Name: a guide to production, crystallization, and structure determination of human ikk1/&#945;
Uploaded: 2018-11-02T13:00:00
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हम विभिंन क्रिस्टल पर डेटा संग्रह के दौरान समर्थन के लिए उंनत फोटॉन स्रोत, Lemont, आईएल पर beamlines 19ID, 24ID, और 13ID में कर्मचारियों को धंयवाद । हम दिमित्री Lyumkis, सॉल्क संस्थान के लिए आभारी है उंहें कम संकल्प क्रायो em मानचित्र के प्रारंभिक दौर में उंहें मानचित्र/मॉडल निर्माण, जो प्रारंभिक IKK1 आणविक प्रतिस्थापन खोज मॉडल बनाने के लिए इस्तेमाल किया गया था । इन परिणामों के लिए अग्रणी अनुसंधान NIH अनुदान AI064326, CA141722, और GM071862 से जीजी को धन प्राप्त हुआ है । एसपी का फिलहाल वेलकम ट्रस्ट डीबीटी इंडिया इंटरमीडिएट फेलो है ।

1. IKK1/α की बड़े पैमाने पर अभिव्यक्ति के लिए उपयुक्त रिकॉमबिनेंट वायरस की तैयारी
<ol><li>
P1 वायरस तैयारी ३२<ol>
<li>1 दिन: प्लेट Sf9 कोशिकाओं (~ 6 X 105) (गद्यांश संख्या 10 से कम) में Sf900 III कीट कोशिका मध्यम के 2 म...

