Name: in vivo multimodal imaging and analysis of mouse laser-induced choroidal neovascularization model
Uploaded: 2018-01-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model at JoVE.com

המחברים רוצה להודות Yuliya Naumchuk (אוניברסיטת לויולה שיקגו), כוכבה משעלי Žiniauskaitė (Experimentica בע מ) עבור תמיכה טכנית, videographic מצוינת. תכנית המחקר של ד ר Kaja נתמך על ידי ד ר ג'ון עמ' תרז אי Mulcahy ניחן כפרופסור במכון עיניים ב אוניברסיטת לויולה שיקגו.

כל החיות טופלו לפי המשפט ארוו עבור שימוש של חיות לרפואת עיניים, ומחקר החזון של EC Directive 86/609/EEC לניסויים בבעלי חיים, באמצעות פרוטוקולים אישרה, בפיקוח של חיות ניסוי לוח של פינלנד.
1. לייזר המושרה העכבר CNV דגם 5
<ol><li>לבדוק את העיניים של החיה בעין בלתי מזוינת על חריגות.</l...

<ol>
	<li>Dobi, E. T., Puliafito, C. A., Destro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+experimental+choroidal+neovascularization+in+the+rat.">A new model of experimental choroidal neovascularization in the rat.</a> Arch. Ophthalmol. Chic. Ill 1960. 107, 264-269 (1989).</li><li>Tobe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+neovascularization+in+mice+with+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+photoreceptors.">Evolution of neovascularization in mice with overexpression of vascular endothelial growth factor in photoreceptors.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 180-188 (1998).</li><li>Seo, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dramatic+inhibition+of+retinal+and+choroidal+neovascularization+by+oral+administration+of+a+kinase+inhibitor.">Dramatic inhibition of retinal and choroidal neovascularization by oral administration of a kinase inhibitor.</a> Am. J. Pathol. 154, 1743-1753 (1999).</li><li>Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+choroidal+and+retinal+neovascularization.">Animal models of choroidal and retinal neovascularization.</a> Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).</li><li>Shah, R. S., Soetikno, B. T., Lajko, M., Fawzi, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mouse+Model+for+Laser-induced+Choroidal+Neovascularization.">A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization.</a> J Vis Exp. (106), e53502 (2015).</li><li>Giani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+evaluation+of+laser-induced+choroidal+neovascularization+using+spectral-domain+optical+coherence+tomography.">In vivo evaluation of laser-induced choroidal neovascularization using spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3880-3887 (2011).</li><li>Gong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+an+Image-Guided+Laser-Induced+Choroidal+Neovascularization+Model+in+Mice.">Optimization of an Image-Guided Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model in Mice.</a> PloS One. 10, e0132643 (2015).</li><li>Sheets, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotectin+D1+attenuates+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+mouse.">Neuroprotectin D1 attenuates laser-induced choroidal neovascularization in mouse.</a> Mol. Vis. 16, 320-329 (2010).</li><li>Hoerster, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+and+ex-vivo+characterization+of+laser-induced+choroidal+neovascularization+variability+in+mice.">In-vivo and ex-vivo characterization of laser-induced choroidal neovascularization variability in mice.</a> Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. Albrecht Von Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol. 250, 1579-1586 (2012).</li><li>Sulaiman, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simple+Optical+Coherence+Tomography+Quantification+Method+for+Choroidal+Neovascularization.">A Simple Optical Coherence Tomography Quantification Method for Choroidal Neovascularization.</a> J. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. 31, 447-454 (2015).</li></ol>

הדמיה עם מודאלים מרובים מציע כלי רב ערך עבור הערכה פתולוגיה CNV. כאן הצגנו פרוטוקול הדמיה המורכב של הפא, SD-אוקטובר, פילוח אוטומטית על הערכה מהירה, לשחזור ואמין של הפתולוגיה CNV. הפסקה של הממברנה של ברוך לאחר לייזר הניהול אושר. בנוסף, השימוש SD-אוקטובר בשלב זה מותר גם מיידית החזיית אפשרי שטפי intrare...

