Name: optimized lc-ms/ms method for the high-throughput analysis of clinical samples of ivacaftor, its major metabolites, and lumacaftor in biological fluids of cystic fibrosis patients
Uploaded: 2017-10-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cys

В национальном институте аллергии и инфекционных заболеваний (NIAID) национальных институтов здравоохранения (R01 AI111965) поддерживаются J.L. и Т.В. Содержание является исключительно ответственности авторов и не обязательно отражают официальную точку зрения в национальном институте аллергии и инфекционных заболеваний или национальных институтов здравоохранения. МС является австралийский NHMRC главный научный сотрудник. J. L. австралийского национального здравоохранения и медицинских исследований Совета (NHMRC) старший научный сотрудник, и т.в. Австралийский NHMRC промышленность карьера развития уровня 2 научный сотрудник. E.K.S назначен посол Янг 2017 для ASM (Американское общество микробиологии) и поддерживается австралийских последипломного Award. Часть этой работы был представлен на 12th Australiasian конференции по муковисцидозом в Мельбурн (5-8го августа 2017).

утверждения этики был получен от Монаш Университета человека исследовательской этики Комитет (MUHREC).
 1. применение анализа: сбор образцов пациента <ol><li>записывать время, когда пациент принимает их стандартной дозы 150 мг ivacaftor или ivacaftor 125 мг /lumacaftor 200 мг.</li>
	<li>Примечание вн?...

<ol>
	<li>Schneider, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug-drug+plasma+protein+binding+interactions+of+ivacaftor.">Drug-drug plasma protein binding interactions of ivacaftor.</a> J Mol Recognit. 28 (6), 339-348 (2015).</li><li>Solomon, M., Leatte, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Treatments for Cystic fibrosis. , (2009).</li><li>O'Sullivan, B. P., Flume, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+approach+to+lung+disease+in+patients+with+cystic+fibrosis.">The clinical approach to lung disease in patients with cystic fibrosis.</a> Semin Respir Crit Care Med. 30 (5), 505-513 (2009).</li><li>Ramsey, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CFTR+potentiator+in+patients+with+cystic+fibrosis+and+the+G551D+mutation.">A CFTR potentiator in patients with cystic fibrosis and the G551D mutation.</a> N Engl J Med. 365 (18), 1663-1672 (2011).</li><li>Wainwright, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lumacaftor-Ivacaftor+in+Patients+with+Cystic+Fibrosis+Homozygous+for+Phe508del+CFTR.">Lumacaftor-Ivacaftor in Patients with Cystic Fibrosis Homozygous for Phe508del CFTR.</a> N Engl J Med. 373 (3), 220-231 (2015).</li><li>Hadida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+N-(2,4-di-tert-butyl-5-hydroxyphenyl)-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxamide+(VX-770,+ivacaftor),+a+potent+and+orally+bioavailable+CFTR+potentiator.">Discovery of N-(2,4-di-tert-butyl-5-hydroxyphenyl)-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxamide (VX-770, ivacaftor), a potent and orally bioavailable CFTR potentiator.</a> J Med Chem. 57 (23), 9776-9795 (2014).</li><li>FDA. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> FDA Advisory Commitee Briefing Material VERTEX-FDA Pulmonary-Allergy drugs advisory commitee. 98 , (2015).</li><li>Holmes, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=False+dawn+for+cystic+fibrosis+disease+modifiers?.">False dawn for cystic fibrosis disease modifiers?.</a> Nat Rev Drug Discov. 13 (10), 713-714 (2014).</li><li>Veit, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+gating+potentiators,+including+VX-770,+diminish+DeltaF508-CFTR+functional+expression.">Some gating potentiators, including VX-770, diminish DeltaF508-CFTR functional expression.</a> Sci Transl Med. 6 (246), 246ra297 (2014).</li><li>Cholon, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potentiator+ivacaftor+abrogates+pharmacological+correction+of+DeltaF508+CFTR+in+cystic+fibrosis.">Potentiator ivacaftor abrogates pharmacological correction of DeltaF508 CFTR in cystic fibrosis.</a> Sci Transl Med. 6 (246), 246ra297 (2014).</li><li>EMA, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Assessment report ORKAMBI (ivacaftor/lumacaftor) European medicines agency. , (2015).</li><li>VERTEX. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Vertex prescribing infomation. , (2015).</li><li>Matthes, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+free+drug+concentration+prevents+inhibition+of+F508del+CFTR+functional+expression+by+the+potentiator+VX-770+(ivacaftor).">Low free drug concentration prevents inhibition of F508del CFTR functional expression by the potentiator VX-770 (ivacaftor).</a> Br J Pharmacol. 173 (3), 459-470 (2016).</li><li>Schneider, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+HPLC+and+LC-MS/MS+methods+for+the+analysis+of+ivacaftor,+its+major+metabolites+and+lumacaftor+in+plasma+and+sputum+of+cystic+fibrosis+patients+treated+with+ORKAMBI+or+KALYDECO.">Development of HPLC and LC-MS/MS methods for the analysis of ivacaftor, its major metabolites and lumacaftor in plasma and sputum of cystic fibrosis patients treated with ORKAMBI or KALYDECO.</a> J Chrom B Analyt Technol Biomed Life Sci. 1038, 57-62 (2016).</li><li>Su, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+LC-MS/MS+method+for+the+quantitation+of+cabozantinib+in+rat+plasma:+application+to+a+pharmacokinetic+study.">An LC-MS/MS method for the quantitation of cabozantinib in rat plasma: application to a pharmacokinetic study.</a> J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 985, 119-123 (2015).</li></ol>

