Name: high-resolution episcopic microscopy (hrem) - simple and robust protocols for processing and visualizing organic materials
Uploaded: 2017-07-07T13:00:00
Duration: 8 min 52 s
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लेखकों ने नमूनों को प्रदान करने के लिए एचआरईएम और पेट्रा हेफ़ेटर के विकास में उनके अन्वेषण योगदान के लिए टिम मोहन का धन्यवाद किया

लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।

एचआरईएम एक बेहद मजबूत माइक्रोस्कोपिक पद्धति है जो बायोमेडिसिन और उद्योग 18 , 21 , 26 , 27 , 28 , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 , 34 , 35 , 36 , 37 में इस्तेमाल किए जाने वाले कार्बनिक पदार्थों के व्यापक स्पेक्ट्रम को देखने के लिए आदर्श है। , 38 , 39 , 40 इसे एक विशेष इमेजिंग साधन के रूप में नियोजित किया जा सकता है, क्योंकि वर्तमान में विकास संबंधी विकारों (डीएमडीडी) के कार्यक्रम 41 , 42 <suपी&gt;, 43 , 44 या मल्टीमॉडल इमेजिंग पाइपलाइन 45 के एक एकीकृत भाग के रूप में। एक पूरी तरह से कामकाजी एचआरईएम डाटा पीढ़ी के उपकरण को पारंपरिक प्रयोगशाला घटकों से इकट्ठा किया जा सकता है और इसमें मोटर चालित माइक्रोोटॉम, माइक्रोस्कोप, मोटर क्रॉस टेबल और उपयुक्त कंप्यूटर 25 वाला कंप्यूटर शामिल है। एक ब्लॉक धारक से लैस एक माइक्रोोटिम का प्रयोग करना महत्वपूर्ण है, जो प्रत्येक अनुभाग के बाद एक निर्धारित स्थिति और ऑप्टिकल मार्ग के अंदर GFP फ़िल्टर क्यूब्स पर पुनप्रश्लेषित रूप से बंद हो जाता है। हालांकि, सर्व-समेकित समाधानों को पूरी तरह से कार्य करना इंडिगो सर्किट जैसे कंपनियों से खरीदा जा सकता है। एचआरईएम सभी हिस्टोलॉजिकल तकनीकों के समान सीमाओं का सामना करते हैं, सिवाय इसके कि अनुभागिंग या अनुभाग बढ़ते दौरान कोई कलाकृतियों को पेश नहीं किया जाता है। हालांकि, सीमाएं हैं, जो सेक्शनिंग से पहले नमूने की आवश्यकता से दाग़ करने के लिए आवश्यक है औरएम्बेडिंग सामग्री की विशेषताओं से पर्याप्त टिशू विरोधाभास प्राप्त करने के लिए पूरे नमूना के माध्यम से ईओएसिन का प्रवेश आवश्यक है; बहुत घने सामग्री, वसा ऊतकों और अकार्बनिक पदार्थ प्रभावी ढंग से ईोसिन पैठ में बाधा डालते हैं और ऑब्जेक्ट्स के केंद्र में अस्थिर ऊतकों में यह परिणाम होता है। स्पेशल फिक्सिस्टिक्स का इस्तेमाल त्वचा के नमूनों को दागने में मदद करता है, लेकिन समस्या पर पूरी तरह से निपटने के लिए अभी कोई उचित तरीका नहीं है। एक और सीमा यह है कि रेजिन जो सेक्शनिंग के दौरान 2 सेमी से अधिक ब्लॉक को तोड़ते हैं। यह अलग-अलग नमूने और प्रसंस्करण भागों को काटने से आंशिक रूप से बचा जा सकता है। एम्बेडिंग के दौरान मोल्ड में अनियमित सतहों के साथ छोटे नमूनों या नमूनों की सही स्थिति अक्सर समस्याग्रस्त होती है। Agarose के साथ नमूनों को कवर करना और प्रोटोकॉल में वर्णित