<ol>
	<li>Xia, Y., Shen, S., Verma, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NF-kappaB,+an+active+player+in+human+cancers.">NF-kappaB, an active player in human cancers.</a> Cancer immunology research. 2 (9), 823-830 (2014).</li><li>Grivennikov, S. I., Greten, F. R., Karin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity,+inflammation,+and+cancer.">Immunity, inflammation, and cancer.</a> Cell. 140 (6), 883-899 (2010).</li><li>Ben-Neriah, Y., Karin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+meets+cancer,+with+NF-kappaB+as+the+matchmaker.">Inflammation meets cancer, with NF-kappaB as the matchmaker.</a> Nature immunology. 12 (8), 715-723 (2011).</li><li>Hinz, M., Scheidereit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+IkappaB+kinase+complex+in+NF-kappaB+regulation+and+beyond.">The IkappaB kinase complex in NF-kappaB regulation and beyond.</a> EMBO reports. 15 (1), 46-61 (2014).</li><li>Karin, M., Ben-Neriah, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphorylation+meets+ubiquitination:+the+control+of+NF-[kappa]B+activity.">Phosphorylation meets ubiquitination: the control of NF-[kappa]B activity.</a> Annu Rev Immunol. 18, 621-663 (2000).</li><li>Ghosh, S., Karin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Missing+pieces+in+the+NF-kappaB+puzzle.">Missing pieces in the NF-kappaB puzzle.</a> Cell. 109, S81-S96 (2002).</li><li>Sun, S. 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M., Zandi, E., Karin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cytokine-responsive+IkappaB+kinase+that+activates+the+transcription+factor+NF-kappaB.">A cytokine-responsive IkappaB kinase that activates the transcription factor NF-kappaB.</a> Nature. 388 (6642), 548-554 (1997).</li><li>Werner, S. L., Barken, D., Hoffmann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulus+specificity+of+gene+expression+programs+determined+by+temporal+control+of+IKK+activity.">Stimulus specificity of gene expression programs determined by temporal control of IKK activity.</a> Science. 309 (5742), 1857-1861 (2005).</li><li>Zandi, E., Rothwarf, D. M., Delhase, M., Hayakawa, M., Karin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+IkappaB+kinase+complex+(IKK)+contains+two+kinase+subunits,+IKKalpha+and+IKKbeta,+necessary+for+IkappaB+phosphorylation+and+NF-kappaB+activation.">The IkappaB kinase complex (IKK) contains two kinase subunits, IKKalpha and IKKbeta, necessary for IkappaB phosphorylation and NF-kappaB activation.</a> Cell. 91 (2), 243-252 (1997).</li><li>Rothwarf, D. M., Zandi, E., Natoli, G., Karin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IKK-gamma+is+an+essential+regulatory+subunit+of+the+IkappaB+kinase+complex.">IKK-gamma is an essential regulatory subunit of the IkappaB kinase complex.</a> Nature. 395 (6699), 297-300 (1998).</li><li>Yamaoka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementation+cloning+of+NEMO,+a+component+of+the+IkappaB+kinase+complex+essential+for+NF-kappaB+activation.">Complementation cloning of NEMO, a component of the IkappaB kinase complex essential for NF-kappaB activation.</a> Cell. 93 (7), 1231-1240 (1998).</li><li>Li, Z. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+IKKbeta+subunit+of+IkappaB+kinase+(IKK)+is+essential+for+nuclear+factor+kappaB+activation+and+prevention+of+apoptosis.">The IKKbeta subunit of IkappaB kinase (IKK) is essential for nuclear factor kappaB activation and prevention of apoptosis.</a> J Exp Med. 189 (11), 1839-1845 (1999).</li><li>Hayden, M. S., Ghosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shared+principles+in+NF-kappaB+signaling.">Shared principles in NF-kappaB signaling.</a> Cell. 132 (3), 344-362 (2008).</li><li>Sun, S. C., Chang, J. H., Jin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+nuclear+factor-kappaB+in+autoimmunity.">Regulation of nuclear factor-kappaB in autoimmunity.</a> Trends Immunol. 34 (6), 282-289 (2013).</li><li>Claudio, E., Brown, K., Park, S., Wang, H., Siebenlist, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BAFF-induced+NEMO-independent+processing+of+NF-kappa+B2+in+maturing+B+cells.">BAFF-induced NEMO-independent processing of NF-kappa B2 in maturing B cells.</a> Nat Immunol. 3 (10), 958-965 (2002).