Name: the c. elegans excretory canal as a model for intracellular lumen morphogenesis and in vivo polarized membrane biogenesis in a single cell: labeling by gfp-fusions, rnai interaction screen and imaging
Uploaded: 2017-10-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The C. elegans Excretory Canal as a Model for Intracellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis in a Single Cell: labeling by GFP-fu

Мы благодарим M. Бюхнер (Университет штата Канзас, Канзас, США), K. Nehrke (медицинский центр университета Рочестера, Рочестер, Нью-Йорк, США) и центр генетики Caenorhabditis , финансируемых за счет национальных институтов здравоохранения, управление исследовательской инфраструктуры Программы (P40 OD010440). Эта работа была поддержана грантов низ GM078653, MGH является 224570 и 223809 SAA в в.г.

1. Маркировка на канал Excretory C. elegans флуоресцентные белки Fusion 14 Примечание: увидеть сопроводительный документ на кишечную tubulogenesis 3 для маркировки в situ антитело пятная процедуры адаптации в выделительной канал. Таблица 1 пример?...

<ol>
	<li>Lubarsky, B., Krasnow, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tube+morphogenesis:+making+and+shaping+biological+tubes.">Tube morphogenesis: making and shaping biological tubes.</a> Cell. 112 (1), (2003).</li><li>Sundaram, M. V., Cohen, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+to+make+the+doughnuts:+Building+and+shaping+seamless+tubes.">Time to make the doughnuts: Building and shaping seamless tubes.</a> Semin. Cell Dev. Biol. S1084-9521, 30130-30136 (2016).</li><li>Zhang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C.+elegans+intestine+as+a+model+for+intercellular+lumen+morphogenesis+and+in+vivo+polarized+membrane+biogenesis+at+the+single-cell+level.">The C. elegans intestine as a model for intercellular lumen morphogenesis and in vivo polarized membrane biogenesis at the single-cell level.</a> JoVE. , (2017).</li><li>Andrew, D. J., Ewald, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogenesis+of+epithelial+tubes:+Insights+into+tube+formation,+elongation,+and+elongation.">Morphogenesis of epithelial tubes: Insights into tube formation, elongation, and elongation.</a> Dev. Biol. 341 (1), 34-55 (2010).</li><li>Nelson, F. K., Albert, P. S., Riddle, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+structure+of+the+Caenorhabditis+elegans+secretory-excretory+system.">Fine structure of the Caenorhabditis elegans secretory-excretory system.</a> J. Ultrastruct. Res. 82 (2), 156-171 (1983).</li><li>Sundaram, M. V., Buechner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+Excretory+System:+A+Model+for+Tubulogenesis,+Cell+Fate+Specification,+and+Plasticity.">The Caenorhabditis elegans Excretory System: A Model for Tubulogenesis, Cell Fate Specification, and Plasticity.</a> Genetics. 203 (1), 35 (2016).</li><li>Altun, Z. F., Hall, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excretory+system.">Excretory system.</a> WormAtlas. , (2009).</li><li>Buechner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubes+and+the+single+C.+elegans+excretory+cell.">Tubes and the single C. elegans excretory cell.</a> Trends Cell Biol. 12 (10), 479-484 (2002).</li><li>Khan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+lumen+extension+requires+ERM-1-dependent+apical+membrane+expansion+and+AQP-8-mediated+flux.">Intracellular lumen extension requires ERM-1-dependent apical membrane expansion and AQP-8-mediated flux.</a> Nat. Cell Biol. 15 (2), 143-156 (2013).</li><li>Kolotuev, I., Hyenne, V., Schwab, Y., Rodriguez, D., Labouesse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pathway+for+unicellular+tube+extension+depending+on+the+lymphatic+vessel+determinant+Prox1+and+on+osmoregulation.">A pathway for unicellular tube extension depending on the lymphatic vessel determinant Prox1 and on osmoregulation.</a> Nat. Cell Biol. 15 (2), 157-168 (2013).</li><li>Buechner, M., Hall, D. H., Bhatt, H., Hedgecock, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cystic+canal+mutants+in+Caenorhabditis+elegans+are+defective+in+the+apical+membrane+domain+of+the+renal+(excretory)+cell.">Cystic canal mutants in Caenorhabditis elegans are defective in the apical membrane domain of the renal (excretory) cell.</a> Dev. Biol. 214 (1), 227-241 (1999).