Name: phase behavior of charged vesicles under symmetric and asymmetric solution conditions monitored with fluorescence microscopy
Uploaded: 2017-10-24T14:00:00
Duration: 10 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Phase Behavior of Charged Vesicles Under Symmetric and Asymmetric Solution Conditions Monitored with Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Bu eser ortaklaşa Federal Eğitim Bakanlığı ve Almanya araştırma ve Max Planck toplum tarafından finanse edilen MaxSynBio Konsorsiyumu bir parçasıdır.

Yazarlar ifşa gerek yok.

GUVs başarılı üretim aşamasında devlet gözlemler simetrik ve asimetrik yüksek tuzluluk koşullar altında için
Burada sunulan protokolleri yüksek tuzluluk tampon ve çözüm asimetri kompozisyonlar geniş bir yelpazesi üzerinde etkisi dolu GUVs membran faz durumunu değerlendirmek için bir strateji tanıtır. Bu amacı gerçekleştirme yolunda büyük zorluklardan biri yüksek tuzluluk arabellekleri dolu GUVs üretim oldu.
Biz başarıyla GUVs Sükroz çözüm ve yüksek serum tampon tarafından yatırılan lipit filmin ön hidrasyon adım ve vezikül büyüme için bir gecede son hidrasyon adım içeren basit bir spontan şişme yaklaşım, üretti. Lipid birikimi unilamellar veziküller vermeye bile lipid yayılmasını sağlamak için bir yapısı PTFE tabağa yapılması gerektiğini unutmamak gerekir. Ayrıca, lipit filmin bir homojen ve sıvı faz durumda nerede bir ısıda vezikül hazırlık sırasında her adımı gerçekleştirmek için önemlidir. Başka vezikül nüfus polydisperse bileşiminde olması ve son nüfus faz durumu analiz önyargı. Spontan GUVs verimi bir yandan küçük cilt olarak elde etmek için yeniden askıya alma imkanı sunan bir vezikül yığın şişlik için belirli iletişim kuralı vezikül dağıtıcıları son derece konsantre ve öte yandan asimetrik bir çözüm sağlar koşullar veziküller8,28seyreltme en aza indirirken membran arasında. Vezikül seyreltme veya harici çözüm sırasında değişimi, iç ve dışında osmolarities Morfoloji değişiklikleri Osmolarite uyuşmazlıkları tarafından kaynaklanan ikna etmek ya da Lo + Ld faz ayrımı41 önlemek gibi Hipotonik durumunda eşleşen kalma ve esastır koşullar, vezikül patlama için neden olabilir.
Burada, PVA destekli şişme multilamellar veziküller vermiştir iken electroformation iletişim kuralları'nda yüksek tuzluluk çözüm en iyi duruma getirmek için girişimleri yok GUVs üretiminde sonuçlandı. Uzun hazırlık süreleri ve sonuçları vezikül kümeler halinde daha düşük kalite10,17, şarj edilmiş veziküller başarılı imalatı spontan tarafından gerektirir rağmen şişme ek avantajları ile gelir. En az çaba yeterli verimleri istatistiksel toplu iş analizleri için sonuçlanan talepleri ve electroformation farklı olarak, hiçbir karmaşık ekipman veya optimizasyon gerekli. Ayrıca, hiçbir contaminations lipid oksidasyonu ile42,43gözlemledim. Edebiyat göre veziküller lipid kompozisyonlar ve hangi onlar7,17yetiştirilmiştir karşılık gelen hisse senetleri arasında hiçbir fark vardır. Ayrıca, vezikül oluşumu PTFE yüzey üzerinde herhangi bir contaminations şişme yöntemleri jel yardımıyla nerede yabancı molekülleri substrat23tarafından tanıtıldı aksine eklenmesi sormaz. Electroformation aşırı vezikül seyreltme için asimetrik çözüm koşulları oluşturma ile ilgili daha fazla sakıncaları ile gelir. Electroformation tarafından üretilen gUVs genellikle homojen bir dağılım (aksine son derece yoğun vezikül Süspansiyon sırasında kendiliğinden şişlik oluşmuş bir yığın şeklinde) olarak mevcuttur. Harici çözüm herhangi bir seyreltme önemli ölçüde de veziküller sayısı sulandırmak. Ayrıca, bu gözlenmiştir Bu eser boyunca DOPG/eSM/Choi GUVs Sükroz electroformation tarafından üretilen yüksek tuzluluk arabellekte seyreltilmiş Eğer kararsız oldu. Floresan mikroskop slayt lipid yamalar dan onların görsel denetim mümkün oldu önce veziküller patlama gösterdi. Böyle istikrarsızlık veziküller ile karşılaştırıldığında bu kendiliğinden şişme10tarafından elde edilen electroformation tarafından hazırlanan bir yükseltilmiş membran gerginlik atfedilir.