הניסיון המוצלח הראשון לחקות הפתולוגיה של האדם CNV בחולדות הודגם לפני כמעט שלושה עשורים עם לייזר קריפטון לונג-אוונס חולדות1. לאחר מכן, שימש לייזר קריפטון לפרוץ קרום של ברוך המתח העכבר הפופולרי ביותר,3,2,C57BL/6J4. שיעור ההצלחה של אינדוקציה CNV אומתה עם הפא וכתמים היסטולוגית. התפתחות מהירה של שיטות הדמיה לא פולשנית, כגון OCT, תמכה את הצמיחה של השדה של מכרסמים במודלים פרה. היכולת לעקוב אחרי שינויים מורפולוגיים הרשתית בנקודות זמן מרובים בעיניים אותו משמעותית תורם צמצום הניצול של בעלי החיים ומגביר את יעילות במחקרים ניסיוני. הערכה היסטולוגית של נגעים CNV הוא די פשוט, ודורש תיוג צמיחת כלי דם נורמלי סביב האתר של המינהל לייזר, ייבוא תמונות/שטח בנפח הערכה באמצעות תוכנת ניתוח של התמונה. לעומת זאת, אין ויוו שיטות הדמיה להציג ניתוחים מורכבים יותר של פתולוגיה CNV והפרשנות שלה.
כאן אנו מציגים שיטה פשוטה ומהירה יחסית כיתה אינדוקציה, התקדמות של רגרסיה של CNV באמצעות הפא, SD-אוקטובר, ואת שיטת פילוח אוטומטית העכבר לייזר המושרה CNV מודל.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="917">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:275px;">Medetomidine (commercial name Domitor)</td>
			<td style="width:123px;">Orion</td>
			<td style="width:344px;">Vnr 01 56 02</td>
			<td style="width:177px;">Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Ketamine</td>
			<td>Intervet</td>
			<td>Vnr 51 14 85</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">0,9% NaCl</td>
			<td>B Braun</td>
			<td>357 0340</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Xylazine (commercial name Rompun vet)</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>vnr 14 89 99</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tropicamide</td>
			<td>Santen</td>
			<td>Vnr 04 12 36</td>
			<td>Mydriatic agent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Viscotears</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>Vnr 44 54 81</td>
			<td>Lubricant</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Systane</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>&#160;-</td>
			<td>Lubricant</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">5% Fluorescein sodium salt</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6377-100G</td>
			<td>Fluoresent agent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Atipamezole (commercial name Antisedane)</td>
			<td>Orion</td>
			<td>Vnr 47 19 53</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo multimodal imaging and analysis of mouse laser-induced choroidal neovascularization model

לייזר המושרה neovascularization כורוידאלית (CNV) היא דוגמנית ומבוססת לחקות את צורת רטוב הקשורות לגיל ניוון מקולרי (AMD). ב פרוטוקול זה, אנו שואפים מדריך את הקורא לא פשוט על-ידי השיקולים הטכניים של יצירת נגעים לייזר המושרה להנעת תהליכים neovascular, אבל מעדיף להתמקד במידע רב עוצמה ניתן להשיג יחידנית או משולבת האורך אין ויוו הדמיה לאורך כל תקופת המעקב.
עכבר לייזר המושרה CNV המודל נוצר על ידי המינהל לייזר דיודה. עם מודאלים מרובים ויוו טכניקות הדמיה שימשו כדי לפקח CNV אינדוקציה, התקדמות, רגרסיה. ראשית, תחום ספקטרלי טומוגרפיה אופטית קוהרנטית (SD-אוקטובר) בוצע מיד לאחר lasering כדי לוודא הפסקה של הממברנה של ברוך. לאחר מכן ויוו הדמיה באמצעות fluorescein מסתמים (FA) אישר נזק מוצלחת של הממברנה של ברוך מתמונות טורי רכשה באותה רמת חיבור. מעקב האורך של התפשטות CNV ו רגרסיה בימים 5, 10 ו- 14 לאחר lasering בוצעה באמצעות הפא ו- SD-אוקטובר. פשוטה ואמינה לדירוג של דולף leasions CNV מתמונות פא מוצג. פילוח אוטומטיים למדידת עובי הרשתית הכולל, בשילוב עם קליבר ידנית יישום למדידת עובי הרשתית באתרים CNV, לאפשר הערכה לא משוחדת של הנוכחות של בצקת. לבסוף, אימות היסטולוגית של CNV מתבצעת באמצעות isolectin GS-IB4 מכתים על flatmounts חיבור. ההכתמה היא thresholded, אזור isolectin-חיוביות מחושבת עם ImageJ.
פרוטוקול זה שימושי במיוחד לימודי הרפוי הדורשים דמויי תפוקה גבוהה הקרנת CNV פתולוגיה, שכן היא מאפשרת מהר, עם מודאלים מרובים, סיווג אמין של בצקת רשתית לפתולוגיה CNV. בנוסף, רזולוציה גבוהה SD-OCT מאפשר ההקלטה של המחפשים פתולוגיים אחרים, כגון הצטברות נוזלים subretinal או intraretinal. עם זאת, שיטה זו אינה מספקת אפשרות להפיכת ניתוח אמצעי האחסון CNV מתמונות SD-אוקטובר, אשר חייב להתבצע באופן ידני.

בועה או subretinal דימום מיד לאחר lasering אינו תמיד גלוי. לכן, SD-אוקטובר חשוב במיוחד לוודא נזק של הממברנה של ברוך. איור 1 מראה דוגמה של OCT הדמיה בנקודות זמן שונות לאחר לייזר המינהל.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig1.jpg"> <strong cl...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model at JoVE.com

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

אין ויוו הדמיה עם מודאלים מרובים וניתוח של עכבר לייזר המושרה חיבור כורוידאלית דגם

כאן, אנו מציגים את התועלת של האורך ויוו הדמיה מעקב אחר שינויים מורפולוגיים של לייזר המושרה neovascularization כורוידאלית בעכברים.

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

מרובה עכבר Neuroanatomical תהודה מגנטית

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

Multimodal הדמיה של השתלת תא גזע במערכת העצבים המרכזית של עכברים

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

הדמייה תפקודית באמצעות שיבוש Ultrasonic הדם למוח הגדר מנגן משופרת MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Ex vivo הדמיה חיה של חלוקות תא יחיד בNeuroepithelium מאוס

We developed a system that integrates live imaging of fluorescent markers and culturing slices of embryonic mouse neuroepithelium. We took advantage of ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

<em&gt; Ex Vivo</em&gt; חוט השדרה מושרה לייזר הפגיעה דגם להערכת מנגנוני axonal הניוון בזמן אמת

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

3-D Imaging and Analysis of Neurons Infected In Vivo with Toxoplasma gondii

3-D Imaging and Analysis of Neurons Infected In Vivo with Toxoplasma gondii

הדמיה 3-D וניתוח של נוירונים נגועים<em&gt; In vivo</em&gt; עם<em&gt; Toxoplasma gondii</em

Toxoplasma gondii is an obligate, intracellular parasite with a broad host range, including humans and rodents. In both humans and rodents, Toxoplasma ...

M&#252;ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

MÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¼ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

עכשיו, דונלד מילר הפעלת תא לייזר המושרה ניוון הרשתית, התחדשות מודל בדג זברה

A fascinating difference between teleost and mammals is the lifelong potential of the teleost retina for retinal neurogenesis and regeneration after ...

Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

פגיעה מוחית כתוצאה בלייזר בקליפת המוח המוטורית של חולדות

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...

Imaging and Analysis of Neurofilament Transport in Excised Mouse Tibial Nerve

הדמיה וניתוח של תעבורת Neurofilament בעצב שוקה עכבר excised

Neurofilament protein polymers move along axons in the slow component of axonal transport at average speeds of ~0.35-3.5 mm/day. Until recently the study ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

הדמיה טרנס-אימונית של שני פוטונים In vivo של רשתית העכבר

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...