</li><li>Fehon, R. G., McClatchey, A. I., Bretscher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organizing+the+cell+cortex:+the+role+of+ERM+proteins.">Organizing the cell cortex: the role of ERM proteins.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 11 (4), 276-287 (2010).</li><li>Gobel, V., Barrett, P. L., Hall, D. H., Fleming, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lumen+morphogenesis+in+C.+elegans+requires+the+membrane-cytoskeleton+linker+erm-1.">Lumen morphogenesis in C. elegans requires the membrane-cytoskeleton linker erm-1.</a> Dev. Cell. 6 (6), 865-873 (2004).</li><li>Sambrook, J., Sambrook, J., DW, R. u. s. s. e. l. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular cloning: a laboratory manual. , (2006).</li><li>Fire, A., Harrison, S. W., Dixon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modular+set+of+lacZ+fusion+vectors+for+studying+gene+expression+in+Caenorhabditis+elegans.">A modular set of lacZ fusion vectors for studying gene expression in Caenorhabditis elegans.</a> Gene. 93 (2), 189-198 (1990).</li><li>Kamath, R. S., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+RNAi+screening+in+Caenorhabditis+elegans.">Genome-wide RNAi screening in Caenorhabditis elegans.</a> Methods. 30 (4), 313-321 (2003).</li><li>Timmons, L., Court, D. L., Fire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ingestion+of+bacterially+expressed+dsRNAs+can+produce+specific+and+potent+genetic+interference+in+Caenorhabditis+elegans.">Ingestion of bacterially expressed dsRNAs can produce specific and potent genetic interference in Caenorhabditis elegans.</a> Gene. 263 (1-2), 103-112 (2001).</li><li>Pawley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Biological Confocal Microscopy. , (2006).</li><li>Hibbs, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Confocal Microscopy for Biologists. , (2004).</li><li>Bankhead, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Analyzing fluorescence microscopy images with ImageJ. , (2014).</li><li>Praitis, V., Casey, E., Collar, D., Austin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creation+of+low-copy+integrated+transgenic+lines+in+Caenorhabditis+elegans.">Creation of low-copy integrated transgenic lines in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 157 (3), 1217-1226 (2001).</li><li>Fr&#248;kjaer-Jensen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-copy+insertion+of+transgenes+in+Caenorhabditis+elegans.">Single-copy insertion of transgenes in Caenorhabditis elegans.</a> Nat. Genet. 40 (11), 1375-1383 (2008).</li><li>Mello, C. C., Kramer, J. M., Stinchcomb, D., Ambros, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+in+C.+elegans:+extrachromosomal+maintenance+and+integration+of+transforming+sequences.">Efficient gene transfer in C. elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences.</a> EMBO J. 10 (12), 3959-3970 (1991).</li><li>Barrangou, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cas9+Targeting+and+the+CRISPR+Revolution.">Cas9 Targeting and the CRISPR Revolution.</a> Science. 344 (6185), 707-708 (2014).</li><li>Dickinson, D. J., Goldstein, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR-Based+Methods+for+Caenorhabditis+elegans+Genome+Engineering.">CRISPR-Based Methods for Caenorhabditis elegans Genome Engineering.</a> Genetics. 202 (3), 885-901 (2016).</li><li>Esposito, D., Garvey, L. A., Chakiath, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gateway+cloning+for+protein+expression.">Gateway cloning for protein expression.</a> Methods Mol. Biol. 498, 31-54 (2009).</li><li>Gibson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymatic+assembly+of+DNA+molecules+up+to+several+hundred+kilobases.">Enzymatic assembly of DNA molecules up to several hundred kilobases.</a> Nat. Methods. 6 (5), 343-345 (2009).</li><li>Hobert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR+fusion-based+approach+to+create+reporter+gene+constructs+for+expression+analysis+in+transgenic+C.+elegans.">PCR fusion-based approach to create reporter gene constructs for expression analysis in transgenic C. elegans.</a> Biotechniques. 32 (4), 728-730 (2002).</li><li>Jorgensen, E. M., Mango, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+art+and+design+of+genetic+screens:+caenorhabditis+elegans.">The art and design of genetic screens: caenorhabditis elegans.</a> Nat. Rev. Genet. 3 (5), 356-369 (2002).