Name: characterizing cell migration within three-dimensional in vitro wound environments
Uploaded: 2017-08-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments at JoVE.com

קרנות לעבודה זו סופקה באמצעות איגוד הלב האמריקני (16SDG29870005), מחקר אוניברסיטת מדינת צפון קרוליינה, חדשנות זרע מימון.

1-יום 1: תא והכנות ריאגנט הערה: הכנה התא ואת ריאגנט יש לבצעו בבטיחות הביולוגי הקבינט למניעת זיהום של דגימות.
<ol><li>חמים מסונן Dulbecco &#39; s נשר שונה &#39; s בינוני (DMEM), סרום שור עוברית (FBS),-גלוטמין ו פניצילין/סטרפטומיצין באמבט מים 37 ° C.</li>
	<li>הכן מדיה neonatal פיברובלסט עורי אנושי (HDFn) על יד...

<ol>
	<li>Chester, D., Brown, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+biophysical+properties+of+provisional+matrix+proteins+in+wound+repair.">The role of biophysical properties of provisional matrix proteins in wound repair.</a> Matrix Biol. , (2016).</li><li>Martin, P., Leibovich, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+during+wound+repair:+the+good,+the+bad+and+the+ugly.">Inflammatory cells during wound repair: the good, the bad and the ugly.</a> Trends in Cell Biology. 15 (11), 599-607 (2005).</li><li>Lin, B., Yin, T., Wu, Y. I., Inoue, T., Levchenko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplay+between+chemotaxis+and+contact+inhibition+of+locomotion+determines+exploratory+cell+migration.">Interplay between chemotaxis and contact inhibition of locomotion determines exploratory cell migration.</a> Nat Commun. 6, 6619 (2015).</li><li>Ngalim, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creating+Adhesive+and+Soluble+Gradients+for+Imaging+Cell+Migration+with+Fluorescence+Microscopy.">Creating Adhesive and Soluble Gradients for Imaging Cell Migration with Fluorescence Microscopy.</a> J Vis Exp. (74), (2013).</li><li>Charras, G., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+influences+of+the+extracellular+environment+on+cell+migration.">Physical influences of the extracellular environment on cell migration.</a> Nat Rev. Mol Cell Biol. 15 (12), 813-824 (2014).</li><li>Petrie, R. J., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+Lead+the+Way:+A+Unified+View+of+3D+Cell+Motility.">Fibroblasts Lead the Way: A Unified View of 3D Cell Motility.</a> Trends Cell Biol. 25 (11), 666-674 (2015).</li><li>Petrie, R. J., Gavara, N., Chadwick, R. S., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonpolarized+signaling+reveals+two+distinct+modes+of+3D+cell+migration.">Nonpolarized signaling reveals two distinct modes of 3D cell migration.</a> J Cell Biol. 197 (3), 439-455 (2012).</li><li>Carlson, M. W., Dong, S., Garlick, J. A., Egles, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-Engineered+Models+for+the+Study+of+Cutaneous+Wound-Healing.">Tissue-Engineered Models for the Study of Cutaneous Wound-Healing.</a> Bioengineering Research of Chronic Wounds. , 263-280 (2009).</li><li>Doyle, A. D., Wang, F. W., Matsumoto, K., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-dimensional+topography+underlies+three-dimensional+fibrillar+cell+migration.">One-dimensional topography underlies three-dimensional fibrillar cell migration.</a> J Cell Bio. 184 (4), 481-490 (2009).</li><li>Fraley, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+distinctive+role+for+focal+adhesion+proteins+in+three-dimensional+cell+motility.">A distinctive role for focal adhesion proteins in three-dimensional cell motility.</a> Nat Cell Biol. 12 (6), 598-604 (2010).