</li><li>Senftleben, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+by+IKKalpha+of+a+second,+evolutionary+conserved,+NF-kappa+B+signaling+pathway.">Activation by IKKalpha of a second, evolutionary conserved, NF-kappa B signaling pathway.</a> Science. 293 (5534), 1495-1499 (2001).</li><li>Coope, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40+regulates+the+processing+of+NF-kappaB2+p100+to+p52.">CD40 regulates the processing of NF-kappaB2 p100 to p52.</a> EMBO J. 21 (20), 5375-5385 (2002).</li><li>Dejardin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lymphotoxin-beta+receptor+induces+different+patterns+of+gene+expression+via+two+NF-kappaB+pathways.">The lymphotoxin-beta receptor induces different patterns of gene expression via two NF-kappaB pathways.</a> Immunity. 17 (4), 525-535 (2002).</li><li>Xiao, G., Fong, A., Sun, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+p100+processing+by+NF-kappaB-inducing+kinase+involves+docking+IkappaB+kinase+alpha+(IKKalpha)+to+p100+and+IKKalpha-mediated+phosphorylation.">Induction of p100 processing by NF-kappaB-inducing kinase involves docking IkappaB kinase alpha (IKKalpha) to p100 and IKKalpha-mediated phosphorylation.</a> The Journal of biological chemistry. 279 (29), 30099-30105 (2004).</li><li>Xiao, G., Harhaj, E. W., Sun, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NF-kappaB-inducing+kinase+regulates+the+processing+of+NF-kappaB2+p100.">NF-kappaB-inducing kinase regulates the processing of NF-kappaB2 p100.</a> Molecular cell. 7 (2), 401-409 (2001).</li><li>Qing, G., Qu, Z., Xiao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stabilization+of+basally+translated+NF-kappaB-inducing+kinase+(NIK)+protein+functions+as+a+molecular+switch+of+processing+of+NF-kappaB2+p100.">Stabilization of basally translated NF-kappaB-inducing kinase (NIK) protein functions as a molecular switch of processing of NF-kappaB2 p100.</a> J Biol Chem. 280 (49), 40578-40582 (2005).</li><li>Zarnegar, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noncanonical+NF-kappaB+activation+requires+coordinated+assembly+of+a+regulatory+complex+of+the+adaptors+cIAP1,+cIAP2,+TRAF2+and+TRAF3+and+the+kinase+NIK.">Noncanonical NF-kappaB activation requires coordinated assembly of a regulatory complex of the adaptors cIAP1, cIAP2, TRAF2 and TRAF3 and the kinase NIK.</a> Nat Immunol. 9 (12), 1371-1378 (2008).</li><li>Vallabhapurapu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonredundant+and+complementary+functions+of+TRAF2+and+TRAF3+in+a+ubiquitination+cascade+that+activates+NIK-dependent+alternative+NF-kappaB+signaling.">Nonredundant and complementary functions of TRAF2 and TRAF3 in a ubiquitination cascade that activates NIK-dependent alternative NF-kappaB signaling.</a> Nat Immunol. 9 (12), 1364-1370 (2008).</li><li>Annunziata, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequent+engagement+of+the+classical+and+alternative+NF-kappaB+pathways+by+diverse+genetic+abnormalities+in+multiple+myeloma.">Frequent engagement of the classical and alternative NF-kappaB pathways by diverse genetic abnormalities in multiple myeloma.</a> Cancer cell. 12 (2), 115-130 (2007).</li><li>Keats, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promiscuous+mutations+activate+the+noncanonical+NF-kappaB+pathway+in+multiple+myeloma.">Promiscuous mutations activate the noncanonical NF-kappaB pathway in multiple myeloma.</a> Cancer cell. 12 (2), 131-144 (2007).</li><li>Staudt, L. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+discovery+of+2-amino-3,5-diarylbenzamide+inhibitors+of+IKK-alpha+and+IKK-beta+kinases.">The discovery of 2-amino-3,5-diarylbenzamide inhibitors of IKK-alpha and IKK-beta kinases.</a> Bioorganic &amp; medicinal chemistry letters. 17 (14), 3972-3977 (2007).</li><li>Karplus, P. A., Diederichs, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linking+crystallographic+model+and+data+quality.">Linking crystallographic model and data quality.</a> Science. 336 (6084), 1030-1033 (2012).</li><li>Chen, V. 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दो संबंधित मतान्ध प्रोटीन का उत्पादन, सघनकरण और संरचना समाधान हम बाहर सेट करने के लिए एक्स-रे क्रिस्टल संरचना IKK1/α की धारणा है कि यह एक अपेक्षाकृत सरल IKK2 के साथ हमारे अनुभव दिया जाएगा/β प्रोटीन उत्?...

