Name: high-resolution episcopic microscopy (hrem) - simple and robust protocols for processing and visualizing organic materials
Uploaded: 2017-07-07T13:00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Episcopic Microscopy HREM - Simple and Robust Protocols for Processing and Visualizing Organic Materials at JoVE.com

Авторы выражают благодарность Тиму Мохун за его вклад в разработку HREM и Петру Хеффетер за предоставление образцов.

Авторам нечего раскрывать.

HREM представляет собой высокопрочный микроскопический метод, который идеально подходит для визуализации широкого спектра органических материалов, используемых в биомедицине и промышленности 18 , 21 , 26 , 27 , 28 , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 , 34 , 35 , 36 , 37 , 38 , 39 , 40 . Его можно использовать в качестве эксклюзивного метода визуализации, который в настоящее время используется программой 41 Механизмы развития нарушений (DMDD) <suP&gt;, 43 , 44 или как интегральная часть мультимодальных конвейеров изображений 45 . Полностью функционирующее устройство генерации данных HREM может быть собрано из обычных лабораторных компонентов и содержит моторизованный микротом, микроскоп, поперечный стол с механическим управлением и компьютер с соответствующим программным обеспечением 25 . Крайне важно использовать микротом, снабженный держателем блока, который воспроизводимо останавливается после каждой секции в определенном положении и кубиков фильтра GFP внутри оптического пути. Тем не менее, полностью функционирующие всеохватывающие решения можно приобрести у таких компаний, как Indigo Scientific. HREM сталкивается с теми же ограничениями, что и все гистологические методы, за исключением того, что артефакты не вводятся при секционировании или разделении. Однако существуют ограничения, которые являются следствием необходимости окрашивания образцов перед разделением иОт характеристик материала погружения. Проникновение эозина по всему образцу требуется для получения достаточного контраста ткани; Очень плотный материал, жировые ткани и неорганические вещества эффективно препятствуют проникновению эозина, что приводит к образованию неокрашенных тканей в центре объектов. Использование специальных фиксаторов помогает окрашивать образцы кожи, но до сих пор нет надлежащего метода для полного преодоления проблемы. Другим ограничением является то, что смолы, которые блокируют более 2 см, как правило, ломаются во время секционирования. Этого можно частично избежать, разрезая образцы и обрабатывающие детали по отдельности. Правильное позиционирование небольших образцов или образцов с нерегулярными поверхностями в формах во время внедрения часто является проблематичным. Покрытие образцов агарозой и обработка блоков агарозы, как описано в протоколе, обычно решает эту проблему 19 . Альтернативный подход, который также помогает, если блоки прерываются во время сектыЧтобы удалить уже затвердевший блок из своего держателя и вставить его заново, следуя описанной процедуре внедрения. Типичный набор данных HREM содержит от 500 до 3000 одиночных изображений. Его численное разрешение определяется расстоянием между последовательными изображениями ( т. Е. Толщиной раздела), характеристикой цели камеры и свойствами используемой оптики. Мы использовали толщину сечения от 1 до 5 мкм и добились хороших результатов, хотя представленные протоколы не полностью устраняют блеск от артефактов 20 , 46 . Эти артефакты вызваны сильно окрашенными тканями, расположенными глубоко внутри блока, что приводит к размыванию информации о ткани на поверхности блока. Камеры имели целевые размеры 2,560 x 1,920 пикселей 2 , 2,048 x 2,048 пикселя 2 и 4096 x 4096 пикселей 2 и были комбинированнымиС объективами 1.25X, 2.5X, 5X, 10X и 20X. Это привело к тому, что числовые размеры пикселей составляли от 0,18 до 0,18 мкм 2 и 5,92 х 5,92 мкм 2 , что оказалось достаточным для трехмерного анализа структуры ткани и форм ячеек и даже для визуализации ядер. Учитывая высокое числовое разрешение, следует также видеть другие клеточные органеллы. Недостаточные контрасты благодаря простому окрашиванию эозином и оптическим свойствам целей значительно уменьшают возможность дискриминации структур. Максимальное истинное пространственное разрешение данных HREM, которое учитывает числовую апертуру, составляет приблизительно 1 x 1 x 1 мкм 3 и, следовательно, допускает эффективную дискриминацию структур, превышающих приблизительно 3 x 3 x 3 мкм 3 . Общей проблемой для всех цифровых технологий визуализации является компромисс между размером поля зрения, который определяет часть образца, который может отображатьсяD на цели камеры и числовое разрешение изображения. Чем больше поле зрения, тем ниже максимально возможное числовое разрешение 46 . Используемая здесь настройка HREM позволяет генерировать данные HREM с полем обзора между 0,74 x 0,74 мм 2 (объектив 20X), отображаемым с числовым разрешением 0,18 x 0,18 мкм 2 и 12,12 x 12,12 мм 2 (объектив 1,25X), отображаемый в Числовое разрешение 2,96 x 2,96 мкм 2 . Альтернативные, коммерциализированные настройки могут обеспечить большие поля зрения, но ценой истинного разрешения. Тем не менее, они обеспечивают отличные результаты, о чем свидетельствуют данные, представленные на домашней странице программы DMDD 47 .