agarose ब्लॉकों के प्रसंस्करण आमतौर पर इस समस्या को हल करता है 19 । एक वैकल्पिक दृष्टिकोण, जो भी मदद करता है यदि ब्लॉक को बीच में बिखरेऑनिंग, पहले से कड़े ब्लॉक को अपने धारक से निकालने और इसे एम्बेड किया गया है, वर्णित एम्बेडिंग प्रक्रिया के बाद। एक सामान्य एचआरईएम डेटा सेट में 500 से 3,000 सिंगल इमेजेस शामिल हैं। इसका संख्यात्मक संकल्प क्रमिक छवियों ( यानी , अनुभाग मोटाई के अनुसार), कैमरा लक्ष्य की विशेषता, और उपयोग किए गए प्रकाशिकी के गुणों के बीच की दूरी से निर्धारित होता है। हमने 1 माइक्रोन और 5 माइक्रोन के बीच अनुभाग मोटाई का इस्तेमाल किया और अच्छे परिणाम प्राप्त किए, हालांकि प्रस्तुत प्रोटोकॉल 20 , 46 कलाकृतियों से चमचमाते नहीं हैं। इन कलाकृतियों ब्लॉक के अंदर गहरे स्थित गहन ऊतकों के कारण होते हैं, जिसके परिणामस्वरूप ब्लॉक सतहों पर ऊतक की जानकारी को धुंधला हो जाता है। कैमरों में 2,560 x 1,920 पिक्सल 2 , 2,048 x 2,048 पिक्सल 2 , और 4,0 9 6,04 पिक्सेल 2 के लक्ष्य के आयाम थे और कॉम्पी थे1.25 एक्स, 2.5 एक्स, 5 एक्स, 10 एक्स, और 20 एक्स उद्देश्य लेंस के साथ इसके परिणामस्वरूप 0.18 x 0.18 माइक्रोन 2 और 5.92 एक्स 5.92 माइक्रोन 2 के बीच संख्यात्मक पिक्सेल आकार मिला, जो टिशू आर्किटेक्चर और सेल आकृतियों के 3 डी विश्लेषण के लिए पर्याप्त साबित हुआ और यहां तक ​​कि नाभिक देखने के लिए भी। उच्च संख्यात्मक संकल्प को देखते हुए, अन्य सेल ऑर्गेनेल भी दृश्यमान होना चाहिए। सरल ईोसिन धुंधला होने के कारण अपर्याप्त विरोधाभास, और उद्देश्यों के ऑप्टिकल गुणों ने नाटकीय संरचनाओं को भेदभाव करने की संभावना को कम कर दिया है। HREM डेटा का अधिकतम वास्तविक रिज़ॉल्यूशन, जो संख्यात्मक एपर्चर लेता है, लगभग 1 x 1 x 1 माइक्रोन 3 है , और इसलिए केवल 3 x 3 x 3 माइक्रोन 3 से बड़े संरचनाओं के प्रभावी भेदभाव की अनुमति देता है। सभी डिजिटल इमेजिंग तकनीकों के लिए आम समस्या दृश्य के क्षेत्र के आकार के बीच का व्यवहार है, जो कि नमूने के भाग को परिभाषित करती है जिसे प्रदर्शित किया जा सकता हैडी कैमरा लक्ष्य पर, और छवि का संख्यात्मक समाधान। दृश्य के क्षेत्र में जितना बड़ा होगा, अधिकतम अधिकतम संख्यात्मक संकल्प 46 यहां इस्तेमाल की गई एचआरईएम सेटअप, एचआरईएम डेटा की पीढ़ी को 0.74 x 0.74 मिमी 2 ( 20 एक्स उद्देश्य) के बीच में प्रदर्शित किए जाने वाले 0.18 x 0.18 माइक्रोन 2 और 12.12 एक्स 12.12 मिमी 2 (1.25 एक्स उद्देश्य) में एक संख्यात्मक संकल्प में प्रदर्शित की अनुमति देता है। 2.96 x 2. 9 6 माइक्रोन 2 के एक संख्यात्मक संकल्प वैकल्पिक, व्यावसायिक सेट-अप दृश्यों के बड़े क्षेत्रों को प्रदान कर सकते हैं, लेकिन वास्तविक रिज़ॉल्यूशन की लागत पर। इसके बावजूद, वे डीएमडीडी कार्यक्रम 47 के होमपेज पर प्रदर्शित डेटा से स्पष्ट रूप से उत्कृष्ट परिणाम प्रदान करते हैं।

