Name: assessment of dopaminergic homeostasis in mice by use of high-performance liquid chromatography analysis and synaptosomal dopamine uptake
Uploaded: 2017-09-21T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake at JoVE.com

이 작품은 UCPH 2016 프로그램의 우수성 (U.G., 아칸소, 대리)에 의해 지원 되었다, Lundbeck 재단 (M.R.) Lundbeck 재단 센터 Biomembranes에서 Nanomedicine (U.G.), 국립 연구소의 건강 보조금 P01 DA 12408 (U.G.), 덴마크 독립적인 연구-의료 과학 (U.G.)를 위한 위원회.

덴마크 동물 실험 검사자의 지침 (허가 번호: 2017-15-0201-01160) 그 뒤를 이었다는 로컬 동물 복지의 감독 하에 완전히 AAALAC 공인 시설에서 실험 수행 위원회.
 1. synaptosomal 도파민 글귀 (방법 1) 참고:이 프로토콜 두 두뇌의 병렬 평가 하지만에서 4 개의 두뇌를 가진 synaptosomal 다 이해 실험 수행을 성공적으로 사용 될 수 있습니다 병렬.
<li><ol>준비</strong...

<ol>
	<li>Tritsch, N. X., Sabatini, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+modulation+of+synaptic+transmission+in+cortex+and+striatum.">Dopaminergic modulation of synaptic transmission in cortex and striatum.</a> Neuron. 76, 33-50 (2012).</li><li>Cartier, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biochemical+and+functional+protein+complex+involving+dopamine+synthesis+and+transport+into+synaptic+vesicles.">A biochemical and functional protein complex involving dopamine synthesis and transport into synaptic vesicles.</a> J Biol Chem. 285, 1957-1966 (2010).</li><li>Kristensen, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLC6+neurotransmitter+transporters:+structure,+function,+and+regulation.">SLC6 neurotransmitter transporters: structure, function, and regulation.</a> Pharmacol Rev. 63, 585-640 (2011).</li><li>Gainetdinov, R. R., Caron, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoamine+transporters:+from+genes+to+behavior.">Monoamine transporters: from genes to behavior.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 43, 261-284 (2003).</li><li>Runegaard, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preserved+dopaminergic+homeostasis+and+dopamine-related+behaviour+in+hemizygous+TH-Cre+mice.">Preserved dopaminergic homeostasis and dopamine-related behaviour in hemizygous TH-Cre mice.</a> Eur J Neurosci. 45, 121-128 (2017).</li><li>Whittaker, V. P., Michaelson, I. A., Kirkland, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+separation+of+synaptic+vesicles+from+nerve-ending+particles+('synaptosomes').">The separation of synaptic vesicles from nerve-ending particles ('synaptosomes').</a> Biochem J. 90, 293-303 (1964).</li><li>Hornykiewicz, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+(3-hydroxytyramine)+and+brain+function.">Dopamine (3-hydroxytyramine) and brain function.</a> Pharmacol Rev. 18, 925-964 (1966).</li><li>Schultz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+dopamine+signals.">Behavioral dopamine signals.</a> Trends Neurosci. 30, 203-210 (2007).</li><li>Beaulieu, J. M., Gainetdinov, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+physiology,+signaling,+and+pharmacology+of+dopamine+receptors.">The physiology, signaling, and pharmacology of dopamine receptors.</a> Pharmacol Rev. 63, 182-217 (2011).</li><li>Giros, B., Jaber, M., Jones, S. R., Wightman, R. M., Caron, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperlocomotion+and+indifference+to+cocaine+and+amphetamine+in+mice+lacking+the+dopamine+transporter.">Hyperlocomotion and indifference to cocaine and amphetamine in mice lacking the dopamine transporter.</a> Nature. 379, 606-612 (1996).</li><li>Torres, G. E., Amara, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+and+monoamine+transporters:+new+visions+of+form+and+function.">Glutamate and monoamine transporters: new visions of form and function.</a> Curr Opin Neurobiol. 17, 304-312 (2007).</li><li>Jones, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+neuronal+plasticity+in+response+to+inactivation+of+the+dopamine+transporter.">Profound neuronal plasticity in response to inactivation of the dopamine transporter.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 4029-4034 (1998).</li><li>Gabriel, L. R., Wu, S., Melikian, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+slice+biotinylation:+an+ex+vivo+approach+to+measure+region-specific+plasma+membrane+protein+trafficking+in+adult+neurons.">Brain slice biotinylation: an ex vivo approach to measure region-specific plasma membrane protein trafficking in adult neurons.