Структурный анализ органических и неорганических материалов является первым шагом в понимании их физических свойств и функций. Основой для такого анализа часто является двумерная (2D) информация, полученная путем тщательного наблюдения гистологических разделов, с использованием множества простых и сложных методов визуализации, которые извлекают детали тканевой архитектуры, морфологии клеток и топологии, молекулярного состава и биомеханических свойств 1 , 2 , 3 . Однако двумерная информация не подходит для исследования пространственно сложных схем. Следовательно, в последние десятилетия было установлено все большее число методов in vivo и ex vivo, которые позволяют генерировать цифровые данные о объемах 4 и многие другие. Методическим принципом большинства методов генерации данных объема является создание виртуальных стековЦифровых изображений, отображающих разделы, полученные виртуальным или физическим разделением объекта. Если изображения разделов правильно выровнены, это создает громкость, которую можно перерезать в плоскостях виртуальных секций или использовать для создания 3D-моделей с объемным изображением. Популярными методами визуализации людей и более крупных биологических образцов являются магнитно-резонансная томография (МРТ), компьютерная томография (КТ), позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) и однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ). Малые образцы обычно визуализируются с использованием микромагнитного резонансного изображения (μMRI), оптической проекционной томографии (OPT), оптической когерентной томографии (ОКТ), фотоакустической томографии (PAT), методов гистологического секционирования, конфокальной микроскопии и электронной томографии 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 <sВверх, 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 . Относительно новая технология генерации объемных данных, которая производит цифровые данные образцов малых образцов и гистологических тканей, представляет собой метод HREM, который был разработан в тесном сотрудничестве с Тимом Мохун 18 , 19 . Это простой метод микроскопа, который генерирует цифровые данные объема из смоляного материала, который разделен на микротоме. Данные облегчают детальный анализ структуры тканей и клеточных распределений, а также метрический анализ небольших признаков на промежуточном световом микроскопическом уровне. HREM создает стеки неотъемлемо выровненных цифровых изображений, которые выглядят как захваченные с eОсин окрашенные гистологические разделы. Контрастность тканей и разрешение данных в отношении поля зрения превосходят контрастность данных, полученных с помощью μCT, μMRI и OPT, но ниже, чем достижимые с помощью конфокальной, легкой и электронной микроскопии. Однако, в отличие от последнего, HREM способен визуализировать образцы с относительными большими объемами до 5 × 5 × 7 мм 3 по гистологическому качеству. Ряд недавних исследований дает подробные характеристики и сравнение преимуществ и недостатков методов одиночной визуализации, и для объективности мы ссылаемся на те, которые содержат дополнительную информацию об их ограничениях и потенциальных областях применения 4 , 21 , 22 , 23 , 24 . В этом исследовании основное внимание уделяется методу визуализации HREM иОчень простые протоколы для генерации данных HREM из широкого спектра органических материалов, а также примеры их применения. Рабочий процесс для создания данных HREM прост и применяется ко всем материалам, которые могут внедряться в метакрилатную смолу ( рис. 1 ). Тем не менее существуют специфические различия в тканях в образце, которые необходимо учитывать. Поэтому мы предлагаем три стандартных протокола для подготовки различных образцов. Шаги протокола внедрения и формирования данных идентичны для всех из них.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="672">
	<tbody>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:231px;">JB-4 Plus Embedding Kit</td>
			<td style="width:115px;">Polysciences Europe GmbH</td>
			<td style="width:161px;">18570-1</td>
			<td style="width:167px;">includes Benzoyl Peroxide, Plasticized (Catalyst) and Solution A+B</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Polyethylene Molding Cup Trays, 6x8x5mm hexagon (9 cavities)</td>
			<td style="width:115px;">Polysciences Europe GmbH</td>
			<td style="width:161px;">17177A-3</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Polyethylene Molding Cup Trays, 13x19x5mm (9 cavities)</td>
			<td style="width:115px;">Polysciences Europe GmbH</td>
			<td style="width:161px;">17177C-3</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">JB-4 Plastic Block Holders</td>
			<td style="width:115px;">Polysciences Europe GmbH</td>
			<td>15899-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:231px;">Eosin</td>
			<td style="width:115px;">Waldeck GmbH &#38; Co. KG, Division Chroma</td>
			<td style="width:161px;">1A-196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">Microtec CUT 4060E</td>
			<td></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td>rotary microtome</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:231px;">Leica DM LM, fluorescence compound microscope</td>
			<td style="width:115px;">Leica Mikrosysteme Handelges.m.b.H</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:231px;">GFP filter set</td>
			<td style="width:115px;">Leica Mikrosysteme Handelges.m.b.H</td>
			<td style="width:161px;">11090937180000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:231px;">Motorised cross table</td>
			<td style="width:115px;">Walter Uhl, technische Mikroskopie GmbH &#38; CO. KG</td>
			<td style="width:161px;">KT5-LSMA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">Digital video camera SPOT-FLEX</td>
			<td style="width:115px;">Visitron Systems GmbH.</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">precisExcite High-Power LED</td>
			<td style="width:115px;">Visitron Systems GmbH.</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td>light source</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:231px;">VisiView 2.1.4</td>
			<td style="width:115px;">Visitron Systems GmbH.</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td>Image capturing software</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:231px;">Hard metal knife (tungsten carbide), profile D</td>
			<td style="width:115px;">Leica Mikrosysteme Handelges.m.b.H</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:231px;">KL 2500 LCD</td>
			<td style="width:115px;">Schott AG</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td>light source </td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-resolution episcopic microscopy (hrem) - simple and robust protocols for processing and visualizing organic materials

