Name: assessment of dopaminergic homeostasis in mice by use of high-performance liquid chromatography analysis and synaptosomal dopamine uptake
Uploaded: 2017-09-21T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי המצוינות של התוכנית 2016 (U.G., ע. ר, K.J.) UCPH, קרן לונדבק (M.R.) קרן לונדבק המרכז Biomembranes של ננו-רפואה (U.G.), לאומי המכון של בריאות מענקים P01 התובע 12408 (U.G.), הדנית המועצה מחקר עצמאי - מדעי הרפואה (U.G.).

הקווים המנחים של Inspectorate ניסויים הדנית החיה (מספר הרשאה: 2017-15-0201-01160) עקבו וביצע ניסויים במתקן באופן מלא AAALAC מוכר בפיקוחו של רווחת בעלי חיים המקומי ועדת.
 1. דופמין synaptosomal ספיגת (שיטה 1) הערה: פרוטוקול זה עבור הערכה מקבילים של מוחות, אך ניתן להשתמש בהצלחה ביצוע ניסו...

<ol>
	<li>Tritsch, N. X., Sabatini, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+modulation+of+synaptic+transmission+in+cortex+and+striatum.">Dopaminergic modulation of synaptic transmission in cortex and striatum.</a> Neuron. 76, 33-50 (2012).</li><li>Cartier, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biochemical+and+functional+protein+complex+involving+dopamine+synthesis+and+transport+into+synaptic+vesicles.">A biochemical and functional protein complex involving dopamine synthesis and transport into synaptic vesicles.</a> J Biol Chem. 285, 1957-1966 (2010).</li><li>Kristensen, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLC6+neurotransmitter+transporters:+structure,+function,+and+regulation.">SLC6 neurotransmitter transporters: structure, function, and regulation.</a> Pharmacol Rev. 63, 585-640 (2011).</li><li>Gainetdinov, R. R., Caron, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoamine+transporters:+from+genes+to+behavior.">Monoamine transporters: from genes to behavior.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 43, 261-284 (2003).</li><li>Runegaard, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preserved+dopaminergic+homeostasis+and+dopamine-related+behaviour+in+hemizygous+TH-Cre+mice.">Preserved dopaminergic homeostasis and dopamine-related behaviour in hemizygous TH-Cre mice.</a> Eur J Neurosci. 45, 121-128 (2017).</li><li>Whittaker, V. P., Michaelson, I. A., Kirkland, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+separation+of+synaptic+vesicles+from+nerve-ending+particles+('synaptosomes').">The separation of synaptic vesicles from nerve-ending particles ('synaptosomes').</a> Biochem J. 90, 293-303 (1964).</li><li>Hornykiewicz, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+(3-hydroxytyramine)+and+brain+function.">Dopamine (3-hydroxytyramine) and brain function.</a> Pharmacol Rev. 18, 925-964 (1966).</li><li>Schultz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+dopamine+signals.">Behavioral dopamine signals.</a> Trends Neurosci. 30, 203-210 (2007).</li><li>Beaulieu, J. M., Gainetdinov, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+physiology,+signaling,+and+pharmacology+of+dopamine+receptors.">The physiology, signaling, and pharmacology of dopamine receptors.</a> Pharmacol Rev. 63, 182-217 (2011).</li><li>Giros, B., Jaber, M., Jones, S. R., Wightman, R. M., Caron, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperlocomotion+and+indifference+to+cocaine+and+amphetamine+in+mice+lacking+the+dopamine+transporter.">Hyperlocomotion and indifference to cocaine and amphetamine in mice lacking the dopamine transporter.</a> Nature. 379, 606-612 (1996).</li><li>Torres, G. E., Amara, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+and+monoamine+transporters:+new+visions+of+form+and+function.">Glutamate and monoamine transporters: new visions of form and function.</a> Curr Opin Neurobiol. 17, 304-312 (2007).</li><li>Jones, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+neuronal+plasticity+in+response+to+inactivation+of+the+dopamine+transporter.">Profound neuronal plasticity in response to inactivation of the dopamine transporter.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 4029-4034 (1998).</li><li>Gabriel, L. R., Wu, S., Melikian, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+slice+biotinylation:+an+ex+vivo+approach+to+measure+region-specific+plasma+membrane+protein+trafficking+in+adult+neurons.">Brain slice biotinylation: an ex vivo approach to measure region-specific plasma membrane protein trafficking in adult neurons.