Name: transplantation of schwann cells inside pvdf-trfe conduits to bridge transected rat spinal cord stumps to promote axon regeneration across the gap
Uploaded: 2017-11-03T12:30:00
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हम मियामी परियोजना में वायरल वेक्टर और पशु कोर धंयवाद करने के लिए लेंती-GFP-वायरस के उत्पादन और पशुओं की देखभाल, क्रमशः प्रदान करने के लिए पक्षाघात का इलाज करना चाहते हैं, और cryostat, फोकल माइक्रोस्कोप के उपयोग के लिए प्रोटोकॉल और इमेजिंग कोर, और स्टीरियो अन्वेषक के साथ फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप. NINDS (०९९२३), DOD (W81XWH-14-1-0482), और NSF (DMR-१००६५१०) द्वारा अनुदान प्रदान किया गया । M.B. डाट क्रिस्टीन E लिन तंत्रिका विज्ञान के प्रतिष्ठित प्रोफेसर है ।

महिला वयस्क फिशर चूहों (१८०-२०० & #160; जी शरीर के वजन) NIH और USDA दिशानिर्देश के अनुसार घर कर रहे हैं । विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) मियामी के सभी पशु प्रक्रियाओं को मंजूरी दे दी । 
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एक प्रभावी transection मॉडल बनाने में सबसे महत्वपूर्ण कदम एक या दो में कटौती रीढ़ की हड्डी विच्छेद है । rostral और caudal स्पाइनल कॉर्ड स्टंप्स के बीच एक 2-2.5 mm गैप transection साइट पर मौजूद होना चाहिए । इस तरह के एक अंतर के लिए तीन...

