Name: correlative super-resolution and electron microscopy to resolve protein localization in zebrafish retina
Uploaded: 2017-11-10T12:30:00
Duration: 12 min 28 s
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अनुदान आयन और आरजीबी: स्विस नेशनल साइंस फाउंडेशन Ambizione-स्कोर ग्रांट PZ00P3 142404/1 और PZ00P3 १६३९७९.

<ol>
	<li>Hauser, M., Wojcik, M., Kim, D., Mahmoudi, M., Li, W., Xu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlative+Super-Resolution+Microscopy:+New+Dimensions+and+New+Opportunities.">Correlative Super-Resolution Microscopy: New Dimensions and New Opportunities.</a> Chem Rev. , (2017).</li><li>Dempsey, G. T., Vaughan, J. C., Chen, K. 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H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+intracellular+fluorescent+proteins+at+nanometer+resolution.">Imaging intracellular fluorescent proteins at nanometer resolution.</a> Science (New York, N.Y.). 313 (5793), 1642-1645 (2006).</li><li>Kopek, B. G., Shtengel, G., Grimm, J. B., Clayton, D. A., Hess, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlative+photoactivated+localization+and+scanning+electron+microscopy.">Correlative photoactivated localization and scanning electron microscopy.</a> PLOS one. 8 (10), e77209 (2013).</li><li>Paez-Segala, M. G., Sun, M. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ciliopathy+gene+cc2d2a+controls+zebrafish+photoreceptor+outer+segment+development+through+a+role+in+Rab8-dependent+vesicle+trafficking.">The ciliopathy gene cc2d2a controls zebrafish photoreceptor outer segment development through a role in Rab8-dependent vesicle trafficking.</a> Hum Mol Gen. 20 (20), 4041-4055 (2011).</li><li>Bachmann-Gagescu, R., Dona, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ciliopathy+Protein+CC2D2A+Associates+with+NINL+and+Functions+in+RAB8-MICAL3-Regulated+Vesicle+Trafficking.">The Ciliopathy Protein CC2D2A Associates with NINL and Functions in RAB8-MICAL3-Regulated Vesicle Trafficking.</a> PLOS Gen. 11 (10), e1005575 (2015).</li><li>Mateos, J. M., Guhl, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topographic+contrast+of+ultrathin+cryo-sections+for+correlative+super-resolution+light+and+electron+microscopy.">Topographic contrast of ultrathin cryo-sections for correlative super-resolution light and electron microscopy.</a> Sci Rep. 6, 34062 (2016).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Thompson, R. E., Larson, D. R., Webb, W. 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A., Neumann, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscale+distribution+of+mitochondrial+import+receptor+Tom20+is+adjusted+to+cellular+conditions+and+exhibits+an+inner-cellular+gradient.">Nanoscale distribution of mitochondrial import receptor Tom20 is adjusted to cellular conditions and exhibits an inner-cellular gradient.</a> Proc Nat Acad Sci U S A. 108 (33), 13546-13551 (2011).</li><li>Slot, J. W., Geuze, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryosectioning+and+immunolabeling.">Cryosectioning and immunolabeling.</a> Nat Prot. 2 (10), 2480-2491 (2007).</li></ol>

