Name: using in vivo and tissue and cell explant approaches to study the morphogenesis and pathogenesis of the embryonic and perinatal aorta
Uploaded: 2017-09-12T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using In Vivo and Tissue and Cell Explant Approaches to Study the Morphogenesis and Pathogenesis of the Embryonic and Perinatal Aorta at JoVE.com

우리 감사 딘 리 대동맥 SMC 격리에 대 한 그의 실험실의 프로토콜을 공유. 미국 심장 협회는 건강의 국가 학회 (R21NS088854, R01HL125815, 및 D.M.G R01HL133016)에 의해 제공 된 지원 자금 (D.M.G.에 특정 14GRNT19990019), 예일 대학 (브라운-기술혁신 화목 오전 및 시작 D.M.G.에 기금)입니다.

모든 마우스 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회 예일 대학에 의해 승인 됩니다.
 1. Vivo에서 배아 운명 매핑 및 클론 분석 참고: 우리는 이러한 접근 널리 평가 하 사용 셀과 그들의 클론 아키텍처 개발 및 질병 모델에서의 유래 7 , 8 , 9 , 10. <o...

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	<li>Shankman, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KLF4-dependent+phenotypic+modulation+of+smooth+muscle+cells+has+a+key+role+in+atherosclerotic+plaque+pathogenesis.">KLF4-dependent phenotypic modulation of smooth muscle cells has a key role in atherosclerotic plaque pathogenesis.</a> Nat Med. 21, 628-637 (2015).</li><li>Rowe, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+smooth+muscle+cell+apoptosis+in+aneurysmal,+occlusive,+and+normal+human+aortas.">Vascular smooth muscle cell apoptosis in aneurysmal, occlusive, and normal human aortas.</a> J Vasc Surg. 31, 567-576 (2000).</li><li>Rodella, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+aortic+aneurysm+and+histological,+clinical,+radiological+correlation.">Abdominal aortic aneurysm and histological, clinical, radiological correlation.</a> Acta Histochem. 118, 256-262 (2016).</li><li>Lewandoski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+control+of+gene+expression+in+the+mouse.">Conditional control of gene expression in the mouse.</a> Nat Rev Genet. 2, 743-755 (2001).</li><li>Lakso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+oncogene+activation+by+site-specific+recombination+in+transgenic+mice.">Targeted oncogene activation by site-specific recombination in transgenic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 89, 6232-6236 (1992).</li><li>Metzger, D., Clifford, J., Chiba, H., Chambon, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+site-specific+recombination+in+mammalian+cells+using+a+ligand-dependent+chimeric+Cre+recombinase.">Conditional site-specific recombination in mammalian cells using a ligand-dependent chimeric Cre recombinase.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 92, 6991-6995 (1995).</li><li>Sheikh, A. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+crypt+homeostasis+results+from+neutral+competition+between+symmetrically+dividing+Lgr5+stem+cells.">Intestinal crypt homeostasis results from neutral competition between symmetrically dividing Lgr5 stem cells.</a> Cell. 143, 134-144 (2010).</li><li>Kumar, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+cells.+Defining+a+mesenchymal+progenitor+niche+at+single-cell+resolution.">Mesenchymal cells. Defining a mesenchymal progenitor niche at single-cell resolution.</a> Science. 346, 1258810 (2014).