Name: dissection and immunofluorescent staining of mushroom body and photoreceptor neurons in adult drosophila melanogaster brains
Uploaded: 2017-11-06T16:45:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить Чангху Пак и Alysia Врайлас Мортимер первоначально преподавания СМК технику рассечения мозга. Мы также благодарим членов группы лаборатории Кен Моберг, особенно Крис раундов, за критически читать рукопись. Антитела, признавая Fas2 (1 d 4) и chaoptin (24B10) были получены от развития банка гибридомной исследования. 24B10 антитела к DSHB сданный Сеймур Бензер и гастрольный Colley24,,6061, антитела 1 d 4 был сдан на хранение до DSHB Кори Гудман 22,23,56. Покупать акции были получены от центра Bloomington складе. Мы также хотели бы поблагодарить Огайо сельскохозяйственных исследований и развития центр (OARDC) MCIC центр изображений для использования Конфокальный микроскоп изображение мозги в рисунке 4A и B. SMK поддерживается грант от NICHD (1 R15 HD084241-01A1).

Авторы заявляют, что они не имеют никаких финансовых интересов.

Рассечение и визуализации методом, описанным выше может быть использован в широком спектре иммуноокрашивания и жить графических приложений. Мы наметили протокол общего иммуноокрашивания и показали один из способов, в которых MARCM может использоваться для визуализации аксональное морфология отдельных грибные тела нейронов. Кроме того эти общие процедуры могут также использоваться для визуализации других регионов мозга в фиксированных или свежей расчлененных взрослого мозги48,65. Живой изображений может обеспечить более эффективный подход при анализе моделей выражение усилитель ловушки, репортер генов или имитировать линии66, например. Для предотвращения захвата артефакты от смерти клетки во время живых изображений GFP в незаписанных тканей, мозги следует расчлененный в 1 x фосфат буфер солевой (PBS) или HL3 СМИ48, установленный на мост слайды в 1 x PBS (или HL3) и отражаться в менее чем 15-20 минут Уход следует также удалить столько трахеи как можно дальше от расчлененных мозга до изображений, так как это может помешать с визуализацией GFP флуоресценции.
В то время как окрашивание условия для оценки морфологии грибные тела и фоторецепторных нейронов, относительно устоявшихся24,61,67, локализация специфического протеина интереса в эти ячейки типы могут потребовать диагностики и оптимизации. В частности несколько критических шагов, включая разбавления антитела, блокирующий буфер компонента концентрации и фиксации, должны быть оптимизированы для создания наиболее надежные и воспроизводимые результаты. Во-первых должны быть определены оптимальная концентрация основное антитело. Хотя коммерчески доступных антител часто имеют предлагаемые разрежения (и мы часто сначала начать с помощью этой концентрации), эти значения редко определяются эмпирически на ткани дрозофилы . Таким образом тестирование серию разведений первичных антител, которые диапазон выше и ниже производителя начиная предложение часто приводит к более специфического окрашивания. Хотя основное антитело разрежения может иметь значительное влияние на окрашивание точность и следует точно определить, время мозги инкубируют в основное антитело содержащие решения может значительно изменяться с незначительное воздействие на общий результат. Например мы наблюдаем аналогичные результаты при инкубации расчлененный мозги с Fas2 антитела основное антитело для два, три или даже четыре дня при 4 ° C. Хотя мы рекомендуем по крайней мере две ночи, мы также инкубировали мозги в раствор первичных антител на одну ночь и получить воспроизводимые пятнать. Важно отметить, что ограничивает количество времени, которое мозги инкубируют в вторичное антитело до 3 ч при комнатной температуре (или одну ночь при 4 ° C) помогает предел привязки неспецифических вторичных антител ткани мозга.
Во-вторых это может быть необходимо использовать дополнительные «блокирование» реагенты для устранения нежелательного фонового сигнала. Параметры включают в себя повышение концентрации NGS ~ 10%, добавив 1-10% бычьим сывороточным альбумином (БСА) для блокировки и первичные/вторичные антитела решения, или предварительно адсорбции первичных антител на ночь при 4 ° C с дрозофилы эмбрионов (см. Ссылка68, разделе 2.9, шаг 3).
Хотя мы писали выше протокол, с помощью PTN как предлагаемые буфер для всех фиксации, мыть и Антитело инкубации шаги, фиксация ткани в других буферов (например ПЛП и PEM, перечисленные в Таблице материалов) может привести к глубокие различия в Сила сигнала. Например предыдущие исследования показали, что циклин E обнаруживается в личиночных имагинальных дисков, когда ткани фиксируются в традиционных параформальдегида 4%, разбавленных в PBS, но хорошо видна, когда ткани фиксируются в буфере ПЛП (Ken Моберг, личное коммуникации и ведения69). Помимо изменения в буфере компоненты, изменяя время и температура для фиксации ткани может также существенно повлиять на immunofluorescent окрашивание и может определяться эмпирически в случае необходимости. Как правило фиксации времени должно быть достаточно долго, чтобы обеспечить достаточную сшивки клеточных компонентов и долгосрочное поддержание общей клеточной морфологии будучи ограничены достаточно, чтобы предотвратить более сшивки и «захоронение» epitopes белка. Таким образом когда первоначально оптимизации окрашивание условия для вновь приобретенного основного антитела, мы обычно ограничивают время фиксации до примерно 20 мин и часто будет исправить тканей при холодных температурах.