Vezikül seyreltme asimetrik Şef çözüm koşulları oluşturmak için kolay ve hızlı bir yaklaşım olmakla birlikte, bu yalnızca bir kısmi çözüm dış Satım, yüksek bir kısmı de olsa için gerçekleştirir (burada: % 95, Resim 2), seyreltme, izler gibi çözüm şişlik devam edecektir. Harici çözüm Satım derecesini vezikül yığın şişme çözüm (Bölüm 2) ile birlikte pipetting ve çok fazla sulandrarak değil arasında bir ticaret-off seçimdir. Bu nedenle, biz başka bir yerde izin veren bir hızlı ve eksiksiz harici çözüm değişimi için Şef faz devlet gözlemler sırasında seyreltilmiş için yapılan faz devlet gözlemleri doğrulamak için ayrıntı37 içinde tartışılan bir alternatif mikrosıvısal yaklaşım tanıttı veziküller. Simetrik asimetrik çözüm koşullar değiştirirken faz devlet varyasyonları gözlemleri sözleşmesinde olmak gerçekten de tespit edildi. Ayrıca, her iki yöntem burada nispeten hızlı gösterilir asimetrik çözüm koşulları (Ref.8Karşılaştır) oluşturmak ve yerel kompozisyon değişiklikler (başvurular30,31karşılaştırmak) hiçbir bilinen riskleri ile gelmek için membran gerilim (karşılaştırma referans32) artırın veya yerel Isıtma (karşılaştırma referans33), alternatif yöntemler gelince giriş bölümünde bahsedilen. Mikrosıvısal yakalama sırasında vezikül içte ve dışta arasında ozmotik bir denge faz devlet yapıları yukarıda da belirtildiği gibi aynı zamanda hipertonik çözüm koşulları neden deflasyon önlemek için sadece temel kayma kapana GUVs neden olabilir değil Harici çözüm değişimi sonra mesaj yoluyla.
Spontan şişme doldurulmamış büyümeye başarıyla uygulanmış olsa bile veziküller DOPC/eSM/CHOI sistemden, diğer durumlarda, ücretleri yokluğu itme bireysel bilayers44 arasında ortaya çıkan eksikliği nedeniyle şişlik Şef bozabilen . Önceden şişme süresini uzatma veya hantal lipid headgroups tanıtan bu sorunu45counter. Ayrıca, vezikül istikrar sonra onların seyreltme çözümlerinde şişlik için kullanılandan farklı farklı lipit kompozisyonları ve biz burada araştırdık değil seyreltme medya için farklı olabilir. Ayrıca burada sunulan hazırlama yöntemi ile ortalama Şef çap ayarlama olanağı araştırılmalıdır değil. Ancak vezikül kompozisyon ve çözüm şişme gibi parametreleri sonuçlarını etkilemek. Alternatif yöntemler46 uygulanması daha büyük veziküller lipidler ve burada kullanılan çözümler için verim, ancak, yöntemi ile ilişkili diğer dezavantajları ile gelebilir. GUVs simetrik ve asimetrik yüksek tuzluluk koşullarda üretmek için yukarıda açıklanan yaklaşım daha da farklı lipid kompozisyonlar oluşan ve farklı medyada dağınık veziküller çalışmaları için potansiyel bir araç sağlar. Biz bu olanakları keşfedilmeyi değil gibi gelecek çalışmalar nasıl genellikle Şef hazırlık ve seyreltme yöntemleri uygulanabilir gösterir.
Faz ayrımı değişen sıcaklıklarda gözlemleyerek
Farklı deneysel kurulumları GUVs değişen sıcaklıklarda çalışmaya uygun adlı biri yok. Bu ayarlar genellikle edebiyatı içinde ayrıntılı olarak açıklanan değildir süre, mevcut iş bu tür çalışmalar için geçerli bir temel derleme sunar.
_content "> kontrol ölçümleri göster bu şirket içinde tasarlanmış ve odası inşa sıcaklığı tam bir termostat tarafından kontrol edilir ve sıcaklık degradeleri odasının içinde içinde deneysel sıcaklık çözünürlüğü vardır. Deneysel termal durumların termostat okuma ile tutarlı sağlanmaktadır.