</a> J Vis Exp. , (2014).</li><li>Rickhag, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C-terminal+PDZ+domain-binding+sequence+is+required+for+striatal+distribution+of+the+dopamine+transporter.">A C-terminal PDZ domain-binding sequence is required for striatal distribution of the dopamine transporter.</a> Nat Commun. 4, 1580 (2013).</li><li>Dunkley, P. R., Jarvie, P. E., Robinson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+Percoll+gradient+procedure+for+preparation+of+synaptosomes.">A rapid Percoll gradient procedure for preparation of synaptosomes.</a> Nat Protoc. 3, 1718-1728 (2008).</li><li>Whittaker, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thirty+years+of+synaptosome+research.">Thirty years of synaptosome research.</a> J Neurocytol. 22, 735-742 (1993).</li><li>Schmitz, Y., Benoit-Marand, M., Gonon, F., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+regulation+of+dopaminergic+neurotransmission.">Presynaptic regulation of dopaminergic neurotransmission.</a> J Neurochem. 87, 273-289 (2003).</li><li>Yang, L., Beal, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+neurotransmitter+levels+in+models+of+Parkinson's+disease+by+HPLC-ECD.">Determination of neurotransmitter levels in models of Parkinson's disease by HPLC-ECD.</a> Methods Mol Biol. 793, 401-415 (2011).</li><li>Earles, C., Schenk, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rotating+disk+electrode+voltammetric+measurements+of+dopamine+transporter+activity:+an+analytical+evaluation.">Rotating disk electrode voltammetric measurements of dopamine transporter activity: an analytical evaluation.</a> Anal Biochem. 264, 191-198 (1998).</li><li>Wu, Q., Reith, M. E., Kuhar, M. J., Carroll, F. I., Garris, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+increases+in+nucleus+accumbens+dopamine+after+systemic+cocaine+administration+are+caused+by+unique+characteristics+of+dopamine+neurotransmission.">Preferential increases in nucleus accumbens dopamine after systemic cocaine administration are caused by unique characteristics of dopamine neurotransmission.</a> J Neurosci. 21, 6338-6347 (2001).</li><li>Schonfuss, D., Reum, T., Olshausen, P., Fischer, T., Morgenstern, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+constant+potential+amperometry+for+investigations+of+dopaminergic+neurotransmission+kinetics+in+vivo.">Modelling constant potential amperometry for investigations of dopaminergic neurotransmission kinetics in vivo.</a> J Neurosci Methods. 112, 163-172 (2001).</li><li>Hoover, B. R., Everett, C. V., Sorkin, A., Zahniser, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+regulation+of+dopamine+transporters+by+tyrosine+kinases+in+rat+neuronal+preparations.">Rapid regulation of dopamine transporters by tyrosine kinases in rat neuronal preparations.</a> J Neurochem. 101, 1258-1271 (2007).</li><li>Hansen, F. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Missense+dopamine+transporter+mutations+associate+with+adult+parkinsonism+and+ADHD.">Missense dopamine transporter mutations associate with adult parkinsonism and ADHD.</a> J Clin Invest. 124, 3107-3120 (2014).</li><li>Damier, P., Hirsch, E. C., Agid, Y., Graybiel, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+substantia+nigra+of+the+human+brain.+II.+Patterns+of+loss+of+dopamine-containing+neurons+in+Parkinson's+disease.">The substantia nigra of the human brain. II. Patterns of loss of dopamine-containing neurons in Parkinson's disease.</a> Brain. 122 (Pt 8), 1437-1448 (1999).</li><li>Atack, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+determination+of+dopamine+by+a+modification+of+the+dihydroxyindole+fluorimetric+assay.">The determination of dopamine by a modification of the dihydroxyindole fluorimetric assay.</a> Br J Pharmacol. 48, 699-714 (1973).</li><li>Yoshitake, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-sensitive+liquid+chromatographic+method+for+determination+of+neuronal+release+of+serotonin,+noradrenaline+and+dopamine+monitored+by+microdialysis+in+the+rat+prefrontal+cortex.">High-sensitive liquid chromatographic method for determination of neuronal release of serotonin, noradrenaline and dopamine monitored by microdialysis in the rat prefrontal cortex.