जैविक और अकार्बनिक सामग्री का संरचनात्मक विश्लेषण उनके भौतिक गुणों और कार्यों को समझने में पहला कदम है। इस तरह के विश्लेषण का आधार अक्सर ऊतक वास्तुकला, सेल आकारिकी और टोपोलॉजी, आणविक संरचना और बायोमेनिकल गुण 1 का विवरण निकालने वाले विभिन्न सरल और परिष्कृत इमेजिंग विधियों के साथ हिस्टोलॉजिकल अनुभागों के सावधान अवलोकन द्वारा प्राप्त की गई दो-आयामी (2 डी) सूचना है । 2 , 3 हालांकि, 2 डी जानकारी स्थानिक जटिल परिस्थितियों के शोध के लिए उपयुक्त नहीं है। इसलिए विवो और पूर्व विवो विधियों की संख्या बढ़ रही है जो डिजिटल मात्रा डेटा तैयार करने की अनुमति देते हैं, पिछले 4 सालों में स्थापित की गई थीं और कई और भी विकास के अधीन हैं। अधिकांश वॉल्यूम डेटा पीढ़ी के तरीकों का सिद्धांतिक सिद्धांत आभासी ढेर की पीढ़ी हैडिजिटल छवियों की एक वस्तु के आभासी या भौतिक सेक्शन द्वारा प्राप्त वर्गों को प्रदर्शित करता है। यदि अनुभाग छवियों को ठीक से गठबंधन किया गया है, तो यह एक मात्रा बनाता है, जिसे आभासी अनुभाग विमानों में फिर से विभाजित किया जा सकता है, या 3 डी की सतह और मात्रा गाया मॉडल बनाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। मनुष्यों और बड़े जैविक नमूनों को देखने के लिए लोकप्रिय तकनीक चुंबकीय अनुनाद टोमोग्राफी (एमआरटी), कंप्यूटेड टोमोग्राफी (सीटी), पॉज़िट्रॉन एमिशन टोमोग्राफी (पीईटी) और एकल फोटॉन उत्सर्जन कंपॉमेटेड टोमोग्राफी (एसपीईसीटी) हैं। छोटे नमूनों को आम तौर पर सूक्ष्म-चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (μMRI), ऑप्टिकल प्रोजेक्शन टोमोग्राफी (ओपीटी), ऑप्टिकल कॉन्सरेंस टोमोग्राफी (ओसीटी), फोटोकाउस्टिक टोमोग्राफी (पैट), हिस्टोलॉजिकल सेटेक्शन आधारित विधियों, कॉम्बोक्ल माइक्रोस्कोपी, और इलेक्ट्रॉन टोमोग्राफी 5 , 6 का उपयोग करके देखा जाता है। , 7 , 8 , 9 , 10 <sअप&gt;, 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 एक अपेक्षाकृत नई मात्रा डेटा पीढ़ी तकनीक, जो छोटे नमूनों और ऊतक ऊतक के नमूने के डिजिटल डेटा का उत्पादन करती है एचआरईएम विधि है, जिसे टिम मोहन 18 , 1 9 के साथ करीबी सहयोग में विकसित किया गया था। यह एक सरल सूक्ष्मदर्शी आधारित तकनीक है, जो राल एम्बेडेड सामग्री से डिजिटल वॉल्यूम डेटा जनरेट करता है जिसे माइक्रोोटॉम पर वर्गीकृत किया गया है। डेटा मध्यवर्ती प्रकाश सूक्ष्म स्तर पर ऊतक आर्किटेक्चर और सेल डिस्ट्रीब्यूशन के साथ-साथ छोटी विशेषताओं के मीट्रिक विश्लेषण के विस्तृत विश्लेषण की सुविधा देता है। एचआरएम स्वाभाविक संरेखित डिजिटल छवियों के ढेर पैदा करता है, जो ई से कब्जा किए जाने के रूप में दिखाई देते हैंओएसिन सना हुआ हिस्टोलॉजिकल सेक्शन दृश्य के क्षेत्र के संबंध में ऊतक के विपरीत और डेटा संकल्प, μCT, माइक्रिया, और ओपीटी के साथ उत्पादित डेटा से अधिक है, लेकिन confocal, light sheet और electron microscopy 20 के साथ प्राप्त करने योग्य है। हालांकि, उत्तरार्द्ध के विपरीत, एचआरएम हिस्टोल की गुणवत्ता में 5 x 5 x 7 मिमी 3 के सापेक्ष बड़ी मात्रा के साथ नमूने देखने में सक्षम है। कई हालिया अध्ययनों में एक विस्तृत इजाजत तकनीक के फायदे और नुकसान के विस्तृत लक्षण वर्णन और तुलना की जाती है और, निष्पक्षता की खातिर, हम उन लोगों को उनकी सीमाओं और 4 , 21 , 22 , 23 , 24 यह अध्ययन एचआरईएम इमेजिंग पद्धति पर केंद्रित है और प्रदान करना हैकार्बनिक पदार्थों के व्यापक स्पेक्ट्रम के एचआरईएम डेटा के साथ-साथ उनके आवेदन के उदाहरणों को बनाने के लिए बहुत सरल प्रोटोकॉल। एचआरईएम डेटा बनाने के लिए कार्यप्रवाह सरल है और सभी सामग्रियों पर लागू होता है जो मेथाक्रीलाट राल ( चित्रा 1 ) में एम्बेड कर सकते हैं। फिर भी नमूना तैयार करने में ऊतक विशिष्ट मतभेद हैं, जिन्हें समझने की आवश्यकता है। इसलिए हम विभिन्न नमूने तैयार करने के लिए तीन मानक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं। एम्बेडिंग और डेटा जनरेशन प्रोटोकॉल चरण उन सभी के लिए समान हैं।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="672">