Şef faz Birleşik geniş sıcaklık aralığı boyunca değerlendirme sırasında sıcaklık değiştirildikten sonra gözlenen veziküller de equilibrated önemlidir. Bunu sağlamak için tek mümkün yolu histeresis için kontrol etmektir. Histeresis varsa, sıcaklık adımları azalma / veya denge kez arttı. Sıcaklık Bu eser denetiminde kurulmuş su bazlı bir termostat tarafından çalışma Sıcaklık aralığı 0 - 100 ° c için ideal bir konuma sahip sınırlıdır Bu Aralık diğer sıcaklık kontrol sıvı yağı kullanarak veya diğer kurulumları, örneğin istihdam Peltier aygıt genişletilebilir. Uygulamada, çalışma sıcaklığı da mümkün yoğunlaşma veya buharlaşma ile sınırlıdır. Ayrıca, oda sıcaklığında uzakta sıcaklıklar için kararlı duruma sıcaklık degrade boyunca gözlem odası oluşumunu daha büyük olasılıkla olur. Ayrıca, görüntüleme cihazları aşırı sıcaklıklarda zarar. Tipik sıcaklık aralıkları lipid vezikül çalışmaları (~ 10-50 ° C7,9) için uygun gözlem ekipman hasar düşünülmesi gereken ancak genellikle değil bekleniyor.
Vezikül etki alanı gözlem eserler
Geniş alanlı Floresans mikroskobu kullanarak gözlem eserler için kaynakları vardır. Her şeyden önce bir vezikül faz Birleşik görsel denetim için uygulanan nesne maksimum çözünürlük r lipid etki alanlarına göre algılama sınırını belirler hususlara dikkat etmelidir: 
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56034/56034eq2v2.jpg"> Burada λ emisyon dalga boyu ve NA amacın sayısal diyafram olduğunu. Tipik bir amaç 40 x büyütme ve yeşil emisyon algılar 0,6 bir NA ışık yaklaşık 560 nm ~0.6 µm. dolayısıyla, belirli lipid karışımları farklı arasında yapılan veziküller faz durumları karşılaştırmak çalışmalar optik çözünürlük ulaşmak koşullar aynı amaç için aynı lipid karışımı kullanmalısınız.
Lipid etki sonucu olarak lipid fotoğraf-oksidasyon nedeniyle uzun bir pozlama uyarma ışık41geçtiği başka bir eserdir. Fotoğraf-hasar tercihen doymamış hidrokarbon lipid moieties üzerinde oluşur. Aslında, bazı lipid besteleri için başlangıçta homojen veziküller böyle etki alanı oluşumu burada uyarma ışık pozlama uzun bir süre sonra gözlenmiştir (~ 30 s). Bu konuda kalkması için uyarma ışık bir görüş alanı yalnızca bir kaç saniye faz durum değerlendirmesi için odaklı tutuldu. Bu nedenle, DiIC18 bizim amacımız için uygun oldu. Diğer boya, ancak, çok daha duyarlı olabilir ve daha düşük uyarma yoğunluklarını ve daha kısa uyarma ışık pozlama süreleri ile ele alınması gerekebilir.
Veziküller pipet transferini mekanik makas stresten potansiyel etki alanlarını geçici olarak, böylece belirgin vezikül faz davranış bozan karışımları. Bazı toplu işlemler için farklı veziküller gösterdi farklı faz davranışları 0 dk ve 5 dk sonra pipet transfer mikroskop coverslip. Ayrıca kesme mikrosıvısal cihaz sıvı akış tarafından indüklenen stres47karıştırma etki alanında neden olduğu gösterilmiştir. Veziküller gözlem önce denge için yeterli süreyi için rahatsız edilmeden bırakılmalıdır. Bu çalışma içinde mikrosıvısal aygıtta tuzağa veziküller vezikül yükleme ve çözüm alışverişi gözlem önce sonra 1 h için rahatsız edilmeden kalmıştı.
Yukarıda bahsedilen zorluklar yanı sıra hafif kırınım sınırı, Nükleer manyetik rezonans spektroskopisi48 veya süper çözünürlük mikroskobu teknikleri49 gibi alternatif yöntemler tarafından dayatılan kısıtlama bazı önlemek için istihdam olabilir.
Sonuç ve outlook
Sunulan çalışma yüksek tuzluluk simetrik ve asimetrik çözüm koşulları etkisi membran faz ayırma analizi için sağlar bir dizi yöntem gösterir. Tüm sunulan yöntemleri diğer uygulamalar için uygundur. Mikrosıvısal aygıt örneğin etki alanı oluşumu ve kaybolması üzerine çözüm asimetri indüksiyon Kinetik çalışma için bir platform sağlar. Ayrıca, etki alanı görünüm tuz konsantrasyonu bir fonksiyonu olarak bu şekilde muayene. Tüm yöntemleri de ilgi diğer çözümleri kullanarak faz davranışları üzerindeki etkisi bakmak için kullanılabilir.