रीढ़ की हड्डी में चोट की मरंमत एक जटिल और चुनौतीपूर्ण समस्या यह है कि एक मिश्रित उपचार शामिल रणनीति की आवश्यकता होगी, उदाहरण के लिए, कोशिकाओं के उपयोग और एक के लिए एक अनुकूल microenvironment के लिए प्रत्यारोपण सेल समारोह और axon प्रदान करने के लिए सामग्री चोट के स्थल पर पुनर्जनन । Hemisection1,2,3,4,5,6,7,8,9 और पूर् transection10 ,11,12,13,14,15,16,17,18,19 ,20,21,22 मॉडल अक्सर के लिए उपयोग किया जाता है के प्रभाव का आकलन करने के लिए सामग्री आधारित ब्रिजिंग चिकित्सा । एक hemisection मॉडल का उपयोग कर के लाभ यह है कि यह पाटने के लिए और अधिक स्थिरता प्रदान करता है पूरा transection की तुलना में निर्माण । हालांकि, hemisection मॉडलों में, यह axon पुनर्जनन बख्शी ऊतक की उपस्थिति के कारण लागू चिकित्सीय विधि के एक परिणाम के रूप में साबित करने के लिए मुश्किल है । पूरा transection मॉडल axon पुनर्जनन प्रदर्शित करने के लिए सबसे कठोर तरीका है ।
विभिन्न प्राकृतिक और सिंथेटिक सामग्री एक इंजेक्शन जेल के रूप में उपयोग के लिए अध्ययन किया गया है, एक पूर्व गठित जेल चोट या hemisection मॉडल में रखा, या hemisection या पूरा transection मॉडल में एक संरचित नाली के रूप में (विस्तृत समीक्षा में23 , 24 , 25). एक इंजेक्शन मैट्रिक्स के सीटू तालमेल में /axon पार करने के लिए प्रत्यारोपण और मेजबान कॉर्ड के बीच एक और स्वतंत्र इंटरफेस बनाता है26,27 की तुलना में पूर्व gelled मैट्रिक्स/अनुसूचित जाति समाविष्ट 5 , 18 , 19 , 28. सीटू में तालमेल की अनुमति मैट्रिक्स अनियमित मेजबान इंटरफेस के आसपास समोच्च जबकि एक और अधिक कठोर और संरचित नाली या एक कम मोल्ड पूर्व गठित जेल नहीं सकता है । एक संरचित नाली अक्सर एक इंजेक्शन मैट्रिक्स के विपरीत संपर्क मार्गदर्शन और प्रत्यारोपण स्थिरता प्रदान करता है । यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल एक शल्य प्रक्रिया है कि दोनों एक इंजेक्शन तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स का लाभ लेता है का वर्णन (जैसे, matrigel, सामग्री की तालिका देखने के लिए, यहां इंजेक्शन मैट्रिक्स के रूप में संदर्भित) और एक संरचित नाली सबसे कठोर रीढ़ की हड्डी चोट मॉडल में axon पुनर्जनन का मूल्यांकन करें ।
Electrospun पाली-vinylidenedifluoride-trifluoroethylene (PVDF-TrFE) गठबंधन रेशेदार खोखले नाली हमारे प्रयोगात्मक दृष्टिकोण में उपयोग किया जाता है । PVDF-TrFE एक piezoelectric बहुलक है कि जब यांत्रिक विकृत और neurite विस्तार और axon पुनर्जनन दोनों इन विट्रो29,30 और vivo में बढ़ावा देने के लिए दिखाया गया है पर एक क्षणिक चार्ज उत्पन्न करता है 31. Electrospinning एक आम पाड़ निर्माण विधि है कि तेजी से फाइबर संरेखण, फाइबर व्यास, और के लिए पाड़ की मोटाई के रूप में नियंत्रणीय गुणों के साथ पॉलिमर की एक किस्म का उपयोग कर विश्वसनीय रेशेदार पाड़ का उत्पादन कर सकते है तंत्रिका और अंय अनुप्रयोगों३२,३३,३४।
चूहे रीढ़ की हड्डी की चोट साइटों में प्रत्यारोपित SCs के कई अध्ययनों उपचार प्रभावकारिता का प्रदर्शन किया है5,9,18,19,20,21 ,26. इन प्रत्यारोपण घावों के आसपास के ऊतकों के लिए न्यूरोप्रोटेक्टिव हैं, घाव गुहा आकार को कम करने, और पुनर्जीवित axons के घावों/प्रत्यारोपण साइट और myelination में axon पुनर्जनन को बढ़ावा देने के । मानव SCs autologously प्रत्यारोपण किया जा सकता है, एक लाभ जब सबसे अन्य तंत्रिका से संबंधित कोशिकाओं की तुलना में24. एक परिधीय तंत्रिका बायोप्सी के बाद, SCs अलग और शुद्ध किया जा सकता है और मानव में प्रत्यारोपण के लिए वांछित राशि के लिए पैदा होगा । रीढ़ की हड्डी के लिए ऑटोलॉगस SC ट्रांसप्लांटेशन घायल मरीजों में सुरक्षित साबित हो रहा है ईरान३५,३६,३७,३८, चीन३९,४०, और संयुक्त राज्य अमेरिका४१,४२। SCs कई neurotrophic कारकों और extracellular मैट्रिक्स axon विकास के लिए महत्वपूर्ण प्रोटीन और परिधीय तंत्रिका चोट के बाद axon पुनर्जनन में एक आवश्यक भूमिका निभाने के लिए गुप्त करने के लिए जाना जाता है । हमारे यहां लक्ष्य विधियों जो नाली डिजाइन की जांच करने के लिए एक पूरा चूहा रीढ़ की हड्डी transection मॉडल में अनुसूचित जाति के प्रत्यारोपण के परिणाम में सुधार कर सकते है का वर्णन है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cryogenic vials</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>5000-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cm Petri dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25382-428</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium: nutrient mixture F-12</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11039-021</td>
			<td>&#34;DMEM/F12&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>&#34;Pen/Strep&#34; in protcol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH300-70-03</td>
			<td>&#34;FBS&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pituitary extract</td>
			<td>Biomedical Technologies</td>
			<td>BT-215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heregulin</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2636</td>
			<td>&#34;PLL&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>&#34;DMEM&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14170-112</td>
			<td>&#34;HBSS&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryspin-EDTA</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Female Fischer rat (160-180g)</td>
			<td>Envigo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissor, straight</td>
			<td>FST</td>
			<td>15018-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Vedco Inc</td>
			<td>5098976106</td>
			<td>100 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Lloyd Inc</td>
			<td>AnaSed</td>
			<td>20 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamycin</td>
			<td>APP Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 63323-010-02</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Spatula</td>
			<td>FST</td>
			<td>10089-11</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved scissors with blunt end</td>
			<td>FST</td>
			<td>14017-18</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11006-12</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rongeur</td>
			<td>FST</td>
			<td>16121-14</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled spring scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15006-09</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorption triangles</td>
			<td>FST</td>
			<td>18105-03</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>9083300</td>
			<td>&#34;Compressed foam&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#10 blades</td>
			<td>Sklar</td>
			<td>06-3010</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>&#34;Injectable matrix&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti-green fluorescent protein antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB16901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse RT97 hybridoma antibody</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>RT97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-neurofilament antibody</td>
			<td>Encor Biotechnology, Inc</td>
			<td>PRCA-NF-H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyclonal Rabbit anti-Glial Fibrillary Acidic Protein antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z033401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 goat anti-chicken IgG (H+L)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-11039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 546 goat anti-rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-11035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 goat anti-rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-21244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 goat anti-mouse IgG (H+L)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-21236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscopy</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>clsi</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transplantation of schwann cells inside pvdf-trfe conduits to bridge transected rat spinal cord stumps to promote axon regeneration across the gap

