Name: assessment of human adipose tissue microvascular function using videomicroscopy
Uploaded: 2017-09-29T13:00:00
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Os autores gostaria de agradecer os voluntários para a sua participação nestes estudos e a equipe cirúrgica no centro médico de Boston para a prestação de biópsias de tecido adiposo. Dr. Gokce é suportado pelo Instituto Nacional de bolsas de saúde (NIH), HL081587, HL114675 e HL126141. Dr. Farb é suportado pelo NIH conceder K23 HL135394.

o protocolo e exemplos aqui descritos foram aprovados por Boston Universidade escola de medicina institucional Review Board (IRB, protocolo #H-25644) e foram conduzidos de acordo com a declaração de Helsinque. Todos os temas fornecidos escrito consentimento informado antes participação.
 1. preparação de soluções e vidro Micro cânulas <ol><li>preparar a solução salina de ácido 4-2-hydrosyethyl-1-piperazineethanesulfonic (HEPES). Para 1 L, dissolver 8,059 g de NaCl, 0,298 g de KC...

<ol>
	<li>Schubert, R., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myogenic+response:+established+facts+and+attractive+hypotheses.">The myogenic response: established facts and attractive hypotheses.</a> Clin Sci (Lond). 96 (4), 313-326 (1999).</li><li>Jadeja, R. N., Rachakonda, V., Bagi, Z., Khurana, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+Myogenic+Response+and+Vasoactivity+In+Resistance+Mesenteric+Arteries+Using+Pressure+Myography.">Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography.</a> J Vis Exp. (101), e50997 (2015).</li><li>Gutterman, D. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+adipose+tissue+inflammation+represents+an+intermediate+cardiometabolic+phenotype+in+obesity.">Reduced adipose tissue inflammation represents an intermediate cardiometabolic phenotype in obesity.</a> J Am Coll Cardiol. 58 (3), 232-237 (2011).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WNT5A-JNK+regulation+of+vascular+insulin+resistance+in+human+obesity.">WNT5A-JNK regulation of vascular insulin resistance in human obesity.</a> Vasc Med. 21 (6), 489-496 (2016).</li><li>Durand, M. J., Phillips, S. A., Widlansky, M. E., Otterson, M. F., Gutterman, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vascular+renin-angiotensin+system+contributes+to+blunted+vasodilation+induced+by+transient+high+pressure+in+human+adipose+microvessels.">The vascular renin-angiotensin system contributes to blunted vasodilation induced by transient high pressure in human adipose microvessels.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 307 (1), H25-H32 (2014).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclooxygenase+inhibition+improves+endothelial+vasomotor+dysfunction+of+visceral+adipose+arterioles+in+human+obesity.">Cyclooxygenase inhibition improves endothelial vasomotor dysfunction of visceral adipose arterioles in human obesity.</a> Obesity (Silver Spring). 22 (2), 349-355 (2014).</li><li>Park, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+age+on+the+vasodilatory+function+of+human+skeletal+muscle+feed+arteries.">Impact of age on the vasodilatory function of human skeletal muscle feed arteries.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 310 (2), H217-H225 (2016).</li><li>Ives, S. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arteriolar+function+in+visceral+adipose+tissue+is+impaired+in+human+obesity.">Arteriolar function in visceral adipose tissue is impaired in human obesity.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (2), 467-473 (2012).</li><li>Tanner, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamin-Related+Protein+1+Mediates+Low+Glucose-Induced+Endothelial+Dysfunction+in+Human+Arterioles.">Dynamin-Related Protein 1 Mediates Low Glucose-Induced Endothelial Dysfunction in Human Arterioles.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. , (2016).</li><li>Ives, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=alpha1-Adrenergic+responsiveness+in+human+skeletal+muscle+feed+arteries:+the+impact+of+reducing+extracellular+pH.">alpha1-Adrenergic responsiveness in human skeletal muscle feed arteries: the impact of reducing extracellular pH.</a> Exp Physiol. 98 (1), 256-267 (2013).</li><li>Dharmashankar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthase-dependent+vasodilation+of+human+subcutaneous+arterioles+correlates+with+noninvasive+measurements+of+endothelial+function.">Nitric oxide synthase-dependent vasodilation of human subcutaneous arterioles correlates with noninvasive measurements of endothelial function.</a> Am J Hypertens. 25 (5), 528-534 (2012).</li><li>Truran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+and+leptomeningeal+arteriole+endothelial+dysfunction+induced+by+beta-amyloid+peptide:+a+practical+human+model+to+study+Alzheimer's+disease+vasculopathy.">Adipose and leptomeningeal arteriole endothelial dysfunction induced by beta-amyloid peptide: a practical human model to study Alzheimer's disease vasculopathy.</a> J Neurosci Methods. 235, 123-129 (2014).</li><li>Karki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forkhead+box+O-1+modulation+improves+endothelial+insulin+resistance+in+human+obesity.">Forkhead box O-1 modulation improves endothelial insulin resistance in human obesity.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (6), 1498-1506 (2015).</li><li>Shahid, M., Buys, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+murine+resistance+artery+function+using+pressure+myography.">Assessing murine resistance artery function using pressure myography.</a> J Vis Exp. (76), (2013).</li></ol>