Lipid Sal hipotez1,2 araştırmak için bir model sistemi olarak GUVs kullanılmıştır hiç mikron büyüklüğünde etki alanlarında bulunan sıvı-sıvı faz ayrılmış dev unilamellar veziküller (GUVs) floresan mikroskopi tarafından gözlenmesi beri , 3 . Bu dizi biyolojik hücreleri kendi müstakil bilayer alan yatıyor onlar plazma hypothesized sallar featuring membranlar, uygun taklit eder şunlardır. Böyle GUVs çok sayıda çalışmalar saf su, sukroz veya düşük-tuzluluk çözümler4,5,6,7,8dağınık veziküller ile gerçekleştirilmiş. Hücreler için koşullar gibi bu koşullar, ancak, biomembranes fizyolojik ilgili maruz kalma yüksek tuzluluk ortamları ve trans-membran çözüm asimetri yansıtmıyor.
Bu eser ve bir önceki yayın bizim grup9, ücret uygulamasının GUVs faz Birleşik membran arasında tuz ve çözüm asimetri varlığı bir fonksiyonu olarak incelenmiş. GUVs dioleoylphosphatidylglycerol (DOPG), yumurta sphingomyelin (eSM) ve kolesterol (CHOI) Sükroz çözüm (ile Osmolarite 210 mOsm/kg) veya yüksek tuzluluk arabellek (100 mM NaCl, 10 mM Tris, pH 7.5, 210 farklı oranlarda karışımları hazırlanan mOsm/kg). Lipid seçim zaten bu karışımı6,8faz diyagramı üzerinde elde edilen veriler tarafından haklı idi.
Birkaç yöntem GUVs hazırlanması için edebiyat10,11,12 ' kullanılabilir (buraya dikkat edin, biz bir sulu faz lipidler ve yağ bazlı üzerinden aktarımı ilgili olanlar dikkate almayacağım 13 , 14 faz davranışını etkileyebilir zarda kalan yağ artıkları doğal tehlikesi nedeniyle). Yüksek tuzluluk arabellek GUVs hazırlanmasında belirli sorunlarla ilgili olduğu. Düşük iyonik gücü çözümler için electroformation yöntemi15,16 küçük kusurları10,17ile yüksek verimleri GUVs hazırlamak için hızlı bir yol sunar. Bu yöntem lipidler tabakası bir iletken yüzeye (elektrot) yatırmak, onları kurutma ve onları bir AC alanı uygulanırken sulu bir çözüm ile nemlendirici dayanır. Ancak, bu yöntem ayarlamalar eğer tuz sulu çözüm18,19' mevcut gerektirir. Electroformation tarafından vezikül büyüme için itici güç electroosmosis16 yüksek iletkenlikleri20, engel olduğu varsayılır. Farklı tuz konsantrasyonları şişme çözümde mevcut için en iyi duruma getirme gerektirdiği dolayısıyla, GUVs electroswelling yüksek tuzluluk çözümlerinde basit bir yaklaşım değildir. Jel yardımıyla vezikül21,22 şişme electroformation bile daha hızlı oluşumu süreleri ile potansiyel bir alternatiftir. Bir jel (özel veya polivinil alkol (PVA)) bir substrat kullanıldığında bu yaklaşım gelişmiş lipid film nemlendirme üzerinde oluşturur. Bu yaklaşımlar, ancak, özel tabanlı şişme23 ve/veya sıcaklık sınırları PVA tabanlı şişme durumunda olduğu gibi durumunda membran bulaşma riskini ile geliyor. Benzer şekilde, GUVs selüloz kağıt substrat büyümek için bir protokol kurulan24son zamanlarda. Bu yöntemin genel sorunlar substrat saflık üzerinde kontrol eksikliği yanı sıra kullanım lipid büyük miktarda vardır. Bu çalışmada, tanıtmak ve en geleneksel yöntem Şef hazırlık, yani kendiliğinden şişme yöntemi25,26için avantajları mevcut. Su buharı atmosfer ve istenen şişme çözümde sonraki şişlik nemlendirici bir lipophobic substrat lipid katmanda kurutma oluşur (bkz: şekil 1 ve ayrıntıları protokol bölümünde). Bu yöntem vezikül boyutu dağılımı üzerinde kontrol sunmuyor ve polimer substrat veya mikrosıvısal anlamına gelir ile karşılaştırıldığında nerede üretim elektrik alanı tarafından destekli yöntemleri genel olarak daha küçük veziküller sonuçları. Ancak, vezikül kalite ve boyutu burada membran faz durumu araştırdı olarak incelenmesi için uygun.
Asimetri vezikül membran arasında çözüm arasında oluşturma belli sorunlarla karşı ilişkilidir. Bir sık kullanılan yaklaşımdır istenen harici çözüm27,28vezikül süspansiyon doğrudan seyreltme. Ancak, bu aynı zamanda vezikül dağılım sıklığı azalır. Başka bir strateji yavaş yavaş dış çözüm için çözüm içinde - sağlayan bir akış-hücre alt kısmında yerleşmiş GUVs etrafında değişimi için olduğunu ve outflux. Rahatsız edici veya bile akışı ile veziküller kaybetme önlemek için bu yaklaşım zaman verimsiz işleyen uygulanan8, düşük akış oranları vardır. Ayrıca, bu yaklaşımlardan hiçbiri tam harici çözüm Satım garanti eder. Onları bir harici çözüm alışverişi sırasında kaybetmemek için veziküller hareketsiz açık bir çözümdür. Örneğin, biotinylated