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

इस विधि में एक organelle में प्रोटीन की सटीक स्थिति निर्धारित करने के लिए संदर्भ जानकारी के साथ सुपर हल प्रोटीन स्थानीयकरण को जोड़ती है । हम यहाँ mitochondria की बाहरी झिल्ली में Tom20 की अभिव्यक्ति की कल्पना करने के लिए प्रयोग के समापन का प्रदर्शन, और photoreceptor लार्वा रेटिना में zebrafish के नाभिक या बाहरी क्षेत्रों की तरह अन्य organelles के लिए अपने संबंध.
Tokuyasu क्रायो-अनुभाग में अच्छी तरह से संरक्षित वर्गों को प्राप्त करने के लिए कुछ प्रशिक्षण की आवश्यकता है । हालांकि, यह एक के साथ कई प्रयोगशालाओं में कार्यरत पद्धति है सफलता का प्रदर्शन21। सिलिकॉन वेफर के लिए वर्गों के हस्तांतरण बहुत आसान है और कोई विशेष विचार की जरूरत है । इमेजिंग बफर में ग्लिसरॉल का उपयोग वर्गों के सूखने से बचने के लिए एक बहुत ही महत्वपूर्ण कदम है । सुपर संकल्प इमेजिंग के लिए सबसे अच्छा परिणाम प्राप्त कर रहे हैं जब वेफर बहुत पेट्री डिश के नीचे कांच के करीब है । सिलिकॉन धारियों इस स्थिति में वेफर बनाए रखने में मदद करते हैं । वर्गों को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए धारियों को हटाते समय विशेष सावधानी बरतनी होगी ।
क्रायो की मोटाई-वर्गों, १०० एनएम के आसपास, Z-आयाम में ऑप्टिकल संकल्प से पतले, इसके अलावा सुपर संकल्प माइक्रोस्कोपी संकेत के रूप में इस correlative विधि की सटीकता की सुविधा केवल इस पतली परत से आ रहा है और स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप संकेत नमूना की स्थलाकृति प्रदर्शित कर रहा है । इस विधि भी बहुरंगा इमेजिंग के साथ जोड़ा जा सकता है । हालांकि, विशेष देखभाल लिया जाना चाहिए कि नमूना एक ही स्थिति के तहत imaged किया जा सकता है (उदाहरण के लिए इमेजिंग बफर) और क्रॉस टॉक रोका जाना चाहिए ।
विधि की एक सीमा अपने दो आयामी दृष्टिकोण है, केवल धारावाहिक वर्गों की एक सीमित संख्या के बाद से (के बारे में 3 से 7 वेफर प्रति) एकत्र किया जा सकता है । इस प्रकार, परियोजनाओं की मात्रा विश्लेषण से निपटने आदर्श नहीं होगा । हालांकि, यह एक तरीका है कि नमूने के सरल अनुभाग द्वारा ऊतक के किसी भी प्रकार में प्रोटीन अभिव्यक्ति का पता लगाने के लिए लागू किया जा सकता है । हम uranyl एसीटेट या सीसा साइट्रेट जैसे शास्त्रीय विपरीत एजेंटों के उपयोग के बिना एक विधि प्रदान करते हैं । प्लैटिनम छायांकित द्वारा इसके विपरीत बहुत जानकारीपूर्ण स्थलाकृतिक विपरीत प्रदान करता है, लेकिन कुछ मामलों में झिल्ली को हल करने के लिए मुश्किल हैं । यह परियोजनाओं के लिए समस्या है कि जरूरत है, उदाहरण के लिए, छोटे बुलबुले में प्रोटीन की अभिव्यक्ति निर्धारित करने के लिए पैदा कर सकता है ।
हमारे प्रोटोकॉल, Tokuyasu क्रायो के आधार पर-वर्गों, मानक उपकरण का उपयोग करता है के लिए सुपर संकल्प से correlative परिणाम प्राप्त करने और इलेक्ट्रॉन सूक्ष्मदर्शी स्कैनिंग । सिलिकॉन वेफर्स पर वर्गों का संग्रह और इसके विपरीत प्लेटिनम के उपयोग के लिए नमूना तैयार करने के लिए स्थिरता और reproducibility प्रदान करने के लिए सरल कदम हैं ।