	<tbody>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:231px;">JB-4 Plus Embedding Kit</td>
			<td style="width:115px;">Polysciences Europe GmbH</td>
			<td style="width:161px;">18570-1</td>
			<td style="width:167px;">includes Benzoyl Peroxide, Plasticized (Catalyst) and Solution A+B</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Polyethylene Molding Cup Trays, 6x8x5mm hexagon (9 cavities)</td>
			<td style="width:115px;">Polysciences Europe GmbH</td>
			<td style="width:161px;">17177A-3</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Polyethylene Molding Cup Trays, 13x19x5mm (9 cavities)</td>
			<td style="width:115px;">Polysciences Europe GmbH</td>
			<td style="width:161px;">17177C-3</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">JB-4 Plastic Block Holders</td>
			<td style="width:115px;">Polysciences Europe GmbH</td>
			<td>15899-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:231px;">Eosin</td>
			<td style="width:115px;">Waldeck GmbH &#38; Co. KG, Division Chroma</td>
			<td style="width:161px;">1A-196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Microtec CUT 4060E</td>
			<td></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td>rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:231px;">Leica DM LM, fluorescence compound microscope</td>
			<td style="width:115px;">Leica Mikrosysteme Handelges.m.b.H</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:231px;">GFP filter set</td>
			<td style="width:115px;">Leica Mikrosysteme Handelges.m.b.H</td>
			<td style="width:161px;">11090937180000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:231px;">Motorised cross table</td>
			<td style="width:115px;">Walter Uhl, technische Mikroskopie GmbH &#38; CO. KG</td>
			<td style="width:161px;">KT5-LSMA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Digital video camera SPOT-FLEX</td>
			<td style="width:115px;">Visitron Systems GmbH.</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">precisExcite High-Power LED</td>
			<td style="width:115px;">Visitron Systems GmbH.</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td>light source</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">VisiView 2.1.4</td>
			<td style="width:115px;">Visitron Systems GmbH.</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td>Image capturing software</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:231px;">Hard metal knife (tungsten carbide), profile D</td>
			<td style="width:115px;">Leica Mikrosysteme Handelges.m.b.H</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">KL 2500 LCD</td>
			<td style="width:115px;">Schott AG</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td>light source </td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-resolution episcopic microscopy (hrem) - simple and robust protocols for processing and visualizing organic materials