GUVs bir streptavidin kaplı yüzey29gergin. Ancak, bu yaklaşım yapıştırılır kompozisyon varyasyonları neden olabilir ve bu nedenle sigara yapıştırılır membran30,31kesimleri. Manyetik uygulanması veya elektrik alanları membran heybetli veziküller sonuçları yakalamak için32gerilim. Bir vezikül yakalamak için optik cımbız istihdam gerektirir bir kolu olan optik sedye kullanımı yerel Isıtma33içerebilir iken (Yani bir boncuk), bağlı. GUVs yakalama son dekolmanı34olmadan Platin teller üzerinde büyüyerek da yapılabilir. Bu ancak ince lipid tüpler (bağları) tarafından hangi izole değildir ve hangi genellikle için kabloların takılı olduğundan veziküller ya da diğer veziküller verir.
Yukarıda belirtilen sınırlamalar üstesinden gelmek için stratejiler sunulan iş vurgulamaktadır. Biz ilk spontan şişme yönteminin uyarlanmış ve iyimserlik GUVs üretimde yüksek tuzluluk arabellekleri için ayrıntılı bir açıklama mevcut. Biz o zaman verimli bir şekilde basit seyreltme veya bir mikrosıvısal cihazın kullanımını tarafından asimetrik çözüm koşulları oluşturmak için iki yaklaşım tanıtmak. Amacımız GUVs membran faz durumunu farklı çözüm koşullarında analizini olduğundan, başarılı istatistiksel analiz ölçütlerini ve yanlış Kategori önlemek için mevcut ipuçları sonraki bölümlerde açıklanmaktadır.
Analizleri izotermal koşullar altında yanı sıra değişik sıcaklıklar altında yapıldı. Sıcaklık c iseTim yaygın olarak istihdam, deneysel sıcaklık kontrol odaları ayrıntılarını nadiren açıklanmıştır. Burada, çeşitli sıcaklık koşullarında GUVs gözlemlemek için bir kurum içi yapılı Kur sunulur.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-(1&#39;-rac-glycerol), sodium salt</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>840475C</td>
			<td>abbreviated as DOPG in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chicken egg sphingomyelin</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>860061</td>
			<td>abbreviated as eSM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cholesterol (ovine wool, &#62; 98 %)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>700000</td>
			<td>abbreviated as Chol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,1&#129;&#39;-dioctadecyl-3,3,3&#39;,3&#39;-tetramethylindocarbocyanine perchlorate</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>D-282</td>
			<td>abbreviated as DiIC18</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform, HPLC grade (&#8805; 99.8 %)</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl (&#62; 99.8 %)</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl (37 %)</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris (&#8805; 99.9 %)</td>
			<td>Roth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose (&#8805; 99.5 %)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Threaded vial 45x27 mm, 15 mL</td>
			<td>Kimble</td>
			<td></td>
			<td>Soda flat bottom, white screw cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>MP220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmometer</td>
			<td>Gonotec</td>
			<td>Osmomat030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epi-fluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Observer D1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>TCS SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 40x, 0.6 NA</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LD Achroplan</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 40x, 0.75 NA</td>
			<td>Leica</td>
			<td>506174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 63x, 0.9 NA</td>
			<td>Leica</td>
			<td>506148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide, 56x26 mm, 0.17 &#177; 0.01 mm</td>
			<td>Menzel-Gl&#228;ser</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slip, 22x22 mm, 0.17 &#177; 0.01 mm</td>
			<td>Menzel-Gl&#228;aser</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm &#34;M&#34;</td>
			<td>Bremix Flexible Packaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes, 5 mL, 10 mL</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.45 &#181;m syringe filter</td>
			<td>GVS North America</td>
			<td>Cameo 25AS, 1213723</td>
			<td>Acetate, sterile</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