Как сообщалось ранее наша группа имеет впервые разработан и проверен метод ВЭЖХ и LC-MS для быстрого обнаружения и количественного определения ivacaftor и его главных метаболитов гидроксиметил IVA M1 (активный) и IVA-карбоксилатных M6 (неактивный); и lumacaftor в плазме крови и мокроты больных CF<sup class="xre...

Кистозный фиброз (CF) является общим генетическим заболеванием, с участием слизь экзокринной железы легких, печени, поджелудочной железы и кишечника, вызывая прогрессивного мульти полиорганной недостаточности, такие как снижение легочной функции и недостаточность поджелудочной железы1, 2,3. Ivacaftor (IVA) является первым пищевых продуктов и медикаментов (FDA-США) и Европейское агентство лекарственных средств (EMA) одобрил муковисцидоз транс мембраны проводимости регулятор (МВТР) potentiator наркотиков, с свидетельствует клиническая эффективность производства значительного улучшение функции легких над плацебо в небольшого подмножества CF пациентов с учетом G551D-МВТР [глицин (G) в положение 551 заменяется аспарагиновой кислоты (D)] Миссенс-мутации (~ 4-5% из населенности CF)4,5. Это перорально наркотиков увеличивает МВТР канал открытия, тем самым увеличивая поток ионов хлорида и действуя на первичный дефект, который приводит к клинических проявлений CF4,6. К сожалению, IVA монотерапия не эффективен у пациентов с более распространенными гомозиготных F508del мутация [в кадр удаления гена МВТР, что приводит к потере фенилаланин (F) в позиции 508] что приводит смятых МВТР, который рассматривается в ~ 50% CF населения7,8.
Недавно FDA предоставил официальное утверждение для объединения IVA с корректором МВТР lumacaftor наркотиков. Умная стратегия объединения МВТР Корректор (lumacaftor, Лума), который спасает F508del-МВТР на поверхности клеток с модулятором (IVA), который потенцирует активность канала МВТР, эффективно расширяет окна лечения для большинства населения CF5 . Вопросы по-прежнему ли эти препараты будут выполнить свое обещание, как ряд противоречивых докладов появились что сомнение после их клиническая эффективность9,10. Кроме того, улучшение функции легких были лишь скромный (2,6-4% для комбинации ivacaftor-lumacaftor) по сравнению с успех, достигнутый с IVA монотерапии у больных с учетом G551D мутации (10.6-12,5%)8. Потенциальные антагонистических наркотиков-взаимодействиях между IVA и LUMA потенциально ограничивают клиническая эффективность ivacaftor-lumacaftor комбинации приходят от его менее идеальных фармакокинетические свойства7,11. IVA активно метаболизируется ферментами цитохрома P450 (CYP), главным образом в активный метаболит гидроксиметил IVA (IVA-M1, M1) и неактивной форме IVA-карбоксилатных (IVA-M6, M6)7,12. Индуктором CYP3A4 Лума, с другой стороны, широко не метаболизируется и это во многом экскретируется в неизмененном виде в фекалиях11. Как индукторов CYP3A4 вызывают метаболизм цитохрома, ivacaftor (CYP3A4 субстрата) концентрации могут быть сокращены. Кроме того IVA и LUMA очень гидрофобные молекулы и ~ 99% связаны с белками плазмы, что значительно ограничивает свободный (активные) препарата концентрация1,13.
В совокупности эти факторы могут собираются вместе, чтобы ограничить клиническая эффективность комбинации ivacaftor-lumacaftor. Не известно ли оптимальный плазменные концентрации достигаются под текущий режим дозирования для ivacaftor-lumacaftor комбинации или если порог терапевтического сохраняется8. В настоящее время существует нехватка информации о фармакокинетические параметры, такие как пик и концентрации в плазме установившемся ivacaftor или ivacaftor-lumacaftor. Учитывая отметил метаболизм ivacaftor и lumacaftor, мониторинг воздействия-реакция является условием для достижения оптимальной дозировке схемы для ivacaftor или ivacaftor-lumacaftor терапии. Наша группа недавно опубликовал первый метод ВЭЖХ/LC-MS для мониторинга воздействия-реакция IVA и LUMA14. До настоящего времени не поступало никаких альтернативных методов измерения концентрации ivacaftor, его метаболитов и lumacaftor. Для высокой пропускной способности анализа больших пациента коллектива и резко уменьшить время анализа, наша группа оптимизированный метод сообщалось с помощью столбца реверс фаза хроматографии размер меньше поры и градиентной жидкостной системы, уменьшает стоимость и время работы.