</li><li>Berry, K. L., Bulow, H. E., Hall, D. H., Hobert, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+CLIC-like+protein+required+for+intracellular+tube+formation+and+maintenance.">C. elegans CLIC-like protein required for intracellular tube formation and maintenance.</a> Science. 302 (5653), 2134-2137 (2003).</li><li>Mattingly, B. C., Buechner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+FGD+homologue+EXC-5+regulates+apical+trafficking+in+C.+elegans+tubules.">The FGD homologue EXC-5 regulates apical trafficking in C. elegans tubules.</a> Dev. Biol. 359 (1), 59-72 (2011).</li><li>Shaye, D. D., Greenwald, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+disease-associated+formin+INF2/EXC-6+organizes+lumen+and+cell+outgrowth+during+tubulogenesis+by+regulating+F-actin+and+microtubule+cytoskeletons.">The disease-associated formin INF2/EXC-6 organizes lumen and cell outgrowth during tubulogenesis by regulating F-actin and microtubule cytoskeletons.</a> Dev. Cell. 32 (6), 743-755 (2015).</li><li>Lant, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CCM-3/STRIPAK+promotes+seamless+tube+extension+through+endocytic+recycling.">CCM-3/STRIPAK promotes seamless tube extension through endocytic recycling.</a> Nat. Commun. 6 (6), 6449 (2015).</li><li>Paupard, M. C., Miller, A., Grant, B., Hirsh, D., Hall, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immuno-EM+localization+of+GFP-tagged+yolk+proteins+in+C.+elegans+using+microwave+fixation.">Immuno-EM localization of GFP-tagged yolk proteins in C. elegans using microwave fixation.</a> J. Histochem. Cytochem. 49 (8), 949-956 (2001).</li><li>Lukyanov, K. A., Chudakov, D. M., Lukyanov, S., Verkhusha, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoactivatable+fluorescent+proteins.">Photoactivatable fluorescent proteins.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6 (11), 885-891 (2005).</li><li>Bates, M., Huang, B., Dempsey, G. T., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicolor+super-resolution+imaging+with+photo-switchable+fluorescent+probes.">Multicolor super-resolution imaging with photo-switchable fluorescent probes.</a> Science. 317 (5845), 1749-1753 (2007).</li><li>Sherman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+abts+and+sulp+families+of+anion+transporters+from+Caenorhabditis+elegans.">The abts and sulp families of anion transporters from Caenorhabditis elegans.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 289 (2), C341-C351 (2005).</li><li>. Transgeneome website Available from: <a target="_blank" href="https://transgeneome.mpi-cbg.de/transgeneomics/index.html">https://transgeneome.mpi-cbg.de/transgeneomics/index.html</a> (2017)</li><li>. National BioResource Project (NBRP)::C. elegans Available from: <a target="_blank" href="https://shigen.nig.ac.jp/c.elegans/">https://shigen.nig.ac.jp/c.elegans/</a> (2017)</li><li>Heppert, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+assessment+of+fluorescent+proteins+for+in+vivo+imaging+in+an+animal+model+system.">Comparative assessment of fluorescent proteins for in vivo imaging in an animal model system.</a> Mol. Biol. Cell. 27 (22), 3385-3394 (2016).</li><li>Shaner, N. C., Steinbach, P. A., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+choosing+fluorescent+proteins.">A guide to choosing fluorescent proteins.</a> Nat Methods. 2 (12), 905-909 (2005).</li><li>. BLAST Available from: <a target="_blank" href="https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi">https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi</a> (2017)</li><li>Kamath, R. S., Martinezcampos, M., Zipperlen, P., Fraser, A. G., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+specific+RNA-mediated+interference+through+ingested+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Effectiveness of specific RNA-mediated interference through ingested double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Genome Biol. 2 (1), RESEARCH0002 (2001).</li><li>Kamath, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+functional+analysis+of+the+Caenorhabditis+elegans+genome+using+RNAi.">Systematic functional analysis of the Caenorhabditis elegans genome using RNAi.</a> Nature. 421 (6920), 231-237 (2003).</li><li>Rual, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+improving+Caenorhabditis+elegans+phenome+mapping+with+an+ORFeome-based+RNAi+library.">Toward improving Caenorhabditis elegans phenome mapping with an ORFeome-based RNAi library.</a> Genome research. 14 (10B), 2162-2168 (2004).</li></ol>