</a> J Vis Exp. , (2014).</li><li>Rickhag, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C-terminal+PDZ+domain-binding+sequence+is+required+for+striatal+distribution+of+the+dopamine+transporter.">A C-terminal PDZ domain-binding sequence is required for striatal distribution of the dopamine transporter.</a> Nat Commun. 4, 1580 (2013).</li><li>Dunkley, P. R., Jarvie, P. E., Robinson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+Percoll+gradient+procedure+for+preparation+of+synaptosomes.">A rapid Percoll gradient procedure for preparation of synaptosomes.</a> Nat Protoc. 3, 1718-1728 (2008).</li><li>Whittaker, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thirty+years+of+synaptosome+research.">Thirty years of synaptosome research.</a> J Neurocytol. 22, 735-742 (1993).</li><li>Schmitz, Y., Benoit-Marand, M., Gonon, F., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+regulation+of+dopaminergic+neurotransmission.">Presynaptic regulation of dopaminergic neurotransmission.</a> J Neurochem. 87, 273-289 (2003).</li><li>Yang, L., Beal, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+neurotransmitter+levels+in+models+of+Parkinson's+disease+by+HPLC-ECD.">Determination of neurotransmitter levels in models of Parkinson's disease by HPLC-ECD.</a> Methods Mol Biol. 793, 401-415 (2011).</li><li>Earles, C., Schenk, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rotating+disk+electrode+voltammetric+measurements+of+dopamine+transporter+activity:+an+analytical+evaluation.">Rotating disk electrode voltammetric measurements of dopamine transporter activity: an analytical evaluation.</a> Anal Biochem. 264, 191-198 (1998).</li><li>Wu, Q., Reith, M. E., Kuhar, M. J., Carroll, F. I., Garris, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+increases+in+nucleus+accumbens+dopamine+after+systemic+cocaine+administration+are+caused+by+unique+characteristics+of+dopamine+neurotransmission.">Preferential increases in nucleus accumbens dopamine after systemic cocaine administration are caused by unique characteristics of dopamine neurotransmission.</a> J Neurosci. 21, 6338-6347 (2001).</li><li>Schonfuss, D., Reum, T., Olshausen, P., Fischer, T., Morgenstern, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+constant+potential+amperometry+for+investigations+of+dopaminergic+neurotransmission+kinetics+in+vivo.">Modelling constant potential amperometry for investigations of dopaminergic neurotransmission kinetics in vivo.</a> J Neurosci Methods. 112, 163-172 (2001).</li><li>Hoover, B. R., Everett, C. V., Sorkin, A., Zahniser, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+regulation+of+dopamine+transporters+by+tyrosine+kinases+in+rat+neuronal+preparations.">Rapid regulation of dopamine transporters by tyrosine kinases in rat neuronal preparations.</a> J Neurochem. 101, 1258-1271 (2007).</li><li>Hansen, F. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Missense+dopamine+transporter+mutations+associate+with+adult+parkinsonism+and+ADHD.">Missense dopamine transporter mutations associate with adult parkinsonism and ADHD.</a> J Clin Invest. 124, 3107-3120 (2014).</li><li>Damier, P., Hirsch, E. C., Agid, Y., Graybiel, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+substantia+nigra+of+the+human+brain.+II.+Patterns+of+loss+of+dopamine-containing+neurons+in+Parkinson's+disease.">The substantia nigra of the human brain. II. Patterns of loss of dopamine-containing neurons in Parkinson's disease.</a> Brain. 122 (Pt 8), 1437-1448 (1999).</li><li>Atack, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+determination+of+dopamine+by+a+modification+of+the+dihydroxyindole+fluorimetric+assay.">The determination of dopamine by a modification of the dihydroxyindole fluorimetric assay.</a> Br J Pharmacol. 48, 699-714 (1973).</li><li>Yoshitake, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-sensitive+liquid+chromatographic+method+for+determination+of+neuronal+release+of+serotonin,+noradrenaline+and+dopamine+monitored+by+microdialysis+in+the+rat+prefrontal+cortex.">High-sensitive liquid chromatographic method for determination of neuronal release of serotonin, noradrenaline and dopamine monitored by microdialysis in the rat prefrontal cortex.