Name: horizontal whole mount: a novel processing and imaging protocol for thick, three-dimensional tissue cross-sections of skin
Uploaded: 2017-08-02T15:00:00
Duration: 8 min 31 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin at JoVE.com

המחברים מכירים בחסות תרמו-פישר סיינטיפיק ומודים למרכז ההדמיה של ניקון בקינגס קולג &#39;בלונדון לתמיכה במהלך רכישת תמונות קונפוקאליות.

<ol>
	<li>Plikus, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+dermal+BMP+signalling+regulates+stem+cell+activation+during+hair+regeneration.">Cyclic dermal BMP signalling regulates stem cell activation during hair regeneration.</a> Nature. 451 (7176), 340-344 (2008).</li><li>Zhang, Y. V., Cheong, J., Ciapurin, N., McDermitt, D. J., Tumbar, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+self-renewal+and+differentiation+phases+in+the+niche+of+infrequently+dividing+hair+follicle+stem+cells.">Distinct self-renewal and differentiation phases in the niche of infrequently dividing hair follicle stem cells.</a> Cell Stem Cell. 5 (3), 267-278 (2009).</li><li>Jensen, U. B., Lowell, S., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatial+relationship+between+stem+cells+and+their+progeny+in+the+basal+layer+of+human+epidermis:+a+new+view+based+on+whole-mount+labelling+and+lineage+analysis.">The spatial relationship between stem cells and their progeny in the basal layer of human epidermis: a new view based on whole-mount labelling and lineage analysis.</a> Development. 126 (11), 2409-2418 (1999).</li><li>Braun, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulation+of+stem+cell+proliferation+and+lineage+commitment:+visualisation+of+label-retaining+cells+in+wholemounts+of+mouse+epidermis.">Manipulation of stem cell proliferation and lineage commitment: visualisation of label-retaining cells in wholemounts of mouse epidermis.</a> Development. 130 (21), 5241-5255 (2003).</li><li>Driskell, R. R., Giangreco, A., Jensen, K. B., Mulder, K. W., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox2-positive+dermal+papilla+cells+specify+hair+follicle+type+in+mammalian+epidermis.">Sox2-positive dermal papilla cells specify hair follicle type in mammalian epidermis.</a> Development. 136 (16), 2815-2823 (2009).</li><li>Niculescu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+ablation+of+integrin+alpha-6+in+mouse+epidermis+leads+to+skin+fragility+and+inflammation.">Conditional ablation of integrin alpha-6 in mouse epidermis leads to skin fragility and inflammation.</a> Eur J Cell Biol. 90 (2-3), 270-277 (2011).</li><li>Fujiwara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+basement+membrane+of+hair+follicle+stem+cells+is+a+muscle+cell+niche.">The basement membrane of hair follicle stem cells is a muscle cell niche.</a> Cell. 144 (4), 577-589 (2011).</li><li>Desciak, E. B., Maloney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artifacts+in+frozen+section+preparation.">Artifacts in frozen section preparation.</a> Dermatol Surg. 26 (5), 500-504 (2000).</li><li>Driskell, R., Jahoda, C. A., Chuong, C. M., Watt, F., Horsley, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+dermal+adipose+tissue.">Defining dermal adipose tissue.</a> Exp Dermatol. 23 (9), 629-631 (2014).</li><li>Driskell, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+fibroblast+lineages+determine+dermal+architecture+in+skin+development+and+repair.">Distinct fibroblast lineages determine dermal architecture in skin development and repair.</a> Nature. 504 (7479), 277-281 (2013).</li><li>Snippert, H. J., Schepers, A. G., Delconte, G., Siersema, P. D., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slide+preparation+for+single-cell-resolution+imaging+of+fluorescent+proteins+in+their+three-dimensional+near-native+environment.">Slide preparation for single-cell-resolution imaging of fluorescent proteins in their three-dimensional near-native environment.</a> Nat Protoc. 6 (8), 1221-1228 (2011).</li><li>Sada, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+cellular+lineage+hierarchy+in+the+interfollicular+epidermis+of+adult+skin.">Defining the cellular lineage hierarchy in the interfollicular epidermis of adult skin.</a> Nat Cell Biol. 18 (6), 619-631 (2016).</li><li>Chung, K., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CLARITY+for+mapping+the+nervous+system.">CLARITY for mapping the nervous system.</a> Nat Methods. 10 (6), 508-513 (2013).</li><li>Tetteh, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replacement+of+Lost+Lgr5-Positive+Stem+Cells+through+Plasticity+of+Their+Enterocyte-Lineage+Daughters.">Replacement of Lost Lgr5-Positive Stem Cells through Plasticity of Their Enterocyte-Lineage Daughters.</a> Cell Stem Cell. 18 (2), 203-213 (2016).</li></ol>

