Name: characterizing cell migration within three-dimensional in vitro wound environments
Uploaded: 2017-08-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments at JoVE.com

Finansiering for dette arbeidet ble gitt gjennom American Heart Association (16SDG29870005) og North Carolina State University Research og innovasjon såkorn finansiering.

1. dag 1: cellen og forberedelse av reagenser Merk: alle cellen og reagens forberedelse skal utføres i en biologiske sikkerhetskabinett kabinett for å unngå forurens av prøvene.
<ol><li>Varm filtrert Dulbecco &#39; s endret Eagle &#39; s Medium (DMEM), fosterets bovin serum (FBS), L-glutamin og penicillin/streptomycin i et 37 ° C vannbad.</li>
	<li>Forberede neonatal menneskelige dermal fibroblast (HDFn) media ved supplere varmet DMEM med 10% FBS, 1% penicillin/streptomycin og 1% L-gl...

<ol>
	<li>Chester, D., Brown, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+biophysical+properties+of+provisional+matrix+proteins+in+wound+repair.">The role of biophysical properties of provisional matrix proteins in wound repair.</a> Matrix Biol. , (2016).</li><li>Martin, P., Leibovich, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+during+wound+repair:+the+good,+the+bad+and+the+ugly.">Inflammatory cells during wound repair: the good, the bad and the ugly.</a> Trends in Cell Biology. 15 (11), 599-607 (2005).</li><li>Lin, B., Yin, T., Wu, Y. I., Inoue, T., Levchenko, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplay+between+chemotaxis+and+contact+inhibition+of+locomotion+determines+exploratory+cell+migration.">Interplay between chemotaxis and contact inhibition of locomotion determines exploratory cell migration.</a> Nat Commun. 6, 6619 (2015).</li><li>Ngalim, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creating+Adhesive+and+Soluble+Gradients+for+Imaging+Cell+Migration+with+Fluorescence+Microscopy.">Creating Adhesive and Soluble Gradients for Imaging Cell Migration with Fluorescence Microscopy.</a> J Vis Exp. (74), (2013).</li><li>Charras, G., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+influences+of+the+extracellular+environment+on+cell+migration.">Physical influences of the extracellular environment on cell migration.</a> Nat Rev. Mol Cell Biol. 15 (12), 813-824 (2014).</li><li>Petrie, R. J., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+Lead+the+Way:+A+Unified+View+of+3D+Cell+Motility.">Fibroblasts Lead the Way: A Unified View of 3D Cell Motility.</a> Trends Cell Biol. 25 (11), 666-674 (2015).</li><li>Petrie, R. J., Gavara, N., Chadwick, R. S., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonpolarized+signaling+reveals+two+distinct+modes+of+3D+cell+migration.">Nonpolarized signaling reveals two distinct modes of 3D cell migration.</a> J Cell Biol. 197 (3), 439-455 (2012).</li><li>Carlson, M. W., Dong, S., Garlick, J. A., Egles, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-Engineered+Models+for+the+Study+of+Cutaneous+Wound-Healing.">Tissue-Engineered Models for the Study of Cutaneous Wound-Healing.</a> Bioengineering Research of Chronic Wounds. , 263-280 (2009).</li><li>Doyle, A. D., Wang, F. W., Matsumoto, K., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-dimensional+topography+underlies+three-dimensional+fibrillar+cell+migration.">One-dimensional topography underlies three-dimensional fibrillar cell migration.</a> J Cell Bio. 184 (4), 481-490 (2009).</li><li>Fraley, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+distinctive+role+for+focal+adhesion+proteins+in+three-dimensional+cell+motility.">A distinctive role for focal adhesion proteins in three-dimensional cell motility.</a> Nat Cell Biol. 12 (6), 598-604 (2010).</li><li>Petrie, R. J., Doyle, A. D., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Random+versus+directionally+persistent+cell+migration.">Random versus directionally persistent cell migration.</a> Nat Rev. Mol Cell Biol. 10 (8), 538-549 (2009).</li><li>Rommerswinkel, N., Niggemann, B., Keil, S., Z&#228;nker, K. S., Dittmar, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Cell+Migration+within+a+Three-dimensional+Collagen+Matrix.">Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix.</a> J Vis Exp. (92), (2014).</li><li>Jonkman, J. E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+introduction+to+the+wound+healing+assay+using+live-cell+microscopy.">An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy.</a> Cell Adh Migr. 8 (5), 440-451 (2014).</li><li>L&#228;mmermann, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+leukocyte+migration+by+integrin-independent+flowing+and+squeezing.">Rapid leukocyte migration by integrin-independent flowing and squeezing.</a> Nature. 453 (7191), 51-55 (2008).</li><li>Chen, Z., Yang, J., Wu, B., Tawil, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Three-Dimensional+Wound+Healing+Model.">A Novel Three-Dimensional Wound Healing Model.</a> J Dev Biol. 2 (4), 198-209 (2014).</li><li>Ross, R., Benditt, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+and+collagen+formation.">Wound healing and collagen formation.</a> The J Cell Biol. 12 (3), 533-551 (1962).</li><li>Sproul, E. P., Argraves, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cytokine+axis+regulates+elastin+formation+and+degradation.">A cytokine axis regulates elastin formation and degradation.</a> Matrix Biol. 32 (2), 86-94 (2013).</li><li>Almine, J. F., Wise, S. G., Weiss, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastin+signaling+in+wound+repair.">Elastin signaling in wound repair.</a> Birth Defects REs C Embryo Today. 96 (3), 248-257 (2012).</li><li>Tracy, L. E., Minasian, R. A., Caterson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+Matrix+and+Dermal+Fibroblast+Function+in+the+Healing+Wound.">Extracellular Matrix and Dermal Fibroblast Function in the Healing Wound.</a> Adv Wound Care. 5 (3), 119-136 (2016).</li><li>Cox, S., Cole, M., Tawil, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+of+Human+Dermal+Fibroblasts+in+Three-Dimensional+Fibrin+Clots:+Dependence+on+Fibrinogen+and+Thrombin+Concentration.">Behavior of Human Dermal Fibroblasts in Three-Dimensional Fibrin Clots: Dependence on Fibrinogen and Thrombin Concentration.</a> Tissue Eng. 10 (5-6), 942-954 (2004).</li><li>Brown, A. C., Barker, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin-based+biomaterials:+Modulation+of+macroscopic+properties+through+rational+design+at+the+molecular+level.">Fibrin-based biomaterials: Modulation of macroscopic properties through rational design at the molecular level.</a> Acta Biomaterialia. 10 (4), 1502-1514 (2014).</li><li>Bartosh, T. J., Ylostalo, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+anti-inflammatory+mesenchymal+stem/precursor+cells+(MSCs)+through+sphere+formation+using+hanging+drop+culture+technique.">Preparation of anti-inflammatory mesenchymal stem/precursor cells (MSCs) through sphere formation using hanging drop culture technique.</a> Curr Protoc Stem Cell Biol. 28, (2014).</li><li>Bainbridge, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+and+the+role+of+fibroblasts.">Wound healing and the role of fibroblasts.</a> J Wound Care. 22 (8), 410-412 (2013).</li></ol>