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="915">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:480px;">IVA (Cat#S114)&#160;</td>
			<td style="width:229px;">SelleckChem (USA).&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LUMA (Cat#S1565)&#160;</td>
			<td>SelleckChem (USA).&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IVA-carboxylate (Cat# 510242247CS)&#160;</td>
			<td>Clearsynth (Canada).&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hydroxymethyl-IVA (Cat# 510240849CS)&#160;</td>
			<td>Clearsynth (Canada).&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methanol (MeOH, LC-MS grade),&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">acetonitrile (ACN, LC-MS grade)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">formic acid (FA)&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">triple-quadrupole Shimadzu 8030 LC-MS&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phenomenex Kinetex (2.6 &#181;m C8 100 &#197;; 50 &#215; 2.1mm)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">(KrudKatcher Ultrea HPLC In-Line Filter 0.5 m Depth Filter x 0.004inID).&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.5 mL polypropylene microcentrifuge tube (VWR).&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eppendorf Centrifuge 5430</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">13-mm syringe filter (0.45 &#181;m nylon, GRACE, USA)&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">[Phenomenex VEREX, 9 mm, PP, 300 &#181;L, PTFE/Silicone septa].&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optimized lc-ms/ms method for the high-throughput analysis of clinical samples of ivacaftor, its major metabolites, and lumacaftor in biological fluids of cystic fibrosis patients

Дефекты в Регулятор проводимости транс мембраны кистозный фиброз (МВТР) являются причиной кистозный фиброз (CF), болезнь с угрожающей жизни легких проявлениях. Ivacaftor (IVA) и ivacaftor-lumacaftor (яркость) комбинации являются два новых прорыв CF лекарств, которые непосредственно модулировать активность и торговля дефектных МВТР-белка. Однако есть еще недостаток понимания на фармакокинетические/фармакодинамика параметров и фармакологии ivacaftor и lumacaftor. Метод ВЭЖХ-МС для одновременного анализа концентрации ivacaftor, гидроксиметил ivacaftor, ivacaftor карбоксилатных и lumacaftor в биологических жидкостях у больных, получавших стандартные комбинации ivacaftor или ivacaftor-lumacaftor терапия ранее был разработан нашей группы и частично проверяются по стандартам FDA. Однако, чтобы разрешить высок объём анализа большего числа пациентов образцов, наша группа оптимизировал сообщил метод с помощью столбца реверс фаза хроматографии размер меньше поры (2.6 мкм, C8 100 Å; 50 x 2,1 мм) и градиентной жидкостной системы ( 0-1 мин: 40% B; 1-2 мин: 40-70% B; 2-2.7 мин: в 70% B; 2,7-2,8 мин: 70-90% B; 2.8-4.0 мин: 90% B стирки; 4.0-4.1 мин: 90-40% B; 4.1-6.0 мин: в 40% B) вместо Изократические элюции. Целью настоящего исследования было уменьшить время анализа ВЭЖХ-МС на сэмпл резко от ~ 15 мин до только 6 мин на сэмпл, которая необходима для анализа большого количества пациентов образцов. Этот метод целесообразно будет весьма полезными для исследований в воздействие-реакция этих препаратов CF прорыв.