हम उच्च संकल्प एपिसकोपिक माइक्रोस्कोपी (एचआरईएम) विधि के साथ डिजिटल वॉल्यूम डेटा बनाने के लिए सरल प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं। एचआरईएम 1 x 1 x 1 और 5 x 5 x 5 माइक्रोन 3 के बीच विशिष्ट संख्यात्मक प्रस्तावों में 5 x 5 x 7 मिमी 3 तक की मात्रा के साथ जैविक सामग्री इमेजिंग करने में सक्षम है। नमूनों को मेथाक्रीलाट राल में एम्बेडेड किया गया है और एक सूक्ष्ममाणु पर अनुभाग किया गया है। प्रत्येक अनुभाग के बाद ब्लॉक की सतह की एक छवि को एक डिजिटल वीडियो कैमरा के साथ कब्जा कर लिया जाता है जो मिश्रित माइक्रोस्कोप हेड से जुड़े फोटोट्यूब पर बैठता है। ऑप्टिकल अक्ष हरे रंग की फ्लोरोसेंट प्रोटीन (जीएफपी) फ़िल्टर क्यूब से गुजरता है और एक स्थिति के साथ गठबंधन किया जाता है, जिस पर प्रत्येक खंड के बाद बॉक धारक आर्म आराम में आता है। इस तरह, स्वाभाविक संरेखित डिजिटल छवियों की एक श्रृंखला, बाद के ब्लॉक सतहों को प्रदर्शित करने का उत्पादन किया जाता है। ऐसी छवि श्रृंखला को तीन-आयामी (3 डी) विज़ुअलाइज़ेशन सॉफ़्टवेयर में लोड करना, डिजिटल वॉल्यूम डेटा में तत्काल रूपांतरण की सुविधा देता है, जो वर्चुअल एसविभिन्न orthogonal और तिरछे विमानों में खपत और मात्रा और सतह गाया कंप्यूटर मॉडल का निर्माण। हम तीन सरल, ऊतक विशिष्ट प्रोटोकॉल पेश करते हैं जिनमें माउ, चिली, बटेर, मेंढक और ज़ेब्रा मछली भ्रूण, मानव बायोप्सी सामग्री, बिना कागज वाले कागज और त्वचा प्रतिस्थापन सामग्री शामिल हैं।