C. elegans генетических универсальность, прозрачности, план простой тела и инвариантные клеток линии делают отличную модель для анализа морфогенеза. Этот протокол описывает как сочетать стандартные генетических манипуляций и томографии исследования воспользоваться 2 микрон тонкие <...

Все внутренние органы состоят из трубок, решающее значение для их много разных функций, таких как транспорта и обмен газов, жидкостей и питательных веществ и выведение метаболических отходов. Их поляризованный характер, с собственный апикальной и lumenal мембраны, приспособлен для этих конкретных функций, и дефекты в биогенеза их систем эндо - и плазматической мембраны являются частой причиной человеческих болезней1,2. Большинство трубок сосудистую и внутренних органов многоклеточных и формируют просвет intercellularly; Однако одноклеточными трубок, которые формируют просвета внутриклеточно, можно например, представляют столько, сколько 30 – 50% человеческого капиллярные кровати2. Поляризованной мембраны multi - и одноклеточные трубы похожи в составе, хотя их microdomains могут различаться в зависимости от трубки определенной функции (например, выделительной канал канальцев против кишечных микроворсинки в Caenorhabditis Элеганс; сопроводительный документ на кишечные нематоды Caenorhabditis elegans tubulogenesis см)3. Среди размером сохраняются принципы биогенеза поляризованной мембраны и tubulogenesis, и подобные молекулярные машины направляет их1,2,4.
C. elegans выделительной системы состоит из пяти ячеек: выделительной клеток (EC), проток клетки (DC), поры клеток (PC) и две железы клетки. Аблация EC, DC или PC приводит к накоплению жидкости в полости тела и животные умирают в начале личиночной стадии5. Интригующе, эти три одноклеточными трубки создать их люмен тремя различными способами: клеткой раздалбывают (EC); ячейки обертывания в сочетании с autocellular стыке формирования (PC); и путем обмотки клеток в сочетании с autofusion (DC); различные механизмы люмен морфогенеза, которые являются все филогенетически сохраняется6,7. EC, расположенный на левой боковой стороне задней глотки колбы, отправляет два боковых расширений из которых четыре каналов разветвляются продлить кпереди и кзади (на правой и левой стороне) в кончик носа червя и хвост , соответственно (рис. 1)5,6,8. ЕК простирается от примерно 1 мкм 2 x 1000 мкм, что делает его крупнейшим ячейки в животное. На субклеточном уровне выделительной канал представляет собой простой трубку, созданный из базальной мембраны направлена на pseudocoelom и туннель lumenal мембраны (endotube). Канал lumenal мембраны подключается воздуховод lumenal мембраны на его только межклеточные соединения; в противном случае каналы junctionless вдоль их длины (рис. 1). Lumenal мембрана выделительной канала и его submembraneous цитоскелета верхушечный, определяется их молекулярного состава, напоминающее состав апикальной мембраны и submembraneous цитоскелета многоклеточных трубок, как кишечник, и другие (например, плоские) эпителия. Цитоплазматических органелл, включая от англ везикулярный и другие (например, Гольджи) endomembranes распределяются по длине канала. Кроме того несколько канальцев везикулы - либо подключен к lumenal мембраны, взаимосвязаны или изолированные - являются многопоточными через канал цитоплазме7,8,9,10 . Это динамическое подключение плазмы мембраны/канальцев далее расширяет канал мембранной системы и способствует как люмен морфогенеза и осморегуляция10. Выделительной канал таким образом почти полностью состоит из эндо - и плазменных мембран, обеспечивая отличную модель для анализа биогенеза поляризованной мембраны и регулирование Эндо-интерфейсу плазматической мембраны. Резкое расширение апикальной мембраны в ходе морфогенеза канал - в этой системе одноклеточных совпадающих с расширением люмен – также позволяет анализировать архитектурных проблем необходимость стабилизации и центра внутриклеточного lumenal мембрана . Этот протокол сосредоточена на анализе канала трубки и Люмене в структурной морфогенеза и внутриклеточные мембраны динамика, необходимые для этого процесса, а не на сигналы, которые направляют ячейки движения, которые генерируют позиции ЕС в выделительной системы и построить его сложные соединения другие клеточные элементы (обзор в6).
Еще одним преимуществом C. elegans одноклеточных канал системы для анализа поляризованной мембраны и внутриклеточных люмен биогенеза является его способность отделить, путем развития время поколения различных компонентов своих мембран и развязок. ЕК рождается во время закрытия брюшной и оседает Вентро боков глотки в середине эмбриогенеза5,6,8, во время которого времени боковой канал расширение и ветвление возникают. Это сопровождается расширением передний задний канал во время позднего эмбриогенеза, процесс, который продолжается в L1-личиночной стадии (рис. 1). В только что вылупившихся личинок кончик заднего канала достигает примерно в середине червь, полностью расширения к хвосту в конце этапа L1, после чего канал удлиняется наряду с червь8. Рост активного канала со скоростью, превышающей животного роста таким образом заканчивается на первом личиночной стадии, однако, дальнейшего роста происходит параллельно с ростом всего животного в течение дополнительных личиночной стадии (L2-4). Этот параметр обеспечивает возможность анализировать различные шаги de novo поляризованной мембраны биогенеза независимо от поляризации деление клеток или миграции. Кроме того он допускает разделение этого процесса от Ассамблеи узлов (которые встречаются в эмбриона до инициации люмен); их точное требованием в поляризацию мембраны по-прежнему является открытым вопросом в области полярности. Наконец он однозначно отделяет апикальной от базальной мембраны экспансии, последний процесс, предшествующий бывший в выделительной каналов10. В C. elegans выделительной канал модель является поэтому особенно информативным дополнением к кишечной модель, которая разделяет ряд этих преимуществ для анализа биогенеза поляризованной мембраны, но выполняет его в многоклеточных обстановке (см. сопроводительный документ на кишечную tubulogenesis3).