</li><li>Srinivas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre+reporter+strains+produced+by+targeted+insertion+of+EYFP+and+ECFP+into+the+ROSA26+locus.">Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus.</a> BMC Dev Biol. 1, 4 (2001).</li><li>Muzumdar, M. D., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+global+double-fluorescent+Cre+reporter+mouse.">A global double-fluorescent Cre reporter mouse.</a> Genesis. 45, 593-605 (2007).</li><li>Li, D. 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Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastin+point+mutations+cause+an+obstructive+vascular+disease,+supravalvular+aortic+stenosis.">Elastin point mutations cause an obstructive vascular disease, supravalvular aortic stenosis.</a> Hum Mol Genet. 6, 1021-1028 (1997).</li><li>Pober, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Williams-Beuren+syndrome.">Williams-Beuren syndrome.</a> N Engl J Med. 362, 239-252 (2010).</li><li>Pober, B. R., Johnson, M., Urban, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+treatment+of+cardiovascular+disease+in+Williams-Beuren+syndrome.">Mechanisms and treatment of cardiovascular disease in Williams-Beuren syndrome.</a> J Clin Invest. 118, 1606-1615 (2008).</li><li>Holtwick, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle-selective+deletion+of+guanylyl+cyclase-A+prevents+the+acute+but+not+chronic+effects+of+ANP+on+blood+pressure.">Smooth muscle-selective deletion of guanylyl cyclase-A prevents the acute but not chronic effects of ANP on blood pressure.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 7142-7147 (2002).</li><li>Boucher, P., Gotthardt, M., Li, W. P., Anderson, R. G., Herz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LRP:+role+in+vascular+wall+integrity+and+protection+from+atherosclerosis.">LRP: role in vascular wall integrity and protection from atherosclerosis.</a> Science. 300, 329-332 (2003).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+an+adult+smooth+muscle+cell-targeted+Cre+recombinase+mouse+model.">Generation of an adult smooth muscle cell-targeted Cre recombinase mouse model.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 26, 23-24 (2006).</li><li>Armstrong, J. J., Larina, I. V., Dickinson, M. E., Zimmer, W. E., Hirschi, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+bacterial+artificial+chromosome+transgenic+mice+expressing+mCherry+fluorescent+protein+substituted+for+the+murine+smooth+muscle+alpha-actin+gene.">Characterization of bacterial artificial chromosome transgenic mice expressing mCherry fluorescent protein substituted for the murine smooth muscle alpha-actin gene.</a> Genesis. 48, 457-463 (2010).</li><li>Magness, S. T., Bataller, R., Yang, L., Brenner, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dual+reporter+gene+transgenic+mouse+demonstrates+heterogeneity+in+hepatic+fibrogenic+cell+populations.">A dual reporter gene transgenic mouse demonstrates heterogeneity in hepatic fibrogenic cell populations.</a> Hepatology. 40, 1151-1159 (2004).</li><li>Yokota, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow+lacks+a+transplantable+progenitor+for+smooth+muscle+type+alpha-actin-expressing+cells.">Bone marrow lacks a transplantable progenitor for smooth muscle type alpha-actin-expressing cells.</a> Stem Cells. 24, 13-22 (2006).</li></ol>