एचईआरएम स्वाभाविक संरेखित डिजिटल छवियों की श्रृंखला उत्पन्न करती है, जिसमें हेमटॉक्साइलिन / ईओसिन सना हुआ ऊतक वर्ग के चित्रों के समान विरोधाभास हैं। 2 डी खंड की छवियों के विपरीत, एचआरएम छवियों के ढेर 3 डी में जैविक सामग्री की व्यापक विविधता के ऊतक आर्किटेक्चर, आकृति विज्ञान, और टोपोलॉजी के विज़ुअलाइज़ेशन और विश्लेषण के लिए अनुमति देता है। उच्च विपरीत अक्सर सतह प्रदान की जाने वाली मॉडल की पीढ़ी के लिए मात्रात्मक कंप्यूटर मॉडल और अर्ध स्वचालित समोच्च निष्कर्षों की त्वरित और सरल 3D विज़ुअलाइज़ेशन की सुविधा प्रदान करता है। एचईआरएम डेटा का आकार कैमरा लक्ष्य के आकार के अनुसार, छवि कैप्चरिंग मोड (8, 12, 16 बिट, ग्रे स्केल, रंग) और एकल ब्लॉक फेस छवियों की संख्या के अनुसार भिन्न होता है। 1,000 8-bit.jpg के छोटे डेटा सेट 2,048 पिक्सेल x 2,048 पिक्सेल के ग्रे स्केल छवियों का आकार लगभग 900 एमबी है। 4,000 9 पी के ग्रे स्केल चित्रों के 3,000 8-bit.jpg के बड़े डेटा सेटIxel x 4,096 पिक्सेल में लगभग 20 जीबी की मात्रा है प्रदान किए गए प्रोटोकॉल सरल और मजबूत होते हैं, और पिछले दशक के दौरान, वे कई अलग-अलग नमूनों के एचआरईएम आंकड़े पैदा करने के लिए कार्यरत थे। प्रोटोकॉल खंड 1.1 को बायोमेडिकल मॉडल जीवों के पूरे भ्रूण को प्रोसेस करने के लिए अनुकूलित किया गया था जिसमें 1 सेमी तक की लंबाई और भ्रूण टिशू के नमूनों के साथ 5 x 5 x 5 मिमी 3 के आयाम के साथ; हम निम्न प्रजातियों के भ्रूणों के एचआरईएम डेटा का उत्पादन करने के लिए इस विधि का इस्तेमाल करते हैं: माउस ( मैसस्कूलुस) , चिकी ( गैलस गैट्स ), ज़ेब्रा मछली ( दानियो रीयियो) , बटेर ( कोटिनिक्स कोटिनिक्स) , अफ्रीकी पंजे वाला मेंढक ( एक्सनोपस लाईविस ), घोड़ा ( इक््यूस फेरस कैबेलस ), मिल्कवेड बग ( ओंकोप्लेल्टस फसीसीटस ), मगरमच्छ ( क्रोकोडालिया ), और ऑक्टोपस ( ऑक्टोपस वुल्गारिस )। सभी प्रजातियों का आंकड़ा उत्कृष्ट गुणवत्ता का था ( जैसे , चित्रा 3 ) 3 तक के आयाम के साथ किशोर और वयस्क ऊतक नमूनों के संसाधित करने के लिए अनुकूलित किया गया था और वे ऊतक के नमूनों को देखने के लिए नियोजित थे त्वचा, यकृत, अग्न्याशय, गुर्दा, थायरॉयड, हृदय, धारीदार मांसपेशियों, मस्तिष्क, नसों और ट्यूमर के मॉडल मानव ( होमो सेपियंस ), चूहों ( मस्तिष्क का मांस ), चूहों ( रत्तुस नर्सगिकस ), सूअर ( सस स्कोरोफा डोमेस्टिका ) फेर्रेट ( मुस्टला फरो ), फ्लाइट फ्लाई ( ड्रोसोफिला मेलानोगस्टर ), और ज़ेब्रा फिश ( दानियो रीयो )। हालांकि परिणाम अधिकांश नमूनों ( जैसे , चित्रा 4 , एनीमेशन 1 ) के साथ उत्कृष्ट थे, त्वचा के बहुत केंद्रीय हिस्सों (एपिडर्मिस के साथ) और मस्तिष्क के नमूने 3 x 3 x 3 मिमी 3 से बड़े होते हैं क्योंकि ईोसिन के अपर्याप्त प्रवेश के कारण अक्सर अस्थिरता बनी रहे इन ऊतकों प्रोटोकॉल एसएक्शन 1.3 को तंतुमय कार्बनिक सामग्री प्रसंस्करण के लिए अनुकूलित किया गया था और लेपित पेपर, अनकोएटेड पेपर, देशी त्वचा संबंधी सामग्री और स्टेम सेल वरीकृत त्वचीय स्थानापन्न सामग्री के फाइबर आर्किटेक्चर को देखने के लिए नियोजित किया गया था। ये नमूनों को प्रक्रिया में आसान और त्वरित किया गया था Uncoated कागज और सबसे त्वचा विकल्प का डेटा अच्छी गुणवत्ता के थे ( चित्रा 5 , एनीमेशन 2 )। लेपित कागज को संसाधित करने में समस्याएं हुईं, जब अकार्बनिक पदार्थ ईोसिन के प्रवेश में बाधा पहुंचा। एक अन्य मुद्दा तब होता है जब त्वचा के विकल्प के आधार पर अगर का उपयोग होता है क्योंकि वे घुसपैठ समाधान द्वारा आंशिक रूप से पच जाते हैं। <img alt="आकृति 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56071/56071fig1.jpg" /> चित्रा 1: वर्कफ़्लो लाल बक्से में दिखाए गए कदमों को नमूना विशेषताओं के अनुसार संशोधनों की आवश्यकता होती है। हरे रंग के बक्से के चरण उन हैं जोसभी नमूनों में समान हैं <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/56071fig1large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें</a> <img alt="चित्र 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56071/56071fig2.jpg" /> चित्रा 