Хотя одичал тип каналов ультратонких трубочки в этой крошечной червя, их люмен может быть visualized непосредственно на Номарски оптики в этой прозрачной животного. В самом деле морфологии мутант кистозных канал может быть охарактеризована в непомеченном животных, с использованием малое увеличение рассекает микроскопии, который был использован для большой эффект в вперед генетических экраны для идентификации генов, участвующих в tubulogenesis11. Улучшенная визуализация морфология каналов и различия их поляризованной мембраны, цитоскелетных компонентов, различных внутриклеточных органелл и других внутриклеточных структур, однако, требует маркировки и выше мощность люминесцентных рассечения и конфокальная микроскопия. Хотя по каналам тонкой структуры создает ряд трудностей для маркировки и микроскопии, мембраны и субцеллюлярные компоненты можно выделить через конкретных молекул, уникальные для каждого отсека, и животные могут безопасно установлены для микроскопии, если меры предосторожности во избежание введения артефакты (см. протокол и обсуждение). Маркировка может быть сделано по иммуногистохимия в фиксированных образцов, или путем создания трансгенных червей, выражая флуоресцентные синтез белков под их собственным контролем или выделительной промоутеров канал специфичные для изображений в естественных условиях . Этот протокол описывает последний метод маркировки (см. сопроводительный документ на кишечную tubulogenesis для антитело пятная3).
Способность сочетать в vivo исследований или получить из функция потерь с в vivo imaging анализ на одну ячейку уровень на протяжении всего развития делает в C. elegans выделительной канал особенно строгую модель для молекулярных и Сотовый анализ одноклеточные tubulogenesis. Прямого или обратного генетического экраны могут быть выполнены начиная с одичал тип или помечены трансгенных животных, чтобы определить канал морфогенеза фенотипов (например, кисты) и их основные дефекты гена. Кроме того такие экраны можно начать с мутант фенотип (например, кистозный канал) и идентифицировать Подавители или усилители этот фенотип для идентификации генов, которые функционально взаимодействуют с геном, вызывая фенотипом мутанта. Может вызвать генетический дефект, вызывая фенотипом мутанта прибыли или убытка (например, через удаление ген) (например, через активирующих мутаций или через введение избыточного гена копий) исследуемой функции. Вперед, мутагенеза или систематического RNAi экраны без предубеждений на функции гена и объективной идентификации генов, вовлеченных в функции интерес. Учитывая наличие генома общесистемной RNAi кормления библиотек почти каждый ген может быть легко сбит RNAi в C. elegans, таким образом, что любой одного гена интереса или любой группы генов (например, в целевых экраны) могут также быть быстро исследован для их эффекта обратной генетики подход. Чтобы продемонстрировать возможно сочетание подходов, мы здесь описать целевой экран взаимодействия РНК-интерференции, начиная с кистозным выделительной канал усиления функции мутант, помечены цитоплазматических канал зеленого флуоресцентного белка (ГПУП). Мутант фенотип порожденных гиперэкспрессия erm-1, высоко сохранены C. elegans ortholog мембраны актина компоновщика семьи Эзрин-Radixin-Moesin (ERM), который был вовлечен в просвете морфогенеза и мембраны Организация в многих видов12. C. elegans ERM-1 локализуется в lumenal мембраны внутренних органов, например выделительной канал и кишечника и необходим для формирования Люмене в обоих13. ERM-1 гиперэкспрессия новобранцев избыток актина и везикулы канал lumenal мембраны, увеличение потока в просвет и генерации короткий кистозных канал и гофрированные lumenal мембраны с утолщенными актина подшерсток9. Протокол описывает способы создания трансгенных штаммы с выделительной выразил канал помечены синтез белков (или другие белки); как выполнить целевые RNAi экраны, начиная с таких штаммов, определить модификаторы канал фенотип; и как визуально анализировать результаты таких экранов путем рассечения и конфокальной микроскопии флуоресцирования, включая простые способы для количественного определения информативный tubulogenesis фенотипов. Альтернативные методы и детали интерференции, часто смертельным tubulogenesis генов, с учетом можно найти в сопроводительный документ на кишечную tubulogenesis3. Все методы могут использоваться в различных сочетаниях для расследования других вопросов на канал tubulogenesis.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="983">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:811px;">Cloning</td>
			<td style="width:173px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Plasmid pPD95.75</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>Cat. No. 37464</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PCR Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>Cat. No. 27106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ligation kit</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>Cat. No. E2611L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DNA marker</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Cat. No. SM1331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Agarose DNA grade</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. No. BP164-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Competent cells</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>Cat. No. C2987H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tris</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. No. BP154-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. No. ED-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Acetic acid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. No. A38S-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ethidium bromide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. No. BP1302-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Equipments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PCR machine&#160;</td>
			<td>MJ Research</td>
			<td>Cat. No. PTG-200&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf&#160;</td>
			<td>Cat. No. 5415C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Water Bath</td>
			<td>Precision Scientific&#160;</td>