</li><li>Petrie, R. J., Doyle, A. D., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Random+versus+directionally+persistent+cell+migration.">Random versus directionally persistent cell migration.</a> Nat Rev. Mol Cell Biol. 10 (8), 538-549 (2009).</li><li>Rommerswinkel, N., Niggemann, B., Keil, S., Z&#228;nker, K. S., Dittmar, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Cell+Migration+within+a+Three-dimensional+Collagen+Matrix.">Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix.</a> J Vis Exp. (92), (2014).</li><li>Jonkman, J. E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+introduction+to+the+wound+healing+assay+using+live-cell+microscopy.">An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy.</a> Cell Adh Migr. 8 (5), 440-451 (2014).</li><li>L&#228;mmermann, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+leukocyte+migration+by+integrin-independent+flowing+and+squeezing.">Rapid leukocyte migration by integrin-independent flowing and squeezing.</a> Nature. 453 (7191), 51-55 (2008).</li><li>Chen, Z., Yang, J., Wu, B., Tawil, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Three-Dimensional+Wound+Healing+Model.">A Novel Three-Dimensional Wound Healing Model.</a> J Dev Biol. 2 (4), 198-209 (2014).</li><li>Ross, R., Benditt, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+and+collagen+formation.">Wound healing and collagen formation.</a> The J Cell Biol. 12 (3), 533-551 (1962).</li><li>Sproul, E. P., Argraves, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cytokine+axis+regulates+elastin+formation+and+degradation.">A cytokine axis regulates elastin formation and degradation.</a> Matrix Biol. 32 (2), 86-94 (2013).</li><li>Almine, J. F., Wise, S. G., Weiss, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastin+signaling+in+wound+repair.">Elastin signaling in wound repair.</a> Birth Defects REs C Embryo Today. 96 (3), 248-257 (2012).</li><li>Tracy, L. E., Minasian, R. A., Caterson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+Matrix+and+Dermal+Fibroblast+Function+in+the+Healing+Wound.">Extracellular Matrix and Dermal Fibroblast Function in the Healing Wound.</a> Adv Wound Care. 5 (3), 119-136 (2016).</li><li>Cox, S., Cole, M., Tawil, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+of+Human+Dermal+Fibroblasts+in+Three-Dimensional+Fibrin+Clots:+Dependence+on+Fibrinogen+and+Thrombin+Concentration.">Behavior of Human Dermal Fibroblasts in Three-Dimensional Fibrin Clots: Dependence on Fibrinogen and Thrombin Concentration.</a> Tissue Eng. 10 (5-6), 942-954 (2004).</li><li>Brown, A. C., Barker, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin-based+biomaterials:+Modulation+of+macroscopic+properties+through+rational+design+at+the+molecular+level.">Fibrin-based biomaterials: Modulation of macroscopic properties through rational design at the molecular level.</a> Acta Biomaterialia. 10 (4), 1502-1514 (2014).</li><li>Bartosh, T. J., Ylostalo, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+anti-inflammatory+mesenchymal+stem/precursor+cells+(MSCs)+through+sphere+formation+using+hanging+drop+culture+technique.">Preparation of anti-inflammatory mesenchymal stem/precursor cells (MSCs) through sphere formation using hanging drop culture technique.</a> Curr Protoc Stem Cell Biol. 28, (2014).</li><li>Bainbridge, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+and+the+role+of+fibroblasts.">Wound healing and the role of fibroblasts.</a> J Wound Care. 22 (8), 410-412 (2013).</li></ol>

