per studiare la cinetica di formazione di dominio e scomparsa dopo l'induzione dell'asimmetria di soluzione. Inoltre, aspetto di dominio in funzione della concentrazione di sale potrebbe essere esaminato in questo modo. Tutti i metodi potrebbero essere utilizzati anche per all'influenza il comportamento di fase utilizzando qualsiasi altre soluzioni di interesse.

Fin dall'osservazione del micron imprese domini in vescicole unilamellari gigante fase separata di liquido-liquido (GUV) mediante microscopia a fluorescenza, GUV sono stati utilizzati come sistema modello per studiare il lipido zattera ipotesi1,2 , 3 . Come la zona del loro bilayer autoportante si trova nella gamma di che da cellule biologiche, sono adatti mimici delle membrane del plasma con le zattere ipotizzate. Sono stati effettuati numerosi studi su tali GUV con vescicole dislocate in acqua pura, saccarosio o bassa salinità soluzioni4,5,6,7,8. Queste condizioni, tuttavia, non riflettono l'esposizione fisiologicamente rilevante dei biomembranes per ambienti ad alta salinità e trans-membrana soluzione asimmetria come sono le condizioni per le cellule.
In questo lavoro e in una precedente pubblicazione dal nostro gruppo9, gli Stati di fase di carica GUV multicomponente sono stati esaminati in funzione della presenza di asimmetria di sale e la soluzione attraverso la membrana. GUV sono stati preparati da miscele di differenti rapporti di dioleoylphosphatidylglycerol (DOPG), uovo sfingomielina (eSM) e colesterolo (Chol) nella soluzione di saccarosio (con osmolarità di 210 mOsm/kg) o buffer di alta salinità (NaCl 100 mM, 10 mM Tris, pH 7.5, 210 mOsm/kg). La scelta del lipido è stata giustificata dai dati già acquisiti nel diagramma di fase di questa miscela6,8.
Una serie di metodi per la preparazione di GUV è disponibile nella letteratura10,11,12 (Nota che qui, non prenderà in considerazione quelli che comportano il trasferimento dei lipidi da una base di olio per una fase acquosa 13 , 14 a causa del pericolo inerente dei residui di olio rimanente nella membrana che possono influenzare il comportamento di fase). La preparazione del Guv nel buffer ad alta salinità è associata a specifiche sfide. Per le soluzioni di forza ionica bassa, il metodo di electroformation15,16 presenta un modo rapido per preparare GUV in alti rendimenti con piccoli difetti10,17. Il metodo si basa su depositando uno strato di lipidi su una superficie conduttiva (l'elettrodo), asciugarli e idratandoli con una soluzione acquosa durante l'applicazione di un campo di CA. Tuttavia, questo metodo richiede regolazioni se sale è presente in soluzione acquosa18,19. Si presume che la forza trainante per la crescita della vescicola di electroformation è elettroosmosi16 che è ostacolato a conducibilità alta20. Quindi, electroswelling di GUV nelle soluzioni ad alta salinità non è un approccio diretto, poichè richiede ottimizzazione per diverse concentrazioni saline presenti nella soluzione gonfiore. Gel-assistita vescicola gonfiore21,22 è un'alternativa potenziale per electroformation con ancora più veloci tempi di formazione. Questo approccio si basa sull'idratazione di pellicola lipidica migliorata quando un gel (agarosio o alcol polivinilico (PVA)) viene utilizzato come substrato. Questi approcci, tuttavia, vengono con il rischio di contaminazione della membrana nel caso basati su agarosio gonfiore23 limiti e/o temperatura come nel caso di gonfiore a base di PVA. Allo stesso modo, un protocollo di crescere GUV su un substrato di carta di cellulosa è stato recentemente stabilito24. Problemi generali di questo metodo sono la mancanza di controllo sopra la purezza di substrato, nonché l'utilizzo di grandi quantità di lipidi. In questo lavoro, vi presentiamo e presentare i vantaggi del metodo più tradizionale per la preparazione di GUV, vale a dire la spontanea gonfiore metodo25,26. Si compone di uno strato di lipidi su un substrato lipofobo, idratante e in atmosfera di vapore acqueo e conseguente gonfiore nella soluzione desiderata gonfiore di essiccazione (Vedi dettagli nella sezione protocollo e Figura 1 ). Questo metodo non offre controllo della distribuzione di dimensione delle vescicole e si traduce in generale più piccole vescicole rispetto ai metodi dove la produzione è assistita dal campo elettrico, substrato polimerico o microfluidici significa. Tuttavia, la qualità della vescicola e la dimensione è appropriato per esaminare lo stato della fase di membrana come esplorato qui.
Creazione di asimmetria tra le soluzioni attraverso la membrana della vescicola è associato con determinate sfide pure. Un approccio comunemente utilizzato è la diretta diluizione della sospensione della vescicola nella soluzione esterna desiderata27,28. Tuttavia, questo inoltre fa diminuire la densità di distribuzione della vescicola. Un'altra strategia è quello di scambiare lentamente la soluzione esterna intorno GUV si stabilirono nella parte inferiore di una cella di flusso che consente la soluzione in - e impiegano. Per evitare di disturbare o addirittura perdere le vescicole con il flusso, basse portate sono applicate8, che rende questo approccio inefficienti in termini di tempo. Inoltre, nessuno di questi approcci garantisce un cambio di soluzione completa esterna. Una soluzione ovvia è di immobilizzare le vescicole al fine di evitare di perderli durante uno scambio di soluzione esterna. Per esempio, può essere legato biotinylated GUV su una superficie rivestita con streptavidina29. Tuttavia, questo approccio può portare a variazioni composizionali presso l'aderito e quindi la membrana non aderito segmenti30,31. L'applicazione della magnetoterapia o campi elettrici per intrappolare risultati di vescicole in imponenti membrana tensione32. Che impiegano pinzette ottiche per intercettare una vescicola è necessario avere un manico attaccato (cioè una perlina), mentre l'uso di barelle ottiche può coinvolgere il riscaldamento locale33. Intrappolamento di GUV può essere effettuata anche coltivandoli su fili di platino senza distacco finale34. Questo tuttavia produce vescicole che non sono isolate e che sono di solito collegati ai cavi o altre vescicole di tubi sottili del lipido (attacchi).
Il lavoro presentato evidenzia strategie per superare le limitazioni di cui sopra. Presentiamo innanzitutto una descrizione dettagliata del metodo gonfiore spontanea adattato e ottimizzato per la produzione di GUV nei buffer di alta salinità. Introduciamo poi due approcci per creare in modo efficiente condizioni di soluzione asimmetrica mediante semplice diluizione o l'utilizzo di un dispositivo microfluidico. Perché il nostro obiettivo è l'analisi dello stato di fase della membrana del Guv in condizioni di soluzione diversa, le sezioni successive descrivono i criteri per l'analisi statistica successo e presenti suggerimenti per evitare false categorizzazione.
Le analisi sono state eseguite sotto condizioni isotermiche e sotto diverse temperature. Mentre la temperatura control è comunemente impiegato, i dettagli sulle camere di temperatura-controllo sperimentale sono raramente descritte. Qui, è presentata un'installazione costruita in-House per osservare GUV alle varie condizioni di temperatura.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-(1&#39;-rac-glycerol), sodium salt</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>840475C</td>
			<td>abbreviated as DOPG in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chicken egg sphingomyelin</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>860061</td>
			<td>abbreviated as eSM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cholesterol (ovine wool, &#62; 98 %)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>700000</td>
			<td>abbreviated as Chol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,1&#129;&#39;-dioctadecyl-3,3,3&#39;,3&#39;-tetramethylindocarbocyanine perchlorate</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>D-282</td>
			<td>abbreviated as DiIC18</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform, HPLC grade (&#8805; 99.8 %)</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl (&#62; 99.8 %)</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl (37 %)</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris (&#8805; 99.9 %)</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose (&#8805; 99.5 %)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Threaded vial 45x27 mm, 15 mL</td>
			<td>Kimble</td>
			<td></td>
			<td>Soda flat bottom, white screw cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>MP220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmometer</td>
			<td>Gonotec</td>
			<td>Osmomat030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epi-fluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Observer D1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 40x, 0.6 NA</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LD Achroplan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 40x, 0.75 NA</td>
			<td>Leica</td>
			<td>506174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 63x, 0.9 NA</td>
			<td>Leica</td>
			<td>506148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide, 56x26 mm, 0.17 &#177; 0.01 mm</td>
			<td>Menzel-Gl&#228;ser</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slip, 22x22 mm, 0.17 &#177; 0.01 mm</td>
			<td>Menzel-Gl&#228;aser</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm &#34;M&#34;</td>
			<td>Bremix Flexible Packaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes, 5 mL, 10 mL</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.45 &#181;m syringe filter</td>
			<td>GVS North America</td>
			<td>Cameo 25AS, 1213723</td>
			<td>Acetate, sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