dimeric प्रतिलेखन कारकों की NF-κB परिवार के Transcriptional गतिविधियों विविध सेलुलर सूजन और प्रतिरक्षा से बचने और मौत के लिए कार्यों को लेकर कार्य के लिए आवश्यक हैं । इन गतिविधियों को इसरो कोशिकाओं में नियंत्रित कर रहे हैं और विनियमन की हानि विभिन्न रोग की स्थिति की ओर जाता है, स्व-प्रतिरक्षित विकारों सहित, और कैंसर1,2,3. एक उत्तेजना के अभाव में, NF-κB की गतिविधियों IκB द्वारा बाधित रखा जाता है (अवरोध करनेवाला-κB) प्रोटीन4. IκB प्रोटीन पर विशिष्ट Ser अवशेषों के फास्फारिलीकरण उन्हें ubiquitination और बाद में proteasomal क्षरण या चुनिंदा प्रोसेसिंग5के लिए चिह्नित करता है । दो अत्यधिक मुताबिक़ Ser/kinases, IKK2/β और IKK1/α, NF-κB गतिविधियों के केंद्रीय नियामकों के रूप में कार्य इन फास्फारिलीकरण घटनाओं6,7ले जाकर ।
एक ligand और एक रिसेप्टर के बीच बातचीत NF के सक्रियण के लिए अग्रणी मध्यस्थों की एक श्रृंखला के माध्यम से एक संकेत transduces-κB कारकों. NF-κB संकेत प्रक्रिया मोटे तौर पर दो अलग रास्ते में वर्गीकृत किया जा सकता है – विहित और गैर-विहित (वैकल्पिक)8. IKK2/β की गतिविधि मुख्य रूप से विनियमित NF-κB संकेत विहित मार्ग है कि भड़काऊ और जंमजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं9के लिए आवश्यक है । इस मार्ग की एक विशिष्ट सुविधा एक तेजी से और कम रहता है IKK2 के सक्रियकरण/β10 एक अब तक जैव रासायनिक विलक्षण मतान्ध परिसर के भीतर — माना IKK1 और IKK2 से बना होना करने के लिए, साथ ही एक विनियामक घटक, निमो (NF-κB आवश्यक मॉडुलन )11,12,13. मतान्ध परिसर के दो उत्प्रेरक मतान्ध उपइकाईयों के बीच, IKK2 prototypical IκBs के विशिष्ट अवशेषों के फास्फारिलीकरण के लिए मुख्य रूप से14 जिंमेदार है (α,-β, &-γ) nf-κB करने के लिए बाध्य, और यह भी एक असामान्य IκB प्रोटीन, nf-κB1/p105, जो एक है NF-κB p50 उपइकाई5के प्रणेता । फास्फारिलीकरण प्रेरित ubiquitination और IκB के proteasomal क्षरण (या p105 के प्रसंस्करण) जारी है और NF के एक विशिष्ट सेट के सक्रियकरण की ओर जाता है-κB dimers15। ंयायपालिका NF-κB IKK2 के एमआईएस विनियमित समारोह के कारण गतिविधि कई कैंसर में मनाया गया है के रूप में के रूप में अच्छी तरह से स्व-प्रतिरक्षित विकारों2,3,16।
IKK2/β, IKK1/α की गतिविधि के विपरीत NF-κB संकेत के गैर-विहित मार्ग है, जो विकास और प्रतिरक्षा के लिए आवश्यक है को नियंत्रित करता है । IKK1 phosphorylates के विशिष्ट अवशेषों NF-κB2/p100 पर अपने सी-टर्मिनल IκBδ खंड है, जो इसके प्रसंस्करण और p52 की पीढ़ी की ओर जाता है । transcriptionally सक्रिय p52 का गठन: RelB heterodimer विकास संकेतों के लिए एक धीमी और निरंतर प्रतिक्रिया शुरू7,17,18,19,20। दिलचस्प है, इस मार्ग के केंद्रीय nf-κB कारक p52 की पीढ़ी गंभीर रूप से एक और कारक पर निर्भर है, nf-κB उत्प्रेरण कळेनासे (NIK)21,22, लेकिन IKK2 या निमो पर नहीं । शेष कोशिकाओं में, NIK का स्तर अपने निरंतर proteasome-निर्भर क्षरण23,24,25के कारण कम रहता है । ' गैर ' विहित लाइगैंडों द्वारा कोशिकाओं की उत्तेजना पर, और कुछ घातक कोशिकाओं में, NIK को भर्ती करने के लिए स्थिर हो जाता है और IKK1/α. कळेनासे गतिविधियों दोनों NIK और IKK1 के p1007में p52 के कुशल प्रसंस्करण के लिए आवश्यक है सक्रिय । IKK1 और NIK phosphorylate के तीन serines (Ser866, ८७० और ८७२) NF-κB2/p100 अपने C-टर्मिनल IκBδ खंड पर अपने प्रसंस्करण और p52 की पीढ़ी के लिए अग्रणी । गैर विहित मार्ग के ंयायपालिका सक्रियण एकाधिक मायलोमा26,27,28सहित कई द्रोह में फंसाया गया है ।
कई अत्यधिक कुशल और विशिष्ट अवरोधकों IKK2/β के लिए जाना जाता है, हालांकि कोई भी अब तक निकला है एक प्रभावी दवा है । इसके विपरीत, IKK1/α-विशिष्ट अवरोधकों विरल हैं । यह आंशिक रूप से IKK1 पर संरचनात्मक और जैव रासायनिक जानकारी की हमारी कमी से स्टेम कर सकते हैं/α, जो NF के सक्रियकरण के यंत्रवत आधार की हमारी समझ सीमा-κB कोशिकाओं में IKK1 द्वारा, और तर्कसंगत दवा डिजाइन । IKK2/β के एक्स-रे संरचनाओं IKK2/β29के सक्रियकरण तंत्र में अंतर्दृष्टि के साथ हमें प्रदान की; हालांकि, इन संरचनाओं पता चलता है कि कैसे अलग ऊपर उत्तेजनाओं IKK1/α या IKK2 के सक्रियकरण को ट्रिगर नहीं कर सकता/β NF-κB गतिविधियों के विभिन्न सेट को विनियमित करने के लिए 30,31. यंत्रवत IKK1/α के विशिष्ट संकेत समारोह अंतर्निहित आधार को समझने के लिए, और तर्कसंगत दवा डिजाइन के लिए एक मंच स्थापित करने के लिए, हम IKK1/α की संरचना का निर्धारण करने पर ध्यान केंद्रित किया ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cellfectin/Cellfectin II</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10362100</td>
			<td>Cellfectin is now discontinued, replaced by Cellfectin II</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sf900 III Insect cell medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12658-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SF9 cells</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12659017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-IKK1 antibody</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NB100-56704</td>
			<td>Previously sold by Imgenex</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-PentaHis antibody</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>34460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF membrane</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>IPVH00010</td>
			<td>Nitrocellulose can also be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ni-NTA agarose</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>30210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bradford assay reagent</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>500001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superdex 200 column</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>28989335</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon concentrator</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC801008, UFC803008, UFC201024, UFC203024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compound A</td>
			<td>Bayer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calbiochem IKK-inhibitor XII</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>401491</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staurosporine</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>S4400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MLN120B</td>
			<td>Millenium</td>
			<td>Gift item</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMPPNP</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>A2647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran sulfate</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>51227, 42867, 31404,</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran sulfate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>J62101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>93593, 81210, 88276, 95904, 81255, 89510, 92897, 81285, 95172</td>
			<td>Some of them are new Cat # on SIGMA catalogue. What we had was originally from Fluka that had different Cat #.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystallization Screens</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal Screen I and II (Crystal Screen HT)</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Index HT</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG/Ion and PEG/Ion2 (PEG/Ion HT)</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEGRX 1 and PEGRx 2 (PEGRx HT)</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SaltRx 1 and SaltRx 2 (SaltRx HT)</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal mounts</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR8-188, 190, 192, 194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synchrotron</td>
			<td>The Advanced Photon Source (APS) at the U.S. Department of Energy&#8217;s Argonne National Laboratory</td>
			<td>Beamline 19 ID</td>
			<td>The Advanced Photon Source (APS) at the U.S. Department of Energy&#8217;s Argonne National Laboratory provides ultra-bright, high-energy storage ring-generated X-ray beams for research in almost all scientific disciplines.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a guide to production, crystallization, and structure determination of human ikk1/&#945;