</a> J Neurosci Methods. 140, 163-168 (2004).</li><li>Decressac, M., Mattsson, B., Lundblad, M., Weikop, P., Bjorklund, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+neurodegenerative+and+behavioural+changes+induced+by+AAV-mediated+overexpression+of+alpha-synuclein+in+midbrain+dopamine+neurons.">Progressive neurodegenerative and behavioural changes induced by AAV-mediated overexpression of alpha-synuclein in midbrain dopamine neurons.</a> Neurobiol Dis. 45, 939-953 (2012).</li><li>Huot, P., Johnston, T. H., Koprich, J. B., Fox, S. H., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-DOPA+pharmacokinetics+in+the+MPTP-lesioned+macaque+model+of+Parkinson's+disease.">L-DOPA pharmacokinetics in the MPTP-lesioned macaque model of Parkinson's disease.</a> Neuropharmacology. 63, 829-836 (2012).</li><li>Mikkelsen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MPTP-induced+Parkinsonism+in+minipigs:+A+behavioral,+biochemical,+and+histological+study.">MPTP-induced Parkinsonism in minipigs: A behavioral, biochemical, and histological study.</a> Neurotoxicol Teratol. 21, 169-175 (1999).</li><li>Salvatore, M. F., Pruett, B. S., Dempsey, C., Fields, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+profiling+of+dopamine+regulation+in+substantia+nigra+and+ventral+tegmental+area.">Comprehensive profiling of dopamine regulation in substantia nigra and ventral tegmental area.</a> J Vis Exp. , (2012).</li><li>Van Dam, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+distribution+of+biogenic+amines,+amino+acids+and+cholinergic+markers+in+the+CNS+of+the+C57BL/6+strain.">Regional distribution of biogenic amines, amino acids and cholinergic markers in the CNS of the C57BL/6 strain.</a> Amino Acids. 28, 377-387 (2005).</li><li>Barth, C., Villringer, A., Sacher, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+hormones+affect+neurotransmitters+and+shape+the+adult+female+brain+during+hormonal+transition+periods.">Sex hormones affect neurotransmitters and shape the adult female brain during hormonal transition periods.</a> Front Neurosci. 9 (37), (2015).</li><li>Corthell, J. T., Stathopoulos, A. M., Watson, C. C., Bertram, R., Trombley, P. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+bulb+monoamine+concentrations+vary+with+time+of+day.">Olfactory bulb monoamine concentrations vary with time of day.</a> Neuroscience. 247, 234-241 (2013).</li><li>Zhuang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperactivity+and+impaired+response+habituation+in+hyperdopaminergic+mice.">Hyperactivity and impaired response habituation in hyperdopaminergic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 1982-1987 (2001).</li><li>Ungerstedt, U., Pycock, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+correlates+of+dopamine+neurotransmission.">Functional correlates of dopamine neurotransmission.</a> Bull Schweiz Akad Med Wiss. 30, 44-55 (1974).</li><li>Wickham, R. J., Park, J., Nunes, E. J., Addy, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examination+of+Rapid+Dopamine+Dynamics+with+Fast+Scan+Cyclic+Voltammetry+During+Intra-oral+Tastant+Administration+in+Awake+Rats.">Examination of Rapid Dopamine Dynamics with Fast Scan Cyclic Voltammetry During Intra-oral Tastant Administration in Awake Rats.</a> J Vis Exp. , e52468 (2015).</li><li>Phillips, P. E., Robinson, D. L., Stuber, G. D., Carelli, R. M., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+measurements+of+phasic+changes+in+extracellular+dopamine+concentration+in+freely+moving+rats+by+fast-scan+cyclic+voltammetry.">Real-time measurements of phasic changes in extracellular dopamine concentration in freely moving rats by fast-scan cyclic voltammetry.</a> Methods Mol Med. 79, 443-464 (2003).</li><li>Callaghan, P. D., Irvine, R. J., Daws, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+the+in+vivo+dynamics+of+neurotransmitter+release+and+serotonin+uptake+after+acute+para-methoxyamphetamine+and+3,4-methylenedioxymethamphetamine+revealed+by+chronoamperometry.">Differences in the in vivo dynamics of neurotransmitter release and serotonin uptake after acute para-methoxyamphetamine and 3,4-methylenedioxymethamphetamine revealed by chronoamperometry.</a> Neurochem Int. 47, 350-361 (2005).</li></ol>