</a> J Neurosci Methods. 140, 163-168 (2004).</li><li>Decressac, M., Mattsson, B., Lundblad, M., Weikop, P., Bjorklund, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+neurodegenerative+and+behavioural+changes+induced+by+AAV-mediated+overexpression+of+alpha-synuclein+in+midbrain+dopamine+neurons.">Progressive neurodegenerative and behavioural changes induced by AAV-mediated overexpression of alpha-synuclein in midbrain dopamine neurons.</a> Neurobiol Dis. 45, 939-953 (2012).</li><li>Huot, P., Johnston, T. H., Koprich, J. B., Fox, S. H., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-DOPA+pharmacokinetics+in+the+MPTP-lesioned+macaque+model+of+Parkinson's+disease.">L-DOPA pharmacokinetics in the MPTP-lesioned macaque model of Parkinson's disease.</a> Neuropharmacology. 63, 829-836 (2012).</li><li>Mikkelsen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MPTP-induced+Parkinsonism+in+minipigs:+A+behavioral,+biochemical,+and+histological+study.">MPTP-induced Parkinsonism in minipigs: A behavioral, biochemical, and histological study.</a> Neurotoxicol Teratol. 21, 169-175 (1999).</li><li>Salvatore, M. F., Pruett, B. S., Dempsey, C., Fields, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+profiling+of+dopamine+regulation+in+substantia+nigra+and+ventral+tegmental+area.">Comprehensive profiling of dopamine regulation in substantia nigra and ventral tegmental area.</a> J Vis Exp. , (2012).</li><li>Van Dam, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+distribution+of+biogenic+amines,+amino+acids+and+cholinergic+markers+in+the+CNS+of+the+C57BL/6+strain.">Regional distribution of biogenic amines, amino acids and cholinergic markers in the CNS of the C57BL/6 strain.</a> Amino Acids. 28, 377-387 (2005).</li><li>Barth, C., Villringer, A., Sacher, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+hormones+affect+neurotransmitters+and+shape+the+adult+female+brain+during+hormonal+transition+periods.">Sex hormones affect neurotransmitters and shape the adult female brain during hormonal transition periods.</a> Front Neurosci. 9 (37), (2015).</li><li>Corthell, J. T., Stathopoulos, A. M., Watson, C. C., Bertram, R., Trombley, P. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+bulb+monoamine+concentrations+vary+with+time+of+day.">Olfactory bulb monoamine concentrations vary with time of day.</a> Neuroscience. 247, 234-241 (2013).</li><li>Zhuang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperactivity+and+impaired+response+habituation+in+hyperdopaminergic+mice.">Hyperactivity and impaired response habituation in hyperdopaminergic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 1982-1987 (2001).</li><li>Ungerstedt, U., Pycock, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+correlates+of+dopamine+neurotransmission.">Functional correlates of dopamine neurotransmission.</a> Bull Schweiz Akad Med Wiss. 30, 44-55 (1974).</li><li>Wickham, R. J., Park, J., Nunes, E. J., Addy, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examination+of+Rapid+Dopamine+Dynamics+with+Fast+Scan+Cyclic+Voltammetry+During+Intra-oral+Tastant+Administration+in+Awake+Rats.">Examination of Rapid Dopamine Dynamics with Fast Scan Cyclic Voltammetry During Intra-oral Tastant Administration in Awake Rats.</a> J Vis Exp. , e52468 (2015).</li><li>Phillips, P. E., Robinson, D. L., Stuber, G. D., Carelli, R. M., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+measurements+of+phasic+changes+in+extracellular+dopamine+concentration+in+freely+moving+rats+by+fast-scan+cyclic+voltammetry.">Real-time measurements of phasic changes in extracellular dopamine concentration in freely moving rats by fast-scan cyclic voltammetry.</a> Methods Mol Med. 79, 443-464 (2003).</li><li>Callaghan, P. D., Irvine, R. J., Daws, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+the+in+vivo+dynamics+of+neurotransmitter+release+and+serotonin+uptake+after+acute+para-methoxyamphetamine+and+3,4-methylenedioxymethamphetamine+revealed+by+chronoamperometry.">Differences in the in vivo dynamics of neurotransmitter release and serotonin uptake after acute para-methoxyamphetamine and 3,4-methylenedioxymethamphetamine revealed by chronoamperometry.</a> Neurochem Int. 47, 350-361 (2005).</li></ol>