Мы недавно сообщили метода, частично проверяются по стандартам FDA, на тройной квадрупольного LC-MS и ВЭЖХ системы детектор, с помощью столбца C8 (5 мкм, и.д. 3,9 мм x 50 мм) с мобильных фаза, состоящая из 100% АКС и 0,1% муравьиной кислоты в воде (широколиственные v/v) со скоростью потока 1 мл/мин. Линейно?...

Watch this Scientific Journal Video about Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cys

Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cystic Fibrosis Patients

Сочетание Ivacaftor и ivacaftor-lumacaftor являются два новых препаратов CF. Однако есть еще недостаток понимания их Фармакологических и фармакологии. Мы представляем оптимизированный метод ВЭЖХ-МС для одновременного анализа ivacaftor и его главных метаболитов и lumacaftor.

Оптимизированный метод LC-MS/MS для высокой пропускной способности анализа клинических образцов Ivacaftor, его основных метаболитов и Lumacaftor в биологических жидкостях больных муковисцидозом

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantification of the Immunosuppressant Tacrolimus on Dried Blood Spots Using LC-MS/MS

Количественная оценка иммуносупрессором такролимуса на сухих пятен крови с использованием LC-MS / MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

Сетевой анализ овального электродных Recordings в устойчивых к лекарственным средствам височная эпилепсия пациентов

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Форсколин-индуцированной Отек в кишечном органоидов:<em&gt; In Vitro</em&gt; Анализ для оценки ответа на наркотики в больных муковисцидозом

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Оптимизированный анализ<em&gt; В Vivo</em&gt; и<em&gt; In Vitro</em&gt; Стеатоз печени

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

Стратегий выборки и обработки образцов ткани биобанка из свинины биомедицинской модели

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

Collecting Hair Samples for Hair Cortisol Analysis in African Americans

Сбор образцов волос для анализа волос кортизола в африканских американцах

The hormone cortisol is typically assessed in saliva, serum, or urine samples. More recently, cortisol has been successfully extracted from hair, ...

Generation of Human Nasal Epithelial Cell Spheroids for Individualized Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Study

Поколение сфероидов человеческого носа эпителиальных клеток для исследования регулятор трансмембранной проводимости индивидуализированные муковисцидоза

While the introduction of Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) modulator drugs has revolutionized care in Cystic Fibrosis (CF), the ...

High-Throughput Analysis of Optical Mapping Data Using ElectroMap

Высокопроходимый анализ оптических картографических данных с помощью ElectroMap

Optical mapping is an established technique for high spatio-temporal resolution study of cardiac electrophysiology in multi-cellular preparations. Here we ...

Validated LC-MS/MS Panel for Quantifying 11 Drug-Resistant TB Medications in Small Hair Samples

Проверенная lc-MS/MS Panel для количественной оценки 11 лекарствоустойчивых противотуберкулезных препаратов в малых образцах волос

Drug resistant-tuberculosis (DR-TB) is a growing public health threat, and assessment of therapeutic drug levels may have important clinical benefits. ...

Design and Development of a Model to Study the Effect of Supplemental Oxygen on the Cystic Fibrosis Airway Microbiome

Проектирование и разработка модели для изучения влияния дополнительного кислорода на микробиом дыхательных путей муковисцидоза

Airway microbial communities are thought to play an important role in the progression of cystic fibrosis (CF) and other chronic pulmonary diseases. ...