चूहों में रीढ़ की हड्डी में चोट के लिए विभिन्न मॉडलों के बीच, चोट मॉडल सबसे अधिक बार इस्तेमाल किया है क्योंकि यह मानव रीढ़ की हड्डी की चोट का सबसे आम प्रकार है । पूरा transection मॉडल है, हालांकि के रूप में नैदानिक चोट मॉडल के रूप में प्रासंगिक नहीं है, सबसे कठोर विधि axon पुनर्जनन का मूल्यांकन करने के लिए है । चोट मॉडल में, यह अंकुरित या बख्शा axons से पुनर्जीवित करने के लिए शेष ऊतक पोस्ट चोट की उपस्थिति के कारण अंतर मुश्किल है । पूरा transection मॉडल में, एक पाटन विधि अंतर को भरने और rostral से caudal स्टंप को निरंतरता बनाने के क्रम में उपचार की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए आवश्यक है । एक विश्वसनीय ब्रिजिंग शल्य चिकित्सा पद्धति के कारण परिवर्तनशीलता को कम करके परिणाम उपायों का परीक्षण करने के लिए आवश्यक है । यहां वर्णित प्रोटोकॉल Schwann कोशिकाओं को तैयार करने के लिए उपयोग किया जाता है (SCs) और प्रत्यारोपण करने से पहले नाली, वक्ष स्तर 8 पर रीढ़ की हड्डी की पूरी transection (T8), नाली डालें, और नाली में SCs प्रत्यारोपण. यह दृष्टिकोण भी अनुसूचित जाति ट्रांसप्लांटेशन के साथ एक इंजेक्शन तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स के सीटू तालमेल में का उपयोग करता है कि मेजबान ऊतक के साथ rostral और caudal इंटरफेस भर में सुधार axon विकास की अनुमति देता है ।

इस शल्य चिकित्सा तकनीक का उपयोग करने का लक्ष्य पूरा transected रीढ़ की हड्डी में प्रत्यारोपण के बाद अनुसूचित जाति समारोह को अधिकतम करता है कि एक संरचित नाली और इंजेक्शन मैट्रिक्स के उपयोग का मूल?...

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Transplantation of Schwann Cells Inside PVDF-TrFE Conduits to Bridge Transected Rat Spinal Cord Stumps to Promote Axon Regeneration Across the Gap

इस लेख को पूरा transection के बाद रीढ़ की हड्डी स्टंप के बीच एक खोखले नाली डालने के लिए और Schwann कोशिकाओं (SCs) और इंजेक्शन तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स के साथ भरने के लिए एक तकनीक का वर्णन करने के लिए पुल और अंतर भर में axon पुनर्जनन को बढ़ावा देने के ।

PVDF के अंदर Schwann कोशिकाओं के प्रत्यारोपण-TrFE नाली Transected चूहा रीढ़ की हड्डी स्टंप को पाटने के लिए अंतर भर में Axon पुनर्जनन को बढ़ावा देने के लिए

Among various models for spinal cord injury in rats, the contusion model is the most often used because it is the most common type of human spinal cord ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Orthotopic महाधमनी ट्रांसप्लांटेशन एक चूहा जीर्ण Vasculopathy के विकास अध्ययन के लिए मॉडल:

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Acute and Chronic Tactile Sensory Testing after Spinal Cord Injury in Rats

तीव्र और जीर्ण चूहे में स्पाइनल कॉर्ड चोट के बाद स्पर्श संवेदी परीक्षण

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory ...

The Measurement and Treatment of Suppression in Amblyopia

दमन के मापन और Amblyopia उपचार

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current ...

Controlled Cortical Impact Model for Traumatic Brain Injury

घाव मस्तिष्क चोट के लिए नियंत्रित Cortical प्रभाव मॉडल

Every year over a million Americans suffer a traumatic brain injury (TBI).  Combined with the incidence of TBIs worldwide, the physical, emotional, ...

A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts

एक रेडियो टैलिमीटर सिस्टम स्पाइनल कॉर्ड transection और भ्रूण तंत्रिका कोशिका Grafts स्टेम के साथ चूहों में हृदय समारोह मॉनिटर

High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

स्पाइनल कॉर्ड चोट की प्रायोगिक Contusive मॉडल में तंत्रिका स्टेम कोशिका प्रत्यारोपण

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Reproducible Motor Deficit Following Aortic Occlusion in a Rat Model Of Spinal Cord Ischemia

स्पाइनल कॉर्ड इस्किमिया के एक चूहा मॉडल में महाधमनी प्रक्षेपण के बाद पुनरुत्पादक मोटर घाटे

Spinal cord ischemia is a fatal complication following thoracoabdominal aortic aneurysm surgery. Researchers can investigate the strategies for preventing ...

A Clinical Trial Assessing the Safety, Efficacy, and Delivery of Olive-Oil-Based Three-Chamber Bags for Parenteral Nutrition

एक नैदानिक परीक्षण सुरक्षा का आकलन, दक्षता, और माता पिता के पोषण के लिए जैतून का तेल आधारित तीन-चैंबर बैग की डिलीवरी

Limited evidence exists to precisely estimate efficacy and safety differences between parenteral nutrition (PN) prepared using olive-oil-based ...

Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research

संशोधितविषयात्मक हिडिअंग अस्थिमापितत्वचीय विपुटीय संवहनी संरोपण के लिए चूहे में फ्लैप मॉडल

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

गर्म इस्केमिया / रीपरफ्यूजन चोट का एक चूहा फेफड़े प्रत्यारोपण मॉडल: परिणामों में सुधार के लिए अनुकूलन

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...