כתב יד זה מתאר שימושי פרוטוקולים ניסיוני ניסחו DA הומאוסטזיס כל דגם העכבר של בחירה. אנו מספקים פרוטוקולים מפורט עבור מדידת רמות של DA ברקמת המוח של עכברים באמצעות HPLC ספיגת DA synaptosomal כדי להעריך פונקציונלי DA התחבורה באמצעות ידיים למעלה הנהלים, הפרוטוקולים ואת מגבלות עבור ניסוי HPLC ו synaptosomal assay ס...

דופמין (DA) הוא נוירוטרנסמיטור modulatory קריטי עבור התנהגות מוטורית, פרס, התפקוד הקוגניטיבי1,7,8,9. חוסר איזון ב- DA הומאוסטזיס הם מעורבים מספר מחלות מנוטלי כמו הפרעת קשב-קשב, התמכרות לסמים, דיכאון, מחלת פרקינסון1. DA משוחרר מן הנוירון presynaptic לתוך החריץ סינפטית, איפה זה נקשר ומפעילה רצפטורים על קרום קדם ו postsynaptic, ובכך נוסף העברת האות. הרמה דה ב הסינפסה לאחר שחרור במרחב של חנותם נשלטת על ידי DAT3,10. המשגר מרחיק דא מן המרחב חוץ-תאית, ובכך ומקיימת פיזיולוגיים DA רמות3,11. הסרת גנטי של DAT בעכברים גורמת פנוטיפ hyperdopaminergic מאופיין על ידי רמות גבוהות DA סינפטית, דלדול של בריכות DA תאיים ושינויים עמוקה DAergic postsynaptic איתות10,12.
. הנה, שני פרוטוקולים נפרדים מוצגים, שיטה אחת מדד דה רקמות התוכן של אחר כדי להעריך את הפונקציונליות של במבטאו משולבים עם וזמינותו biotinylation פני השטח המתואר על ידי גבריאל ואח13 שתי שיטות אלו מספקים מידע אודות DA תוכני ופונקציונאלי רמות של DAT הערכה יסודית של DA הומאוסטזיס. באמצעות שיטות אלה DA הומאוסטזיס של העכברים הטרנסגניים או מחלת מודלים שונים יכול להיות מאופיין, תיאר. כלים אלו מיושמות, מותאם הן שימוש רגיל במעבדות שלנו. מבחני הנוכחי שמשו לחקור את ההשלכות על הומאוסטזיס DA של שינוי על C-הטרמינל DAT14 ולהבעת Cre recombinase תחת טירוזין hydroxylase (ה) יזם 5.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>COMT inhibitor</td>
			<td>Sigma Aldrich, Germany</td>
			<td>RO-41-0960</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[3H]-Dopamine</td>
			<td>Perkin-Elmer Life Sciences, Boston, MA, USA</td>
			<td>NET67-3001MC</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microfiber filters</td>
			<td>GF/C Whatman, GE Healthcare Life Sciences, Buckinghamshire</td>
			<td>1822-024</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiSafe Scintillation fluid</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>1200-437</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroBeta2</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA Protein Assay kit</td>
			<td>Thermo Scientific Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>H3375</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>S7903</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>S3014</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>P9541</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Merck KGaA</td>
			<td>10043-52-4</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>63065</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic Acid</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>A0278</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>G7021</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pargyline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P-8013</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desipramine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D3900</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dopamine</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>H8502</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cocaine</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>C5776</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain matrix</td>
			<td>ASI instruments</td>
			<td>RBM2000C</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cafano mechanical teflon disrupter</td>
			<td>Buch &#38; Holm</td>
			<td>Discontinued</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol (homogenization)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antec Decade (Amperometric detector)</td>
			<td>Antec, Leiden, The Netherlands</td>
			<td>Discontinued: new model DECADE Elite / Lite&#8482; Electrochemical Detector type 175 and 176</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avantec 0.22 &#956;m glass filter</td>
			<td>Frisenette ApS, Denmark</td>
			<td>13CP020AS</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Column: Prodigy 3 &#956; ODS-3 C18</td>
			<td>Phenomenex, YMC Europe, Chermbeck, Germany</td>
			<td>Part Number:00A-3300-E0</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC solution software</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>LabSolutions Series Workstation</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perchlor acid 0.1M</td>
			<td>Fluka Analytical</td>
			<td>35418-500ml</td>
			<td>For HPLC protocol (Tissue preparation)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E5134-50g</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Natriumdihydrogenphosphar</td>
			<td>Bie&#38;Berntsen</td>
			<td>1.06346 1000g</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium 1-octanesulfonate monohydrate</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>74885 -10g</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile, isocratic HPLC grade</td>
			<td>Scharlau</td>
			<td>AC03402500</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filtre 0.22um</td>
			<td>Frisenette ApS, Denmark</td>
			<td>Avantec 13CP020AS</td>
			<td>For HPLC protocol (Tissue preparation)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ortho-Phosphoric acid 85%</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.00563. 1000ml</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode</td>
			<td>Antec, Leiden, The Netherlands</td>
			<td>AN1161300</td>
			<td>For HPLC protocol (see manual online)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Detector program on DECADE II electrochemical detector</td>
			<td>Antec, Leiden, The Netherlands</td>
			<td>Lite&#8482; Electrochemical Detector type 175 and 176</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of dopaminergic homeostasis in mice by use of high-performance liquid chromatography analysis and synaptosomal dopamine uptake