Несколько элементов управления должны быть включены в любой иммунофлюоресценции эксперимента исследовать специфику первичных и вторичных антител, а также влияние трансгенов/генетический фон на наблюдаемых фенотип. Чтобы определить, распознает ли основное антитело, используются специально протеина интереса, ткани от мух не хватает этот белок и/или тканей, экспрессирующих белка должны быть включены как элементы управления. Добавление избыток антигена очищенный протеин также могут быть включены чтобы определить, распознает ли основное антитело другие epitopes в лету мозга. Наконец любой флуоресцентные сигнал, когда первичного антитела опущены представляет уровень неспецифической привязки выбранного вторичные антитела.
Несколько важных элементов управления также должны быть включены для оценки вклада генетический фон или наличие трансгенов интенсивности окрашивания или нейронов морфологии. Например, мухи, используемые в MARCM эксперименте на рисунке 5 содержат несколько трансгенов (hsFLP, бас-CD8-GFP, FRT82B, Ванна &#62; GAL80 и OK107-GAL4), каждая из которых должны быть проанализированы отдельно для воздействия на морфологию грибные тела. В очень минимальные, грибные тела морфология мух содержащие OK107-GAL4 и бас-CD8-GFP должны быть проанализированы. Она также может быть необходимо оценить влияние теплового шока и ФЛП рекомбиназа производства на развитие грибные тела, анализируя летит, содержащий hsFLP и FRT82B. Хотя MARCM может обеспечить значительное понимание ли данный белок самостоятельно управляет аксональное руководство, количество элементов управления, требуется точно сделать этот вывод может быть незначительные ограничения этой техники. В менее сложных экспериментов также применимы аналогичные элементы управления. Например возьмем эксперимент, где GAL4/Уан система используется в сочетании с RNAi трансген нокдаун выражение протеина интереса к всех нейронов. В этом эксперименте, будет присутствовать по крайней мере два трансгенов: Пан нейронов GAL4 драйвер, например Elav-GAL4 и трансген UAS-РНК-интерференции . Морфология грибные тела нейронов в мух, содержащие каждый из этих трансгенов только должны быть расследованы в дополнение к экспериментальной условие, где мухи гавани оба трансгенов в том же ходу.
Наконец чтобы определить, является ли протеина интереса выражается в грибные тела нейронов это обычно необходимо совместно пятно мозги с антителами к Fas2. В качестве альтернативы флуоресцентных белков, таких как CD8-GFP связаны GFP, ППП или мембраны могут также выражаться с помощью системы GAL4/Уан и используется в сочетании с антителами, признавая протеина интереса. Fas2 распознает только fasciculated аксонов, которые формируют грибные тела α и β лопастями, использование ориентированных на GAL4, мембрана прыгните CD8-GFP пор особенно полезно для маркировки грибные тела нейронов.
Дефекты в аксональное руководство часто не 100% проникающей и даже мозги же генотипа может показать некоторые изменчивости. Таким образом при анализе недавно мутантные аллели дефекты в грибные тела или фоторецепторных пути, следует использовать сочетание различных аллелей и подходы. Большинство исследований в литературе использовать несколько различных подходов расследовать ли белок играет клетки автономная роль в управлении аксональное руководство: я) анализ пути дефекты в гомозиготной null мух (желательно с использованием различных нюLL аллели), ii) анализ пути дефекты мух, не хватает белка интерес только в нейронах (обычно через RNAi), iii) MARCM анализ дефектов пути и iv) спасти эксперименты, где ген повторно выраженную в нейронах гомозиготных null мух. В идеале несколько десятков мозги на генотип должны быть проанализированы для дефектов в нейрональных морфологии.
Хотя Протокол описан здесь главным образом фокусируется на immunofluorescent Локализация белков в рамках фиксированных тканей, несколько будущего применения этой техники разрабатываются для изображения живой мозговой ткани. Как только мозги разделяются (обычно в СМИ культуры клеток), они может быть культивировали в течение нескольких дней при температуре 25 ° C. Эти ex vivo культивирования методы в настоящее время разрабатываются для того, чтобы исследовать широкий спектр биологических процессов, таких как активность белка, способствует регенерации аксона, после травмы70,71, внутриклеточной Сигнальный динамика72и развития нервной системы73.