פרוטוקול זה מאפשר הבחינה של נדידת תאים בריפוי הפצע הקשורים ECMs באמצעות מודל במבחנה תלת-ממד. צעד מכריע בביצוע תקין של ההליך הוא התפתחות נאותה של פיברובלסט spheroids; תא ריכוז במהלך ההכנה היה אופטימיזציה לתת של ריכוז הראשונית של תאים 2,500/שחרור, ומאפשר spheroids לטופס באופן אמין על תקופת דגירה של 72...

ריפוי הפצע הוא תהליך מורכב אשר התוצאות השיקום של רקמות תקינות בעקבות פגיעה. תהליך זה מחולק לארבעה שלבים חופפים הקיף על ידי hemostasis, דלקת, התפשטות, שיפוץ, שמווסתים אחד על ידי שילוב מורכב של רמזים מסיסים, תא-מטריקס אינטראקציות ותקשורת תא-תא. 1 , 2 העיבוד התזמורתי של רמזים אלה שולט שפע של תגובות הסלולר ב ריפוי הפצע כולל, חשוב, נדידת תאים. 3 , 4 נדידת תאים הוא תהליך דינמי מאוד תלויה פנוטיפים הסלולר והן את המאפיינים הביוכימי ו ביופיזיקלי של הסביבה שבה התרחשה מטריצה חוץ-תאית. 5 תאים ללא הרף לחקור את סביבתם מטריצה חוץ-תאית בתיווך אינטגרין מסלולים; תהליך זה מאפשר תאים לחוש מגוון רחב של נכסים מטריקס כולל הטופוגרפיה, קשיחות של כליאה. ניתוח דו מימדי (2D) של נדידת תאים מדגים כי ההעברה הוא מונע על ידי היווצרות lamellipodia בחוד דרך הדור של אקטין פילמנט חבילות. לאחר מכן היווצרות הידבקויות מוקד בחוד, בשילוב עם actomyosin מונע הכחשה להתכווצות בקצה נגרר, כונני התא קדימה. 6 ההעברה סלולרית תלת מימדי (3D) כיום אינה מובנת היטב, אולם מחקרים אחרונים מדגימים כי ההעברה 3D הוא שונה במידה ניכרת מאשר שצויינו תיאר מנגנון בדו מימד, והוא ככל הנראה מונע על ידי מנגנונים alterative. לדוגמה, מחקרים שנעשו לאחרונה על ידי פיטרי ואח. הפגינו, בהתאם, את המאפיינים של ה-ECM תאים ב- 3D מטריצות באפשרותך לעבור בין lamellipodium לבין lobopodium מונע מנגנונים של הגירה. 7 כיוון נדידת תאים הוא מרכיב קריטי של הפצע ריפוי התגובה, דגמי תלת-ממד של נדידת תאים הם קריטיים להבנת תגובות פיזיולוגיות לגירויים שונים במהלך ריפוי הפצע. למרות בהתנהגות התא נודדים על משטחים 2D הוכח שפתרון של ההעברה ב- 3D מטריצות, ביותר במבחנה המודלים הנוכחיים של נדידת תאים במהלך תהליך, כולל assay מאפס, ומבוססת על ריפוי הפצע לנצל 2D טפט תרבויות. 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 יותר לאחרונה פיתח מבחני נעזרו מטריצה תלת-ממד, אך עדיין התרבות תאים חד שכבתי על גבי המטריצה, ובכך יגביל את היכולת באמת לסכם את אתמהא של הסביבה תא ויוו. 15
מטרת השיטה המתוארת כאן היא ללמוד נדידת תאים דגם תלת-ממד רלוונטי מבחינה פיזיולוגית, ולא על משטח דו-מימדית, על מנת להשיג הבנה עמידים יותר של תגובות ההעברה המשויך הגירויים יישומית. שיטה זו מאפשרת על ההערכה של נדידת תאים בתוך מטריצה קריש פיברין 3D בנוכחות גורמים להפעיל או לעכב מסלולים הקשורים עם נדידת תאים. מטריצה פיברין נבחרה עבור שיטה זו עקב הפעלת פיברין תפקיד קריטי בשלבים המוקדמים של ריפוי הפצע; פגיעה הבאים, קריש פיברין נוצר בתוך הפצע סביבות לבלום את אובדן הדם ומשמש לפיגום חדירה לתא ההתחלתי במהלך שיפוץ ותיקון רקמות. 2 , 16 , 17 , 18 , 19 , 20 . בנוסף, פיברין משמש קלינית כמו איטום כירורגי, ההרכב של אוטמים היתה קשורה נדידת תאים ו- ultimate ריפוי תוצאות. מחקר קודמות מאת קוקס ואח. חקר פיברובלסט הגירה עם קרישי פיברין מורכבת פיברין משתנות ובתמצית תרומבין לצורך מיטוב של פיברין. במחקרים אלה, נדידה של תאים מחוץ קרישי פיברין על גבי כלים פלסטיק הייתה לכמת. 20 . אנו מציגים שיטה המאפשרת על כימות של נדידה של תאים בתוך הסביבה פיברין תלת-ממד. בעוד השיטה המתוארת ב פרוטוקול זה באופן ספציפי משתמשת פיברין, מודל זה יכול בקלות להיות שונה להשתמש בחומרים אלטרנטיביים מטריקס כרצונכם, כגון קולגן או אחרים מטריצות תלת-ממד. בנוסף, אנו מציגים את השימוש פיברובלסט spheroids assay הזה כי ההעברה פיברובלסט. לתוך המיטה הפצע היא בעלת חשיבות עליונה סינתזה מטריצה חוץ-תאית, רקמות תיקון/שיפוץ. עם זאת, במהלך התיקון תהליך נויטרופילים הם סוג התא הראשון להעביר לתוך המיטה הפצע, ואחריו מקרופאגים. Fibroblasts אז מתחיל לחדור את הסביבה הפצע כ- 48 שעות לאחר הפגיעה, בתחילת השלב המקדימות תהליך ריפוי הפצע. 19 assay הזה יכול בקלות לשנות כדי לכלול נויטרופילים, מקרופאגים או סוגי תאים אחרים כדי להעריך כיצד שינויים במבנה קריש פיברין משפיעים על ההעברה אחד מסוגי התאים. 21
כדי ליישם את assay, ראשית, ספרואיד פיברובלסט נוצר באמצעות שינוי של טכניקות שתואר קודם לכן לתרבות תאי גזע. 22 ספרואיד פיברובלסט לאחר מכן מועבר לתוך מטריצה פיברין 3D ואז תוצר יכול להיות בקלות תחת פיקוח לכמת על פני מספר ימים. פרוטוקול זה לוקח בחשבון את מימד של מערכות פיזיולוגיות על-ידי הטבעת תא 3D spheroids בתוך מטריצה פיברין, וכך להימנע המגבלות ב רלוונטיות הביא על ידי באמצעות משטח צמיחה דו-מימדית טפט תא מודל להתנהגות הנדידה, בזמן מתן אפשרות להערכת בהתנהגות התא בסביבה מבוקרת מאוד במבחנה .