Мы предоставляем простые протоколы для генерации цифровых данных объема с помощью метода эрископической микроскопии высокого разрешения (HREM). HREM способен отображать органические материалы с объемами до 5 × 5 × 7 мм 3 в типичных числовых разрешениях между 1 x 1 x 1 и 5 x 5 x 5 мкм 3 . Образцы встроены в метакрилатную смолу и секционированы на микротоме. После каждой секции изображение поверхности блока захватывается цифровой видеокамерой, которая сидит на фотобуфе, подключенной к головке составного микроскопа. Оптическая ось проходит через куб фильтра зеленого флуоресцентного белка (GFP) и выровнена с положением, при котором рычаг держателя бока опускается после каждой секции. Таким образом, производится серия неотъемлемых цифровых изображений, отображающих последующие поверхности блоков. Загрузка такой серии изображений в трехмерное (3D) программное обеспечение визуализации облегчает немедленное преобразование в цифровые данные тома, которые позволяют виртуальнымВ различных ортогональных и наклонных плоскостях и создании объемных и поверхностных компьютерных моделей. Мы представляем три простых, специфичных для ткани протоколов для обработки различных групп органических образцов, включая мыши, цыплят, перепелов, эмбрионов лягушки и зебры, материал для биопсии человека, материал без покрытия и материал для замены кожи.