Murine 대동맥과 동맥 경화 증의 모델 등의 성인 병 적인 조건에 그것의 주요 분 지의 광범위 한 조사와 달리 덜는 morphogenesis와 배아와 perinatal 대동맥의 병 인에 대 한 알려져 있다. 여기, 우리 배아 perinatal 대동맥, 특히 SMCs에 집중 하 고 제공 하는 프로토콜을 vivo에서, 조직 explant 통해 대동맥 공부와 SMC 격리 접근. 이러한 무료 방법 제공 배아 perinatal 대동맥 공부를 다양 한 방법으로 조사 합니...

세포에 영양분과 산소를 제공 하는 다세포 생물 기능의 순환 시스템에 있으며 하지 외부 환경 접촉이 세포에서 폐기물 및 이산화탄소 제거 하. 척추 동물, 심장, 혈관의 시리즈를 통해 혈액을 펌프 기본 순환 시스템에 의하여 이루어져 있다. 동맥과 정 맥, 같은 큰 혈관의 벽 3 계층 구성: 나) intima, 또는 내부 층의 내 피 세포; 2) 미디어, 또는 원주 교류의 중간 층 길쭉한 SMCs 부드러운 근육 세포 및 탄성 lamellae; 그리고 iii) adventitia, 또는 결합 조직과 섬유 아 세포의 바깥 레이어. 혈관 생물학에서 연구의 대부분 신생 통해 새로운 내 피 세포 늘어선 관의 형성을 조사 하 고, 내 피 세포에 초점. 비교에서는, SMCs 상대적으로 작은 관심을 받을. 그러나, SMCs는 정상적인 동맥 벽의 건축에서 및 혈관 병 리에 중요 한 세포 유형입니다.
대동맥에서 심장의 좌 심 실 심장 출력을 받는 본문에 큰 구경 동맥입니다. 그것은 아 테 롬, 동맥, 및 해 부를 포함 하 여 다양 한 인간 질병에 의해 시달리 다. 성인 유기 체, 대동맥 및 그 주요 분 지는 심각 하 게 공부 하지 혈관 질환의 모델. 예를 들어, 인코딩 apolipoprotein E, 또는 저밀도 지 단백질 수용 체 유전자에 대 한 null이 쥐를 먹이 하는 고 지방 규정식 아 테 롬, 개발 하 고 최근 운명 매핑 연구 나타냅니다 기존의 SMCs에 여러 세포 유형을 일으키는 동맥 경 화성 플 라크1. 대동맥 동맥 류, 병 적인 변경 SMC apoptosis와 세포 외 매트릭스2,3개조를 포함.
실질적으로 더 적은 배아 및 perinatal 기간 동안 SMC morphogenesis 및 병 인에 대 한 알려져 있다. 여기, 우리는 배아 및 perinatal 대동맥 SMCs에 vivo에서, 고립 된 세포와 조직 explants에서 공부에 대 한 프로토콜을 제공 합니다. 예를 들어, 프로토콜의 첫 번째 섹션 구분 운명 매핑 및 미 발달 쥐에 클론 분석. 특정 셀의 표시 및 그들의 자손4,,56; Cre recombinase 셀 전용 모터의 제어 아래 표현 용이 그러나, 휴대 전용 라벨의 일시적인 제어에 쥐에 배아 개발 하는 동안 전하실 수 있습니다. 이러한 맥락에서 SMCs (e.g.,Myh11 또는 Acta2)와 Cre 기자 활성 발기인에서 조건부 있다 표현 하는 배아 우리 tamoxifen 또는 그 활성 대사 산물 4-오-tamoxifen 임신 댐에서 주입 방법 제공 태아 나 산 후 자손에 레이블이 지정 된 셀을 분석을 위한. 또한, 운명 매핑 연구, 어느 주로 단일 기자 fluorophore1,7Cre 기자 활용, 달리 클론 분석은 실질적으로 향상 된 멀티 컬러 Cre 기자.
프로토콜의 두 번째 및 세 번째 섹션 분리 하 고 배양 배아 대동맥 explants 및 신생아에서 대동맥 SMCs 각각에 대 한 방법을 설명 합니다. 이러한 접근 허용 신호 경로, 특히 대동맥 explants 또는, SMCs의 조작에 대 한 분석을 위한 약리학 대리인의 직접 효과. 따라서, 관심의 조직에 있는 특정 한 유전자의 역할 쥐에서 전통적인 유전자 조작을 통해 보다 훨씬 더 빠른 방식에서 상영 될 수 있습니다. 또한, 고립 된 SMC 연구 세포 이동의 분석을 촉진 하 고 기술적으로 접착 제한 에 비보.
마지막으로, 네 번째 프로토콜 섹션 구분 (또는 비 임신) 임신한 쥐에 약리 에이전트와 함께 로드 피하 삼 투 미니 펌프의 배치. 이 방법은 빠른 대사 때문에 지속적인 주입을 요구 하는 에이전트에 의해 발생 하는 배아 발달에 미치는 영향의 분석을 촉진 한다. 잦은 주사의 대안 많은 에이전트에 대 한 실용적 이며 피해 야 한다, 그것은 임신 댐에서 상당한 불편을 발생할 수 있습니다.