2: अनुकूलित ढालना मोल्ड को एक छेद को मूल मोल्ड में काटने के द्वारा अनुकूलित किया जा सकता है, पाश्चर pipet का बल्ब डालना और उसे मॉडलिंग सामग्री के साथ सील करना। <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/56071fig2large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें</a> <img alt="चित्र तीन" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56071/56071fig3.jpg" /> चित्रा 3: विशेष रूप से विज़ुअलाइज्ड भ्रूण (ए, बी) भ्रूण के दिन में पैदा हुए माउस भ्रूण, ई = 9.5 HREM अनुभाग छवि (ए) में दिखाया गया है </strong&gt;। सतह दिखाए जाने वाले 3 डी मॉडल की मात्रा (बी) में दिखायी गई है (सी) एक ई 15.5 माउस भ्रूण के गर्दन के एक मात्रा गाया मॉडल के माध्यम से आभासी बाण का खंड। (डी) विकासात्मक हैमबर्गर हैमिल्टन (एचएच) चरण 18 में चिकी भ्रूण। हृदय संबंधी घटकों के लुमिना के भूतल मॉडल, जो सभी भ्रूण के ऊतकों की मात्रा रेंडरिंग के साथ जोड़ता है। स्केल बार = 200 माइक्रोन <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/56071fig3large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें</a> <img alt="चित्रा 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56071/56071fig4.jpg" /> चित्रा 4: विशेष रूप से विज़ुअलाइज्ड वयस्क टिशू नमूने। (ए) एक मानव तंत्रिका के माध्यम से एक HREM अनुभाग छवि का हिस्सा जड़ना छवि का एक भाग अधिक विस्तार से दिखाता है। (बी) पोर्किन यकृत के माध्यम से एक एचआरईएम अनुभाग छवि का हिस्सा। एन नोट करेंuclei। (सी) मानव लसीका ऊतक की एक HREM अनुभाग छवि का हिस्सा (डी, ई) एक मानव अंगूठे पैड की मोटी त्वचा पूरे बायोप्सी के वॉल्यूम ने 3 डी मॉडल प्रस्तुत किया (डी) एचआरईएम डेटा (ई) के माध्यम से एक आभासी लपट के सामने धमनियों, नसों और तंत्रिकाओं के भूतल प्रदान किए गए मॉडल। (एफ) वयस्क माउस टिश्यू में प्रायोगिक ट्यूमर। एचआरईएम डेटा के माध्यम से तीन आभासी वर्गों के सामने वॉल्यूम ने 3 डी मॉडल पेश किया नेक्रोटिक भागों (एरोहेड्स) को नोट करें स्केल बार = 200 माइक्रोन <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/56071fig4large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें</a> <img alt="चित्रा 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56071/56071fig5.jpg" /> चित्रा 5: उदाहरण के तौर पर तंतुमय सामग्री का विज़ुअलाइज़ किया गया। (ए, बी) एचआरईएम खंड अनचाहे, भूरे रंग के पेपर की छवि (बी) </sTrong&gt; (ए) के एक भाग से पता चलता है फाइबर और उनके लुमेन पर ध्यान दें (सी) लेपित कागज के एचआरईएम अनुभाग ध्यान दें कि फाइबर अस्थिर रहता है (डी) वॉल्यूम मूल त्वचीय स्थानापन्न सामग्री का मॉडल प्रस्तुत किया। विभिन्न कैलिबर और फाइबर का रूप ध्यान दें। स्केल सलाखों = 100 माइक्रोन <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/56071fig5large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें</a> <img alt="मूवी 1" src="/files/ftp_upload/56071/56071mov1.jpg" /> एनीमेशन 1: वॉल्यूम एक मानव अंगूठा पैड के मोटी त्वचा की रेडर्ड मॉडल ऊतक ब्लॉक का आकार लगभग 4.2 x 2.7 x 2.7 मिमी 3 है वोक्सल का आकार 1.07 x 1.07 x 2 माइक्रोन 3 है । <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/animation1.mp4" target="_blank">कृपया इस वीडियो को देखने के लिए यहां क्लिक करें। (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें।)</a> <pवर्ग = &quot;jove_content&quot; के लिए: रख-एक साथ। अंदर-पेज = &quot;1&quot;&gt; <img alt="मूवी 2" src="/files/ftp_upload/56071/56071mov2.jpg" /> एनीमेशन 2: वॉल्यूम रैंडर्ड मॉडल ऑफ़ नेटिव डायमल ऑब्सटिटियल मटेरियल। नमूना का आकार लगभग 1.2 x 0.85 x 0.4 मिमी 3 है । वोक्सल का आकार 0.54 x 0.54 x 2 माइक्रोन 3 है । <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/animation2.mp4" target="_blank">कृपया इस वीडियो को देखने के लिए यहां क्लिक करें। (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें।)</a>