phase behavior of charged vesicles under symmetric and asymmetric solution conditions monitored with fluorescence microscopy

Vescicole unilamellari gigante fase separata (GUV) esibendo coesistenza liquido-ordinato e liquido-disordinata domini sono uno strumento comune di biofisico per indagare l'ipotesi di Zattera lipidica. Numerosi studi, tuttavia, trascurano l'impatto delle condizioni di soluzione fisiologica. Su quel conto, i lavori in corso presenta l'effetto di asimmetria di soluzione tampone e trans-membrana di alta salinità sulla separazione di fase liquido-liquido in carica GUV cresciuto da dioleylphosphatidylglycerol, uovo sfingomielina e colesterolo. Gli effetti sono stati studiati in condizioni di temperatura isotermici e variabili.
Descriviamo attrezzature e strategie sperimentali applicabili per il monitoraggio della stabilità di coesistenza liquidi domini in vescicole di caricate in condizioni di soluzione ad alta salinità simmetrica e asimmetrica. Questo include un approccio per preparare GUV multicomponente carica nel buffer ad alta salinità ad alte temperature. Il protocollo prevede la possibilità di eseguire un cambio parziale della soluzione esterna di un passo semplice diluizione, riducendo al minimo la diluizione della vescicola. Un approccio alternativo è presentato utilizzando un dispositivo microfluidico che consente di scambiare soluzione esterna completa. Gli effetti di soluzione sulla separazione di fase sono stati studiati anche sotto diverse temperature. A tal fine, vi presentiamo la progettazione di base e l'utilità di una camera di controllo temperatura costruito in-House. Inoltre, riflettiamo sulla valutazione dello stato di fase GUV, trabocchetti associato con esso e come aggirarli.

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Phase Behavior of Charged Vesicles Under Symmetric and Asymmetric Solution Conditions Monitored with Fluorescence Microscopy

Esperimenti sulle vescicole unilamellari gigante di fase separati (GUV) trascurano frequentemente condizioni di soluzione fisiologica. Questo lavoro presenta approcci per studiare l'effetto del buffer ad alta salinità sulla separazione di fase liquido-liquido in carica GUV multicomponente come una funzione di trans-membrana soluzione asimmetria e temperatura.

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