HREM генерирует ряд неотъемлемо выровненных цифровых изображений с контрастами, подобными изображениям гистологических разделов, покрытых гематоксилином / эозином. В отличие от изображений 2D-секций, стопки изображений HREM позволяют визуализировать и анализировать структуру ткани, морфологию и топологию широкого разнообразия органических материалов в 3D. Высокая контрастность часто облегчает быструю и простую трехмерную визуализацию объемно-отображаемых компьютерных моделей и полуавтоматические результаты контура для создания моделей, созданных на поверхности. Размер данных HREM варьируется в зависимости от размера цели камеры, режима захвата изображения (8, 12, 16 бит, шкалы серого, цвета) и количества изображений с одним блоком. Меньшие наборы данных из 1000 изображений 8-бит.jpg с серой шкалой размером 2048 пикселей x 2048 пикселей имеют размер около 900 МБ. Большие наборы данных из 3000 изображений с 8-бит.jpg серой шкалой 4096 pXix x 4096 пикселей имеют объемы около 20 ГБ. Представленные протоколы просты и надежны, и в течение последнего десятилетия они были использованы для генерации данных HREM многих разных образцов. Секция протокола 1.1 была оптимизирована для обработки целых эмбрионов биомедицинских модельных организмов длиной до 1 см и образцов эмбриональной ткани размером до 5 × 5 × 5 мм 3 ; Мы использовали этот метод для получения данных HREM эмбрионов следующих видов: мыши ( Mus musculus) , цыпленка ( Gallus gallus ), рыбы зебры ( Danio rerio ), перепела ( Coturnix coturnix) , африканской когтистой лягушки ( Xenopus laevis ), лошади ( Equus ferus caballus ), молочная ошибка ( Oncopeltus fasciatus ), крокодил ( крокодил ) и осьминог ( Octopus vulgaris ). Данные всех видов были превосходного качества ( например , рис. 3 ) <p clAss = &quot;jove_content&quot; fo: keep-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; Раздел 1.2 протокола был оптимизирован для обработки образцов молочной и взрослой ткани с размерами до 5 × 5 × 7 мм 3 и использовался для визуализации образцов ткани Кожи, печени, поджелудочной железы, почек, щитовидной железы, сердца, полосатой мышцы, мозга, нервов и опухолевых моделей, собранных у людей ( Homo sapiens ), мышей ( Mus musculus ), крыс ( Rattus norvegicus ), свиней ( Sus scrofa domestica ) Фуро ), фруктовая муха ( Drosophila melanogaster ) и зебра ( Danio rerio ). В то время как результаты были превосходными с большинством образцов ( например , Рисунок 4 , Анимация 1 ), очень центральные части кожи (с эпидермисом) и образцы головного мозга размером более 3 х 3 х 3 мм 3 часто оставались неокрашенными из-за недостаточного проникновения эозина через Эти ткани. Протокол sEction 1.3 была оптимизирована для обработки волокнистого органического материала и использовалась для визуализации структуры волокна из мелованной бумаги, бумаги без покрытия, природного дермального материала-заменителя и материала, заменяемого дермальным заменителем. Эти образцы были легко и быстро обработаны. Данные непокрытой бумаги и большинства заменителей кожи были хорошего качества ( рисунок 5 , анимация 2 ). Возникли проблемы при обработке бумаги с покрытием, когда неорганический материал препятствовал проникновению эозина. Другая проблема возникала при обработке заменителей кожи на основе агара, потому что они частично усваивались инфильтрационным раствором. <img alt="Рисунок 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56071/56071fig1.jpg" /> Рисунок 1: Рабочий процесс. Шаги, показанные в красных ящиках, требуют модификаций в соответствии с характеристиками образца. Шаги в зеленых коробках - это те, которыеОдинаковы во всех образцах. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/56071fig1large.jpg" target="_blank">Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a> <img alt="фигура 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56071/56071fig2.jpg" /> Рисунок 2: Индивидуальные формы. Формы можно адаптировать, разрезав отверстие в исходную форму, вставив колбу пипетки Пастера и запечатав ее с помощью модельного материала. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/56071fig2large.jpg" target="_blank">Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a> <img alt="Рисунок 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56071/56071fig3.jpg" /> Рисунок 3: Примерно визуализированные эмбрионы. (A, B) Мышечный эмбрион, собранный в эмбриональный день, E = 9,5. Изображение раздела HREM показано в (A) </сильный&gt;. 3D-модель, отображающая поверхность, показана в (B) . (C) Виртуальный сагиттальный разрез через объемную модель шейки эмбриона мыши E15.5. (D) Зародыш цыплят на стадии развития Гамбургер Гамильтон (HH) 18. Поверхностная модель люмина сердечно-сосудистых компонентов в сочетании с объемной визуализацией всех тканей эмбрионов. Шкала шкалы = 200 мкм. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/56071fig3large.jpg" target="_blank">Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a> <img alt="Рисунок 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56071/56071fig4.jpg" /> Рисунок 4: Примерные визуальные образцы для взрослых тканей. (A) Часть изображения раздела HREM через человеческий нерв. Inlay более подробно показывает часть изображения. (B) Часть изображения раздела HREM через свиную печень. Обратите внимание на nuclei. (C) Часть изображения раздела HREM человеческой лимфатической ткани. (D, E) Толстая кожа человеческого пальца. Объем 3D-модели всей биопсии. (D) Поверхностные модели артерий, вен и нервов перед виртуальной резекцией через данные HREM (E) . (F) Экспериментальная опухоль во взрослой ткани мыши. Объем визуализировал 3D-модель перед тремя виртуальными разделами через данные HREM. Обратите внимание на некротические части (наконечники стрел). Шкала шкалы = 200 мкм. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/56071fig4large.jpg" target="_blank">Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a> <img alt="Рисунок 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56071/56071fig5.jpg" /> Рисунок 5: Примерно визуализированный волокнистый материал. (A, B) изображение раздела HREM без покрытия, коричневая бумага. (В) </sTrong&gt; показывает раздел (A) . Обратите внимание на волокна и их просвет. (C) секции HREM бумаги с покрытием. Обратите внимание, что волокна остаются неокрашенными. (D) Объемная модель местного дермального заменителя. Обратите внимание на различный калибр и форму волокон. Шкала шкалы = 100 мкм. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/56071fig5large.jpg" target="_blank">Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a> <img alt="Фильм 1" src="/files/ftp_upload/56071/56071mov1.jpg" /> Анимация 1: Объемная модель толстой кожи человеческого пальца. Размер блока ткани составляет приблизительно 4,2 x 2,7 x 2,7 мм 3 . Размер Voxel составляет 1,07 x 1,07 x 2 мкм 3 . <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/animation1.mp4" target="_blank">Нажмите здесь, чтобы посмотреть это видео. (Щелкните правой кнопкой мыши, чтобы загрузить.)</a> <pClass = &quot;jove_content&quot; fo: keep-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; <img alt="Фильм 2" src="/files/ftp_upload/56071/56071mov2.jpg" /> Анимация 2: Объемная модель родного дермального заменителя. Размер образца составляет примерно 1,2 х 0,85 х 0,4 мм 3 . Размер Voxel составляет 0,54 x 0,54 x 2 мкм 3 . <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56071/animation2.mp4" target="_blank">Нажмите здесь, чтобы посмотреть это видео. (Щелкните правой кнопкой мыши, чтобы загрузить.)</a>

Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Episcopic Microscopy HREM - Simple and Robust Protocols for Processing and Visualizing Organic Materials at JoVE.com

High-resolution Episcopic Microscopy HREM - Simple and Robust Protocols for Processing and Visualizing Organic Materials

Мы предоставляем простые и надежные протоколы для обработки биопсийного материала различных видов, эмбрионов биомедицинских модельных организмов и образцов других органических тканей, чтобы обеспечить генерацию цифровых объемных данных с помощью метода эпископической микроскопии высокого разрешения.

Епископская микроскопия высокого разрешения (HREM) - Простые и надежные протоколы для обработки и визуализации органических материалов

We provide simple protocols for generating digital volume data with the high-resolution episcopic microscopy (HREM) method. HREM is capable of imaging ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

High-resolution Episcopic Microscopy (HREM) - Simple and Robust Protocols for Processing and Visualizing Organic Materials

Analysis of Zebrafish Kidney Development with Time-lapse Imaging Using a Dissecting Microscope Equipped for Optical Sectioning

Анализ развития данио почки с течением времени покадровой визуализации Использование рассекает микроскопа, оборудованного для оптического секционирования

In order to understand organogenesis, the spatial and temporal alterations that occur during development of tissues need to be recorded. The method ...

Rapid Acquisition of 3D Images Using High-resolution Episcopic Microscopy

Быстрое приобретение 3D-изображений с помощью высокого разрешения Эпископическое микроскопии

High-resolution episcopic microscopic (HREM) technology enables rapid acquisition of high-resolution digital volumetric and three-dimensional (3D) ...

A Simple Chamber for Long-term Confocal Imaging of Root and Hypocotyl Development

Простая камера для долговременной конфокальной визуализации развития корней и гипокотилов

Several aspects of plant development, such as lateral root morphogenesis, occur on time spans of several days. To study underlying cellular and ...

Protocols for Visualizing Steroidogenic Organs and Their Interactive Organs with Immunostaining in the Fruit Fly Drosophila melanogaster

Protocols for Visualizing Steroidogenic Organs and Their Interactive Organs with Immunostaining in the Fruit Fly Drosophila melanogaster

Протоколы Визуальное стероидогенных органов и их интерактивные Органов с иммунным окрашиванием плодовой мушки<em&gt; Дрозофилы</em

In multicellular organisms, a small group of cells is endowed with a specialized function in their biogenic activity, inducing a systemic response ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

Горизонтальная целая гора: новый протокол обработки и обработки изображений для толстых, трехмерных поперечных сечений кожи

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Correlative Super-resolution and Electron Microscopy to Resolve Protein Localization in Zebrafish Retina

Корреляционные суперразрешением и электронной микроскопии решить локализация белка в Zebrafish сетчатки

We present a method to investigate the subcellular protein localization in the larval zebrafish retina by combining super-resolution light microscopy and ...

Multimodal Hierarchical Imaging of Serial Sections for Finding Specific Cellular Targets within Large Volumes

Смешанных иерархических изображений последовательных секций для нахождения конкретных клеточных мишеней в больших объемах

Targeting specific cells at ultrastructural resolution within a mixed cell population or a tissue can be achieved by hierarchical imaging using a ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

Живые клетки изображений сегрегации хромосом в процессе митоза

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Thin Film Composite Silicon Elastomers for Cell Culture and Skin Applications: Manufacturing and Characterization

Тонкий фильм композитный кремния эластомеров для культуры клеток и приложений кожи: производство и характеристика

In this protocol, we present methods to fabricate thin elastomer composite films for advanced cell culture applications and for the development of skin ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Визуализация узлов и Notochordal пластины в Gastrulating эмбрионов мыши, используя растровая электронная микроскопия и вся гора иммунофлуоресценции

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...