			<td>Cat. No. 666A3&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Gel running instrument</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. No. 09-528-165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Gel running power supply</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. No. 45-000-465</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Molecular Imager&#160;Gel Doc XR System</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>Cat. No. 1708195EDU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Nanodrop Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Cat. No. ND1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">C. elegans related1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1see reference27 for standard C. elegans culture and maintenance procedures.</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">LB Medium and plates2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2see reference24 for protocols.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tryptone&#160;</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>Cat. no. 611845000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Yeast Extract</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Cat. no. 212750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bacto Agar&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Cat. no. 214040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ampicillin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. A0116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tetracycline</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. no. BP912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td colspan="3" height="23" style="height:23px;">M9 Medium2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2see reference24 for protocols.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. P0662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Na2HPO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. S7907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">MgSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. M2773</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">NGM plates 2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2see reference24 for protocols.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Peptone&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Cat. no. 211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tryptone&#160;</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>Cat. no. 611845000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bacto Agar&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Cat. no. 214040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">MgSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. M2773</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. C3881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cholesterol&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. C8667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">K2HPO4&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. P3786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. P0662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">RNAi plates3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3see reference60 for protocols.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Peptone&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Cat. no. 211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tryptone&#160;</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>Cat. no. 611845000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bacto Agar&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Cat. no. 214040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">MgSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. M2773</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. C3881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cholesterol&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. C8667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">K2HPO4&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. P3786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Cat. no. P0662</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">IPTG&#160;</td>
			<td>US Biological</td>
			<td>Cat. no. I8500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Carbenicillin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. no. BP2648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NaOH</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. no. SS266-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium hypochlorite</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. no. 50371500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bacteria</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">OP50 bacteria</td>
			<td colspan="2">CGC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HT115 bacteria</td>
			<td colspan="2">CGC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Genome-wide RNAi libraries</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Ahringer genome-wide RNAi feeding library (ref29,49)</td>
			<td>Source BioScience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">C. elegans ORF-RNAi feeding library (ref50)</td>
			<td>Source BioScience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Imaging related</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lidocaine</td>
			<td>MP Biomedicals,LLG</td>
			<td>Cat. no. 193917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vacuum Grease Silicone</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>Cat. no. 335148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microscope slides&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. no. 4448</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microscope coverslips (22&#215;22-1&#65289;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat. no. 12-542-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tissue culture plate, 6 well&#160;</td>
			<td>Corning Inc.</td>
			<td>Cat. no. 08-772-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">SMZ-U dissecting microscope (Nikon)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:811px;">SZX12 dissecting microscope (Olympus), equipped with a high-power stereo fluorescence attachment (Kramer Scientific), CCD camera with Q capture software and X-Cite fluorescent lamp (Photonic Solutions).</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TCS SL Laser-scanning confocal microscope (Leica Microsystem)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">C2 laser-scanning confocal mounted on an ECLIPSE Ti-E inverted microscope (Nikon)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the c. elegans excretory canal as a model for intracellular lumen morphogenesis and in vivo polarized membrane biogenesis in a single cell: labeling by gfp-fusions, rnai interaction screen and imaging