तरीके प्रोटीन के उपसेलुलर स्थानीयकरण और सेल के विभिन्न डिब्बों के लिए उनके रिश्ते का निर्धारण करने के लिए उनके कार्यों और संभव बातचीत को समझने के लिए आवश्यक उपकरण हैं । इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के साथ संयोजन में सुपर संकल्प माइक्रोस्कोपी ऐसी जानकारी प्रदान करता है1. भूमि राज्य कमी व्यक्तिगत अणु वापसी के बाद माइक्रोस्कोपी (GSDIM) एक सुपर संकल्प सूक्ष्म प्रौद्योगिकी कार्बनिक और आनुवंशिक रूप से इनकोडिंग fluorophores2 की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ संगत है और 20 एनएम के लिए एक पार्श्व संकल्प प्राप्त 3. मानक विवर्तन से उच्च संकल्प के साथ तरीकों का शामिल-सीमित माइक्रोस्कोपी सहसंबंध4,5,6की सटीकता में सुधार करता है । आदेश में एक विशिष्ट उपसेलुलर डिब्बे के साथ प्रोटीन अभिव्यक्ति का सबसे अच्छा संबंध को प्राप्त करने और अनिश्चितता की मात्रा को कम करने के लिए7 प्रकाश और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए एक ही ultrathin अनुभाग के उपयोग की सिफारिश की है । विभिंन अनुभागीय तरीकों के अलावा, Tokuyasu क्रायो-अनुभाग प्रोटोकॉल निर्जलीकरण या राल embedding की आवश्यकता नहीं है और, इसके अलावा में, कई epitopes के antigenicity को बरकरार रखता है और अच्छे ऊतक ultrastructure प्रदान करता है8। कई तरीकों correlative प्रकाश और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (भूखों)4,5,9,10में इन वर्गों की प्रयोज्यता का प्रदर्शन किया है ।
zebrafish रेटिना एक मूल्यवान दृश्य विकास और मानव रोग रीढ़ भर में अपने अत्यधिक संरक्षित संरचना और समारोह दिया तंत्र का अध्ययन करने के लिए मॉडल है. विशेष रूप से, रेटिना photoreceptors स्तनधारी photoreceptors के रूप में एक ही वास्तुकला प्रदर्शित, एक बेसल synapse, एक apico-बेसल लंबी नाभिक के साथ, अधिक mitochondria भीतरी खंड में शिखर की clustering और एक बाहरी झिल्ली से बना खंड सबसे शिखर स्थिति11में डिस्क्स । प्रोटीन स्थानीयकरण विविध सेलुलर डिब्बों को zebrafish और मानव के बीच संरक्षित है, मानव रोग के जैविक समारोह-प्रासंगिक प्रोटीन12,13की जांच की अनुमति ।
यहाँ हम correlative सुपर संकल्प प्रकाश और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा mitochondrial बाहरी झिल्ली प्रोटीन Tom20 के स्थानीयकरण को हल करने के लिए लार्वा zebrafish रेटिना नमूने तैयार करने के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं । विधि सिलिकॉन वेफर्स पर क्रायो-वर्गों को इकट्ठा करने और स्थलाकृतिक प्लेटिनम की एक पतली परत के आवेदन के बाद उत्पादित जानकारी के द्वारा इसके विपरीत प्राप्त करने पर आधारित है । इन चरणों का उपयोग करने के लिए आसानी के मामले में स्पष्ट तकनीकी सुधार कर रहे हैं, reproducibility, और प्रयोग पूरा करने के लिए समय. हमने हाल ही में माउस के ऊतकों में परमाणु pores और mitochondrial प्रोटीन का पता लगाने के लिए विधि की प्रयोज्यता का प्रदर्शन किया14।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde EM Grade</td>
			<td>EMS, USA</td>
			<td>#16220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cacodylate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>#8.20670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#886-86-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose, peqGOLD Universal</td>
			<td>VWR International GmbH</td>
			<td>35-1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat embedding molds</td>
			<td>BEEM Flat</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Local food brand gelatin</td>
			<td>Dr.Oetker</td>
			<td>Extra Gold</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>#1.07687</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylcellulose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>#M-6385</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>#G-7126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin type B</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>#G-6650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>#A6588.0050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon wafer</td>
			<td>Si-Mat Silicon Materials</td>
			<td></td>
			<td>Type: P/Boron; Orientation &#60;111&#62; ON; Growth method: CZ; Resistivity:1-30 ohm/cm; Surface: polished; Laser cut at 7 x7 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo-pin</td>
			<td>Baltic Preparation</td>
			<td>#16701950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wired loop &#34;Perfect loop&#34;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone stripes</td>
			<td>Picodent</td>
			<td>Twinsil 22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glucoseoxidase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#G7141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>catalase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#C40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>beta-Mercaptoethylamine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#M6500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Tom20</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>#sc - 11415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AlexaFluor 647 AffiniPure F(ab&#39;)2 fragment donkey anti rabbit IgG</td>
			<td>Jackson Immuno-Research</td>
			<td>#711-606-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>ROCHE, Switzerland</td>
			<td>#10236276001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>#49782</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom petri dish</td>
			<td>Ibidi, Germany</td>
			<td>u-Dish 35mm, high glass bottom, #81158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEM aluminium stub</td>
			<td>Agar Scientific</td>
			<td>#G301F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conducting carbon cement Leit-C</td>
			<td>Plano, Germany</td>
			<td>AG3300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond Knife (Cryo Immuno)</td>
			<td>Diatome</td>
			<td>DCIMM3520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo-ultramicrotome</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Leica EM FCS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Widefield-TIRF microscope GSD Leica SR GSD 3D</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>160x 1.43 TIRF objective</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>11523048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SEM - Zeiss Supra 50 VP</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Supra 50 VP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIB-SEM - Zeiss Auriga 40</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Auriga 40</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

correlative super-resolution and electron microscopy to resolve protein localization in zebrafish retina