A dissecção e o isolamento de arteríolas adiposas dos tecidos circundantes podem ser um processo demorado e trabalhoso com cuidadosa atenção aos detalhes e protocolo técnico. O procedimento de microdissection exige habilidades meticulosas e utensílios especializados dissecação para evitar possíveis danos ao músculo liso ou endoteliais células camadas da microvasculatura. Até mesmo pequenas punções acidentais na parede arteriolar podem evitar pressurização intraluminal e resultados em um experimento mal s...

Tele-microscopia é uma técnica útil utilizada para examinar a função vasomotora pequenas arteríolas removido da vida humana assuntos ex vivo. Nosso laboratório centrou-se na dissecação fora microvessels minúsculo de compartimentos diferentes de tecido adiposo para caracterizar os efeitos de vários microambiente adiposa sobre a microvasculatura. Uma grande vantagem desta técnica é que os vasos sanguíneos removidos do corpo humano permanecem funcionais e podem ser examinados prontamente dentro de minutos a horas após a biópsia. Condições fisiológicas são imitadas e firme pressão transmural mantida no espaço intraluminal através de cânulas de vidro micro que recapitular muitas características de na vivo . 1 , 2 além disso, um set-up confiável tele-microscopia com software de detecção de borda automática permite que para avaliação qualitativa e quantitativa do endotélio-dependente e - independente de vasodilatador e vasoconstritor capacidade isolada navios em tempo real, permitindo rápida avaliação fisiológica em resposta a estímulos físicos e farmacológicos. 3 outras técnicas microvasculares também estão disponíveis como fio miografia que tende a ser menos demorado e medir respostas de tensão para vários agonistas por um transdutor de força.
Nosso laboratório tem aplicado tele-microscopia para examinar a relação entre obesidade e disfunção vascular, enfocando os efeitos de domínios diferentes de tecido adiposo na vasculatura. Adiposidade central, com acúmulo de gordura visceral intra-abdominal tem sido mais estreitamente associada a produção de adipocytokine, disfunção metabólica e risco Cardiometabólica. Foi postulado que a disfunção do tecido adiposo com excesso de produção de pro-aterogênico desregulagem de citocinas e adipokine estão fortemente implicados nestes processos, mas moléculas reguladoras específicas e alvos de tratamento permanecem em grande parte por descobrir. 4 além disso, no nível do tecido adiposo local, rarefação capilar e perfusão deficiente têm sido associados a pseudohypoxia de tecido adiposo e desregulação metabólica. A hipótese de que a doença cardiovascular pode ser a consequência da disfunção do tecido adiposo está evoluindo. Pro-aterogênico mediadores liberados da gordura, particularmente em associação com a adiposidade central/visceral, provável promovem disfunção endotelial e alterações vasculares patogénicas que podem ser manifestam localmente na vasculatura adiposa e detectado usando o descrito neste documento metodologia. 5
A avaliação funcional das arteríolas isoladas de tecido adiposo é uma abordagem útil para a compreensão da fisiopatologia e mecanismos moleculares que contribuem para a disfunção vascular na obesidade humana. Para investigar os mecanismos que contribuem para a disfunção gordura de depósito específico, desenvolvemos métodos para examinar o endotélio-dependente e - respostas vasodilatadoras independentes da microvasculatura e avaliar a expressão de vários normativos candidatos em emparelhados viscerais e subcutâneas (SC) tecido adiposo espécimes obtidos de indivíduos obesos no momento da cirurgia bariátrica.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="769">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Chemical Name</td>
			<td style="width:159px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Acetylcholine</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">A6625</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>223506</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">G5767</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Endothelin-1</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">E7764</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:352px;">Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N&#8217;,N&#8217;-tetra acetic acid (EGTA)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">E3889</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">E9884</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">HEPES</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">H3784</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:352px;">Nw-nito-L-arginine methyl ester hydrochloride</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">N5751</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">M7506</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Potassium chloride (KCL)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P3911</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Potassium phosphate (KH2PO4)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P5655</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Papaverine</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P3510</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Sodium bicarbonate (NaHCO3 )</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">S6014</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">S7653</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:352px;">Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2Po4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td style="width:159px;">Company</td>
			<td style="width:132px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:127px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Forceps</td>
			<td>Finescience tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Inverted microscope</td>
			<td>Zeiss Achromat</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Laboratory tubing</td>
			<td>Euro-Pharm</td>
			<td>250100306F999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Needle/pippette puller</td>
			<td>David kopf instruments</td>
			<td>720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ophthalmic monofilament nylon suture</td>
			<td>Surgical specialties</td>
			<td>A7756N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scissors</td>
			<td>Finescience tools</td>
			<td>150000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vessel Chamber</td>
			<td>DMT</td>
			<td>VAS v.2.1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of human adipose tissue microvascular function using videomicroscopy