Хотя дрозофилы нервной системы меньше, чем людей и грызуны, его сложности обеспечивает мощный, доступный модель лучше понять его позвоночных коллегами. Во многих случаях геном позвоночных и мух кодирования очень похожие белки, которые определяют механизмы развития нервной системы. В самом деле многие из генов, необходимых для развития нервной системы позвоночных Ортологи в мух, включая те, которые участвовали в сигнальных путей, управления структурирования, нейрогенез и аксональной руководство1,2,3 ,4,5. Например Нетрины является лигандом для аксональное руководства в млекопитающих и D. melanogaster6,,78. В то время как Нетрины был первоначально изолирован от зародышевых куриных мозг ткани6, последующие исследования показали, что Нетрины играет роль сохраняется во время разработки эмбриональных центральной нервной системы (ЦНС) в дрозофилы8. Другие исследования использовали генетических экраны в эмбриональных дрозофилы ЦНС для выявления сохранившихся лигандов и рецепторы, необходимые для поиска пути в9 дрозофилы и позвоночных.
В то время как эмбриональные лету ЦНС широко используется в прошлом для идентификации лиганды рецепторов и внутриклеточных сигнальных белков, необходимых для аксональное руководство8,9, недавняя работа исследовала способов, в котором многие из Эти белки также контролировать Поиск пути решения на более поздних стадиях развития. В частности расследование грибные тела (МБ) и сетчатки фоторецепторных нейрон развития (рис. 1) предоставил заглянуть в механизмы, поиск пути управления, формирования синапсов, обрезка аксона и несколько других аспектов нейронов Разработка10,11,12,13,14,,1516,17. Фоторецептор нейронов Подключите летать сетчатки в регионы взрослого мозга называется пластинки и продолговатого мозга и имеют решающее значение для передачи визуальной информации в мозг (рассмотрен1918,), а грибные тела нейронов Отель расположен в лету мозга и необходимы для обучения и памяти20,21. Фоторецептор нейронов и встроенные нейронов Грибовидные тела, называемые клетки Кеньон, использовать механизмы эволюционно сохраняется diffusible и контакт зависимой аксональное руководства найти их пост синаптических целей. Помимо видимых в взрослых мух, фоторецептор и MB нейроны могут также быть непосредственно визуализирована в личинки и куколки с антителами или репортер генов22,23,24,25. Способность легко визуализировать эти два вида нейронов в разное время развития пунктов способствовал их использования превосходным образцом для многих аспектов развития нервной системы.
Помимо использования как модель для понимания механизмов развития нормальных нервной системы, недавние исследования показали, что мухи могут также служить точные модели широкого спектра заболеваний человека, включая синдром хрупкий X (FXS)26 , Интеллектуальной инвалидности (ID)27,28,,2930,31и другие32. Например для изучения молекулярных функции ZC3H14, ген недавно связаны с человеческой умственной инвалидности, мы создали модель fly ID с помощью null аллеля лету ZC3H14 ortholog, называется Nab230. Мухи не хватает Nab2 имеют серьезные памяти нарушениями и расширенный poly(A) хвосты, изложив что наблюдается у людей больных или пациентом производных клеток линии33,34. Главное мух, также не хватает Nab2 отображения тяжелых мозга морфология дефекты в их взрослых Грибовидные тела34, похож на то, что наблюдается в мух, не хватает FXS ген синдрома, FMR135. Таким образом мухи может служить организма важной моделью для изучения развития нормального мозга и заболеваний, которые сорвать его.
Наконец доступность методов высокой пропускной способности контролировать поведение, в сочетании с широкий спектр имеющихся генетических инструменты, сделать дрозофилы модельный организм выбора для выявления областях мозга, которые контролируют сложные поведения, такие как обучения и памяти, сна, ухаживания, жажда и другие36,37,,3839. Один особенно полезным инструментом, который находится в центре летать генетик «Инструментарий» является системой GAL4/Уан (рис. 2). 40,эта система41 использует конкретное выражение ткани transcriptional Gal4 активатора для увеличения выражение генов или трансгенов вниз по течению вверх по течению активации последовательности (Уан). Модификации этой системы позволило исследователям, например, точно контролировать возбудимость нейронов определенных42,43, overexpress или специфических генов нокдаун интерес44, 45, анализировать динамику реального времени кальция в vivo46и выразить репортер генов в ознаменование нейрональных линий41. Сочетание GAL4/Уан системы с митотическая рекомбинации, также допускается для создания мозаики анализа с12,Repressible маркер клеток (MARCM) в системе47. MARCM широко используется в один нейрон трассировки для выявления клеточных сигналов компонентов, необходимых для аксональное руководство12,47. Хотя эти и другие методы предоставили ряд ценную информацию о клеточных механизмов, необходимых для функции нервной системы, большинство требуют, что мозг дрозофилы сначала быть расчленены; тщательное удаление мозга требуется сохранить правильный мозг морфологии и связи моделей между областями мозга. Следующий протокол использует грибные тела и фоторецепторных нейронов, какПример нейрональных популяций как он проведет вас через вскрытие и immunofluorescent окрашивание взрослого дрозофилы мозги.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Microdissection forceps/tweezers</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>505-NM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard dishes</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>DD-50-S-BLK</td>
			<td>Available from amazon.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fas2 Antibody</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
			<td>1D4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chaoptin Antibody</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
			<td>24B10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFP Antibody</td>
			<td>Aves Lab</td>