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	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Tamoxifen</td>
			<td style="width:216px;">Sigma</td>
			<td style="width:111px;">T5648</td>
			<td style="width:412px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Corn oil</td>
			<td style="width:216px;">Sigma</td>
			<td style="width:111px;">C-8267</td>
			<td>Vehicle for tamoxifen</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">4-OH-tamoxifen</td>
			<td style="width:216px;">Sigma</td>
			<td style="width:111px;">H7904</td>
			<td>Active metabolite of tamoxifen</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Progesterone</td>
			<td style="width:216px;">Sigma</td>
			<td style="width:111px;">P8783-5G</td>
			<td>Use at half the concentration of tamoxifen</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">OCT compound</td>
			<td style="width:216px;">Sakura tissue tek</td>
			<td style="width:111px;">4583</td>
			<td>For making cryoblocks</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Cryomolds</td>
			<td style="width:216px;">Polysciences inc</td>
			<td style="width:111px;">18986</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">DAPI</td>
			<td style="width:216px;">Sigma</td>
			<td style="width:111px;">D9542</td>
			<td>IHC staining of nucleus, final concentration 5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cy3 directly conjugated anti-SMA antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2547</td>
			<td>IHC staining of SMA, final dilution 1:500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Anti-CD31 antibody</td>
			<td style="width:216px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:111px;">550274</td>
			<td>IHC staining of GFP, final concentration 0.006 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Anti-GFP antibody</td>
			<td style="width:216px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:111px;">A-11121</td>
			<td>IHC staining of CD31, final concentration 0.0016 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Secondary antibody goat anti-rabbit, Alexa 647</td>
			<td style="width:216px;">Life Technologies</td>
			<td>a21244</td>
			<td>IHC staining, final concentration 0.004 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Secondary antibody goat anti-rabbit, Alexa 488</td>
			<td style="width:216px;">Life Technologies</td>
			<td>a11008</td>
			<td>IHC staining, final concentration 0.004 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:216px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:111px;">10567-014</td>
			<td>For cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">FBS</td>
			<td style="width:216px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:111px;">10437028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Anti-integrin beta3 blocking antibody</td>
			<td style="width:216px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:111px;">553343</td>
			<td>Clone 2C9.G2, final concentration 0.02 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagenase</td>
			<td>Worthington Biochemical Corp</td>
			<td>44H14977A</td>
			<td>For digesting aorta</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Elastase</td>
			<td>Worthington Biochemical Corp</td>
			<td>34K15139</td>
			<td>For digesting aorta</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Antibiotic-antimycotic (100X)</td>
			<td style="width:216px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:111px;">15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Recombinant human FGF</td>
			<td style="width:216px;">Promega</td>
			<td style="width:111px;">G5071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Recombinant human EGF</td>
			<td style="width:216px;">Promega</td>
			<td style="width:111px;">G5021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Penicillin/streptomycin (10,000 U/ml)</td>
			<td style="width:216px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:111px;">15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Amphotericin B</td>
			<td style="width:216px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:111px;">15290026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Tissue culture plates</td>
			<td style="width:216px;">Corning</td>
			<td style="width:111px;">CLS430165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:323px;height:21px;">Alzet osmotic mini-pump</td>
			<td style="width:216px;">Durect Corporation</td>
			<td style="width:111px;">2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ECLIPSE 80i Upright Fluorescent Microscope</td>
			<td style="width:216px;">Nikon </td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"> TCS SP5</td>
			<td style="width:216px;">Leica</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Branson Sonifier 450</td>
			<td style="width:216px;">VWR</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Myh11-CreERT2 mice</td>
			<td style="width:216px;">The Jackson Laboratory </td>
			<td>19079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acta2-CreERT2 mice</td>
			<td style="width:216px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td>Obtained from lab of Dr. Pierre Chambon and Daniel Metzger</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ROSA26R-CreERT2 mice</td>
			<td style="width:216px;">The Jackson Laboratory </td>
			<td style="width:111px;">8463</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ROSA26R(mTmG/mTmG) mice</td>
			<td style="width:216px;">The Jackson Laboratory </td>
			<td> 026862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ROSA26R(EYFP/EYFP) mice</td>
			<td style="width:216px;">The Jackson Laboratory </td>
			<td> 006148 </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ROSA26R(Confetti/Confetti) mice</td>
			<td style="width:216px;">The Jackson Laboratory </td>
			<td>13731</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ROSA26R(Rb/Rb) mice</td>
			<td style="width:216px;">Lab of Dr. Irv Weissman</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:412px;">Obtained from lab of Dr. Irv Weissman</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using in vivo and tissue and cell explant approaches to study the morphogenesis and pathogenesis of the embryonic and perinatal aorta

