Name: transplantation of schwann cells inside pvdf-trfe conduits to bridge transected rat spinal cord stumps to promote axon regeneration across the gap
Uploaded: 2017-11-03T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Schwann Cells Inside PVDF-TrFE Conduits to Bridge Transected Rat Spinal Cord Stumps to Promote Axon Regeneration Across the Gap at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить вирусный вектор и животных ядер в Майами проекта для лечения паралича для производства lenti-GFP-вирус и обеспечение ухода за животными, соответственно, гистология и изображений ядра для использования криостат, конфокального микроскопа, и Флуоресцентный микроскоп с стерео следователь. Финансирование было предоставлено NSF (DMR-1006510), NINDS (09923) и МО (W81XWH-14-1-0482). М.б. Бунге является Кристина E Линн Уважаемый профессор неврологии.

самок взрослых Фишер (180-200 г веса тела) размещаются согласно низ и USDA руководящие принципы. Институциональные животное уход и использование Комитет (IACUC) из университета Майами одобрил все животные процедуры.
 1. подготовка предварительного трансплантации <ol><li>канал...

Наиболее важным этапом в создании эффективной перерезка модели разрыва спинного мозга в одной или двух разрезов. 2-2,5 мм зазор между ростральной и хвостовой спинного пни должны присутствовать на сайте перерезка. Три наиболее вероятные причины такой разрыв не появляется являются (1) спин...

Ремонт повреждений спинного мозга является сложной и трудной проблемой, которая потребует стратегии комбинаторного лечения с участием, например, использование клеток и биоматериал обеспечить благоприятное микроокружение для функции пересаженных клеток и аксон Регенерация на месте травмы. Гемисекция1,2,3,4,5,6,,78,9 и полный перерезка10 ,11,12,13,14,,1516,,1718,19 ,20,,2122 модели часто используются для оценки последствий на основе биоматериала преодоление терапии. Преимущество использования гемисекция модель является, что он обеспечивает большую стабильность для моста конструкции, по сравнению с полной перерезка. Однако в моделях гемисекция, трудно доказать регенерации аксона как результат прикладной терапевтического метода связано с наличием пощадил ткани. Полный перерезка модель является наиболее строгий метод продемонстрировать регенерации аксона.
Были изучены различные природные и синтетические материалы для использования в качестве инъекционный гель, предварительно сформированных гель помещается в ушиб или гемисекция модели, или как структурированной каналом в гемисекция или завершить перерезка модели (подробные отзывы23 , 24 , 25). в situ гелеобразующего смеси инъекционные матрица/SC создает более либеральными интерфейс между трансплантации и принимающей шнур для axon пересечения26,27 по сравнению с предварительно загущенное матрица/SC имплантатов 5 , 18 , 19 , 28. в situ гелеобразующего допускается матрицы контур вокруг нерегулярных хост интерфейсов, в то время как более жесткой и структурированных каналом или менее moldable предварительно сформированных гель не может. Структурированный каналом часто обеспечивает контакт руководство и имплантат стабильность в отличие от инъекционного матрицы. Протоколы, здесь представлены описания хирургическая процедура, которая использует матрицу инъекционные базальной мембраны (например, matrigel, см. Таблицу материалы, упоминаемые как инъекционные матрицы здесь) и структурированных каналом для Оцените регенерации аксона в самые строгие модели травмы спинного мозга.
Electrospun поли vinylidenedifluoride трифторэтиленом (PVDF-ТрФЭ) соответствие волокнистых полые трубы используются в нашем экспериментальном подходе. PVDF-ТрФЭ является пьезоэлектрический полимер, который генерирует переходных заряда, когда механически деформируется и показал neurite расширение и аксон регенерации в vitro29,30 и в естественных условиях 31. Electrospinning является распространенным методом изготовления лески, который может быстро производить надежные волокнистых подмостей, с использованием различных полимеров с управляемыми свойствами, такими как выравнивание волокна, волокна диаметр и толщину лески для Нейронные и других приложений32,,3334.
Многочисленные исследования крыс SCs, пересаженные в сайты травмы спинного продемонстрировали лечения эффективность5,9,18,19,20,21 ,26. Эти трансплантаты являются нейропротекторной для ткани вокруг очага поражения, уменьшить размер полости поражения и способствуют регенерации аксона в сайт поражения/трансплантации и миелинизации регенерированный аксонов. Можно autologously трансплантированы человеческой SCs, преимущество по сравнению с большинством других связанных с нервной клетки24. После биопсии периферических нервов, СКС может быть изолированный и очищенный и будет распространяться на нужную сумму для трансплантации в людей. Аутологичной трансплантации SC для позвоночника пациентов было доказано быть безопасными в Иране35,,3637,38, Китай39,40и 42Соединенные Штаты41,. СКС, как известно, выделяют многочисленные нейротрофических факторов и белков внеклеточного матрикса, важное значение для роста аксона и играть важную роль в регенерации аксона после травмы периферических нервов. Наша цель здесь — для описания методов, которые можно исследовать трубы конструкции улучшить результаты трансплантации SC в полной крыса спинного перерезка модели.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cryogenic vials</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>5000-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cm Petri dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25382-428</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium: nutrient mixture F-12</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11039-021</td>
			<td>&#34;DMEM/F12&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>&#34;Pen/Strep&#34; in protcol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH300-70-03</td>
			<td>&#34;FBS&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pituitary extract</td>
			<td>Biomedical Technologies</td>
			<td>BT-215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heregulin</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>396-HB/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2636</td>
			<td>&#34;PLL&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>&#34;DMEM&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s balanced salt solution</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14170-112</td>
			<td>&#34;HBSS&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryspin-EDTA</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Female Fischer rat (160-180g)</td>
			<td>Envigo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissor, straight</td>
			<td>FST</td>
			<td>15018-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Vedco Inc</td>
			<td>5098976106</td>
			<td>100 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Lloyd Inc</td>
			<td>AnaSed</td>
			<td>20 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamycin</td>
			<td>APP Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 63323-010-02</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Spatula</td>
			<td>FST</td>
			<td>10089-11</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved scissors with blunt end</td>
			<td>FST</td>
			<td>14017-18</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11006-12</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rongeur</td>
			<td>FST</td>
			<td>16121-14</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled spring scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15006-09</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorption triangles</td>
			<td>FST</td>
			<td>18105-03</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>9083300</td>
			<td>&#34;Compressed foam&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#10 blades</td>
			<td>Sklar</td>
			<td>06-3010</td>
			<td>Can be any brand of choice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>&#34;Injectable matrix&#34; in protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti-green fluorescent protein antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB16901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse RT97 hybridoma antibody</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>RT97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-neurofilament antibody</td>
			<td>Encor Biotechnology, Inc</td>
			<td>PRCA-NF-H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyclonal Rabbit anti-Glial Fibrillary Acidic Protein antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z033401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 goat anti-chicken IgG (H+L)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-11039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 546 goat anti-rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-11035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 goat anti-rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-21244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 goat anti-mouse IgG (H+L)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A-21236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscopy</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>clsi</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transplantation of schwann cells inside pvdf-trfe conduits to bridge transected rat spinal cord stumps to promote axon regeneration across the gap