이 원고는 선택의 어떤 마우스 모델에서 다 항상성 윤곽을 그리 다 유용한 실험 프로토콜을 설명 합니다. DAT. 통해 다 전송 기능을 평가 하기 위해 HPLC 및 synaptosomal 다 이해를 사용 하 여 쥐에서 뇌 조직에서 다의 측정 수준에 대 한 자세한 프로토콜 제공 절차, 프로토콜 및 HPLC 실험 synaptosomal 다 이해 분석 결과 대 한 제한 아래 정교 합니다.
Synaptosomal 통풍 관 프로토콜 표면 bioti...

도파민 (DA) modulatory 모터 행동, 보상 및 인지 기능1,7,,89에 대 한 중요 한 신경 이다. 다 항상성 불균형 주의-결핍 과잉 행동 장애, 약물 중독, 우울증과 파 킨 슨 병1등 여러 가지 정신병 질병에 연루 된다. 다 연 접 신경에서 시 냅 스 갈라진 틈, 어디 그것에 바인딩하고 사전 및 postsynaptic 막에 수용 체를 활성화에 신호를 전달 하는 그로 인하여 더 발표입니다. 출시 후 시 냅 스에 다의 수준은 공간적으로 일시적으로 제어 DAT3,10. 전송 sequesters 세포 외 공간에서 다 하 고 따라서 생리 다 레벨3,11을 격려. 쥐에 있는 DAT의 유전 제거는 hyperdopaminergic 형 수준에 의해 상승 된 시 냅 스 다, 특징 고갈의 세포내 다 풀 심오한 postsynaptic DAergic10,12신호 발생 합니다.
여기, 두 개의 별도 프로토콜 제시, 측정 다 조직 콘텐츠 및 가브리엘 외.13 에 의해 설명 된 표면 biotinylation 분석 결과 함께 결합 된 DAT.의 기능을 평가 하기 위해 또 다른 한 가지 방법은이 두 가지 방법 다에 정보를 제공 콘텐츠 및 기능 수준 DAT의 다 항상성의 철저 한 평가 대 한. 이러한 방법으로 다양 한 유전자 변형 쥐 또는 질병 모델의 다 항상성 특징 고 설명 될 수 있습니다. 이러한 도구 구현 및 최적화 된 우리의 실험실에서 표준 사용. 현재 분석 실험의 DAT14 의 C-터미널 변경 또는 티로신 hydroxylase (TH) 발기인 5아래 Cre recombinase 표현 다 항상성에 결과 조사 하 봉사 했다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>COMT inhibitor</td>
			<td>Sigma Aldrich, Germany</td>
			<td>RO-41-0960</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[3H]-Dopamine</td>
			<td>Perkin-Elmer Life Sciences, Boston, MA, USA</td>
			<td>NET67-3001MC</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microfiber filters</td>
			<td>GF/C Whatman, GE Healthcare Life Sciences, Buckinghamshire</td>
			<td>1822-024</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiSafe Scintillation fluid</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>1200-437</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroBeta2</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA Protein Assay kit</td>
			<td>Thermo Scientific Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>H3375</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>S7903</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>S3014</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>P9541</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Merck KGaA</td>
			<td>10043-52-4</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>63065</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic Acid</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>A0278</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>G7021</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pargyline</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P-8013</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Desipramine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D3900</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dopamine</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>H8502</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cocaine</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>C5776</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain matrix</td>
			<td>ASI instruments</td>
			<td>RBM2000C</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cafano mechanical teflon disrupter</td>
			<td>Buch &#38; Holm</td>
			<td>Discontinued</td>
			<td>For synaptosomal DA uptake protocol (homogenization)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antec Decade (Amperometric detector)</td>
			<td>Antec, Leiden, The Netherlands</td>
			<td>Discontinued: new model DECADE Elite / Lite&#8482; Electrochemical Detector type 175 and 176</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avantec 0.22 &#956;m glass filter</td>
			<td>Frisenette ApS, Denmark</td>
			<td>13CP020AS</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Column: Prodigy 3 &#956; ODS-3 C18</td>
			<td>Phenomenex, YMC Europe, Chermbeck, Germany</td>
			<td>Part Number:00A-3300-E0</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC solution software</td>
			<td>Shimadzu</td>
			<td>LabSolutions Series Workstation</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perchlor acid 0.1M</td>
			<td>Fluka Analytical</td>
			<td>35418-500ml</td>
			<td>For HPLC protocol (Tissue preparation)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E5134-50g</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Natriumdihydrogenphosphar</td>
			<td>Bie&#38;Berntsen</td>
			<td>1.06346 1000g</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium 1-octanesulfonate monohydrate</td>
			<td>Aldrich</td>
			<td>74885 -10g</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile, isocratic HPLC grade</td>
			<td>Scharlau</td>
			<td>AC03402500</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filtre 0.22um</td>
			<td>Frisenette ApS, Denmark</td>
			<td>Avantec 13CP020AS</td>
			<td>For HPLC protocol (Tissue preparation)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ortho-Phosphoric acid 85%</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.00563. 1000ml</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode</td>
			<td>Antec, Leiden, The Netherlands</td>
			<td>AN1161300</td>
			<td>For HPLC protocol (see manual online)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Detector program on DECADE II electrochemical detector</td>
			<td>Antec, Leiden, The Netherlands</td>
			<td>Lite&#8482; Electrochemical Detector type 175 and 176</td>
			<td>For HPLC protocol</td>
		</tr>
	</tbody>
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assessment of dopaminergic homeostasis in mice by use of high-performance liquid chromatography analysis and synaptosomal dopamine uptake