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="692">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Materials</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:217px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:267px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium, 4.5 g/L Glucose, w/ Sodium Pyruvate, w/out L-Glutamine</td>
			<td style="width:91px;">VWR</td>
			<td>VWRL0148-0500</td>
			<td style="width:217px;">DMEM already containing L-glutamine can also be used</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">100mm Tissue Culture Dish, Non-Treated, Sterilized, Non-Pyrogenic</td>
			<td style="width:91px;">VWR</td>
			<td>10861-594</td>
			<td style="width:217px;">Dishes of any size can be used for hanging drop culture&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:267px;">Fetal Bovine Serum from USDA approved countries, heat inactivated, sterile-filtered, cell culture tested</td>
			<td style="width:91px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>12306C-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:91px;">Fisher Scientific</td>
			<td>ICN1680149</td>
			<td style="width:217px;">Not needed if using DMEM that already contains L-glutamine&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:267px;">Penicillin-Streptomycin Solution stabilized, sterile-filtered, with 10,000 units penicillin and 10 mg streptomycin/mL</td>
			<td style="width:91px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">Human Dermal Fibroblasts, neonatal</td>
			<td style="width:91px;">Thermo Fisher</td>
			<td>C0045C</td>
			<td style="width:217px;">Can be replaced with other cell type of interest</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">21 G x 1 1/2&#39; needle</td>
			<td style="width:91px;">BD&#160;</td>
			<td>305167</td>
			<td>22 G x 1 1/2 needles will also work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:91px;">VWR</td>
			<td>89174-491</td>
			<td>Syringes of any volume can be used</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:267px;">Cell Culture Multiwell Plates, Polystyrene, Greiner Bio-One (Individially Wrapped) (48 wells)</td>
			<td style="width:91px;">VWR</td>
			<td>82051-004&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:267px;">Human Fibrinogen - Plasminogen, von Willebrand Factor and Fibronectin Depleted</td>
			<td style="width:91px;">Enzyme Research Laboratories</td>
			<td>FIB 3</td>
			<td style="width:217px;">Can be replaced with matrix protein of interest</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:267px;">Human Alpha Thrombin</td>
			<td style="width:91px;">Enzyme Research Laboratories</td>
			<td>HT 1002a</td>
			<td style="width:217px;">May not be necessary depending on matrix protein of interest</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Equipment</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">BSL2 cell culture hood</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Cell culture incubator</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">Inverted microscope with 10X objective</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">Centrifuge compatibile with 15 mL tubes</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterizing cell migration within three-dimensional in vitro wound environments

