Name: optimized lc-ms/ms method for the high-throughput analysis of clinical samples of ivacaftor, its major metabolites, and lumacaftor in biological fluids of cystic fibrosis patients
Uploaded: 2017-10-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cys

J. l. と t. v. は、国立研究所のアレルギーおよび感染症 (NIAID) の健康の国民の協会 (R01 AI111965) によってサポートされます。内容は著者の責任と国立研究所のアレルギーと感染症や健康の国民の協会の公式の見解を必ずしも表さない。三菱商事は、オーストラリア NHMRC 首席研究員です。J. l. はオーストラリア国立保健医療研究評議会 (NHMRC) 主任研究員、および t. v. は、オーストラリア NHMRC 産業キャリア開発レベル 2 研究員。E.K.S は、ASM (微生物学のためのアメリカの社会) の任命された若者大使 2017年でオーストラリアの大学院賞を受賞しています。 この作業の一部は、Australiasian 会議メルボルンに嚢胞性線維症 (2017 年 8 月の 5-8日) 12thで発表されました。

倫理の承認からモナッシュ大学人間研究倫理委員会 (MUHREC) が得られた。
 1 アッセイのアプリケーション: 患者サンプル コレクション <ol><li>とき患者と 150 mg ivacaftor または ivacaftor 125 mg/lumacaftor の標準的な量の時間を記録 200 mg。</li>。
	<li>注下患者の血液サンプルを収集するとき正確な時刻です 。
	注: 24 時間コース上 4-5 の試料を収集をお勧めします。示された時?...

<ol>
	<li>Schneider, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug-drug+plasma+protein+binding+interactions+of+ivacaftor.">Drug-drug plasma protein binding interactions of ivacaftor.</a> J Mol Recognit. 28 (6), 339-348 (2015).</li><li>Solomon, M., Leatte, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Treatments for Cystic fibrosis. , (2009).</li><li>O'Sullivan, B. P., Flume, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+approach+to+lung+disease+in+patients+with+cystic+fibrosis.">The clinical approach to lung disease in patients with cystic fibrosis.</a> Semin Respir Crit Care Med. 30 (5), 505-513 (2009).</li><li>Ramsey, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CFTR+potentiator+in+patients+with+cystic+fibrosis+and+the+G551D+mutation.">A CFTR potentiator in patients with cystic fibrosis and the G551D mutation.</a> N Engl J Med. 365 (18), 1663-1672 (2011).</li><li>Wainwright, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lumacaftor-Ivacaftor+in+Patients+with+Cystic+Fibrosis+Homozygous+for+Phe508del+CFTR.">Lumacaftor-Ivacaftor in Patients with Cystic Fibrosis Homozygous for Phe508del CFTR.</a> N Engl J Med. 373 (3), 220-231 (2015).</li><li>Hadida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+N-(2,4-di-tert-butyl-5-hydroxyphenyl)-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxamide+(VX-770,+ivacaftor),+a+potent+and+orally+bioavailable+CFTR+potentiator.">Discovery of N-(2,4-di-tert-butyl-5-hydroxyphenyl)-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxamide (VX-770, ivacaftor), a potent and orally bioavailable CFTR potentiator.</a> J Med Chem. 57 (23), 9776-9795 (2014).</li><li>FDA. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> FDA Advisory Commitee Briefing Material VERTEX-FDA Pulmonary-Allergy drugs advisory commitee. 98 , (2015).</li><li>Holmes, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=False+dawn+for+cystic+fibrosis+disease+modifiers?.">False dawn for cystic fibrosis disease modifiers?.</a> Nat Rev Drug Discov. 13 (10), 713-714 (2014).</li><li>Veit, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+gating+potentiators,+including+VX-770,+diminish+DeltaF508-CFTR+functional+expression.">Some gating potentiators, including VX-770, diminish DeltaF508-CFTR functional expression.</a> Sci Transl Med. 6 (246), 246ra297 (2014).</li><li>Cholon, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potentiator+ivacaftor+abrogates+pharmacological+correction+of+DeltaF508+CFTR+in+cystic+fibrosis.">Potentiator ivacaftor abrogates pharmacological correction of DeltaF508 CFTR in cystic fibrosis.</a> Sci Transl Med. 6 (246), 246ra297 (2014).</li><li>EMA, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Assessment report ORKAMBI (ivacaftor/lumacaftor) European medicines agency. , (2015).</li><li>VERTEX. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Vertex prescribing infomation. , (2015).</li><li>Matthes, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+free+drug+concentration+prevents+inhibition+of+F508del+CFTR+functional+expression+by+the+potentiator+VX-770+(ivacaftor).">Low free drug concentration prevents inhibition of F508del CFTR functional expression by the potentiator VX-770 (ivacaftor).</a> Br J Pharmacol. 173 (3), 459-470 (2016).</li><li>Schneider, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+HPLC+and+LC-MS/MS+methods+for+the+analysis+of+ivacaftor,+its+major+metabolites+and+lumacaftor+in+plasma+and+sputum+of+cystic+fibrosis+patients+treated+with+ORKAMBI+or+KALYDECO.">Development of HPLC and LC-MS/MS methods for the analysis of ivacaftor, its major metabolites and lumacaftor in plasma and sputum of cystic fibrosis patients treated with ORKAMBI or KALYDECO.</a> J Chrom B Analyt Technol Biomed Life Sci. 1038, 57-62 (2016).</li><li>Su, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+LC-MS/MS+method+for+the+quantitation+of+cabozantinib+in+rat+plasma:+application+to+a+pharmacokinetic+study.">An LC-MS/MS method for the quantitation of cabozantinib in rat plasma: application to a pharmacokinetic study.</a> J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 985, 119-123 (2015).</li></ol>