המחברים מבקשים לגלות כי פרסום כתב היד הזה מומן על ידי Thermo-Fisher Scientific Inc.

Here, we present the "horizontal whole mount" technique, which has several advantages over classical frozen sections. One advantage of our technique is that it can easily be performed with standard histology equipment and a confocal microscope. Second, the tissue integrity is preserved in a superior manner when compared to standard cryosections. For example, adipocytes within the hypodermal layer (i.e., dermal white adipocytes (DWAT))9 are severely disrupted in standard cryosections, which makes studying tissues that are adipose-laden impossible. Our technique allows for the full analysis of the adipocytes in this layer and may be adapted to other tissues with high adipocyte contents. Furthermore, this allows for the improved detection of mesenchymal cells in lineage-tracing studies 2,10. 
Standard cryosections, by their very nature, can never reveal the true 3D aspects of a tissue through confocal microscopy. This means that thicker sections are advantageous in the analysis of skin, since hair follicles, as well as their substructures, can traverse a depth that exceeds the standard thickness of 10 &#181;m used in classical crysosections. We are intrigued that other tissues, such as the intestine and brain, for example, possess similar challenges with regard to viewing the tissue as a 3D structure2,7,11,12,13. Intriguingly, our technique has already been shown to be beneficial for use in certain applications in the intestines14. We believe that our horizontal whole-mount protocol has the potential be applied to any other tissue requiring 3D analysis.