דופמין (DA) הוא נוירוטרנסמיטור modulatory שליטה פעילות מוטורית, תהליכים גמול ועל התפקוד הקוגניטיבי. ירידת ערך של דופאמין (DAergic) עצבית הוא קשור מאוד עם מספר מחלות הקשורות במערכת העצבים המרכזית כגון מחלת פרקינסון, תשומת לב-קשב-היפראקטיביות וסמים התמכרות1,2 3, ,4. בהתוויית מנגנוני המחלה מעורבים דה איזון תלויה באופן ביקורתי מודלים בעלי חיים כדי לחקות את ההיבטים של המחלות, ובכך פרוטוקולים של להעריך חלקים ספציפיים של הומאוסטזיס DA חשובים לספק תובנות הרומן האפשר טיפולית מטרות עבור מחלות אלו.
כאן, אנו מציגים שני פרוטוקולים ניסיוני שימושי זה בשילוב לספק read-out תפקודית של מערכת DAergic בעכברים. פרמטרים ביוכימיים ופונקציונליים על הומאוסטזיס DA מתקבלים באמצעות הערכה של DA רמות דופמין טרנספורטר (. DAT) פונקציונליות5. כאשר חוקרים את מערכת DA, היכולת למדוד באופן מהימן רמות אנדוגני של DA מהמוח למבוגרים הוא חיוני. לכן, אנו מציגים כיצד לבצע ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC) על רקמת המוח של עכברים כדי לקבוע רמות של המחוזי. אנו מבצעים את הניסוי על רקמות הגבי סטריאטום (dStr), גרעין האקומבנס (NAc), אך השיטה מתאים גם באזורים אחרים במוח דה-innervated.
DAT הוא חיוני עבור ספיגה חוזרת של DA בטרמינל presynaptic, ובכך שולט הפעילות הגיאופוליטיות והמרחביות הטמפורלי של המחוזי שפורסמו לדעת את רמות והפונקציונליות של DAT ב סטריאטום זה חשיבות רבה בעת הערכת DA הומאוסטזיס. כאן, אנו מספקים פרוטוקול המאפשר להסיק מידע על פני רמות ותפקוד שימוש assay ספיגת של synaptosomal6 DA בו זמנית.
שיטות בשילוב עם פרוטוקולים סטנדרטיים immunoblotting מספקים החוקר עם כלים רלוונטיים כדי לאפיין את המערכת DAergic.