phase behavior of charged vesicles under symmetric and asymmetric solution conditions monitored with fluorescence microscopy

Dev unilamellar faz ayrılmış veziküller (GUVs) eşlik sergilenmesi sıvı-emretti ve sıvı düzensiz etki alanlarında lipid Sal hipotez araştırmak için ortak bir biyofiziksel araç. Birçok çalışma, ancak, fizyolojik çözüm koşulları etkisini ihmal. İlgili hesapta, mevcut iş dolu GUVs dioleylphosphatidylglycerol, yumurta sphingomyelin ve kolesterol yüksek tuzluluk tampon ve trans-membran çözüm asimetri etkisi sıvı-sıvı faz ayrımı sunar. Etkileri izotermal ve değişen sıcaklık koşullar altında incelenmiştir.
Biz ekipman ve deneysel stratejiler coexisting sıvı etki alanları simetrik ve asimetrik yüksek tuzluluk çözüm koşullar altında ücret veziküller kararlılığını izlenmesi için uygun tarif. Bu yüksek sıcaklıklarda yüksek tuzluluk arabellekte ücret uygulamasının GUVs hazırlamak için bir yaklaşım içerir. Protokol vezikül seyreltme en aza indirirken basit seyreltme adım harici çözüm kısmi bir değişimi gerçekleştirmek için seçeneğini gerektirir. Alternatif bir yaklaşım için bir tam dış çözüm değişimi sağlayan bir mikrosıvısal aygıt kullanan sunulur. Faz ayrımı çözüm etkisi altında değişik sıcaklıklar da incelenmiştir. Bu amaçla, biz temel tasarım ve faydalı bir kurum içi yapılı sıcaklık kontrol odası mevcut. Ayrıca, Şef faz devlet değerlendirilmesi yansıtacak ve onları aşmak nasıl ile tuzaklar ilişkili.