extracellular उत्तेजनाओं के एक वर्ग के IKK1/α के एक NF-κB उपइकाई, p52, इसके अग्रदूत p100 के प्रसंस्करण के माध्यम से की पीढ़ी को प्रेरित करने के लिए सक्रियण की आवश्यकता है । p52 एक homodimer या heterodimer के साथ एक अंय NF-κB उपइकाई, RelB के रूप में कार्य करता है । बारी में इन dimers सूजन में शामिल जीन के सैकड़ों की अभिव्यक्ति को विनियमित, कोशिका अस्तित्व, और कोशिका चक्र. IKK1/α मुख्य रूप से एक त्रिगुट परिसर के रूप में IKK2/β और निमो के साथ जुड़े रहता है । हालांकि, यह एक छोटा सा पूल भी एक कम आणविक वजन जटिल (es) के रूप में मनाया जाता है । यह अज्ञात है यदि p100 संसाधन गतिविधि IKK1/α के बड़े या छोटे जटिल पूल के भीतर सक्रियण द्वारा ट्रिगर किया गया है । IKK1/α के गठन गतिविधि कई कैंसर और भड़काऊ रोगों में पाया गया है । IKK1/α के सक्रियण के तंत्र को समझने के लिए, और एक दवा लक्ष्य के रूप में इसके उपयोग को सक्षम, हम विभिंन मेजबान प्रणालियों में रिकॉमबिनेंट IKK1/α, जैसे ई. कोलाई, कीट और स्तनधारी कोशिकाओं के रूप में व्यक्त की । हम baculovirus संक्रमित कीट कोशिकाओं में घुलनशील IKK1/α व्यक्त करने में सफल रहा, अत्यधिक शुद्ध प्रोटीन की मिलीग्राम मात्रा प्राप्त करने, यह अवरोधकों की उपस्थिति में सघन, और अपने एक्स-रे क्रिस्टल संरचना का निर्धारण । यहां, हम विस्तृत चरणों का वर्णन करने के लिए रिकॉमबिनेंट प्रोटीन, इसके क्रिस्टलीकरण, और उसके एक्स-रे क्रिस्टल संरचना निर्धारण का उत्पादन ।