Четыре C. elegans выделительной каналы являются узкие трубки продлен через длину животного из одной клетки, с почти одинаково далеко расширенной внутриклеточных endotubes, что строить и стабилизировать люмен с мембраной и submembraneous Цитоскелет апикальной характера. Выделительной ячейки расширяет его длина около 2 000 раз для создания этих каналов, делая эта модель уникальной в естественных условиях оценки de novo поляризованной мембраны биогенеза, внутриклеточный люмен морфогенеза и одноклеточные tubulogenesis. Протокола, представленные здесь показано, как объединить стандарта маркировки, выгоды и потери из функцию - генетических или РНК-интерференции (RNAi)-и микроскопический подходы использовать эту модель для визуально анализировать и функционально анализа этих процессов на молекулярном уровне. Как пример маркировки подхода Протоколе излагаются поколения трансгенных животных с флуоресцентные синтез белков для живой анализа tubulogenesis. Как пример генетического подхода в нем освещаются ключевые моменты визуальный РНК-интерференции на основе взаимодействия экран предназначен для изменения фенотипа кистозных канал усиления функции. Конкретные методы, описанные в как: ярлык и визуализировать каналов, выражая флуоресцентных белков; построить библиотеку целевых RNAi и выработать стратегию RNAi скрининг для молекулярного анализа канал морфогенеза; визуально оценить изменения канала фенотипов; Оценка их путем рассечения микроскопии флуоресцирования; характеризуют канал субцеллюлярные компоненты с более высоким разрешением, confocal микроскопии; и количественно визуальных параметров. Этот подход полезен для следователя, кто заинтересован в использовании преимуществ в C. elegans выделительной канал для выявления и классификации генов, участвующих в филогенетически сохранены процессах внутриклеточного просвета и одноклеточные трубка морфогенеза.