Watch this Scientific Journal Video about Phase Behavior of Charged Vesicles Under Symmetric and Asymmetric Solution Conditions Monitored with Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Phase Behavior of Charged Vesicles Under Symmetric and Asymmetric Solution Conditions Monitored with Fluorescence Microscopy

Ayrılmış faz dev unilamellar veziküller (GUVs) üzerinde deneyler sık fizyolojik çözüm koşulları ihmal. Bu çalışma yüksek tuzluluk arabellek etkisi ücret uygulamasının GUVs trans-membran çözüm asimetri ve sıcaklık sıvı-sıvı faz ayrılmaya bir fonksiyonu olarak çalışmaya yaklaşımlar sunar.

Şarj edilmiş veziküller Floresans mikroskobu ile izlenen simetrik ve asimetrik çözüm koşullarda davranışını faz

Phase-separated giant unilamellar vesicles (GUVs) exhibiting coexisting liquid-ordered and liquid-disordered domains are a common biophysical tool to ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Determination of the Gas-phase Acidities of Oligopeptides

Oligopeptidlerin Gaz fazlı asitliğe belirlenmesi

Amino acid residues located at different positions in folded proteins often exhibit different degrees of acidities. For example, a cysteine residue ...

Particles without a Box: Brush-first Synthesis of Photodegradable PEG Star Polymers under Ambient Conditions

Koli olmadan Parçacıklar: Ortam Koşullarında fotoaynşmaya PEG Yıldız Polimerlerin Fırça-ilk Sentez

Convenient methods for the rapid, parallel synthesis of diversely functionalized nanoparticles will enable discovery of novel formulations for drug ...

Mizoroki-Heck Cross-coupling Reactions Catalyzed by Dichloro{bis[1,1',1''-(phosphinetriyl)tripiperidine]}palladium Under Mild Reaction Conditions

Mizoroki-Heck Cross-coupling Reactions Catalyzed by Dichloro{bis[1,1',1''-phosphinetriyltripiperidine]}palladium Under Mild Reaction Conditions

Hafif reaksiyon koşulları altında paladyum - Dikloro {bis [(phosphinetriyl) tripiperidine 1,1 &#39;, 1&#39;&#39;]} katalize Mizoroki-Heck Çapraz bağlama reaksiyonları

Dichloro-bis(aminophosphine) complexes of palladium with the general formula of [(P{(NC5H10)3-n(C6H11)n})2Pd(Cl)2] (where n = 0-2), belong to a new family ...

Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology

Katı Faz Reçine-tabanlı Metodoloji aracılığıyla Asimetrik Ferrosen Türetilmiş Bio-konjuge Sistemleri Sentetik Metodoloji

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. ...

A Simple Method for the Size Controlled Synthesis of Stable Oligomeric Clusters of Gold Nanoparticles under Ambient Conditions

Ortam Koşullarında Altın Nanopartiküller Kararlı Oligomerik Kümeleri Boyut Kontrollü Sentezi için Basit Bir Yöntem

Reducing dilute aqueous HAuCl4 with sodium thiocyanate (NaSCN) under alkaline conditions produces 2 to 3 nm diameter nanoparticles. Stable grape-like ...

Construction and Systematical Symmetric Studies of a Series of Supramolecular Clusters with Binary or Ternary Ammonium Triphenylacetates

İnşaat ve İkili veya Üçlü Amonyum trifenilasetatlar ile Supramoleküler Kümeleri Bir Seri Sistematik Simetrik Çalışmaları

Functions of clusters in nano or sub-nano scale significantly depend on not only kinds of their components but also arrangements, or symmetry, of their ...

A Protocol for Electrochemical Evaluations and State of Charge Diagnostics of a Symmetric Organic Redox Flow Battery

Elektrokimyasal Değerlendirmeleri ve Simetrik Organik Redoks Akış Pil Şarj Diagnostics Devlet için Protokol

Redox flow batteries have been considered as one of the most promising stationary energy storage solutions for improving the reliability of the power grid ...

Probing the Structure and Dynamics of Interfacial Water with Scanning Tunneling Microscopy and Spectroscopy

Tarama tünelleme mikroskobu ve spektroskopi ile Interfacial su dinamiği ve yapısını sondalama

Water/solid interfaces are ubiquitous and play a key role in many environmental, biophysical, and technological processes. Resolving the internal ...

Fabricating High-viscosity Droplets using Microfluidic Capillary Device with Phase-inversion Co-flow Structure

Faz-inversiyon ortak akış yapısıyla mikrosıvısal kapiller aygıtı kullanarak yüksek viskozite damlacıkları imalatı

The generation of monodisperse droplets with high viscosity has always been a challenge in droplet microfluidics. Here, we demonstrate a phase-inversion ...

Solid-phase Synthesis of [4.4] Spirocyclic Oximes

Katı faz [4.4] Spirocyclic Oximes sentezi

A convenient synthetic route for spirocyclic heterocycles is well sought after due to the molecule&#39;s potential use in biological systems. By means of ...