대동맥은 신체에서 가장 큰 동맥 이다. 대동맥 벽 내 피 세포의 내부 계층, 탄성 lamellae 그리고 부드러운 근육 세포 (SMCs)의 중간 층 및 외부 층의 섬유 아 세포와 세포 외 매트릭스의 구성 됩니다. 성인 대동맥에 병 적인 모델 (예: 동맥 경화 증)의 광범위 한 연구와 달리 훨씬 덜 배아 및 perinatal 대동맥에 대 한 알려져 있다. 여기, 우리가 초점을 SMCs는 morphogenesis의 분석 및 배아와 perinatal 대동맥 SMCs 정상적인 개발 및 질병의 병 인에 대 한 프로토콜을 제공. 특히, 포함 하는 4 개의 프로토콜은: 나) 배아 운명 매핑 vivo에서 및 클론 분석; ii) explant 배아 대동맥 문화; iii) SMC 별개로 perinatal 대동맥; 그리고 iv) 임신 (비 임신) 쥐에 피하 삼 투 미니 펌프 배치. 따라서, 이러한 접근 origin(s), 운명, 그리고 대동맥 vivo에서 SMCs의 클론 아키텍처의 조사를 촉진 한다. 약리학 대리인에 지속적인 노출에 의해 배아 대동맥 morphogenesis에서 utero에서 변조에 대 한 수 있습니다. 또한, 고립 된 대동맥 조직 explants 또는 대동맥 SMCs muscularization, 확산, 마이그레이션 등 기본적인 프로세스 동안 특정 유전자 목표의 역할에 통찰력을 얻을 하는 데 사용 될 수 있습니다. 격리 된 SMCs explanted 대동맥에 이러한 가설 생성 실험 다음 약리 및 유전 접근을 통해 생체 내에 컨텍스트에서 평가 수 있습니다.

대표 클론 분석에서 SMCs의 Eln (세포 외 기질 단백질 엘라 스 틴을 인코딩 하는 유전자)에 돌연변이 체 배아에에서, Eln(+), Acta2-크리스챤T2 쥐 Eln(+) 쥐도 들고 성관계 했다는 멀티 컬러 ROSA26R(Rb/Rb) 기자. 1 단계에서 설명한 대로 플러그 했다 확인 하 고 임신 댐 했다 E12.5에 단일 tamoxifen 주입 (1.5 mg)으로 유도 한 그들은 E18.5?...

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Using In Vivo and Tissue and Cell Explant Approaches to Study the Morphogenesis and Pathogenesis of the Embryonic and Perinatal Aorta

Morphogenesis 배아 및 Perinatal 대동맥의 병 인을 공부 하 고 Vivo에서 , 조직 및 세포 Explant 접근을 사용 하 여

배아와 perinatal murine 대동맥 여기 vivo에서 클론 분석 및 운명 매핑, 대동맥 explants 및 격리 된 부드러운 근육 세포 상세를 사용 하 여 공부에 대 한 프로토콜. 이러한 다양 한 접근의 정상적인 발전에서 배아 및 perinatal 대동맥 및 질병의 병 인 morphogenesis 조사를 촉진 한다.

The aorta is the largest artery in the body. The aortic wall is composed of an inner layer of endothelial cells, a middle layer of alternating elastic ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Using In Vivo and Tissue and Cell Explant Approaches to Study the Morphogenesis and Pathogenesis of the Embryonic and Perinatal Aorta

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

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The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

연구

발생학

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

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줄기 세포처럼<em&gt; Xenopus의</em&gt; 배아의 Explants는 초기 신경 발달의 특징을 연구하는<em&gt; 체외</em&gt; 및<em&gt; 생체</em

Understanding the genetic programs underlying neural development is an important goal of developmental and stem cell biology. In the amphibian blastula, ...

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조류 배아 배아 Cardiomyocytes의 생체 내 주입에 대 한 microinjection 기반 시스템

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척추동물 축 신장 및 세분화를 연구하기 위한 세 가지 및 네 차원 시각화 및 분석 접근법

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배아의 날 12.5 및 8 주 된 마우스의 혀 상피 및 메센키메 / 결합 조직에서 세포 해리

Cell dissociation has been an essential procedure for studies at the individual-cell level and/or at a cell-population level (e.g.,&#160;single cell RNA ...