도파민 (DA) 모터 활동, 보상 프로세스 및 인지 기능 modulatory 신경 전달 물질 이다. (DAergic) dopaminergic neurotransmission의 장애는 파 킨 슨 병, 주의 결핍 과잉 행동 장애, 약물 중독1,2 등 여러 중앙 신경 관련 질병에 강하게 연관 ,,34. 다 불균형과 관련 된 질병 메커니즘을 묘사 동물 모델 모방은 질병의 측면을 비판적으로 의존 이며 따라서 다 항상성의 특정 부분을 평가 하는 프로토콜 소설 통찰력 및 가능한 치료를 제공 하는 것이 중요 이 질병의 대상
여기, 선물이 두 유용한 실험 프로토콜을 결합 하는 때 쥐에 DAergic 시스템의 기능 읽기 제공. 생 화 학적 및 기능 매개 변수 다 항상성에 다 수준 및 도파민 운송업 자 (DAT) 기능5의 평가 통해 얻을 수 있습니다. 다 시스템을 조사할 때 안정적으로 성인 두뇌에서 다의 내 생 레벨을 측정 하는 능력은 필수적입니다. 따라서,에 우리가 현재 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 수행 하는 방법을 뇌 조직 검사의 수준을 결정 하는 마우스에서 우리 지가 (dStr) 및 핵 accumbens (NAc), 조직에는 실험을 수행 하지만 방법은 다른 다 innervated 뇌 영역에 대 한 적합도.
출시 검사의 시간적 및 공간적 활동 제어할 DAT 연 접 맨끝에 다의 재흡수를 위해 근본적 이다 레벨과가에서 DAT의 기능을 알면 다 항상성 평가할 때 주요 중요성의 이다. 여기, 우리는 동시에 표면 수준 및 synaptosomal6 다 이해 분석 결과 사용 하 여 함수에 대 한 정보를 추론할 수 있는 프로토콜을 제공 합니다.
표준 immunoblotting 프로토콜와 결합 하는 현재 메서드 DAergic 시스템 특성 관련 도구와 연구원을 제공 합니다.