Среди различных моделей для спинного мозга крыс наиболее часто используется модель ушиба, потому что это наиболее распространенный тип спинного мозга человека. Полный перерезка модель, хотя не как клинически значимых как модель ушиба, является наиболее строгий метод оценки регенерации аксона. В модели ушиба трудно отличить регенерированного из проросших или пощадил аксоны благодаря наличию остающихся пост повреждения тканей. В модели полного перерезка метод перемычки необходимо заполнить этот пробел и создать преемственность с ростральной хвостового пни для того чтобы оценить эффективность лечения. Надежный мост хирургия имеет важное значение для проверки исходов снижая изменчивость из-за хирургический метод. Протоколы, описанные здесь используются для подготовки Шванновские клетки (СКС) и трубопроводы до трансплантации, полный перерезка спинного мозга на грудном уровне 8 (T8), вставить каналом и пересадить СКС в канал. Этот подход также использует в situ гелеобразующего инъекционные базальной мембраны матрицы с SC трансплантации, который позволяет улучшенная аксона роста через интерфейсы ростральной и хвостового с ткани макроорганизма.

Цель использования этой хирургической техники заключается в оценке использования структурированных каналом и инъекционные матрица, которая максимизирует SC функция после пересадки в завершенных пересекал шнуры спинного мозга. Через три недели после пересадки, живо?...

Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Schwann Cells Inside PVDF-TrFE Conduits to Bridge Transected Rat Spinal Cord Stumps to Promote Axon Regeneration Across the Gap at JoVE.com

Transplantation of Schwann Cells Inside PVDF-TrFE Conduits to Bridge Transected Rat Spinal Cord Stumps to Promote Axon Regeneration Across the Gap

Эта статья описывает метод для вставки полые связующим звеном между спинного пни после полного перерезка и заполнить Шванновские клетки (СКС) и инъекционные базальной мембраны матрицы для моста и способствуют регенерации аксона через пробел.

Трансплантация Шванновские клетки внутри трубы PVDF-ТрФЭ для преодоления пересекал крыса спинного пни способствовать регенерации аксона через разрыв

Among various models for spinal cord injury in rats, the contusion model is the most often used because it is the most common type of human spinal cord ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Ортотопическая аорты трансплантации: Крыса модель для изучения развития хронического заболевания сосудов

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Acute and Chronic Tactile Sensory Testing after Spinal Cord Injury in Rats

Острые и хронические Тактильная сенсорная тестирования после травмы спинного мозга у крыс

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory ...

The Measurement and Treatment of Suppression in Amblyopia

Измерение и лечение в борьбе с амблиопией

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current ...

Controlled Cortical Impact Model for Traumatic Brain Injury

Контролируемая Кортикальная Модель воздействия для черепно-мозговой травмой

Every year over a million Americans suffer a traumatic brain injury (TBI).  Combined with the incidence of TBIs worldwide, the physical, emotional, ...

A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts

Радио-телеметрическая система для мониторинга сердечно-сосудистой системы у крыс с спинного мозга Перерезка и эмбриональной нервной стволовой клетки трансплантатов

High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Neural трансплантации стволовых клеток в экспериментальной Contusive модели с повреждением спинного мозга

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Reproducible Motor Deficit Following Aortic Occlusion in a Rat Model Of Spinal Cord Ischemia

Воспроизводимый моторный дефицит после аортальной окклюзии в крысиной модели ишемии спинного мозга

Spinal cord ischemia is a fatal complication following thoracoabdominal aortic aneurysm surgery. Researchers can investigate the strategies for preventing ...

A Clinical Trial Assessing the Safety, Efficacy, and Delivery of Olive-Oil-Based Three-Chamber Bags for Parenteral Nutrition

Клиническое испытание Оценка безопасности, эффективности и доставки оливкового масла основе трехкамерных мешков для парентерального питания

Limited evidence exists to precisely estimate efficacy and safety differences between parenteral nutrition (PN) prepared using olive-oil-based ...

Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research

Модифицированная Гетекопическая задняя Остеомйокутанеаус модель лоскут в крыса для поступательного васкуляризированных композитных аллотрансплантации исследований

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

Модель трансплантации легких крысы при теплой ишемии/реперфузионной травме: оптимизация для улучшения исходов

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...