क्लोनिंग और IKK1 के विभिंन निर्माणों की अभिव्यक्ति/α पूर्ण लंबाई मानव IKK1/α अपनी EcoRI और नोति प्रतिबंध साइटों के भीतर baculovirus अभिव्यक्ति वेक्टर pFastBacHTa में क्लोन किया गया एक N-टर्मिनल हेक्सा-Histidine ?...

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A Guide to Production, Crystallization, and Structure Determination of Human IKK1/ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â±

IκB कळेनासे 1/α (IKK1/α CHUK) एक Ser/... प्रोटीन कळेनासे कि मुख्य रूप से NF-κB प्रतिलेखन कारकों के सक्रियकरण के माध्यम से सेलुलर गतिविधियों के असंख्य में शामिल है । यहां, हम मुख्य उत्पादन और इस प्रोटीन के क्रिस्टल संरचना निर्धारण के लिए आवश्यक कदम का वर्णन ।

मानव IKK1 के उत्पादन, क्रिस्टलीकरण, और संरचना निर्धारण के लिए एक गाइड α/

A class of extracellular stimuli requires activation of IKK1/&#945; to induce generation of an NF-&#954;B subunit, p52, through processing of its ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

A Guide to Production, Crystallization, and Structure Determination of Human IKK1/&#945;

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, अभिव्यक्ति, शोधन, और मानव सेरोटोनिन ट्रांसपोर्टर के क्रिस्टलीकरण के लिए बाध्य<em&gt; S</em&gt; -citalopram

The serotonin transporter is a sodium and chloride-coupled transporter that &#34;pumps&#34; extracellular serotonin into cells. S-citalopram is a drug ...

Combining Wet and Dry Lab Techniques to Guide the Crystallization of Large Coiled-coil Containing Proteins

संयोजन गीले और सूखे प्रयोगशाला तकनीकों बड़े दबाई-तार युक्त प्रोटीन के क्रिस्टलीकरण गाइड करने के लिए

Obtaining crystals for structure determination can be a difficult and time consuming proposition for any protein. Coiled-coil proteins and domains are ...

Production, Crystallization and Structure Determination of C. difficile PPEP-1 via Microseeding and Zinc-SAD

Production, Crystallization and Structure Determination of C. difficile PPEP-1 via Microseeding and Zinc-SAD

उत्पादन, क्रिस्टलीकरण और की संरचना निर्धारण<em&gt; सी। बेलगाम</em&gt; PPEP -1 Microseeding और जिंक-शिरोमणि अकाली दल के माध्यम से

New therapies are needed to treat Clostridium difficile infections that are a major threat to human health. The C. difficile metalloprotease PPEP-1 is a ...

High Precision FRET at Single-molecule Level for Biomolecule Structure Determination

बायोमोलेस्क्यू संरचना निर्धारण के लिए एकल अणु स्तर पर उच्च शुद्धता FRET

A protocol on how to perform high-precision interdye distance measurements using F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) at the single-molecule ...

Production, Crystallization, and Structure Determination of the IKK-binding Domain of NEMO

एनईएमओ के आईकेके-बाध्यकारी डोमेन का उत्पादन, क्रिस्टलीकरण और संरचना निर्धारण

NEMO is a scaffolding protein which plays an essential role in the NF-&#954;B pathway by assembling the IKK-complex with the kinases IKK&#945; and ...

Crystallization and Structural Determination of an Enzyme:Substrate Complex by Serial Crystallography in a Versatile Microfluidic Chip

एक एंजाइम का क्रिस्टलीकरण और संरचनात्मक निर्धारण: एक बहुमुखी माइक्रोफ्लुइडिक चिप में सीरियल क्रिस्टलोग्राफी द्वारा सब्सट्रेट कॉम्प्लेक्स

The preparation of well diffracting crystals and their handling before their X-ray analysis are two critical steps of biocrystallographic studies. We ...

The Extraction of Liver Glycogen Molecules for Glycogen Structure Determination

Liver glycogen is a hyperbranched glucose polymer that is involved in the maintenance of blood sugar levels in animals. The properties of glycogen are ...

Efficient and Scalable Production of Full-length Human Huntingtin Variants in Mammalian Cells using a Transient Expression System

Full-length huntingtin (FL HTT) is a large (aa 1-3,144), ubiquitously expressed, polyglutamine (polyQ)-containing protein with a mass of approximately 350 ...

High-Throughput Screening for Protein Crystallization

High-Throughput Screening to Obtain Crystal Hits for Protein Crystallography

High-Throughput Screening to Obtain Crystal Hits for Protein Crystallography (Video) | JoVE 

प्रोटीन क्रिस्टलोग्राफी के लिए क्रिस्टल हिट प्राप्त करने के लिए उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग

X-ray crystallography is the most commonly employed technique to discern macromolecular structures, but the crucial step of crystallizing a protein into ...

A Fibrinolytic Enzyme-Based Method to Study Cerebral Thrombus Cell Components

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A Novel Method for Comprehensive Cell Component Analysis of Cerebral Blood Clots (Video) | JoVE

सेरेब्रल रक्त के थक्कों के कोशिका घटकों का विश्लेषण करने के लिए एक व्यापक दृष्टिकोण

Cerebral thrombosis, a blood clot in a cerebral artery or vein, is the most common type of cerebral infarction. The study of the cell components of ...