Denne protokollen gir undersøkelse av celle migrasjon i sårheling forbundet ECMs gjennom en i vitro 3D modell. Et avgjørende skritt i riktig utførelse av prosedyren er riktig utvikling av fibroblast spheroids; cellen konsentrasjon under forberedelse var optimalisert for å gi en innledende konsentrasjon av 2500 celler/slipp, slik at spheroids skjemaet pålitelig over en inkubasjonsperiode 72 h. Hvis et tilstrekkelig antall celler, spheroids kan ikke samlet effektivt og kan bryte fra hverandre ble overført o...

Sårheling er en kompleks prosess som resulterer i restaureringen av vev integritet etter skade. Denne prosessen er delt i fire overlappende stadier omfattes av hemostasen, betennelse, spredning og remodeling, som hver reguleres av en kompleks kombinasjon av løselig Stikkordene, celle-matrix interaksjoner og celle-celle kommunikasjon. 1 , 2 orkestreringen av disse stikkordene styrer en rekke mobilnettet svar i sårheling viktigere, inkludert celle migrasjon. 3 , 4 celle migrasjon er en svært dynamisk prosess avhengig både mobilnettet fenotyper og egenskapene biokjemiske og Biofysiske ekstracellulær matrix miljøet. 5 celler kontinuerlig undersøke ekstracellulær matrix miljøet gjennom integrin-mediert baner; Denne prosessen kan celler å kjenne en rekke matrix egenskaper inkludert topografi, stivhet og confinement. Todimensjonal (2D) analyse av celle migrasjon viser at overføringen er drevet av lamellipodia formasjon i forkant gjennom generasjon begrepsordbok filament bunter. Påfølgende dannelsen av fokal adhesjon i forkant, i kombinasjon med actomyosin drevet sammentrekning og retraksjon på etterfølgende kanten, kjører cellen frem. 6 tredimensjonale (3D) mobilnettet overføring er for øyeblikket ikke godt forstått, men studier viser at 3D-overføring er ganske annerledes enn den tidligere beskrevet mekanisme i 2D og er trolig drevet av alternative mekanismer. For eksempel, studier av Petrie et al. viste at avhengig av egenskapene til ECM, celler i 3D matriser kan veksle mellom lamellipodium og lobopodium drevet mekanismer for overføring. 7 celle migrasjon er en kritisk komponent i såret healing respons, 3D-modeller av celle migrasjon er avgjørende for å forstå fysiologiske responser på ulike stimuli under sårtilheling. Selv om cellen vandrende atferd på 2D flater har vist å variere fra migrasjon i 3D matriser, benytte nyeste i vitro modeller av celle migrasjon under såret helbredelsesprosessen, inkludert veletablerte scratch analysen, 2D monolayer kulturer. 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 mer nylig utviklet analyser har benyttet en 3D matrix, men fortsatt kultur celler i en monolayer over matrise, dermed begrenser muligheten til å virkelig recapitulate three-dimensionality av cellen miljøet i vivo. 15
Formålet med metoden beskrevet her er å studere celle migrasjon i en fysiologisk relevante 3D-modell, og ikke på 2D underlag, for å få en mer robust forståelse av migrasjon svar forbundet med anvendt stimuli. Denne metoden tillater for vurdering av celle migrasjon i en 3D fibrin blodpropp matrise i nærvær av faktorer som aktivere eller hemme trasé tilknyttet celle migrasjon. En fibrin matrise ble valgt for denne metoden på grunn av den viktige rolle fibrin spiller i de tidlige stadiene av sårheling; følgende skade, en fibrin blodpropp dannes i såret miljøer å demme blodtap og fungerer som et stillas for første celle infiltrasjon tissue reparasjon og ombygging. 2 , 16 , 17 , 18 , 19 , 20 i tillegg fibrin brukes klinisk som en kirurgisk tetningsmasse og sammensetningen av Forseglinger har vært knyttet til celle migrasjon og ultimate healing resultater. En tidligere studie av Cox et al. undersøkt fibroblast overføring med fibrin clots består av varierende fibrin og trombin konsentrasjoner for å optimere en fibrin fugemasse. I disse studiene, ble migrering av celler av fibrin clots på plast retter kvantifisert. 20 Her presenterer vi en metode som gir mulighet for kvantifisering av migrering av celler i 3D fibrin miljøet. Mens metoden beskrevet i denne protokollen spesielt bruker fibrin, kan denne modellen enkelt endres for å bruke alternative matrix materialer som ønsket, for eksempel kollagen eller andre 3D matriser. I tillegg presenterer vi bruk av fibroblast spheroids i denne analysen fordi fibroblast overføring til såret sengen er av overordnet betydning for ekstracellulær matrix syntese og vev reparasjon/ombygging. Men under reparasjon er prosessen nøytrofile den første celle typen overføre til såret sengen, etterfulgt av makrofager. Fibroblaster da begynne å infiltrere såret miljøet ca 48 timer etter første skade, i begynnelsen av proliferativ fase av såret helbredelsesprosessen. 19 denne analysen kan enkelt endres for å inkludere nøytrofile og makrofager andre celletyper å vurdere hvordan endringer i fibrin blodpropp struktur påvirker migrering av disse celletyper. 21