Этот протокол описывает, как использовать C. elegans выделительной каналов для визуально и молекулярно анализа одноклеточные tubulogenesis и внутриклеточных люмен морфогенеза в одну ячейку. Во время их расширение с момента середине эмбриогенеза к взрослой жизни четыре вы?...

Watch this Scientific Journal Video about The C. elegans Excretory Canal as a Model for Intracellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis in a Single Cell: labeling by GFP-fu

The C. elegans Excretory Canal as a Model for Intracellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis in a Single Cell: labeling by GFP-fusions, RNAi Interaction Screen and Imaging

В C. elegans Excretory канал как модель для внутриклеточного люмен морфогенеза и In Vivo поляризованной мембраны биогенеза в одной ячейке: маркировка GFP-расплавы, RNAi взаимодействие экрана и изображений

В C. elegans выделительной канал является уникальный одноячеечной модели для анализа визуальных в vivo биогенеза de novo поляризованной мембраны. Этот протокол описывает сочетание стандартных генетических/RNAi и изображений подходы, пригодных для идентификации и определения характеристик молекул, направляя одноклеточные tubulogenesis и апикальном мембрана и Люмене биогенеза.

The four C. elegans excretory canals are narrow tubes extended through the length of the animal from a single cell, with almost equally far extended ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

The C. elegans Excretory Canal as a Model for Intracellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis in a Single Cell: labeling by GFP-fusions, RNAi Interaction Screen and Imaging

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Анализ<em&gt; В Vivo</em&gt; Миграция клеток с использованием мобильных трансплантаций и время покадровой визуализации у эмбрионов данио рерио

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Spatial and Temporal Analysis of Active ERK in the C. elegans Germline

Пространственный и временной анализ активного ERK в<em&gt; C. Элеганс</em&gt; Половые

The evolutionarily conserved&#160;extracellular signal transducing RTK-RAS-ERK pathway is an important kinase-signaling cascade that controls multiple ...

Drug Treatment and In Vivo Imaging of Osteoblast-Osteoclast Interactions in a Medaka Fish Osteoporosis Model

Drug Treatment and In Vivo Imaging of Osteoblast-Osteoclast Interactions in a Medaka Fish Osteoporosis Model

Лечение наркомании и<em&gt; В Vivo</em&gt; Визуализация остеобластов-остеокластов взаимодействий в модели Оризии Рыба Остеопороз

Bone-forming osteoblasts interact with bone-resorbing osteoclasts to coordinate the turnover of bone matrix and to control skeletal homeostasis. Medaka ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Новая методика трансплантации молочной жировой ткани для визуализации образования сосудов сосудистых эндотелиальных стволовых клеток

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

The C. elegans Intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analysis and Imaging

The C. elegans Intestine As a Model for Intercellular Lumen Morphogenesis and In Vivo Polarized Membrane Biogenesis at the Single-cell Level: Labeling by Antibody Staining, RNAi Loss-of-function Analy

C. elegans кишечника как модель для межклеточных люмен морфогенеза и In Vivo поляризованной мембраны биогенеза на уровне одной ячейки: маркировка Пятнать антитела, RNAi потери функции анализа и обработки изображений

Multicellular tubes, fundamental units of all internal organs, are composed of polarized epithelial or endothelial cells, with apical membranes lining the ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Применение РНК-интерференции и тепло шок индуцированной выражение фактор транскрипции для перепрограммирования клетки семенозачатка нейронов в C. elegans

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

In Vivo Imaging of Muscle-tendon Morphogenesis in Drosophila Pupae

В естественных условиях Imaging мышц сухожилие морфогенеза в куколки дрозофилы

Muscles together with tendons and the skeleton enable animals including humans to move their body parts. Muscle morphogenesis is highly conserved from ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Оценка окислительного повреждения в первичной мыши глазной поверхностных клеток / стволовых клеток в ответ на ультрафиолет-C (UV-C) Ущерб

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

A Semi-high-throughput Imaging Method and Data Visualization Toolkit to Analyze C. elegans Embryonic Development

A Semi-high-throughput Imaging Method and Data Visualization Toolkit to Analyze C. elegans Embryonic Development

Полу-высокой пропускной способ визуализации и инструментвизуализации данных для анализа C. elegans эмбрионального развития

C. elegans is the premier system for the systematic analysis of cell fate specification and morphogenetic events during embryonic development. One ...

Visualizing Ocular Morphogenesis by Lightsheet Microscopy Using rx3:GFP Transgenic Zebrafish

Визуализация морфогенеза глаза с помощью микроскопии Lightsheet с использованием rx3: GFP Трансгенные рыбки данио

Vertebrate eye development is a complex process that begins near the end of embryo gastrulation and requires the precise coordination of cell migration, ...