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High-resolution Episcopic Microscopy HREM - Simple and Robust Protocols for Processing and Visualizing Organic Materials

हम उच्च-संकल्प एपिसकोपिक माइक्रोस्कोपी पद्धति के साथ डिजिटल वॉल्यूम डेटा जनरेशन को अनुमति देने के लिए विभिन्न प्रजातियों के बायोप्सी सामग्री, बायोमेडिकल मॉडल जीवों के भ्रूण और अन्य जैविक ऊतकों के नमूनों के प्रसंस्करण के लिए सरल और मजबूत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं।

उच्च संकल्प एपिस्कोपिक माइक्रोस्कोपी (एचआरईएम) - प्रसंस्करण और दृश्यमान कार्बनिक सामग्री के लिए सरल और मजबूत प्रोटोकॉल

We provide simple protocols for generating digital volume data with the high-resolution episcopic microscopy (HREM) method. HREM is capable of imaging ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

High-resolution Episcopic Microscopy (HREM) - Simple and Robust Protocols for Processing and Visualizing Organic Materials

Analysis of Zebrafish Kidney Development with Time-lapse Imaging Using a Dissecting Microscope Equipped for Optical Sectioning

समय चूक इमेजिंग एक विदारक माइक्रोस्कोप का उपयोग के साथ Zebrafish गुर्दे का विकास का विश्लेषण ऑप्टिकल सेक्शनिंग के लिए लैस

In order to understand organogenesis, the spatial and temporal alterations that occur during development of tissues need to be recorded. The method ...

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High-resolution episcopic microscopic (HREM) technology enables rapid acquisition of high-resolution digital volumetric and three-dimensional (3D) ...

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