For å implementere denne analysen, først, er en fibroblast-formet dannet ved hjelp av en endring av teknikkene tidligere for stamcelleforskningen kultur. 22 fibroblast-formet overføres senere til en 3D fibrin matrise, og resultatet deretter lett kan overvåkes og kvantifisert over flere dager. Denne protokollen tar hensyn 3D fysiologiske systemer ved å bygge inn 3D celle spheroids i en fibrin matrise, dermed unngår begrensningene i relevans forårsaket av en bruker en 2D vekst overflate med en celle monolayer modell vandrende virkemåten, mens gir for evalueringen av cellen atferd i kontrollerte i vitro omgivelser.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="692">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Materials</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:217px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:267px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium, 4.5 g/L Glucose, w/ Sodium Pyruvate, w/out L-Glutamine</td>
			<td style="width:91px;">VWR</td>
			<td>VWRL0148-0500</td>
			<td style="width:217px;">DMEM already containing L-glutamine can also be used</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">100mm Tissue Culture Dish, Non-Treated, Sterilized, Non-Pyrogenic</td>
			<td style="width:91px;">VWR</td>
			<td>10861-594</td>
			<td style="width:217px;">Dishes of any size can be used for hanging drop culture&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:267px;">Fetal Bovine Serum from USDA approved countries, heat inactivated, sterile-filtered, cell culture tested</td>
			<td style="width:91px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>12306C-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">L-glutamine</td>
			<td style="width:91px;">Fisher Scientific</td>
			<td>ICN1680149</td>
			<td style="width:217px;">Not needed if using DMEM that already contains L-glutamine&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:267px;">Penicillin-Streptomycin Solution stabilized, sterile-filtered, with 10,000 units penicillin and 10 mg streptomycin/mL</td>
			<td style="width:91px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">Human Dermal Fibroblasts, neonatal</td>
			<td style="width:91px;">Thermo Fisher</td>
			<td>C0045C</td>
			<td style="width:217px;">Can be replaced with other cell type of interest</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">21 G x 1 1/2&#39; needle</td>
			<td style="width:91px;">BD&#160;</td>
			<td>305167</td>
			<td>22 G x 1 1/2 needles will also work</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:91px;">VWR</td>
			<td>89174-491</td>
			<td>Syringes of any volume can be used</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:267px;">Cell Culture Multiwell Plates, Polystyrene, Greiner Bio-One (Individially Wrapped) (48 wells)</td>
			<td style="width:91px;">VWR</td>
			<td>82051-004&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:267px;">Human Fibrinogen - Plasminogen, von Willebrand Factor and Fibronectin Depleted</td>
			<td style="width:91px;">Enzyme Research Laboratories</td>
			<td>FIB 3</td>
			<td style="width:217px;">Can be replaced with matrix protein of interest</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:267px;">Human Alpha Thrombin</td>
			<td style="width:91px;">Enzyme Research Laboratories</td>
			<td>HT 1002a</td>
			<td style="width:217px;">May not be necessary depending on matrix protein of interest</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Equipment</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">BSL2 cell culture hood</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Cell culture incubator</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">Inverted microscope with 10X objective</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">Centrifuge compatibile with 15 mL tubes</td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterizing cell migration within three-dimensional in vitro wound environments