			<td>GFP-1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa488 goat anti-mouse secondary antibody</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-11001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa488 goat anti-chicken secondary antibody</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-11039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa647 goat anti-mouse secondary antibody</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20% paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscope Services</td>
			<td>RT15713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperFrost Plus Slides</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>99-910-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-553-454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Phosphate Buffer monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S3139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na phosphate Buffer dibasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S3264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X 100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X100-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fingernail polish</td>
			<td>Electron Microscope Services (EMS)</td>
			<td>72180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereomicroscope</td>
			<td>Leica S6D with KL300 LED light source</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-well dish (spot plate)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89090-482</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nutator/rocker</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-152 or 88-861-041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35mm dish</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-366-794</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipe</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>06-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potential Fixation Buffers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTN Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>0.1M NaPhosphate, pH 7.2, 0.1% Triton-X-100, Typically make up 0.5 L of 0.1M NaPhosphate buffer and aliquote 50ml at a time as needed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLP buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2% paraformaldehyde, 0.01M NaI04, 0.075M Lysine, 0.037M NaPO4, pH 7.2, Dissolve 0.36 g lysine in 10 ml H2O + 7.5 ml 0.1 M NaH2PO4 pH 7.2 + 2.5 ml 0.1 M Na2HPO4 on ice. Immediately before use, mix 15 ml of this buffered lysine solution with 50 mg NaIO4 (sodium periodate) + 2ml of the 20% high grade paraformaldehyde (EMS) + 3ml H2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEM buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>0.1M PIPES pH 7.0, 2mM MgS04, 1mM EGTA, This buffer can be conveniently made as a 2x stock and diluted with 8% paraformaldehyde (PFA) to give a final concentration of 4% PFA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fly Stocks available from Bloomington</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>elav (c155)-GAL4</td>
			<td></td>
			<td>BL458</td>
			<td>Pan-neuronal GAL4 driver</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>w*;;;OK107-GAL4</td>
			<td></td>
			<td>BL 854</td>
			<td>GAL4 driver for all mushroom body neurons (OK107-GAL4 insertion is on the 4th chromosome)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>y(1), w(67c23); c739-GAL4</td>
			<td></td>
			<td>BL 7362</td>
			<td>GAL4 driver for alpha and beta lobes (on 2nd chromosome)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>y(1), w(67c23); c739-GAL4, UAS-CD8-GFP</td>
			<td></td>
			<td>BL 64305</td>
			<td>GAL4 driver for alpha and beta lobes, also contains UAS-CD8-GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>w*; 201Y-GAL4</td>
			<td></td>
			<td>BL 4440</td>
			<td>GAL4 driver for primarily the gamma lobes of mushroom body (on 2nd chromosome)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>y(1), w(67c23); 201Y-GAL4, UAS-CD8-GFP</td>
			<td></td>
			<td>BL 64296</td>
			<td>GAL4 driver for mushroom body gamma lobes, also contains UAS-CD8-GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>w*, elav (c155)-GAL4, hsFLP; FRTG13, Tub&#62;Gal80/CyO</td>
			<td></td>
			<td>BL 5145</td>
			<td>MARCM stock, contains FRT site and GAL80 on 2nd chromosome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>w*, elav (c155)-GAL4, hsFLP, UAS-CD8-GFP</td>
			<td></td>
			<td>BL5146</td>
			<td>MARCM stock, contains hsFLP, pan-neuronal GAL4, and CD8-GFP on X chromosome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>y(1), w*, hsFLP, UAS-CD8-GFP;;FRT82B, Tub&#62;GAL80/TM3, Sb(1);OK107-GAL4</td>
			<td></td>
			<td>BL 44408</td>
			<td>MARCM stock for flipping 3rd chromosome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>y(1), w*, hsFLP, UAS-CD8-GFP;FRT40A, Tub&#62;GAL80;OK107-GAL4</td>
			<td></td>
			<td>BL44406</td>
			<td>MARCM stock for flipping 2nd chromosome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>w*, hsFLP, tub&#62;GAL80, FRT19A; UAS-CD8-GFP/CyO;;OK107-GAL4</td>
			<td></td>
			<td>BL 44407</td>
			<td>MARCM stock for flipping X chromosome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>y(1), w*; UAS-CD8-GFP/CyO</td>
			<td></td>
			<td>BL 5137</td>
			<td>GFP labels cell surface (CD8 is a transmembrane protein)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>y(1), w*; FRTG13, UAS-CD8-GFP</td>
			<td></td>
			<td>BL 5139</td>
			<td>MARCM stock, contains FRT site and CD8-GFP on 2nd chromosome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>y(1), w*, hsFLP, UAS-CD8-GFP; Pin(1)/CyO</td>
			<td></td>
			<td>BL 28832</td>
			<td>MARCM stock, contains hsFLP and CD8-GFP on X chromosome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>w*; FRTG13, Tub&#62;GAL80</td>
			<td></td>
			<td>BL 5140</td>
			<td>MARCM stock, contains FRT site and GAL80 on 2nd chromosome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>y(1), w*;; FRT82B, Tub&#62;GAL80</td>
			<td></td>
			<td>BL 5135</td>
			<td>MARCM stock, contains FRT site and GAL80 on 3rd chromosome</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection and immunofluorescent staining of mushroom body and photoreceptor neurons in adult drosophila melanogaster brains