既報のように、私たちのグループは、初めて開発および HPLC や LCMS 迅速検出と ivacaftor とヒドロキシメチル IVA M1 (アクティブ) とイヴァ カルボン酸 M6 (非アクティブ); その主要代謝物の定量法を検証血漿および CF の患者の14の喀痰中 lumacaftor。以前私たちのグループによって報告されたアッセイ ルミナンス、IVA、イヴァ-M1 とプラズマで IVA M6 の濃度とイヴァ 150 mg/q12 h と定常?...

嚢胞性線維症 (CF) は肺、肝臓、膵臓、肺機能、膵機能不全1,の減少などの進行性多臓器不全を引き起こす腸の分泌粘液腺を含む一般的な遺伝的疾患2,3。Ivacaftor (IVA) は最初の食品医薬品局 (FDA 米国) と欧州医薬品庁 (EMA) 明らかな臨床的有効性の重要な生産と嚢胞性線維症膜コンダクタンス レギュレータ (CFTR) 増強剤を含む薬を承認ベアリング G551D CFTR CF の患者の小さいサブセットでプラセボに対する肺機能の改善 [グリシン (G) 551 の位置にはアスパラギン酸 (D) 置き換え] ミスセンス変異 (CF 人口の 4 〜 5%)4,5。これは経口投与薬剤増加 CFTR チャネルを開く、塩化物イオン流を増加させると CF4,6の臨床症状につながる主要な欠陥に作用します。残念ながら、イヴァ単独療法は [フレーム位置 508 にフェニルアラニン (F) の損失の結果 CFTR 遺伝子の削除] でより一般的なホモ F508del 変異を有する患者における効果的なの 〜 50% に見られる変性 CFTR の結果CF 人口7,8。
最近、FDA は薬 lumacaftor CFTR 補正とイヴァを組み合わせることの承認を付与します。CFTR チャネル活性を増強する変調器 (IVA) を用いた細胞表面に F508del CFTR を救助する「CFTR 補正 (lumacaftor、LUMA) を組み合わせた巧妙な戦略効果的に CF 人口5のほとんどに治療ウィンドウを表示.競合レポートの数の臨床9,10時にその疑いが浮上しているようにこれらの薬が彼らの約束を果たすかどうか以上の質問が残っています。さらに、肺の機能の改善だけささやかな (2.6 4 の % であった ivacaftor lumacaftor 組み合わせ) 軸受 G551D 突然変異 (10.6 12.5%)8患者の IVA 単独で達成した成功と比較して。IVA とルミナンス ivacaftor lumacaftor 併用の臨床的有効性が制限される可能性がの潜在的な敵対的薬物相互作用は、その理想的な未満の薬物動態的特性7,11から来る。IVA は活性代謝物ヒドロキシメチル-イヴァ (IVA M1, M1) と不活性形 IVA-カルボン酸 (IVA M6 M6)7,12主にチトクローム p450 (CYP) によって代謝されます。CYP3A4 誘導ルミナンス、その一方で、広範囲で代謝されてし、は主としてそのまま糞便11に排泄されます。CYP3A4 誘導剤がチトクローム代謝を誘導する、ivacaftor (CYP3A4 基質) 濃度を減らすことができます。また、イヴァとルミナンスの両方は非常に疎水性の分子、~ 99% にバインドされる血漿蛋白 (アクティブ) 遊離型薬物濃度1,13を大幅に制限します。
総称して、これらの要因は、ivacaftor lumacaftor 併用の臨床的有効性を制限する一緒に来るかもしれません。Ivacaftor lumacaftor の組み合わせで現在服用下で最適な血中濃度を達成するかどうかまたはかどうか治療のしきい値は8を維持されますが不明です。現在、ピークといった薬物動態学的パラメーターに関する情報の少なさと ivacaftor または ivacaftor lumacaftor の定常状態血漿濃度があります。Ivacaftor と lumacaftor の指摘の代謝を考えると、すると、ivacaftor または ivacaftor lumacaftor 療法の最適用量レジメンを達成するために必要な暴露-反応関係の監視です。当社グループは最近、イヴァとルミナンス14の量反応関係の監視のための最初の高速液体クロマトグラフィー/液体クロマトグラフィー-質量方法を公開しました。これまで ivacaftor、その代謝産物および lumacaftor 濃度測定の代替技術は報告されていません。大規模患者集団の高スループット解析を許可し、分析時間を大幅に削減する、当社グループが小さい細孔サイズ逆相クロマトグラフィー コラムおよび勾配溶剤系を使用して報告された方法を最適化します。コストと実行時間を削減します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="915">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:480px;">IVA (Cat#S114)&#160;</td>
			<td style="width:229px;">SelleckChem (USA).&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LUMA (Cat#S1565)&#160;</td>
			<td>SelleckChem (USA).&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IVA-carboxylate (Cat# 510242247CS)&#160;</td>
			<td>Clearsynth (Canada).&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hydroxymethyl-IVA (Cat# 510240849CS)&#160;</td>
			<td>Clearsynth (Canada).&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methanol (MeOH, LC-MS grade),&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">acetonitrile (ACN, LC-MS grade)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">formic acid (FA)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">triple-quadrupole Shimadzu 8030 LC-MS&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phenomenex Kinetex (2.6 &#181;m C8 100 &#197;; 50 &#215; 2.1mm)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">(KrudKatcher Ultrea HPLC In-Line Filter 0.5 m Depth Filter x 0.004inID).&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.5 mL polypropylene microcentrifuge tube (VWR).&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eppendorf Centrifuge 5430</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">13-mm syringe filter (0.45 &#181;m nylon, GRACE, USA)&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">[Phenomenex VEREX, 9 mm, PP, 300 &#181;L, PTFE/Silicone septa].&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optimized lc-ms/ms method for the high-throughput analysis of clinical samples of ivacaftor, its major metabolites, and lumacaftor in biological fluids of cystic fibrosis patients

嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子 (CFTR) の欠陥は、嚢胞性線維症 (CF)、生命にかかわる肺症状を病気の原因です。Ivacaftor (IVA) と ivacaftor lumacaftor (輝度) の組み合わせは、直接活動と欠陥 CFTR 蛋白質の輸送を調節する 2 つの新しい CF の画期的な薬です。ただし、薬物動態/薬力学パラメーターに関する理解の不足、ivacaftor と lumacaftor の薬理学はまだです。高速液体クロマトグラフィー MS ivacaftor、ヒドロキシメチル ivacaftor、ivacaftor-カルボン酸、および lumacaftor 標準の ivacaftor または ivacaftor lumacaftor の組み合わせを受けている患者の体液中の濃度の同時分析法治療は、以前されて私たちのグループによって開発され、FDA の基準を部分的に検証されます。ただし、患者サンプルの大きい数の高スループット解析をできるように、私たちのグループが小さい細孔サイズ逆相クロマトグラフィー コラムを使用して報告されたメソッドに最適化 (2.6 μ m、C8 100 Å; 50 x 2.1 mm) と溶媒混合系のグラデーション (0 1 分: 40 %b;1-2 分: 40-70 %b;2 2.7 分: 70 %b にて開催2.7 2.8 分: 70-90 %b;2.8-4.0 分: 90 %b 洗濯;4.0 4.1 分: 90-40 %b;4.1 6.0 分: 40 %b で開催) ではなくイソクラティック溶出。本研究の目的は、大量の患者のサンプルの分析のために不可欠であるサンプルあたり 6 分のみ 〜 15 分から大幅にサンプルあたりの高速液体クロマトグラフィー-質量分析時間を減らすことでした。これらの画期的な CF 薬物の量反応関係を研究のためかなりユーティリティのこの便宜的なメソッドになります。

我々 は最近の C8 列 (5 μ m、内径 3.9 × 50 mm) を用いた 100% 水 (40: 60 の ACN と 0.1% ギ酸から成る移動相をトリプル四重極液体クロマトグラフィー-質量と高速液体クロマトグラフィー検出器システム、FDA の基準を部分的に検証メソッドに報告しています。、v/v) 1 mL/min の流速で。すべての代謝物、ivacaftor、Iva M1、Iva-M6、lumacaftor14のひと血漿は 0.01 から 10 μ g/mL までの濃度範囲でピ...

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Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cystic Fibrosis Patients

Ivacaftor と ivacaftor lumacaftor の組み合わせは、2 つの新しい CF 薬です。ただし、まだ自分の PK/PD と薬理学の理解の不足があります。Ivacaftor 主要な代謝物と lumacaftor の同時解析のために最適化された HPLC MS 技術を提案します。

Ivacaftor、主要な代謝産物および嚢胞性線維症患者の体液中の Lumacaftor の臨床サンプルの高スループット分析のための最適化された LC-MS/MS 法

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