המהפכה של ציוד הדמיה מיקרוסקופית מספקת עבור מכשירים מתוחכמים, ברזולוציה גבוהה הדמיה. עם זאת, בעת רכישת תמונה מיקרוסקופית של מלא תלת מימדית (3D) רקמות חתך, הכנת הדגימה מציג אתגרים משמעותיים יכול להיות הגורם המגביל בהגדרת איכות התמונה. כל צעד נפרד ראוי שיקול זהיר על מנת לשמר מורפולוגיה רקמות ואת האנטיגניות של חלבונים היעד, כדי למזער חפצים המושרה עיבוד, כדי למקסם את איכות התמונה הסופית. לדוגמה, ניתוח מסורתי של העור דורש תמונה עם נוף של האפידרמיס ודרמיס, עם זקיקי השיער כי הם בכיוון הנכון, המאפשר ניתוח אנטומי של תא תא תרומות תא העור הומאוסטזיס 1 , 2 . זה דורש ריכוז יסודי על איך העור מוטבע וחתך. חשוב לציין, זקיקי השיער יכול להיות עבה יותרמ -100 מיקרומטר, אשר עולה בהרבה על פרפין רגיל או עובי סעיף קפוא, וכתוצאה מכך תקן נמוך יותר של ניתוח לעומת mounts כולו או חתכים עבים 3 , 4 , 5 . יחד, כל צעד של הכנת הדגימה לניתוח מיקרוסקופי הוא גורם מכריע שישפיע על ניתוח התמונה. כאן, פרוטוקול עיבוד חדשניים עבור עבה, 3D ניתוח חתך רוחב, אשר אנו מכנים &quot;הר שלם אופקי&quot;, מוצג. הפרוטוקול משמר מאוד אנטיגניות ומאפשר ניצול מלא של חלקים עבים של העור באמצעות ציוד הדמיה confocal רגיל. זהו מדריך מלא לשימוש בעור לעיבוד רקמות עבה חתך הדמיה, כולל קציר הקציר ו paraformaldehyde (PFA), cryopreservation (שלב 1), הדור של 100 מיקרומטר עבה רקמות חתך עם cryostat (צעד 2), תיוג אימונופלורסנט הרכבה (שלבים 3 ו -4). תוצאות נציג להשוות תמונות confocal של שתי טכניקות הכנה היסטולוגית ברורה - cryosectioning קלאסית עבה, רקמות 3D חתך חתך, הדגשת היתרונות של &quot;mounts אופקי שלם&quot; עבור המשתמש הפוטנציאלי של פרוטוקול זה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="658">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">PBS</td>
			<td style="width:99px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">homemade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Gelatin, from cold water fish skin</td>
			<td style="width:99px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">G7765</td>
			<td>250ML</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:273px;">Glycerol</td>
			<td style="width:99px;">BDH Laboratory Supplies</td>
			<td style="width:119px;">444482V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">O.C.T. compound</td>
			<td style="width:99px;">VWR chemicals</td>
			<td style="width:119px;">361603E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Peel-A-Way embedding molds</td>
			<td style="width:99px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">E6032-1CS</td>
			<td>Square S-22</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Non-Fat Powdered Milk</td>
			<td style="width:99px;">Bio Basic Inc.</td>
			<td style="width:119px;">NB0669</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:99px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T9284</td>
			<td>500ML</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">4&#8242;,6-Diamidino-2-phenylindole, dilactate (DAPI)</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">D3571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">FITC Rat Anti-Human CD49f</td>
			<td style="width:99px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:119px;">555735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Mouse/Rat Integrin alpha 8 Antibody</td>
			<td style="width:99px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:119px;">AF4076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">Alexa Fluor 488 donkey anti-rat IgG</td>
			<td style="width:99px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">A21208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">Alexa Fluor 555 donkey anti-goat IgG</td>
			<td style="width:99px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">A21432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:273px;">CryoStar NX70</td>
			<td style="width:99px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">100mm Culture dishes</td>
			<td style="width:99px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">Disposable scalpels</td>
			<td style="width:99px;">Swann-Morton</td>
			<td style="width:119px;">Ref 0501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">pointed metal forceps</td>
			<td style="width:99px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:99px;">VWR</td>
			<td dir="LTR">211-2130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">12 Well plates</td>
			<td style="width:99px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">CLS3513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Dissecting microscope</td>
			<td style="width:99px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">20 ul and 1000 ul Pipette</td>
			<td style="width:99px;">Gilson</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">1000&#181;l XL Graduated TipOne Filter Tip (Sterile)</td>
			<td style="width:99px;">Star Lab</td>
			<td dir="LTR">S1122-1830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td dir="LTR" height="21" style="height:21px;">20&#181;l Bevelled TipOne Filter Tip (Sterile)</td>
			<td style="width:99px;">Star Lab</td>
			<td>S1120-1810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Rocking shaker plate</td>
			<td style="width:99px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">Microscope slides, menzel Glaeser</td>
			<td style="width:99px;">Thermos Scientific</td>
			<td style="width:119px;">631-9483</td>
			<td>Superfrost Plus</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">Cover Glasses, Menzel Glaeser</td>
			<td style="width:99px;">Thermos Scientific</td>
			<td style="width:119px;">MENZBB024060AB</td>
			<td>24 x 60 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:99px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

horizontal whole mount: a novel processing and imaging protocol for thick, three-dimensional tissue cross-sections of skin