Развитие нервной системы включает в себя серию последовательных событий, которые координируются несколько сигнальных путей и регулирования сети. Многие из белков, участвующих в этих путей эволюционно консервируют между млекопитающих и других эукариот, например плодовой мушки Drosophila melanogaster, предполагая, что аналогичные организационные принципы существуют в ходе разработки этих организмов. Важно отметить, что дрозофилы широко используется для идентификации молекулярных и клеточных механизмов, регулирующих процессов, которые требуются в млекопитающих, включая нейрогенез, дифференциация, аксональное руководство и synaptogenesis. Мухи также успешно используются для моделирования различных заболеваний человека психомоторного развития. Здесь мы описываем протокол для поэтапного microdissection, фиксации и immunofluorescent Локализация белков в мозге взрослого дрозофилы . Этот протокол фокусируется на два примера нейрональных популяций, грибные тела нейронов и фоторецепторов сетчатки и включает в себя дополнительные шаги для отслеживания отдельных грибные тела нейронов, с помощью анализа мозаика с техникой Repressible маркер клеток (MARCM). А также краткое описание скоринга критерии аксональное руководство дефектов приводятся данные пример из дикого типа и мутантов мозги. Хотя этот протокол выделяет два устоявшихся антител для изучения морфологии грибные тела и фоторецепторных нейронов, другие Drosophila регионов мозга и Локализация белков в других регионах мозга может также быть расследование, используя этот протокол.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains at JoVE.com