현재 다 글귀 프로토콜 (그림 1) DAT의 쥐에서 synaptosomes의 기능을 평가 하는 데 필요한 모든 단계를 포함 합니다. 다 이해 방법 (그림 2)의 대표적인 데이터 조정 되지 않은 데이터 (그림 2B)와 함께 포화 곡선을 묘사 하 고 데이터 (그림 2A)을 조정. 채도 커브는 야생 타입 마우스에서 통?...

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Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

고성능 액체 크로마토그래피 분석 및 Synaptosomal 도파민 통풍 관의 사용에 의해 쥐에서 Dopaminergic 항상성의 평가

Synaptosomal 도파민 통풍 관 및 고성능 액체 크로마토그래피 분석 대표 실험 도구 마우스에서 도파민 항상성 도파민 운송업 자의 기능과 striatal 조직에서 도파민의 수준을 평가 하 여 조사를 각각. 여기 선물이 도파민 조직 콘텐츠를 측정 하 고 도파민 운송업 자의 기능을 평가 하는 프로토콜.

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assessment of Motor Balance and Coordination in Mice using the Balance Beam

마우스에 모터 밸런스 조정의 평가는 밸런스 빔을 사용하여

Brain injury, genetic manipulations, and pharmacological treatments can result in alterations of motor skills in mice.  Fine motor coordination and ...

연구

신경과학

T-maze Forced Alternation and Left-right Discrimination Tasks for Assessing Working and Reference Memory in Mice

T-미로 강제 교대 및 근무와 마우스의 레퍼런스 메모리를 평가하기위한 왼쪽 오른쪽 차별 작업

Forced alternation and left-right discrimination tasks using the T-maze have been widely used to assess working and reference memory, respectively, in ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

전체 마운트 근육 분석에 의한 재현성 마우스 좌골 신경 크러시와 중생의 후속 평가

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

에 신약 표현형을 평가<em&gt; 초파리</em&gt; 등산 분석 실험에 의한 도파민 뉴런과 뇌 전체의 면역 염색

Drosophila melanogaster is a valuable model organism to study aging and pathological degenerative processes in the nervous system. The advantages of the ...

A High Content Imaging Assay for Identification of Botulinum Neurotoxin Inhibitors

보툴리눔 신경독 억제제의 식별을 위해 높은 콘텐츠 이미징 분석

Synaptosomal-associated protein-25 (SNAP-25) is a component of the soluble NSF attachment protein receptor (SNARE) complex that is essential for synaptic ...

Environmental Modulations of the Number of Midbrain Dopamine Neurons in Adult Mice

성인 마우스의 중간 뇌 도파민 뉴런의 수의 환경 변조

Long-lasting changes in the brain or &#8216;brain plasticity&#8217; underlie adaptive behavior and brain repair following disease or injury. Furthermore, ...

Assessment of Dendritic Arborization in the Dentate Gyrus of the Hippocampal Region in Mice

쥐의 해마 영역의 치아 이랑 (dentate gyrus)에서 수지상 Arborization의 평가

Dendritic arborization has been shown to be a reliable marker for examination of structural and functional integrity of neurons. Indeed, the complexity ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

탐지 기술 현장에서 혁신적인 RNA에 의해 설치류 핵 Accumbens에서 도파민 D1-알파 수용 체의 식별

In the central nervous system, the D1-alpha subtype receptor (Drd1&#945;) is the most abundant dopamine (DA) receptor, which plays a vital role in ...

Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice

정상 및 헌팅턴 마우스의 급성 뇌 슬라이스에서 글루타메이트 방출 및 섭취량의 단일 시냅스 지표

Synapses are highly compartmentalized functional units that operate independently on each other. In Huntington&#39;s disease (HD) and other ...

Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis

자동 이미지 분석을 사용하여 설치류 모델의 실질적인 Nigra에서 도파민성 뉴런 밀도의 반정량 측정

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased ...