Name: generation and long-term maintenance of nerve-free hydra
Uploaded: 2017-07-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation and Long-term Maintenance of Nerve-free Hydra at JoVE.com

Авторы благодарны д-ру Дику Кэмпбеллу (UC Irvine) за обсуждения первоначального протокола для создания и поддержки животных, свободных от нервов, г-жу Руи Ван за помощь в адаптации техники шприца и иглы, и г-жа Даниэль Хагстром и д-р Роб Стил (UC Irvine) для комментариев к рукописи. Эта работа была поддержана грантом RCSA и NSF CMMI-1463572.

1. Двойная обработка колхицином <ol><li> Сделайте 0,4% колхицин (весовой / объемный) раствор в среде Hydra 3 , 4 , 17 . Осторожно: Колхицин остро токсичен, смертелен при проглатывании, может вызвать генетические дефекты и может выз...

<ol>
	<li>Bode, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+interstitial+cell+lineage+of+Hydra:+a+stem+cell+system+that+arose+early+in+evolution.">The interstitial cell lineage of Hydra: a stem cell system that arose early in evolution.</a> J. Cell. Sci. 109, 1155-1164 (1996).</li><li>Hager, G., David, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+differentiated+nerve+cells+in+hydra+is+determined+by+precursor+migration.">Pattern of differentiated nerve cells in hydra is determined by precursor migration.</a> Development. 124, 569-576 (1997).</li><li>Campbell, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elimination+of+Hydra+interstitial+and+nerve+cells+by+means+of+colchicine.">Elimination of Hydra interstitial and nerve cells by means of colchicine.</a> J. Cell. Sci. 21, 1-13 (1976).</li><li>Marcum, B. A., Campbell, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+Hydra+lacking+nerve+and+interstitial+cells.">Development of Hydra lacking nerve and interstitial cells.</a> J. Cell. Sci. 29, 17-33 (1978).</li><li>Burns, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3H-colchicine+binding:+Failure+to+detect+any+binding+to+soluble+proteins+from+various+lower+organisms.">3H-colchicine binding: Failure to detect any binding to soluble proteins from various lower organisms.</a> Exp. Cell. Res. 81, 285-292 (1973).</li><li>Lee, H. -. T., Campbell, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+Behavior+of+an+Intergeneric+Chimera+of+Hydra+(Pelmatohydra+oligactis+Interstitial+Cells+Hydra+attenuata+Epithelial+Cells).">Development and Behavior of an Intergeneric Chimera of Hydra (Pelmatohydra oligactis Interstitial Cells Hydra attenuata Epithelial Cells).</a> Biol. Bull. 157 (2), 288-296 (1979).</li><li>Novak, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparing+Hydra+viridis+with+Nerve+Cells+and+No+Interstitial+Cells,+or+with+Neither+of+These+Cell+Types.">Preparing Hydra viridis with Nerve Cells and No Interstitial Cells, or with Neither of These Cell Types.</a> Hydra: Research Methods. , 295-297 (1983).</li><li>Wanek, N., Marcum, B. A., Lee, H. -. T., Chow, M., Campbell, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+hydrostatic+pressure+on+morphogenesis+in+nerve-free+Hydra.">Effect of hydrostatic pressure on morphogenesis in nerve-free Hydra.</a> J. Exp. Zool. 211, 275-280 (1980).</li><li>Minobe, S., Koizumi, O., Sugiyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+cell+differentiation+in+nerve-free+tissue+of+epithelial+Hydra+from+precursor+cells+introduced+by+grafting.">Nerve cell differentiation in nerve-free tissue of epithelial Hydra from precursor cells introduced by grafting.</a> Dev. Biol. 172 (1), 170-181 (1995).</li><li>Miljkovic-Licina, M., Chera, S., Ghila, L., Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Head+regeneration+in+wild-type+hydra+requires+de+novo+neurogenesis.">Head regeneration in wild-type hydra requires de novo neurogenesis.</a> Development. 134 (6), 1191-1201 (2007).</li><li>Wenger, Y., Buzgariu, W., Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+neurogenesis+in+Hydra+leads+to+compensatory+regulation+of+neurogenic+and+neurotransmission+genes+in+epithelial+cells.">Loss of neurogenesis in Hydra leads to compensatory regulation of neurogenic and neurotransmission genes in epithelial cells.</a> Phil. Trans. R. Soc. B. 371 (20150040), (2015).</li><li>Campbell, R. D., Josephson, R. K., Schwab, W. E., Rushforth, N. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excitability+of+nerve-free+Hydra.">Excitability of nerve-free Hydra.</a> Nature. 262, 388-390 (1976).</li><li>Takaku, Y., Hwang, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innexin+gap+junctions+in+nerve+cells+coordinate+spontaneous+contractile+behavior+in+Hydra+polyps.">Innexin gap junctions in nerve cells coordinate spontaneous contractile behavior in Hydra polyps.</a> Sci. Rep. 4 (3573), (2014).</li><li>Marcum, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+Epithelial+Hydra.">Culturing Epithelial Hydra.</a> Hydra: Research Methods. , 287-290 (1983).</li><li>David, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+method+for+maceration+of+Hydra+tissue.">A quantitative method for maceration of Hydra tissue.</a> Wilhelm Roux Arch. Entwickl. Mech. Org. 171, 259-268 (1973).</li><li>Gr&#246;ger, H., Schmid, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Larval+development+in+Cnidaria:+A+connection+to+Bilateria.">Larval development in Cnidaria: A connection to Bilateria.</a> Genesis. 29 (3), 110-114 (2001).</li><li>Lenhoff, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Water,+Culture+Solutions,+and+Buffers.">Water, Culture Solutions, and Buffers.</a> Hydra: Research Methods. , 29-34 (1983).</li><li>Shenk, M. A., Bode, H. R., Steele, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+Cnox-2,+a+HOM/HOX+homeobox+gene+in+hydra,+is+correlated+with+axial+pattern+formation.">Expression of Cnox-2, a HOM/HOX homeobox gene in hydra, is correlated with axial pattern formation.</a> Development. 117, 657-667 (1993).</li><li>B&#246;ttger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Horizontal+Gene+Transfer+Contributed+to+the+Evolution+of+Extracellular+Surface+Structures:+The+Freshwater+Polyp+Hydra+Is+Covered+by+a+Complex+Fibrous+Cuticle+Containing+Glycosaminoglycans+and+Proteins+of+the+PPOD+and+SWT+(Sweet+Tooth)+Families.">Horizontal Gene Transfer Contributed to the Evolution of Extracellular Surface Structures: The Freshwater Polyp Hydra Is Covered by a Complex Fibrous Cuticle Containing Glycosaminoglycans and Proteins of the PPOD and SWT (Sweet Tooth) Families.</a> PLoS One. 7 (12), (2012).</li><li>King, R. S., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+protocol+for+enhanced+detection+of+gene+expression+in+the+planarian+Schmidtea+mediterranea.">In situ hybridization protocol for enhanced detection of gene expression in the planarian Schmidtea mediterranea.</a> BMC Dev. Biol. 13 (8), (2013).</li></ol>

Гистидные интерстициальные клетки могут быть устранены с помощью двойной обработки колхицином 3 , 4 . В дни, следующие за первой обработкой, крайне важно предотвратить контакт между отдельными Hydra, чтобы избежать слияния кусков Hydra в деформи...

Нервная система Hydra состоит из нервной сетки с нейронами, связанными с обоими эпителиальными тканевыми слоями 1 . Нервная сеть плотнее в гипостоме и цветоносе и менее плотная в колонке 2 тела. Нервные клетки происходят из интерстициальных стволовых клеток, которые являются мультипотентными стволовыми клетками, которые приводят к секреторным клеткам, нематоцитам, зародышевым клеткам и нейронам 1 . Можно исключить интерстициальные клетки Hydra vulgaris путем лечения колхицином 3 , 4 , производным токсином, который убивает делящиеся клетки. Хотя обнаружено, что колхицин ингибирует полимеризацию микротрубочек у других организмов, предыдущее исследование показало, что микротрубочки присутствуют в Hydra на протяжении всего лечения, что указывает на то, что колхицин не действует таким образом в Hydra 3 . Еще однаUdy предполагает, что колхицин не эффективно связывается с тубулином в некоторых организмах, включая Tetrahymena pyriformis, Zea mays, Chlamydomonas и Schizosaccharomyces pombe, что может объяснить эту разницу 5 . Обработка колхицином индуцирует фагоцитоз интерстициальных клеток эндодермальными эпителиальными клетками 3 и, таким образом, позволяет создавать животных, которым не хватает нервных клеток, клеток железы и нематоцитов. Неясно, почему интерстициальные клетки особенно восприимчивы к лечению колхицином. Учитывая, что как постмитотические интерстициальные клетки, так и линия интерстициальных стволовых клеток повреждены и фагоцитированы, Кэмпбелл пришел к выводу, что колхицин не оказывает непосредственного влияния на митотическую активность 3 . Примечательно, что обработка колхицином хорошо работает в Hydra vulgaris, но, как было показано, не работает также и у других видов, таких как Hydra oligactis 6 . </Em&gt; Модифицированная обработка колхицином и гидроксимочевиной может быть использована для получения безрецидивной Hydra viridis 7 . Таким образом, безрецидивная гидра (также иногда называемая «эпителиальная гидра » 8 ) является полезным инструментом для изучения ролей этих специализированных типов клеток из линии междоузельных клеток в тканевом гомеостазе и регенерации. Гидра может быть единственным известным примером животного, способного жить без нервной системы. Нервная гидра служит особенно полезной моделью для исследования роли нервной сети в регуляции регенерации Гидры , гомеостаза и поведения. Например, введение интерстициальных клеток в нервную гидру посредством трансплантации позволило характеризовать дифференцировку нервных клеток как специфическую для региона 9 . Кроме того, поскольку безрецидивная гидра может восстанавливаться, ониПозволяют исследовать альтернативные, не зависящие от нервной системы пути регенерации. Одним из таких примеров является апикальный нейрогенез и формирование головы, который, как было показано, зависит от функции cnox-2 в нервной системе у дикого типа Hydra , но, по-видимому, он не доступен в безрецидивной Hydra , что указывает на возможность альтернативного процесса регенерации головы 10 . Нервная гидра также использовалась для изучения экспрессии эпителиальных клеток и регуляции нейрогенных и нейротрансмиссионных генов после потери нейрогенеза 11 . Нервируемая гидра не проявляет спонтанных спазмов 12 , что указывает на то, что эти всплески регулируются нервной системой. Гибридные нервы , однако, сокращаются в ответ на ущемление колонны тела с помощью щипцов, что указывает на то, что сокращение в ответ на механические раздражители опосредуется сочетаниемGh в эпителиальных клетках, тогда как спонтанное сократительное поведение опосредуется путем связывания через щелевые соединения в нервных клетках 13 . Гидра без нервов не открывают рот, когда они снабжаются пищей или уменьшенным глутатионом 3 , что указывает на то, что сенсорные нейроны необходимы для обнаружения присутствия пищи и сигнала, чтобы открыть рот. Кроме того, нервная сеть, по-видимому, играет определенную роль в определении осмотического давления, поскольку животные без нервов неспособны автономно регулировать свое внутреннее гидростатическое давление через отверстие рта, вызывая их характерный вид, похожий на баллон 3 , 4 ( рисунок 1B ). Регулирование гидростатического давления в безрецидивной гидре при частой ручной дефляции приводило к потере некоторой аномальной морфологии в столбце гипостомы и тела. Однако хроническая дефляция привела к вмешательству в рост, elОрганизация, почкование и организация тканей 8 . Хотя безрецидивная гидра неспособна самостоятельно кормить и самостоятельно, ее можно поддерживать в течение неопределенного времени в лаборатории путем принудительного кормления и отрыжка каждого животного. В предыдущих публикациях были описаны методы принудительного кормления и отрывания нервной системы Hydra , однако в этих протоколах использовались наконечники микропипетки, которые необходимо осторожно вытащить вручную до соответствующего размера, а также использовать мундштук, соединенный с пипеткой трубкой 14 . Здесь описан более простой, безопасный и более эффективный по времени метод кормления и отрыжка. Кроме того, предыдущие исследования включали проверку отсутствия нервных клеток путем диссоциации фиксированных животных в отдельные клетки и исследование морфологии клеток 3 , 4 , 15 . ЧАСКроме того, иммуногистохимия с моноклональным антителом против тирозинированного карбоксильного конца альфа-тубулина использовалась в качестве бесплатного метода для мацерации для проверки истощения нейронов в гипостоме 13 , 16 . Предыдущие исследования показали, что нейроны в цветоносе могут также визуализироваться с использованием этого антитела 13 , однако эти нейроны, а также те, которые находятся в колонке тела, сложнее выявить. Хотя иммуногистохимия достаточна для подтверждения отсутствия нервных клеток в гипостоме и не требует опыта по морфологии клеточного типа, ее нельзя использовать для проверки отсутствия интерстициальных стволовых клеток и других производных этих клеток. Исследования диссоциации и клеточной морфологии более строги и могут дать количественный отчет о количестве каждого типа клеток, оставшихся после каждого этапа лечения.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="663">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:303px;">Colchicine</td>
			<td style="width:75px;">Acros Organics</td>
			<td style="width:119px;">227120010</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">1 ml Syringe</td>
			<td style="width:75px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">301025</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;">Brine Shrimp Eggs</td>
			<td style="width:75px;">Brine Shrimp Direct</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td style="width:167px;">Can be purchased locally</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;">Brine Shrimp Hatchery Dish</td>
			<td style="width:75px;">Brine Shrimp Direct</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">60 mm x 15 mm Petri Dish</td>
			<td style="width:75px;">Celltreat</td>
			<td style="width:119px;">229663</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">30 G x 3/4&#34; Hypodermic Needle</td>
			<td style="width:75px;">Covidien</td>
			<td style="width:119px;">1188830340</td>
			<td style="width:167px;">A 27G needle may also be used</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">2 x Fine-tip Tweezers</td>
			<td style="width:75px;">Dumont</td>
			<td style="width:119px;">0109-5-PO</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Rifampicin</td>
			<td style="width:75px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">557303</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Goat anti-mouse lgG, Pab (HRP Conjugate)</td>
			<td style="width:75px;">Enzo</td>
			<td style="width:119px;">ADI-SAB-100-J</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:75px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">BP9703-100</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel</td>
			<td style="width:75px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">08-920A</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:75px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">10437028</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DAPI (4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td style="width:75px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">D1306</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PBS Tablets</td>
			<td style="width:75px;">MP Bio</td>
			<td style="width:119px;">2810305</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Monoclonal Anti-Tubulin, Tyrosine</td>
			<td style="width:75px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T9028</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:75px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D2650</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Hydrogen Peroxide</td>
			<td style="width:75px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">216763</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td style="width:75px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P6148</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Triton X - 100</td>
			<td style="width:75px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T9284</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tween 20</td>
			<td style="width:75px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P1379</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Urethane</td>
			<td style="width:75px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">U2500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Air Pump</td>
			<td style="width:75px;">Tetra</td>
			<td style="width:119px;">77846-00</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Glass Pasteur Pipette</td>
			<td style="width:75px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">53283-916</td>
			<td style="width:167px;">Length of the pipet does not matter</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">15 ml Tube</td>
			<td style="width:75px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">89039-670</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;">P320 Sandpaper</td>
			<td style="width:75px;">3M</td>
			<td style="width:119px;">IBGABBV00397</td>
			<td style="width:167px;">Can be purchased at local home improvement store</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation and long-term maintenance of nerve-free hydra

Интерстициальная клеточная линия Hydra включает в себя мультипотентные стволовые клетки и их производные: клетки железы, нематоциты, зародышевые клетки и нервные клетки. Интерстициальные клетки можно устранить с помощью двух последовательных обработок колхицином, производным токсином, который убивает делящиеся клетки, тем самым стирая потенциал для обновления дифференцированных клеток, которые получены из интерстициальных стволовых клеток. Это позволяет генерировать Hydra , у которых нет нервных клеток. Нервный полип не может открыть рот для кормления, egest или регулировать осмотическое давление. Однако такие животные могут выживать и размножаться на неопределенный срок в лаборатории, если их регулярно кормят и отрывают. Отсутствие нервных клеток позволяет изучать роль нервной системы в регулировании поведения и регенерации животных. Ранее опубликованные протоколы для поддержания работоспособности Hydra без нервов включали устаревшие методы, такие как пипетирование рта с помощью микропипетки с ручным приводом tIps для подачи и очистки Hydra . Здесь вводится улучшенный протокол для поддержания нервной системы Hydra . Щипцы с тонким наконечником используются, чтобы открыть рот и вставить недавно убитую Артемию . После принудительной подачи полость тела животного смывается свежей средой с помощью шприца и подкожной иглы для удаления непереваренного материала, называемого здесь «отрыжкой». Этот новый метод принудительного кормления и отрыжка нервной системы Hydra благодаря использованию щипцов и шприцев устраняет необходимость в пипетке для рта с помощью ручных наконечников микропипетки. Это делает процесс более безопасным и значительно более эффективным по времени. Чтобы исключить удаление нервных клеток в гипостоме, проводится иммуногистохимия с использованием антитирозинбукулина.

Сразу после начального 8-часового лечения колхицином все гидра выживают. У некоторых из этих Hydra останутся только останки щупальца ( рис. 3 A ), в то время как другие полностью потеряют свои щупальца ( рис. 3 B ). В т...

Watch this Scientific Journal Video about Generation and Long-term Maintenance of Nerve-free Hydra at JoVE.com

Generation and Long-term Maintenance of Nerve-free Hydra

Через двойное лечение колхицином может образоваться токсин, полученный из растений, который убивает делящиеся клетки, без нервов Hydra vulgaris . Эти Hydra не могут кормить или egest самостоятельно. В этой статье описывается улучшенный метод долгосрочного поддержания безрецидивной Hydra vulgaris в лаборатории.

Поколение и долгосрочное содержание без нервов<em&gt; Hydra</em

The interstitial cell lineage of Hydra includes multipotent stem cells, and their derivatives: gland cells, nematocytes, germ cells, and nerve cells. The ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Generation and Long-term Maintenance of Nerve-free Hydra

C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays

C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays

Элеганс C. Положительные обучения бутанон, краткосрочный и долгосрочный Ассоциативные Анализы памяти

The memory of experiences and learned information is critical for organisms to make choices that aid their survival. C. elegans navigates its environment ...

A Polished and Reinforced Thinned-skull Window for Long-term Imaging of the Mouse Brain

Полированные и железобетона тоньше череп-Window для долгосрочных изображений из мозга мыши

In vivo imaging of cortical function requires optical access to the brain without disruption of the intracranial environment. We present a method to form ...

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

Молекулярная Считывание Долгосрочные обонятельной адаптации в<em&gt; C. Элеганс</em

During sustained stimulation most sensory neurons will adapt their response by decreasing their sensitivity to the signal. The adaptation response helps ...

Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation

Улучшенная Подготовка и консервация срезов гиппокампа мышь для очень стабильный и воспроизводимый Запись Долгосрочные Потенцирования

Long-term potentiation (LTP) is a type of synaptic plasticity characterized by an increase in synaptic strength and believed to be involved in memory ...

Long-term Behavioral Tracking of Freely Swimming Weakly Electric Fish

Долгосрочный Поведенческая Отслеживание свободно плавающих слабо электрических рыб

Long-term behavioral tracking can capture and quantify natural animal behaviors, including those occurring infrequently. Behaviors such as exploration and ...

Simultaneous Long-term Recordings at Two Neuronal Processing Stages in Behaving Honeybees

Одновременные Долгосрочные Записи на двух этапах нейронов обработки своем поведении медоносных

In both mammals and insects neuronal information is processed in different higher and lower order brain centers. These centers are coupled via convergent ...

Long-term Time Lapse Imaging of Mouse Cochlear Explants

Долгосрочный длительной Визуализация мыши Cochlear эксплантов

Here we present a method for long-term time-lapse imaging of live embryonic mouse cochlear explants. The developmental program responsible for building ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

Изоляция, культуры и долгосрочного поддержания первичного теменной дофаминергических нейронов из эмбриональных грызунов Brains

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Agarose Microchambers for Long-term Calcium Imaging of Caenorhabditis elegans

Агарозные микрокамеры для долгосрочного Кальций изображений<em&gt; Caenorhabditis Элеганс</em

Behavior is controlled by the nervous system. Calcium imaging is a straightforward method in the transparent nematode Caenorhabditis elegans to measure ...

A Simplified Method for Ultra-Low Density, Long-Term Primary Hippocampal Neuron Culture

Упрощенный метод для сверхнизкой плотности, Долгосрочное Первичный гиппокампа Нейрон культуры

Culturing primary hippocampal neurons in vitro facilitates mechanistic interrogation of many aspects of neuronal development. Dissociated embryonic ...