Foreløpig mest i vitro modeller av sårtilheling, som veletablerte scratch analyser, involverer studere celle migrasjon og såret nedleggelse på todimensjonale overflater. Fysiologiske miljøet som i vivo sårheling foregår er imidlertid tredimensjonale i stedet for todimensjonal. Det blir stadig klarere at cellen atferd varierer sterkt i todimensjonale og tredimensjonale terreng. Derfor er det behov for mer fysiologisk relevante i vitro modeller for å studere celle migrasjon atferd i såret nedleggelse. Metoden beskrevet her kan for studier av celle migrasjon i en tredimensjonal modell som bedre gjenspeiler fysiologiske forhold enn tidligere etablert todimensjonal scratch analyser. Formålet med denne modellen er å evaluere celle utvekst via undersøkelse av celle migrasjon fra en formet kropp i en fibrin matrise i nærvær av pro - eller anti - migratory faktorer. Bruker denne metoden, celle utvekst fra formet kroppen i en tredimensjonal matrise kan observeres og er lett kvantifiserbare over tid via brightfield mikroskopi og analyse av formet kroppen området. Effekten av pro-vandrende og/eller hemmende faktorer på celle migrasjon kan også vurderes i dette systemet. Denne metoden gir forskere med en enkel metode for å analysere celle migrasjon i tredimensjonale såret forbundet matriser i vitro, dermed øke relevansen av i vitro celle studier før bruk av dyr i vivo modeller.