Enquanto a obesidade está intimamente ligada ao desenvolvimento de doenças metabólicas e cardiovasculares, pouco é conhecido sobre os mecanismos que regem esses processos. Supor que mediadores pro-aterogênico liberados do adiposo, particularmente em associação com a adiposidade visceral/central podem promover alterações vasculares patogénicas localmente e sistemicamente, e a noção de doença cardiovascular pode ser o consequência da disfunção do tecido adiposo continua a evoluir. Aqui, descrevemos um método exclusivo de tele-microscopia que envolve a análise das respostas vasodilatador e vasoconstritor intacta pequenas arteríolas humana, retirados do depósito de tecido adiposo de seres humanos vivos. Tele-microscopia é usada para examinar as propriedades funcionais de microvessels isolado em resposta a estímulos fisiológicos ou farmacológicos, usando um sistema de pressão que imita as condições na vivo . A técnica é uma abordagem útil para a compreensão da fisiopatologia e mecanismos moleculares que contribuem para a disfunção vascular localmente dentro do meio do tecido adiposo. Além disso, anormalidades na microvasculatura tecido adiposo também têm sido associadas com doenças sistêmicas. Nós aplicamos esta técnica para examinar o depósito específico respostas vasculares em indivíduos obesos. Avaliamos a vasodilatação endotélio-dependente ao fluxo aumentado e acetilcolina em arteríolas adiposas (50-350 µm de diâmetro interno, 2-3 mm de comprimento) isoladas de dois diferentes depósitos de tecido adiposos durante cirurgia bariátrica do mesmo indivíduo. Demonstrámos que arteríolas de gordura visceral apresentam prejudicada vasodilatação endotélio-dependente, em comparação aos navios isolados do depósito subcutâneo. Os resultados sugerem que o microambiente visceral está associado a disfunção endotelial vascular que pode ser relevante para a observação clínica vinculando aumento de adiposidade visceral aos mecanismos de doença sistêmica. A técnica de tele-microscopia pode ser usada para examinar vasculares fenótipos de diferentes depósitos de gordura, bem como comparar resultados entre indivíduos com diferentes graus de obesidade e disfunções metabólicas. O método também pode ser usado para examinar as respostas vasculares longitudinalmente em resposta às intervenções clínicas.

Nosso laboratório tem usado tele-microscopia para examinar o endotélio-dependente e - vasodilatação independente, bem como a função de vasocontractile de tecido adiposo arteríolas isoladas de gordura subcutânea e visceral de humanos obesos. A montagem experimental característica é exibida na figura 1A. Tecido adiposo arteríolas são suspensas entre duas pipetas de vidro capilar e preso no lugar com suturas dentro da câmara de órgão, como mostrad...

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Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

Avaliação da função Microvascular de tecido adiposo humano usando tele-microscopia

Sistemas de tele-microscopia são usados para examinar as propriedades funcionais das arteríolas isoladas de tecido adiposo em resposta a estímulos fisiológicos e farmacológicos. Esta técnica pode ser usada para examinar fenótipos microvasculares em domínios diferentes de tecido adiposo em seres humanos obesos.

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

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