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Этот протокол описывает диссекции и иммуноокрашивания взрослых Drosophila melanogaster тканей мозга. В частности этот протокол подчеркивается использование дрозофилы грибные тела и фоторецепторных нейронов как пример нейрональных подмножества, которые точно можно выявить общие принципы, лежащие в основе многих аспектов развития нервной системы.

Рассечение и Immunofluorescent окрашивание гриб тело и фоторецепторных нейронов в мозге взрослого Drosophila melanogaster

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Assaying Blood Cell Populations of the Drosophila melanogaster Larva

Assaying Blood Cell Populations of the Drosophila melanogaster Larva

Опробование клеток крови народам<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Личинка

In vertebrates, hematopoiesis is regulated by inductive microenvironments (niches). Likewise, in the invertebrate model organism&#160;Drosophila ...

Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

Выращивание дрозофилы<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Под аксенический и гнотобионтных Условия

The influence of microbes on myriad animal traits and behaviors has been increasingly recognized in recent years. The fruit fly Drosophila melanogaster is ...

Dissection and Staining of Drosophila Pupal Ovaries

Dissection and Staining of Drosophila Pupal Ovaries

Рассечение и пятнать дрозофилы куколки яичников

Unlike adult Drosophila ovaries, pupal ovaries are relatively difficult to access and examine due to their small size, translucence, and encasing within a ...

Thawing, Culturing, and Cryopreserving Drosophila Cell Lines

Thawing, Culturing, and Cryopreserving Drosophila Cell Lines

Размораживание, культивирования и Cryopreserving дрозофила клеточных линий

There are currently over 160 distinct Drosophila cell lines distributed by the Drosophila Genomics Resource Center (DGRC). With genome engineering, the ...

Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster

Methods to Test Endocrine Disruption in Drosophila melanogaster

Методы тестирования эндокринных нарушений в Drosophila меланогастер

In recent years there has been growing evidence that all organisms and the environment are exposed to hormone-like chemicals, known as endocrine disruptor ...

Assay for Blood-brain Barrier Integrity in Drosophila melanogaster

Assay for Blood-brain Barrier Integrity in Drosophila melanogaster

Анализ на кроветчебно-мозговой барьер целостности в Drosophila меланогастер

Proper nervous system development includes the formation of the blood-brain barrier, the diffusion barrier that tightly regulates access to the nervous ...

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Вскрытие и живая визуализация поздней эмбриональной гонады дрозофилы

The Drosophila melanogaster male embryonic gonad is an advantageous model to study various aspects of developmental biology including, but not limited to, ...

Imaging Live Brain Explants from Drosophila melanogaster Third Instar Larvae

Live-Cell Imaging of Drosophila melanogaster Third Instar Larval Brains

Investigating Asymmetric Cell Division Dynamics: A Protocol for Live-Imaging of Drosophila Larval Brain Explants (Video) | JoVE

Визуализация живых клеток личинки Drosophila melanogaster третьего возраста

Drosophila neural stem cells (neuroblasts, NBs hereafter) undergo asymmetric divisions, regenerating the self-renewing neuroblast, while also forming a ...

Detection and Quantification of Single mRNA Molecules in Drosophila

Studying Muscle Transcriptional Dynamics at Single-molecule Scales in Drosophila

Investigating mRNA Spatial Distribution in Drosophila Muscle Tissue (Video) | JoVE

Изучение динамики мышечной транскрипции в одномолекулярных масштабах у дрозофилы

Skeletal muscles are large syncytia made up of many bundled myofibers that produce forces and enable body motion. Drosophila is a classical model to study ...

﻿Staging and Collecting Drosophila melanogaster Third Instar Larvae

ï»¿Staging and Collecting Drosophila melanogaster Third Instar Larvae (Video) | JoVE 

Постановка и сбор личинок Drosophila melanogaster третьего возраста