हम सुपर संकल्प प्रकाश माइक्रोस्कोपी और स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के संयोजन से लार्वा zebrafish रेटिना में उपसेलुलर प्रोटीन स्थानीयकरण की जांच करने के लिए एक विधि प्रस्तुत करते हैं । सुपर संकल्प प्रकाश सूक्ष्मदर्शी की उप-विवर्तन सीमा संकल्प क्षमताओं को संबंधित डेटा की सटीकता में सुधार की अनुमति देते हैं । संक्षेप में, ११० नैनोमीटर मोटी क्रायो-वर्गों एक सिलिकॉन वेफर को हस्तांतरित कर रहे है और, इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला के बाद, सुपर संकल्प प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा imaged हैं । बाद में, वर्गों methylcellulose और प्लैटिनम में संरक्षित कर रहे है एक स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (SEM) में इमेजिंग से पहले छाया हुआ । इन दो सूक्ष्म तरीकों से छवियों को आसानी से खुला स्रोत सॉफ्टवेयर के साथ ऊतक स्थलों का उपयोग कर विलय कर रहे हैं । यहां हम लार्वा zebrafish रेटिना के लिए अनुकूलित विधि का वर्णन । हालांकि, इस विधि के ऊतकों और जीवों के अन्य प्रकार के लिए भी लागू है । हम यह दर्शाते हैं कि इस संबंध द्वारा प्राप्त पूरक जानकारी कोशिका के अन्य डिब्बों के साथ-साथ mitochondria के झिल्ली और cristae के संबंध में mitochondrial प्रोटीन की अभिव्यक्ति को हल करने में सक्षम है.

प्रोटीन Tom20 की अभिव्यक्ति, translocase mitochondrial बाहरी झिल्ली जटिल20की एक उपइकाई, लार्वा zebrafish रेटिना के पतले वर्गों में, सुपर संकल्प प्रकाश माइक्रोस्कोपी (चित्रा 1) द्वारा निर्धारित किया गया था और यह जानकारी थी स्थलाकृतिक एक ही वर्गों के प्लैटिनम छाया के बाद इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी स्कैनिंग द्वारा प्राप्त संकेत के साथ पूरित । ये correlative डेटा एक विशेष डिब्बे के साथ सहयोग में एक प्रोटीन के स्थानीयकरण की पुष्टि, बाहरी mitochondrial झिल्ली और, इसके अलावा कोशिका के अन्य organelles के साथ प्रोटीन के संबंध के बारे में जानकारी प्रदान करते हैं.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56113/56113fig1.jpg"> 
चित्रा 1: भूखों पर zebrafish रेटिना । एक 5 dpf zebrafish रेटिना खंड, नाभिक DAPI (सियान) के साथ सना हुआ की कम आवर्धन widefield छवि । इसी क्षेत्र की बी. स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी. C. उच्च आवर्धन widefield नाभिक में फ़्रेम की छवि DAPI (सियान) के साथ सना हुआ और Tom20 mitochondrial धुंधला लाल रंग में प्रकट होता है । उच्च आवर्धन पर एक ही अनुभाग की D. Widefield छवि । Tom20 अभिव्यक्ति का पैटर्न mitochondria के समूहों में है । Tom20 (लाल डॉट्स) की अभिव्यक्ति ई. GSDIM माइक्रोस्कोपी द्वारा पता चला. DAPI (सियान) के साथ सना नाभिक । ई संयोजन correlative सुपर संकल्प और स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के रूप में एक ही खंड F. Tom20 धुंधला (लाल डॉट्स) mitochondria के बाहरी झिल्ली पर mitochondrial क्लस्टर (एम) में प्रकट होता है । नाभिक (एन) में प्रतिदीप्ति DAPI संकेत SEM छवि की स्थलाकृति के साथ मेल खाती है । F. में फ़्रेम का Gउच्च आवर्धन छवि स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी छवि GSDIM छवि (लाल डॉट्स) के लिए संदर्भ प्रदान करता है । Mitochondrial cristae स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहे हैं और Tom20 धुंधला mitochondria की बाहरी झिल्ली के लिए स्थानीयकृत है । बाहरी खंड photoreceptors (ओएस) की झिल्ली स्पष्ट रूप से हल कर रहे हैं । छवि पिक्सेल आकार 5 एनएम । स्केल बार्स: A, B, and C: 10 µm; D: 2 µm; ई और एफ: 1 µm और जी: ०.२ µm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56113/56113fig1large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.</a>
अनुपूरक चित्रा 1: प्रकाश और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी छवियों का संरेखण । SEM छवि और गिने स्थलों के साथ TrackEM2 अंतरफलक से A. स्क्रीनशॉट (पीले) अलग नाभिक साथ । प्रतिदीप्ति छवि और अलग DAPI सना हुआ नाभिक साथ गिने स्थलों (पीले) के साथ TrackEM2 इंटरफेस से बीस्क्रीनशॉट । परत पारदर्शिता बदलने के लिए मेनू के बाईं ऊपरी भाग पर स्लाइडर्स इस्तेमाल किया जा सकता है । स्केल बार: 1 µm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56113/Supplementary_Figure_1.tif">इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए कृपया यहां क्लिक करें.</a>