עיבוד רקמה של עניין כדי ליצור תמונה מיקרוסקופית התומכת טענה מדעית יכול להיות מאתגר. רכישת תמונות מיקרוסקופיות באיכות גבוהה אינה תלויה לחלוטין באיכות המיקרוסקופ, אלא גם בשיטות עיבוד הרקמות, אשר לעיתים קרובות כרוכות בפעולות קריטיות או צעדים רבים. יתר על כן, סוגי תאים mesenchymal בעור ורקמות אחרות מייצגים אתגר חדש עבור הכנת רקמות הדמיה. כאן, אנו מציגים תהליך שלם, מן הקציר רקמות למיקרוסקופ. הטכניקה שלנו, המכונה &quot;הר שלם אופקית&quot;, הוא אחד כי טירונים יכולים להפוך במהירות בקיאים זה מאפשר שימור אנטיגן ו ב 60-300 מיקרומטר עבה חלקים לחתוך עם cryostat. חלקים של עובי זה מספק הדמיה משופרת של microarchitecture רקמות בסביבה תלת מימדי. בנוסף, הפרוטוקול משמר תאים mesenchymal באופן זה משפר את איכות התמונה כאשרלעומת קריסטוסט סטנדרטי או חלקים פרפין, ובכך להגדיל את היעילות והאמינות של immunostaining. אנו מאמינים כי פרוטוקול זה ייהנה כל המעבדות לדמיין את העור, ואולי רקמות אחרות ואיברים.

כדי להדגיש את היתרונות של הטכניקה שלנו, השווה שלנו עבה, 3D רקמה חתך טכניקה, &quot;הר שלם אופקי&quot;, כדי קטעים קפואים קלאסיים. קטעים קפואים קלאסיים נחתכו כפי שתואר לעיל 5 . כדי לספק מבנה חזותי של האפידרמיס בתמונות מיקרוסקופיות, אנו אימונו-איסטנט עבור אינטגרין אלפא -6 (Itga6), שהוא מרכיב המעגן את תאי האפידרמיס לקרום המרתף שבבסיס 6 . כמו כן, שרטטנו את שריר הפילי ארקטור (APM), שאחראי על פילוארקציה (הידוע גם בשם &quot;צמרמורת&quot;), עם אינטגרין אלפא-8 7 . בקטעים הקפואים הקלאסיים, רוב זקיקי השיער שנדמיינו עם Itga6 לא נחתכו לאורך כל אורך הדרך, ויצרו זקיקי שיער חסרים ברובם לכל סעיף, בהשוואה לרכיבי שיער אופקיים ( איור 4 א -4 ד) </strong&gt;). חתך רקמות עבות מאפשרים לרכוש יותר Z- מחסנית שכבות לעומת מקובל 10 מיקרומטר סעיפים, המאפשר תמונה 3D מלאה יותר. זה הופך להיות אפילו יותר בולט כאשר לומדים את השלמות של APMs, אשר קשורים עם זקיקי השיער ואת קרום המרתף מעל. ב cryosections קלאסית, חלק עצום של APMs היו חלק ( איור 4 א -4 ד ). בנוסף, שלמות רקמות של תא hypodermal נשמר אופקי שלם mounts, לעומת הרס של adipocytes כאשר cryosections מחוברים שקופיות זכוכית חמה, אשר ידועה להקפיא-הפשרת חפץ ( איור 4a- b , להשוות את המזרק 8 ). <img alt="איור 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56106/56106fig4.jpg" /> איור 4. mou אופקי שלםNt לעומת קריאוסקציה קלאסית. ( א ) התקבלו באופן קלאסי cryosections העור 10 מיקרומטר עבה ו ( ב ) 100 מיקרומטר עבה 3D רקמות חתכים היו מסומנים עם integrin אלפא -6 (Itga6) ו integrin alpha-8 (Itga8) כדי לדמיין את תא האפידרמיס ואת שרירי פיילי arrector , בהתאמה. התמונות של חתכים עבים רקמות מיוצגים כמו תחזיות מקסימלית של ערימת Z גדולה. המסגרות הלבנות מציינות את האזורים המורחבים, המוצגים ב ( ג ) החלקים הקלאסיים ( d ) האופטיים. ( ה ) זקיקי שיער שלמים ו ( f ) שרירי פילי שלם arrector היו לכמת בשני קטעים קלאסיים ואופקיים הר שלם. פסי סולם מצביעים על 100 מיקרומטר. הנתונים מיוצגים כ ממוצע ± שגיאת תקן של ממוצע (SEM). סעיף אחד לכל משכפל ביולוגי ( n = 3) היה לכמת. מבחן לא מסונכרן * P &lt;0.05, *** P &lt;0.0005. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56106/56106fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin at JoVE.com

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

אופקי הר שלם: עיבוד רומן פרוטוקול הדמיה על רקמה עבה, תלת מימדי חתכים של העור

עבודה זו מציגה עיבוד חדש פרוטוקול הדמיה לניתוח עבה, תלת ממדי ניתוח חתך המאפשר ניצול מלא של modocalities הדמיה confocal. פרוטוקול זה משמר אנטיגניות ומייצג מערכת חזקה לנתח היסטולוגיה העור וסוגים אחרים של רקמות אחרות.

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

A Novel Use of Three-dimensional High-frequency Ultrasonography for Early Pregnancy Characterization in the Mouse

שימוש הרומן של בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה תלת מימדי אפיון בתחילת ההריון העכבר

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is ...

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

להמחיש Multiciliated בתאים דג זברה באמצעות פרוטוקול משולב של פלורסנט הר שלמה בחיי עיר הכלאה, Immunofluorescence

In recent years, the zebrafish embryo has emerged as a popular model to study developmental biology due to traits such as ex utero embryo development and ...

Whole-mount Clearing and Staining of Arabidopsis Flower Organs and Siliques

Whole-mount Clearing and Staining of Arabidopsis Flower Organs and Siliques

כולה-הר ניקוי, כתמים של תודרנית פרח איברים, Siliques

Due to its formidable tools for molecular genetic studies, Arabidopsis thaliana is one of the most prominent model species in plant biology and, ...

Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos

ניתוח כמותי Immunofluorescence כולה-הר של אוכלוסיות לב ב העכבר עוברי

The use of ever-advancing imaging techniques has contributed broadly to our increased understanding of embryonic development. Pre-implantation development ...

Three-dimensional Rendering and Analysis of Immunolabeled, Clarified Human Placental Villous Vascular Networks

תלת מימדי עיבוד וניתוח של Immunolabeled, מובהר היפרדות villous חלקית וסקולרית הרשתות האנושיות

Nutrient and gas exchange between mother and fetus occurs at the interface of the maternal intervillous blood and the vast villous capillary network that ...

Three-dimensional Inflammatory Human Tissue Equivalents of Gingiva

תלת מימדי רקמה אנושית דלקתיות במקבילות של חניכיים

Periodontal diseases (such as gingivitis and periodontitis) are the leading causes of tooth loss in adults. Inflammation in gingiva is the fundamental ...

Whole-mount Confocal Microscopy for Adult Ear Skin: A Model System to Study Neuro-vascular Branching Morphogenesis and Immune Cell Distribution

כולה-הר מיקרוסקופיה קונפוקלית לעור מבוגר האוזן: מערכת מודל ללמוד מורפוגנזה מסעף נוירו-וסקולרית והפצה תא החיסון

Here, we present a protocol of a whole-mount adult ear skin imaging technique to study comprehensive three-dimensional neuro-vascular branching ...

Three-dimensional Organotypic Cultures of Vestibular and Auditory Sensory Organs

Organotypic תלת מימדי התרבויות שיווי המשקל ושמיעתיים אברי החישה

The sensory organs of the inner ear are challenging to study in mammals due to their inaccessibility to experimental manipulation and optical observation. ...

Whole Mount Immunofluorescence and Follicle Quantification of Cultured Mouse Ovaries

Immunofluorescence הר שלמה, זקיק כימות של השחלות תרבותי. העכבר

Research in the field of mammalian reproductive biology often involves evaluating the overall health of ovaries and testes. Specifically, in females, ...

A Simplified and Efficient Method to Isolate Primary Human Keratinocytes from Adult Skin Tissue

שיטה פשוטה ויעילה כדי לבודד Keratinocytes האנושי העיקרי של רקמת עור מבוגר

Primary human keratinocytes isolated from fresh skin tissues and their expansion in vitro have been widely used for laboratory research and for clinical ...