כיום, רוב במבחנה מודלים של פצע ריפוי, כגון מבחני מאפס ומבוססת, לערב לומד תא העברה וגמר הסגר על משטחים דו-ממדית. עם זאת, הסביבה פיזיולוגיות אשר ויוו ריפוי הפצע מתקיים הוא תלת מימדי ולא דו מימדי. כעת ברור יותר ויותר בהתנהגות התא משתנה במידה רבה בין מימדי לעומת סביבות תלת-מימדי; לכן, אין צורך יותר מבחינה פיזיולוגית הרלוונטיים במבחנה מודלים עבור לומד התנהגויות ההעברה תא לסגירת הפצע. השיטה המתוארת במסמך זה מאפשר לחקר נדידת תאים במודל תלת-ממדי שמשקף טוב יותר בתנאים פיזיולוגיים מאשר שנקבעו קודם מימדי מבחני מאפס. מטרת מודל זה היא להעריך תא תוצר באמצעות הבחינה של נדידת תאים מהגוף ספרואיד מוטבע בתוך מטריצה פיברין בנוכחות גורמים פרו - או אנטי - migratory. באמצעות שיטה זו, תוצר תא מהגוף ספרואיד במטריצה תלת מימדי יכול להיות שנצפו והוא לכימות בקלות לאורך זמן באמצעות מיקרוסקופ brightfield וניתוח של ספרואיד הגוף באזור. גם ניתן להעריך את ההשפעה של גורמים פרו-נודדים ו/או מעכבות על נדידת תאים במערכת זו. שיטה זו מספקת חוקרים שיטה פשוטה של ניתוח נדידת תאים הפצע תלת ממדי משויכות מטריצות במבחנה, ובכך מגדילים את הרלוונטיות של חוץ גופית בתוך התא מחקרים לפני השימוש ב- vivo חיה מודלים.

ספרואיד תרבות יכול להיות מנוצל כדי להעריך את ההשפעה של סוכנים pro אנטי הנדידה על ההעברה פיברובלסט במבחנה בהצלחה Spheroids פיברובלסט 3D יכול להיווצר באמצעות תלוי תרבות טיפה על פני תקופה של 72 h (איור 1). בעקבות תקופת תרבות, spheroids מוטמעים בתוך המטריצה קריש ...

Watch this Scientific Journal Video about Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments at JoVE.com

Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments

המטרה של פרוטוקול זה היא להעריך את ההשפעה של גורמים פרו - ו אנטי - migratory על נדידת תאים בתוך מטריצה תלת מימדי פיברין.

אפיון נדידת תאים בתוך תלת מימדי במבחנה פצע סביבות

Currently, most in vitro models of wound healing, such as well-established scratch assays, involve studying cell migration and wound closure on ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments

Three-dimensional Optical-resolution Photoacoustic Microscopy

תלת ממדית ברזולוציה אופטית photoacoustic מיקרוסקופית

Optical microscopy, providing valuable insights at the cellular and organelle levels, has been widely recognized as an enabling biomedical technology. As ...

Electric Field-controlled Directed Migration of Neural Progenitor Cells in 2D and 3D Environments

שדה חשמלי מבוקר בימוי הגירה של ובתאים עצביות בסביבות 2 ד ו 3D

Endogenous electric fields (EFs) occur naturally in vivo and play a critical role during tissue/organ development and regeneration, including that of the ...

Live-cell Imaging of Migrating Cells Expressing Fluorescently-tagged Proteins in a Three-dimensional Matrix

Live-תא הדמיה של תאים מעבר הבעת חלבונים fluorescently-מתויג מטריקס תלת מימדי

Traditionally, cell migration has been studied on two-dimensional, stiff plastic surfaces. However, during important biological processes such as wound ...

Microinjection Wound Assay and In vivo Localization of Epidermal Wound Response Reporters in Drosophila Embryos.

Microinjection Wound Assay and In vivo Localization of Epidermal Wound Response Reporters in Drosophila Embryos.

Assay וMicroinjection פצע<em&gt; בvivo</em&gt; לוקליזציה של עוריות פצע הכתבים תגובה ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; עוברים.

The Drosophila embryo develops a robust epidermal layer that serves both to protect the internal cells from a harsh external environment as well as to ...

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

ניתוח של נדידת תאים בתוך קולגן מטריקס תלת ממדי

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

דור של עור בעובי מלא תלת ממדי Equivalent ואוטומטי פציעה

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

גירוי מבחן העין (EIT) לסיכוני זיהוי כימיקלים עיניים מעצבנים באמצעות אפיתל דגם רקמות כמו-קרנית משוחזר אדם (RHCE)

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

הכנה וניתוח של<em&gt; במבחנה</em&gt; שלושה שד ממדי המחליפים קרצינומה

Three dimensional (3D) culture is a more physiologically relevant method to model cell behavior in vitro than two dimensional culture. Carcinomas, ...

Engineering Three-dimensional Epithelial Tissues Embedded within Extracellular Matrix

הנדסה תלת מימדי רקמות אפיתל Embedded בתוך מטריקס

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, ...

Culturing Mammalian Cells in Three-dimensional Peptide Scaffolds

Culturing בתרבית של תאים בפפטיד תלת מימדי פיגומים

A useful technique for culturing cells in a self-assembling nanofiber three-dimensional (3D) scaffold is described. This culture system recreates an ...