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Correlative Super-resolution and Electron Microscopy to Resolve Protein Localization in Zebrafish Retina

इस प्रोटोकॉल correlating सुपर संकल्प प्रकाश माइक्रोस्कोपी और स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी छवियों द्वारा zebrafish रेटिना पर उपसेलुलर प्रोटीन स्थानीयकरण परिणाम प्राप्त करने के लिए आवश्यक कदम का वर्णन करता है ।

Correlative सुपर संकल्प और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी Zebrafish रेटिना में प्रोटीन स्थानीयकरण को हल करने के लिए

We present a method to investigate the subcellular protein localization in the larval zebrafish retina by combining super-resolution light microscopy and ...

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Large-scale Scanning Transmission Electron Microscopy (Nanotomy) of Healthy and Injured Zebrafish Brain

Large-scale Scanning Transmission Electron Microscopy Nanotomy of Healthy and Injured Zebrafish Brain

बड़े पैमाने पर स्कैनिंग संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (Nanotomy) स्वस्थ और घायल Zebrafish मस्तिष्क की

Large-scale 2D electron microscopy (EM), or nanotomy, is the tissue-wide application of nanoscale resolution electron microscopy. Others and we previously ...

Analysis of Zebrafish Kidney Development with Time-lapse Imaging Using a Dissecting Microscope Equipped for Optical Sectioning

समय चूक इमेजिंग एक विदारक माइक्रोस्कोप का उपयोग के साथ Zebrafish गुर्दे का विकास का विश्लेषण ऑप्टिकल सेक्शनिंग के लिए लैस

In order to understand organogenesis, the spatial and temporal alterations that occur during development of tissues need to be recorded. The method ...

Using Light Sheet Fluorescence Microscopy to Image Zebrafish Eye Development

छवि Zebrafish आँख विकास के लिए प्रकाश शीट प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग

Light sheet fluorescence microscopy (LSFM) is gaining more and more popularity as a method to image embryonic development. The main advantages of LSFM ...

Analysis of Protein-protein Interactions and Co-localization Between Components of Gap, Tight, and Adherens Junctions in Murine Mammary Glands

प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन और सह-स्थानीकरण का विश्लेषण, गैप, चुस्त और मुर्इन स्तन ग्रंथों के अनुयायकों के जंक्शनों के बीच

Cell-cell interactions play a pivotal role in preserving tissue integrity and the barrier between the different compartments of the mammary gland. These ...

Multimodal Hierarchical Imaging of Serial Sections for Finding Specific Cellular Targets within Large Volumes

बड़ी मात्रा में विशिष्ट सेलुलर लक्ष्य खोजने के लिए धारावाहिक वर्गों के Multimodal पदानुक्रमित इमेजिंग

Targeting specific cells at ultrastructural resolution within a mixed cell population or a tissue can be achieved by hierarchical imaging using a ...

Immunohistochemical Detection of 5-Methylcytosine and 5-Hydroxymethylcytosine in Developing and Postmitotic Mouse Retina

5-Methylcytosine और 5-Hydroxymethylcytosine के विकास और Postmitotic माउस रेटिना में Immunohistochemical डिटेक्शन

The epigenetics of retinal development is a well-studied research field, which promises to bring a new level of understanding about the mechanisms of a ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Gastrulating माउस में नोड और Notochordal प्लेट visualizing इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी और पूरे माउंट इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग कर भ्रूण

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...

A Layered Mounting Method for Extended Time-Lapse Confocal Microscopy of Whole Zebrafish Embryos

पूरे ज़ेब्राफिश भ्रूण की विस्तारित समय-चूक कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी के लिए एक स्तरित बढ़ते विधि

Dynamics of development can be followed by confocal time-lapse microscopy of live transgenic zebrafish embryos expressing fluorescence in specific tissues ...