Spheroid kultur kan benyttes for å kunne evaluere effekten av pro og anti-migratory på fibroblast overføring i vitro 3D fibroblast spheroids kan dannes via hengende slipp kultur løpet av 72 h (figur 1). Etter kultur perioden, spheroids er innebygd i blodpropp matrix og fotografert bruker brightfield mikroskopi (figur 2). Første spheroids (avbildet i figuren som områder som er avgrenset av de hvite kantli...

Watch this Scientific Journal Video about Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments at JoVE.com

Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments

Målet med denne protokollen er å vurdere effekten av pro - og anti - migratory faktorer på celle migrasjon i en tredimensjonal fibrin matrise.

Karakterisere celle migrasjon tredimensjonale In Vitro sår miljøer

Currently, most in vitro models of wound healing, such as well-established scratch assays, involve studying cell migration and wound closure on ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments

Three-dimensional Optical-resolution Photoacoustic Microscopy

Optical microscopy, providing valuable insights at the cellular and organelle levels, has been widely recognized as an enabling biomedical technology. As ...

Electric Field-controlled Directed Migration of Neural Progenitor Cells in 2D and 3D Environments

Elektrisk felt-kontrollert Regissert Migrasjon av Neural stamceller i 2D og 3D miljøer

Endogenous electric fields (EFs) occur naturally in vivo and play a critical role during tissue/organ development and regeneration, including that of the ...

Live-cell Imaging of Migrating Cells Expressing Fluorescently-tagged Proteins in a Three-dimensional Matrix

Live-cell Imaging of Migrering cellene uttrykker fluorescensmerket-merket Proteiner i en tredimensjonal Matrix

Traditionally, cell migration has been studied on two-dimensional, stiff plastic surfaces. However, during important biological processes such as wound ...

Microinjection Wound Assay and In vivo Localization of Epidermal Wound Response Reporters in Drosophila Embryos.

Microinjection Wound Assay and In vivo Localization of Epidermal Wound Response Reporters in Drosophila Embryos.

Mikroinjeksjon Wound-analysen og<em&gt; In vivo</em&gt; Lokalisering av epidermal Wound Response Reportere i<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryo.

The Drosophila embryo develops a robust epidermal layer that serves both to protect the internal cells from a harsh external environment as well as to ...

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

Analyse av celle migrasjon innenfor en tre-dimensjonal Kollagen Matrix

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

Generering av en Tredimensjonal Full Tykkelse hudekvivalent og Automated såret

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

Øyeirritasjonstest (EIT) for fareidentifikasjon for Eye irriterende kjemikalier som bruker Rekonstruert Menneskelig Hornhinnen lignende Epithelial (RHCE) Tissue Modell

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

Utarbeidelse og analyse av<em&gt; In Vitro</em&gt; Tredimensjonal brystkreft Surrogates

Three dimensional (3D) culture is a more physiologically relevant method to model cell behavior in vitro than two dimensional culture. Carcinomas, ...

Engineering Three-dimensional Epithelial Tissues Embedded within Extracellular Matrix

Engineering Tredimensjonal epitelvev innebygd i ekstracellulær matriks

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, ...

Culturing Mammalian Cells in Three-dimensional Peptide Scaffolds

Dyrking pattedyrceller i tredimensjonale peptid stillaser

A useful technique for culturing cells in a self-assembling nanofiber three-dimensional (3D) scaffold is described. This culture system recreates an ...