הפרוטוקול ספיגת DA הנוכחי (איור 1) כולל את כל הצעדים הדרושים כדי להעריך את הפונקציונליות של DAT ב synaptosomes של עכברים. הנתונים שלנו נציג של השיטה ספיגת DA (איור 2) מתארת עקומה רוויה עם נתונים מקוריים (איור 2B) וסידר נתונים (<strong class="xfig"...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake at JoVE.com

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

הערכה של דופאמין הומאוסטזיס בעכברים באמצעות ניתוח ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית, דופמין Synaptosomal ספיגת

ספיגת דופמין synaptosomal ו כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים ניתוח מייצגים ניסוי כלים לחקור דופמין הומאוסטזיס בעכברים על-ידי הערכת את הפונקציה של המשגר דופמין, רמות הדופמין ברקמת striatal, בהתאמה. כאן אנו מציגים פרוטוקולים למדוד דופמין רקמות תוכן, להעריך את הפונקציונליות של המשגר דופמין.

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assessment of Motor Balance and Coordination in Mice using the Balance Beam

הערכת מאזן מוטורי ותיאום עכברים באמצעות קרן איזון

Brain injury, genetic manipulations, and pharmacological treatments can result in alterations of motor skills in mice.  Fine motor coordination and ...

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

T-מבוך לסירוגין בכפייה של שמאל וימין משימות אפליה להערכת עבודה וזיכרון העזר עכברים

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

עכבר לשחזור Sciatic עצב קראש והערכה לאחר ההתחדשות של ניתוח הר שלם שריר

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

הערכת פנוטיפים ניווניות ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; נוירונים דופאמין על ידי מבחני לאז וimmunostaining מוח כל

Drosophila melanogaster is a valuable model organism to study aging and pathological degenerative processes in the nervous system. The advantages of the ...

A High Content Imaging Assay for Identification of Botulinum Neurotoxin Inhibitors

Assay הדמיה תוכן גבוה לזיהוי של טוקסין עצבי המעכבים

Synaptosomal-associated protein-25 (SNAP-25) is a component of the soluble NSF attachment protein receptor (SNARE) complex that is essential for synaptic ...

Environmental Modulations of the Number of Midbrain Dopamine Neurons in Adult Mice

אפנון סביבתי של מספר המוח התיכון דופמין נוירונים בעכברים בוגרים

Long-lasting changes in the brain or &#8216;brain plasticity&#8217; underlie adaptive behavior and brain repair following disease or injury. Furthermore, ...

Assessment of Dendritic Arborization in the Dentate Gyrus of the Hippocampal Region in Mice

הערכה של דנדריטים arborization ברכס המשונן של האזור בהיפוקמפוס של עכברים

Dendritic arborization has been shown to be a reliable marker for examination of structural and functional integrity of neurons. Indeed, the complexity ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

זיהוי של דופמין קולטן D1-אלפא בתוך מכרסמים גרעין האקומבנס על ידי טכנולוגיה חדשנית RNA בחיי עיר זיהוי

In the central nervous system, the D1-alpha subtype receptor (Drd1&#945;) is the most abundant dopamine (DA) receptor, which plays a vital role in ...

Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice

בודד סינפסה אינדיקטורים של גלוטמט שחרור ספיגה בפרוסות המוח חריפה מעכברים נורמלי הנטינגטון

Synapses are highly compartmentalized functional units that operate independently on each other. In Huntington&#39;s disease (HD) and other ...

Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis

קביעה כמותית למחצה של צפיפות נוירון דופאמין בסבסטנציה ניגרה של מודלים מכרסמים באמצעות ניתוח תמונה אוטומטי

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased ...